Rawatan Untuk Batu dalam Buah Pinggang: G. Fruticosus
Mar 22, 2022
Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com
BAHAGIAN Ⅰ: Penilaian keberkesanan kuratif ekstrak pelarut G. fruticosus dalam tikus jantan Wistar nephrolithiatic akibat eksperimen
Tilahun Alelign, Tesfaye Sisay Tessema, Asfaw Debella dan Beyene Petros
Latar belakang
Urolithiasis(batudalam saluran kencing) menjejaskan kira-kira 12 peratus daripada populasi dunia pada beberapa peringkat dalam hidup mereka [1]. Kajian lain melaporkan bahawa kelaziman di seluruh duniaBatu karangberkisar antara 2 hingga 20 peratus [2, 3]. Urolithiasis menjejaskan semua peringkat umur, jantina, dan kaum [4,5], tetapi ia berlaku lebih kerap pada lelaki berbanding wanita antara umur 20 hingga 49 tahun [6]. Patogenesis daripadaBatu karangmasih tidak difahami sepenuhnya [7] dan rawatannya kekal sebagai cabaran, walaupun terdapat kaedah rawatan moden termasuk ESWL [8]. Urutan peristiwa yang mencetuskanbatupembentukan termasuk nukleasi, pertumbuhan, pengagregatan, dan pengekalan kristal dalam buah pinggang [9, 10].
Batu buah pinggangpembentukan memerlukan pengekalan berterusan kristal dalambuah pinggangselepas selesai proses penghabluran[11, 12]. Interaksi kristal COM dengan permukaan sel epitelium buah pinggang adalah peristiwa permulaan kritikal dalam nephrolithiasis [13]. Interaksi sel kristal mengakibatkan pergerakan kristal dari sisi basolateral sel ke membran bawah tanah [14]. Kajian ke atas model haiwan juga mendedahkan bahawa pemberian kristal CaOx atau ion oksalat berpekatan tinggi nampaknya beracun, menyebabkan kerosakan sel tubular renal [7]. Pendedahan kepada hablur oksalat atau CaOx yang lebih tinggi menyebabkan kecederaan sel epitelium, yang merupakan faktor predisposisi untuk kejadian berikutnya.batupembentukan [15, 16].
Ketidakseimbangan antarakencingbatuperencat dan promoter telah dicadangkan menjadi puncabatupembentukan [17]. Promoter memudahkanbatupembentukan [18], tetapi perencat mengurangkan permulaan supersaturasi, nukleasi, pertumbuhan kristal, dan kadar pengagregatan [17]. Walau bagaimanapun, perencat berfungsi sama untuk semua orang; oleh itu, sesetengah orang membentuk batu; manakala yang lain tidak [19]. Antara berulangbatupembentuk, perkumuhan oksalat dalam air kencing adalah lebih tinggi, manakala perkumuhan sitrat adalah lebih rendah Satu kajian juga menunjukkan bahawa oksalat boleh memudahkan penyerapan semula klorida, natrium, dan air dalam tubul proksimal dan mengaktifkan pelbagai laluan isyarat dalam sel epitelium buah pinggang [20].
Walaupun terdapat peningkatan yang ketara dalam terapi perubatan seperti penggunaan extracorporeal shock wave lithotripsy (ESWL), tidak ada ubat yang memuaskan untuk merawat calculi renal [21]. Rawatan ESWL dikaitkan dengan kecederaan buah pinggang akut akibat kesan traumatik gelombang Kejutan, dan jangkitan selepas rawatan [22]. Ia juga mengakibatkan tidak lengkapbatupelepasan, dan tidak dapat mengelakkan yang barubatuformasi [23], ataubatuberulang selalunya sehingga 60 peratus [24,25]. Selepas episod pertama abatu, kadar berulang adalah lebih daripada 50 peratus dalam 10-tahun [26,27]. Oleh itu,Batu karangberulang adalah risiko utama, yang dianggap sebagai cabaran klinikal yang tidak dapat dipenuhi dalam bidang urologi [28].Batumembentuk pesakit terdedah kepada pengulangannya selepas terapi pembedahan pertama [29]. Walaupun komposisi kimia abatumempengaruhi pilihan intervensi [30], pembedahan terbuka kekal sebagai rawatan utama [31]. Beberapa tumbuhan ubatan yang dikaji setakat ini terhadap urolithiasis ditunjukkan dalam Jadual 1
Di Ethiopia, kebanyakan pesakit bergantung kepada tumbuhan ubatan tradisional sebagai terapi alternatif untuk pelbagai penyakit termasuk urolithiasis. Tumbuhan ubatan adalah berpatutan, boleh diakses, berkesan, dengan kesan sampingan yang lebih sedikit, dan lebih serasi dengan tubuh manusia [41], berbanding dengan ubat konvensional [42]. Dalam kajian ini,G. fruticosus(L.) telah dipilih untuk mengkaji kesannya terhadap urolithiasis yang disebabkan oleh eksperimen. Tinjauan literatur yang teliti telah dijalankan untuk memastikan bahawa tiada satu pun bahagian tumbuhan ubatan terpilih telah dikaji setakat ini mengenai aktiviti anti-urolithiatic. Sehingga kini, terdapat juga bukti saintifik yang tidak mencukupi yang dilaporkan mengenai aktiviti antihero-lithiatic tumbuhan ubatan ini. Oleh itu, objektif kajian adalah untuk menilai keberkesanan kuratif tumbuhan ubatan dalam tikus jantan nefrolitiatik akibat eksperimen.
Jadual 1 Tumbuhan ubatan yang mempunyai kesan anti-urolithiatic dalam kajian lepas
Bahan dan kaedah
Pengenalpastian dan pengumpulan bahan tumbuhan ubatanGomphocarpusfruticosus(G. fruticosus) daun dikumpulkan semasa berbunga atau berbuah. TheG.fruticosus(L)Ait.f, dikenali sebagai Tifriena (nama tempatan), telah dikumpulkan di Bole Bulbula sekitar"93 Mazoria"Addis Ababa semasa Oktober 2018.G. fruticosusL.Ait.f(Asclepiadaceae)(dilaporkan oleh pemberi maklumat utama) telah dituntut untuk rawatan urolithiasis. Spesimen tumbuhan telah diserahkan kepada Herbarium Negara, Jabatan Biologi Tumbuhan dan Pengurusan Biodiversiti, Universiti Addis Ababa(AAU) untuk pengesahan taksonomi(TA238), dan nombor kutipan yang sepadan telah diberikan. Spesimen telah disimpan di Herbarium Kebangsaan AAU untuk rujukan masa hadapan.
Penyediaan ekstrak mentah
Bahan tumbuhan telah dibersihkan dengan teliti dengan air paip untuk membuang bahan cemar dan dikeringkan di dalam bangsal pada suhu bilik dari 2 hingga 3 minggu di makmal Sains Bioperubatan, AAU. Bahagian tumbuhan yang kering diserbuk halus menggunakan pengisar dapur (mortar dan alu, bersaiz kira-kira 9 inci diameter). Serbuk-serbuk itu dimasukkan melalui ayak 3 saiz mesh untuk menapis bahan pepejal kasar.
Ekstrak telah disediakan menggunakan prosedur yang serupa dengan yang sering digunakan oleh pengamal perubatan tradisional atau pesakit, dengan beberapa pengubahsuaian kecil. Serbuk tumbuhan direndam dalam air suling, yang diletakkan di atas penggoncang selama 72 jam. Campuran itu ditapis melalui kapas/kasa, kemudian melalui kertas penapis Whatman nombor 1(saiz liang:1l μm） untuk mengeluarkan zarah tumbuhan pepejal halus atau juzuk tidak larut. Keseluruhan ekstrak telah ditumpukan kepada kekeringan menggunakan mesin lyophilizer dengan mengeluarkan air yang ditaburkan. di bawah tekanan yang dikurangkan. Kemudian, pekat separa pepejal dituangkan ke dalam plat petri kaca dan dibiarkan kering sepenuhnya dalam tab mandi air dilaraskan kepada 45 darjah. Ekstrak kering terakhir dikumpul dan disimpan dalam botol steril berlabel ditutup dengan penyumbat ketat dan disimpan dalam penyejuk beku pada -20 darjah sehingga digunakan dalam percubaan.
Penyediaan pengekstrakan pelarut berturut-turut
Gomphocarpus fruticosusekstrak ibu (berair) telah dipisahkan dengan pelarut yang meningkatkan kekutuban daripada pelarut bukan kutub kepada kutub memastikan julat kekutuban yang lebih luas sebatian boleh diekstrak. Pengekstrakan berturut-turut dimulakan secara berurutan dengan eter petroleum, diikuti oleh kloroform, etil asetat, butanol dan air, di mana pelarut ini dikeluarkan dan dipekatkan di bawah penyejat vakum berputar. Bahan tumbuhan yang dimaserat dalam air suling telah diliofilkan di bawah pengering beku untuk mendapatkan sisa serbuk. Ekstrak kering ditutup rapat dengan penyumbat dan disimpan dalam botol kaca dan disimpan di dalam peti sejuk pada -20 darjah C sehingga digunakan untuk eksperimen.
manfaat cistanche deserticola: merawat penyakit buah pinggang
Bahan kimia dan reagen/ubat standard
Bahan kimia dan reagen atau kit yang digunakan adalah gred analitik yang dibeli daripada pelbagai sumber. Perolehan petroleum eter, kloroform, etil asetat, butanol dan etanol adalah daripada Wisteam PLC (Addis Ababa, Ethiopia), kalium dihidrogen fosfat (anhydrous), natrium fosfat (dibasic anhydrous extra pure), Tris-HCl buffer (CaHuNO), dan natrium klorida (NaCl) telah dibeli daripada Micron International Trading House PLC(Addis Ababa Ethiopia). Begitu juga, isoflurane, dan formaldehid telah dibeli daripada Neway Chemicals PLC(Addis Ababa, Ethiopia). Etilena glikol (EG)dan ammonium klorida(NH, Cl) telah dibeli daripada Pharma PLC (Addis Ababa, Ethiopia). Tiub EDTA, tiub pemisah serum, tiub kapilari, dan bilah pembedahan telah dibeli daripada Micro Pharma PLC (Addis Ababa, Ethiopia). Tambahan pula, kit untuk ujian fungsi hati dan buah pinggang telah dibeli daripada Roshi PLC (London, England). Kit ujian kolorimet-rik oksalat (asid oksalat) dan ujian kolorimetrik/fluorometrik sitrat yang dibeli daripada kit BioVision Incorporated ialah (Milpitas, Amerika Syarikat). Serbuk kalium sitrat diperolehi dari Hospital Rujukan Singa Hitam (Addis Ababa, Ethiopia).Cystone (formulasi poliherba) dibeli dari Mumbi, India. Asid askorbik, yang dibeli daripada Micron International Trading House PLC (Addis Ababa, Ethiopia).
Pelarutan ekstrak tumbuhan dan ubat standard Ekstrak/ubat ujian dengan kepekatan yang berbeza telah dibubarkan menggunakan kenderaan yang sesuai, iaitu air suling dan 3 peratus Tween 80.Semua ekstrak tumbuhan dan kalium sitrat telah dilarutkan dalam air suling pada kepekatan yang berbeza. Prosedur yang digunakan untuk melarutkan Cystone adalah serupa dengan kaedah Pha-tak dan Hendre [43] dan Garimella et al. [44] dengan beberapa pengubahsuaian. Tablet Cystone diserbuk menggunakan Mortar dan Alu(saiz: 0.23m), dan dilarutkan (diampai) dalam air suling(900ul） dan 100 ul 3 peratus Tween 80 (iaitu,750 mg/ml). Kemudian, ia disimpan selama 3j untuk larut, disentrifugasi pada 1000rpm selama 5 minit, dan ditapis melalui kertas penapis saiz liang 0.22 mm. Supernatan jernih dikumpulkan dan digunakan untuk nukleasi kalsium oksalat, dan ujian pengagregatan. Ekstrak dikumpul menggunakan tiub Falcon ( 45 ml), ketatkan udara dan disimpan di dalam peti sejuk sehingga penggunaan eksperimen. Ekstrak ujian dan ubat standard disediakan setiap hari dan sejurus sebelum pentadbiran ujian pada dos 200 mg/kg ekstrak, 750mg/kg Cystone, dan 2.5g/kg kalium sitrat. Isipadu dos bahan ujian ialah 2ml/100g berat badan. Air ternyahiion digunakan untuk menyediakan semua salur/ubat dan ini disediakan setiap hari sebelum pentadbiran ujian.
Penyiasatan farmakologi urolithiatic in vivo
Haiwan sasaran: Tikus Wistar albino jantan dewasa yang sihat daripada kumpulan umur yang sama antara 8 hingga 10 minggu dan seberat (220-280g) telah digunakan, dibeli daripada Institut Kesihatan Awam Ethiopia (EPHI) dan membiak di Biomed-ical Makmal haiwan sains, AAU. Eksperimen telah dijalankan di Makmal Sains Bioperubatan AAU dan EPHI, mengikut garis panduan standard yang diterima di peringkat antarabangsa untuk penggunaan haiwan dalam penyelidikan saintifik. Sebelum memulakan eksperimen, tikus telah disesuaikan dengan keadaan makmal standard (6 tikus setiap sangkar polipropilena) selama 7 hari. Mereka disimpan di bawah persekitaran suhu terkawal (27±2 darjah), kelembapan relatif (55±5 peratus), dan cahaya (kitaran terang/gelap 12j). Tikus-tikus ini diberi makan dengan pelet biasa (diet standard) dan dibenarkan air minuman percuma (ad libitum) selama 28 hari.
manfaat cistanche deserticola: merawat penyakit buah pinggang
Induksi Urolithiasis
Batu karangtelah diinduksi menggunakan etilena glikol (EG) bersama-sama dengan ammonium klorida (NHCl) yang ditadbir dalam air minuman tikus. Dalam model hyperoxaluria ini, 1 peratus (w/v) NHACl diberikan dengan 0.75 peratus (v/v)EG untuk 5 hari pertama untuk mempercepatkan lithiasis, berikutan ini bekalan air ditukar kepada {{4 }}.75 peratus EG sahaja untuk 25 hari berikutnya [45-47]. Pendedahan tahap dos ini cukup boleh diterima dalam kajian haiwan [48]. Pentadbiran EG mengakibatkan hyperoxaluria, yang seterusnya membawa kepada pemendapan CaOx dalam buah pinggang [49]. Tikus eksperimen yang ditugaskan sebagaibatukumpulan kuratif telah menerimabatuinduksi rawatan selama 28 hari.
Kesan kuratif urolithiasis
Dalam rawatan kuratif (pembubaran), sejumlah 54 ekor tikus jantan al-bino Wistar telah dibahagikan secara rawak kepada 9 kumpulan yang terdiri daripada 6 individu setiap kumpulan dengan berat badan yang sepadan. Dalam rawatan kuratif, penyakit ini diinduksi priory dari hari 1 hingga 14. Kemudian, setiap ex-tracts/ubat diberikan secara lisan dari hari 15 hingga 28 serentak dengan protokol induksi penyakit (EG) untuk menentukan kesan kuratif [50, 51] . Pada akhir hari ke-28, tikus telah dikorbankan untuk kajian biokimia dan histopatologi. Reka bentuk eksperimen telah ditetapkan sebagai Kumpulan I (kawalan Normal), Kumpulan II (kawalan Lithia-tic), Kumpulan I (K-Cit), Kumpulan IV (Cystone), Kumpulan V (G. fruticosusEkstrak PET), Kumpulan VI (ekstrak Chl. kos G.fruti), Kumpulan VI(G. fruticosusEkstrak EtOAc), Kumpulan VIII (ekstrak G.fruticosus BuOH), dan Kumpulan IX(G. fruticosusaq. pecahan). Penyiasat lain juga menggunakan kalium sitrat (2.5g/kg) sebagai kawalan positif [52, 53]. Isipadu dos ialah 2ml/100g berat badan. Kumpulan kawalan menerima air suling sekali sehari sepanjang eksperimen. Pada penghujung hari ke-28, tikus telah dikorbankan untuk kajian biokimia dan histopatologi.
Pengumpulan air kencing dan analisis mikroskopik
Profil air kencing, serum dan histologi adalah penunjukbatupembentukan serta pengulangan. Kelimpahan dan morfologi kristal kalsium oksalat yang terbentuk di bawah in vivobatuinduksi diperiksa menggunakan mikroskop cahaya (Wagtech Thatcham Berkshire RG194QD, United Kingdom, pembesaran 40x). Tikus diletakkan dalam sangkar metabolik yang berasingan dan tertakluk kepada pengumpulan air kencing 24 jam pada hari ke-28 untuk ujian kuratif [50]. Dalam analisis crystalluria, kira-kira 3 ml sampel air kencing segar yang dikumpul dimasukkan ke dalam tiub kaca dan disentrifugasi pada 3000rpm selama 10 minit untuk mengeluarkan serpihan, dan supernatan dibuang. Sedimen air kencing ini digunakan untuk menentukan pembentukan kristal CaOx. Kira-kira 10 ul sedimen bervorteks diletakkan pada slaid kaca mikroskop (ditutup dengan penutup), dan diperiksa untuk kristal CaOx dengan mengambil kira bilangan dan saiznya di bawah mikroskop cahaya (40x). Hablur yang terbentuk daripada bahan kimia dalam air kencing diperiksa dengan teliti daripada artifak air kencing yang lain. Gambar-gambar pemerhatian mikroskopik diambil menggunakan kamera digital (Sony Cyber-shot DSC-W180 10.1MP dengan zum optik 3x, New Jersey, Amerika Syarikat)dilekapkan secara manual di atasnya.
Analisis biokimia air kencing
Pada penghujung tempoh rawatan masing-masing, haiwan ditempatkan secara individu dalam sangkar metabolik, dan sampel air kencing 24 jam (berasid dan tidak berasid) telah dikumpulkan. Air kencing diasidkan dengan 1ml 6N HCL (asid hidroklorik) dan disimpan pada suhu 4 darjah selama 5 hari. Kemudian, ini telah disentrifugasi pada 3000 rpm selama 10 minit (REMI, R24), dan supernatan air kencing berasid digunakan untuk menganggarkan perkumuhan seperti kandungan oksalat, kalsium, magnesium dan fosfat. Dalam kandungan sampel air kencing tidak berasid seperti sitrat, kreatinin, dan asid urik, dan jumlah kepekatan protein dianalisis menggunakan kit diagnostik yang tersedia secara komersial oleh penganalisis kimia klinikal automatik. Kedua-dua kepekatan oksalat dan sitrat dianalisis menggunakan spektrofotometer berbilang telaga (pembaca ELISA) mengikut manual yang disediakan bersama kit. Untuk tujuan pengiraan, lengkung penentukuran telah disediakan menggunakan kit Oksalat dan Sitrat sebagai piawai.
Pengumpulan dan analisis serum
Selepas tamat tempoh percubaan (hari ke-28), tikus telah dibius menggunakan Isoflurane dan 3 ml sampel darah dikumpulkan dari vena retro-orbital dengan tusukan kapilari. Serum diasingkan selepas disentrifugasi pada 3000rpm, 20 darjah darjah selama 15 minit. Serum yang dikumpul telah disiasat untuk parameter biokimia seperti kreatinin, nitrogen urea darah, asid urik, urea, kalsium, magnesium, dan fosfat oleh Penganalisis Auto Kimia Klinikal (penganalisis Cobas 6000, Jerman) dengan kit diagnostik masing-masing. Kepekatan oksalat dan sitrat berbilang telaga yang ditentukan menggunakan 1 ialah spektrofotometer (pembaca ELISA) mengikut manual yang disediakan bersama kit. Untuk tujuan pengiraan, lengkung penentukuran telah disediakan menggunakan kit Oksalat dan Sitrat sebagai piawai.
faedah cistanche deserticola: anti-keradangan
Analisis homogenat buah pinggang
Pada penghujung tempoh percubaan (hari ke-28), tikus dikorbankan di bawah anestesia Isoflurane, diikuti dengan dislokasi serviks. Kemudian, perut dibuka dan kedua-dua buah pinggang dikumpulkan dari setiap tikus. Buah pinggang yang terpencil telah dikeluarkan dengan teliti dan dibersihkan (dibasuh/dibilas) daripada tisu luar dengan larutan garam fisiologi ais (0.15 M NaCl). Buah pinggang kiri setiap haiwan telah dipelihara dalam 10 peratus penimbal formalin neutral dan digunakan untuk kajian histologi. Buah pinggang kanan dihiris kepada dua bahagian yang sama menggunakan bilah, dan separuh dikeringkan pada suhu 80 darjah dalam ketuhar udara panas. Kaedah yang digunakan adalah sama dengan Ashok et al. [35] dengan beberapa pengubahsuaian, di mana berat tetap 200 mg (29 peratus )daripada jumlah berat min buah pinggang (0.67 g) dipanaskan lagi secara berasingan dalam 10 ml asid hidroklorik 1N (1 peratus HCl), yang diletakkan di dalam mandi air mendidih pada suhu 100 darjah C selama 30 minit. Kemudian, ia dicincang halus menggunakan pisau, dihempas dengan alu dan mortar, dan seterusnya dihomogenkan selama 10 minit menggunakan Ultra-Sonicator. Homogenat telah disentrifugasi pada 3000 rpm selama 15 minit, dan supernatan dikumpul menggunakan Cryotubes berlabel. Akhirnya, supernatan digunakan untuk menganggar kandungan kalsium, oksalat dan fosfat dengan kit biokimia yang tersedia secara komersil (BioVision PLC, Amerika Syarikat), mengikut protokol pengilang [54,55].
Pemeriksaan histopatologi
Pemeriksaan histopatologi telah dilakukan untuk tisu buah pinggang tikus eksperimen. Semua tikus dikorbankan secara berperikemanusiaan menggunakan anestesia Isoflurane pada penghujung hari ke-28 (kajian kuratif urolithiasis). Kepingan tisu diambil dari buah pinggang dan dianalisis untuk potensi kuratif urolithiatic ekstrak tumbuhan. Tisu-tisu telah diperbaiki dengan larutan formalin neutral penampan 10 peratus, dan seterusnya tertanam dalam lilin parafin. Bahagian (tebal 5μm) telah dipotong menggunakan Rotary Microtome 4060E (Jerman), dipasang pada slaid kaca, dan diwarnakan dengan Hematoxylin dan Eosin untuk mengkaji perubahan histopatologi[34]. Semua bidang morfologi tisu telah diperiksa di bawah mikroskop cahaya(pembesaran 100x)(Wagtech Thatcham, Berkshire, RG19 4QD, United Kingdom) dan fotomi-crographs telah ditangkap menggunakan Kamera digital yang dipasang secara manual (Sony Cyber-shot DSC-W180 10.1MP dengan Zum optik 3x, New Jersey, Amerika Syarikat) untuk rujukan lanjut.
Pemendapan kristal kalsium oksalat
Dalam buah pinggang, pemendapan kristal ditentukan menggunakan ujian separa kuantitatif, yang merupakan kaedah pemarkahan mikroskopik [46,56]. Mikrometer filar mikroskop (0.1 mm) kanta mata(10x, Medan lebar 23.3 mm, Olympus Optics OSM 212422, buatan Jepun) telah digunakan. Iaitu, deposit kristal dalam tisu buah pinggang dikira menggunakan mikroskop cahaya. Gred keterukan deposit kristal telah ditetapkan sebagai 0=<1 crystal(no="" crystal="" deposition),1="1-10,2=11-30," 3="31-50," 4="51-75" and="" 5="">75 kiraan kristal, mengambil nilai min [46].
Dalam mengira mendapan kristal CaOx, bahagian sagittal setiap spesimen buah pinggang dibahagikan kepada empat kawasan bersaiz sama dengan dua garisan maya, dan bacaan purata 4 medan mikroskopik dilaporkan [57,58]. Medan 100x kemudiannya secara rawak. dipilih daripada setiap rantau dan deposit CaOx telah dikira. Imej satu daripada empat kawasan di bawah mikroskop cahaya telah ditangkap secara rawak [58] menggunakan kamera digital yang dipasang secara manual di atas Mikroskop.
Analisis statistik
Data dianalisis menggunakan Perisian Graph Pad Prism versi 6 (Graph Pad Software, San Diego, CA, USA). Analisis varians sehala (ANOVA) diikuti dengan perbandingan ujian Dunnett post-hoc dilakukan apabila perlu untuk membandingkan antara kumpulan yang dirawat dan tidak dirawat. Nilai data dinyatakan sebagai min ± sisihan piawai (SD). Nilai P<0.05 was="" considered="" statistically="">
manfaat cistanche deserticola: merawat penyakit buah pinggang