Rebusan Tongluo Digui Merawat Kecederaan Buah Pinggang dalam Tikus Diabetik Dengan Menggalakkan Autophagy Podocytes

Hubungi:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

HAN Jiarui, ZHANG Yage, SHI Xiujie, PENG Zining, XING Yufeng, PANG Xinxin

Abstrak

OBJEKTIF:

Untuk menyiasat kesan rebusan Tongluo Digui pada kecederaan buah pinggang dan autophagy podocyte yang disebabkan oleh streptozotocin dalam tikus diabetes.

KAEDAH:

Tikus Sprague-Dawley jantan dibahagikan secara rawak kepada enam kumpulan: normal, model, rebusan Tongluo Digui (dos tinggi, sederhana dan rendah), dan valsartan. Streptozotocin disuntik secara intraperitoneal untuk meniru model haiwan diabetes. Selepas 8 minggu, proteinuria dinilai untuk mewujudkan model nefropati diabetik. Rawatan diberikan setiap hari melalui laluan intragastrik. Pada 16 minggu selepas gavage, kami menentukan kepekatan protein air kencing 24 jam, glukosa darah, kreatinin serum, dan kepekatan nitrogen urea. Kemudian, tikus dikorbankan, dan buah pinggang dituai dan diwarnai dengan asid-Schiff berkala untuk menilai perubahan patologi dalam glomeruli, termasuk podosit glomerular oleh mikroskop elektron penghantaran. Analisis Western blot digunakan untuk menentukan ekspresi nefrin, podocin, p62, beclin-1, LC3Ⅱ/Ⅰ, dan protein p-mTOR/mTOR dalam tisu buah pinggang.

KEPUTUSAN:

Berbanding dengan kumpulan model, rebusan Tongluo Digui dikaitkan dengan penurunan kepekatan protein air kencing 24 jam, glukosa darah, hemoglobin A1c, kreatinin serum, kepekatan nitrogen urea, jumlah protein serum, dan albumin. Pada masa yang sama, pelebaran mesenterik mesangial dan gabungan proses kaki dikurangkan, membran bawah tanah glomerular tidak menebal dengan ketara, dan bilangan podosit dan bilangan autofagosom dalam podosit meningkat. Selanjutnya, ekspresi nefrin, podocin, LC3Ⅱ, dan beclin{3}} protein dalam tisu buah pinggang dikawal, manakala ekspresi protein p62 dikawal ke bawah dan fosforilasi mTOR telah dihalang.

KESIMPULAN:

Merebus Tongluo Digui boleh menghalang perkembangan nefropati diabetik dengan menghalang fosforilasi mTOR, dengan itu meningkatkan autophagy untuk melindungi podosit dan mengurangkan proteinuria.

Kata kunci:Nefropati diabetes; autophagy; podosit; Rebusan Tongluo Digui

faedah batang cistancheuntukfungsi buah pinggang

PENGENALAN

Nefropati diabetik (DN) ialah salah satu komplikasi mikrovaskular diabetes yang teruk, dengan 30 peratus -40 peratus pesakit diabetes menghidapi penyakit buah pinggang. Dengan peningkatan kejadian diabetes, DN telah menjadi punca utama penyakit buah pinggang peringkat akhir di seluruh dunia.1 Ini merupakan beban ekonomi yang berat kepada keluarga dan masyarakat.

Kerosakan podocyte adalah punca penting perkembangan DN. Sebagai sel yang dibezakan secara terminal, autophagy memainkan peranan penting dalam mengekalkan fungsi fisiologi podosit.2,3 Dalam keadaan fisiologi normal, terdapat tahap autofagi yang tinggi dalam podosit yang menyingkirkan protein dan organel yang rosak.4 Walau bagaimanapun, dalam pesakit diabetes persekitaran, autophagy podocyte dihalang, menunjukkan bahawa autophagy podocyte memainkan peranan penting dalam patogenesis DN.5 DN tergolong dalam kategori "Xiao Ke", "Guan Ge" dan "edema" dalam Perubatan Tradisional Cina. Teori Perubatan Tradisional Cina ialah stasis darah danYin kekuranganadalah punca terpenting DN.6 Oleh itu, rawatan DN harus menggalakkan peredaran darah dan menyuburkan yin, dan rebusan Tongluo Digui telah ditubuhkan untuk ini. Kami sebelum ini mendapati bahawa rebusan Tongluo Digui mempunyai kesan rawatan yang bermanfaat dalam DN. Dalam kajian ini, kami bertujuan untuk menggunakan model tikus jenis 1 DN yang disebabkan oleh streptozotocin (STZ) untuk menilai kesan rebusan Tongluo Digui pada kecederaan buah pinggang, autophagy, dan laluan isyarat mTOR. Kami juga meneroka mekanisme molekul asas rebusan Tongluo Digui dalam melambatkan perkembangan DN dan menyediakan bukti untuk pencegahan dan rawatan klinikal DN.

BAHAN DAN KAEDAH

Haiwan

Tikus Sprague-Dawley bebas patogen khusus (SPF) [n=60, jantan, (150 ± 10) g; nombor sijil kelayakan: SCXK (Yu) 2017-0001] telah dibeli daripada Pusat Haiwan Eksperimen Henan (Zhengzhou, China). Kitaran cahaya standard (14 jam cahaya, 10 jam malam), suhu dalam pintu (23 ± 2) darjah , kelembapan (40 peratus -50 peratus ), perumahan (tiga haiwan setiap sangkar) dan memberi makan (makanan tersteril dan air minuman) telah digunakan. Eksperimen telah disiapkan di Makmal Pusat Pengimejan Sel Hospital Henan Perubatan Tradisional Cina (Zhengzhou, China). Semua eksperimen dijalankan mengikut panduan Penjagaan dan Penggunaan Haiwan Makmal yang diterbitkan oleh Institut Kesihatan Kebangsaan.

Dadah

Kapsul Valsartan (Val) dibeli daripada Novartis Pharma Schweiz AG (X2307 CN-b, Beijing, China). Air rebusan Tongluo Digui terdiri daripada Shuichi (Hirudo) 12g, Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) 30 g, Dihuang (Radix Rehmanniae) 20 g, Huangqi (Radix Astragali Perparata) 20 g, Danggui (Radix Zehi R. Alismatis) 10 g, Dahuang (Radix et Rhizoma Rhei) 15 g, Gancio (Radix Glycyrrhizae) 6 g. Herba Cina dibeli dari Hospital Perubatan Tradisional Cina Henan (Zhengzhou, China).

Reka bentuk eksperimen

Tikus dibahagikan secara rawak kepada enam kumpulan, setiap satu terdiri daripada 10 tikus: kumpulan kawalan (Ctrl), kumpulan model DN (STZ), model DN dengan kumpulan rawatan Val (Val), model DN dengan kumpulan rawatan dos tinggi (HTL) merebus Tongluo Digui. , model DN dengan kumpulan rawatan dos sederhana (MTL) merebus Tongluo Digui dan model DN dengan kumpulan rawatan dos rendah (LTL) merebus Tongluo Digui. Enam kumpulan tikus telah dikorbankan pada 16 minggu selepas gavage dan buah pinggang dikumpulkan.

Val (10 mg·kg－1·d－1 ) dan rebusan Tongluo Digui dalam tiga dos berbeza diberikan secara gavage sekali sehari selama 16 minggu. Dos yang diberikan adalah berdasarkan persamaan penukaran untuk dos ubat antara haiwan dan manusia. Dos tikus (mg/kg)=dos manusia dewasa (mg/kg) × faktor penukaran (6.25). Kumpulan rebusan Tongluo Digui berdos tinggi, sederhana dan berdos rendah telah diberi gavage gastrik masing-masing 5.4, 2.7 dan 1.35 g·kg － 1·d － 1. Tikus ditimbang setiap minggu. Air kencing 24-h dikumpul dengan menggunakan sangkar metabolik pada akhir 0, 12 dan 24 minggu. Selepas tamat rawatan (pada 24 minggu), tikus telah dibius dengan suntikan subkutaneus chloral hydrate, dan sampel tisu buah pinggang dan darah telah dituai dan disimpan pada －80 darjah . Tikus mempunyai akses percuma kepada diet haiwan makmal biasa dan air bersih (kecuali seperti yang diterangkan di bawah).

tumbuhan cistanche

Penubuhan model DN

STZ (Sigma, St. Louis, MO, USA) digunakan untuk mendorong kencing manis seperti yang diterangkan sebelum ini.7 Kesemua 60 tikus mempunyai akses air terhad selama 12 jam sebelum eksperimen. Daripada jumlah ini, 50 ekor tikus diberi suntikan intraperitoneal tunggal STZ 60 mg/kg terlarut dalam penimbal sitrat (0.1 mol/L, pH 4.5). Diabetes disahkan dengan mengukur kepekatan glukosa darah 72 jam selepas suntikan STZ. Haiwan dengan kepekatan glukosa Lebih daripada atau sama dengan 16.7 mmol/L selama tiga hari berturut-turut dianggap menghidap diabetes. Selepas 8 minggu, tikus ditempatkan dalam sangkar metabolik yang berasingan, dan air kencing dikumpul selama 24 jam untuk pengukuran mikroalbumin air kencing (UAE). Model DN telah disahkan untuk mendapatkan UAE Lebih daripada atau sama dengan 30 mg/ 24 jam.

Penunjuk biokimia

Penilaian serum dan air kencing digunakan untuk menilai fungsi buah pinggang haiwan. Air kencing tikus dinilai menggunakan sangkar metabolik. Sampel darah tikus diperoleh menggunakan kaedah potong ekor.8 Sampel serum dan air kencing dibekukan pada －80 darjah sehingga digunakan. Kreatinin serum, nitrogen urea darah, albumin, dan kepekatan protein air kencing diukur dengan radioimmunoassay. Hemoglobin A1c (HbA1c), C-peptida dan tahap insulin diukur menggunakan Kit ELISA HbA1c (Crystal Chem INC, Elk Grove Village, IL, Amerika Syarikat), kit C-peptide Elisa (Kainuo Bio Ltd., Beijing, China) dan insulin Kit Elisa (Merck Millipore Co., Ltd., Bed ford, MA, USA) mengikut arahan pengilang masing-masing. Asid urik, jumlah protein serum (TP), albumin (ALB), alanine aminotransferase (ALT), dan aspartate aminotransferase (AST) dalam tikus ditentukan oleh penganalisis biokimia automatik.

Pemeriksaan histopatologi

Tisu buah pinggang tetap formalin dibenamkan dalam parafin, dihiris dalam bahagian tebal 3-4 μm dan diwarnai dengan asid berkala-Schiff (PAS). Perubahan morfologi dalam tisu buah pinggang, termasuk percambahan sel mesangial, penyusupan selular, dan perubahan matriks mesangial, telah diperiksa untuk setiap bahagian yang diwarnai oleh mikroskop cahaya (NIKON D3100) (× 400).

Mikroskop elektron penghantaran

TEM digunakan untuk memerhati morfologi podosit dan sel mesangial dalam tisu buah pinggang. Tisu buah pinggang segar dibahagikan kepada blok (< 1="" mm3="" ),="" were="" quickly="" fixed="" in="" 2%="" phosphate-buffered="" glutaraldehyde="" for="" at="" least="" 2="" h,="" washed="" three="" times="" with="" pbs,="" fixed="" in="" 1%="" osmium="" tetroxide="" for="" 2="" h,="" and="" then="" embedded="" in="" acetone="" wrap="" after="" dehydration.="" specimens="" were="" sliced="" in="" 50-60="" nm="" ultrathin="" sections,="" double-stained="" with="" 3%="" uranyl="" acetate="" and="" lead="" citrate,="" and="" then="" examined="" under="" a="" tem="" (jeol-jem-1400="" plus,="" japan="" electron="" optics="" laboratory,="">

Analisis Western blot

Jumlah protein diekstrak daripada tisu buah pinggang oleh penimbal lisis protein (Solarbio Biotech, Beijing, China). Kepekatan protein dalam supernatan telah diuji oleh kit ujian BCA (Solarbio Biotech, Beijing, China, PC0020). Sampel yang mengandungi 40 ug protein diasingkan pada 12 peratus SDS-polyacrylamide gel elektroforesis (SDS PAGE) (Applygen, Beijing, China, B1004), dan kemudian dipindahkan ke membran penapis nitroselulosa (Solar biotech, Beijing, China). Selepas menyekat dengan susu skim 5 peratus pada suhu bilik selama 2 jam, -actin (Proteintech, nombor artikel: 60008-1-lg), LC3II/I (Ab cam, nombor item: ab48394), P62 (Proteintech, nombor item: 18420-1-AP), beclin-1 (teknologi protein, nombor item: 11306-1-AP), p-mTOR (CST, nombor item: #5536), mTOR (CST, nombor item: # 2983), nephrin (Abcam, nombor item: ab58968) dan podocin (masing-masing protein, nombor item: 20384 -1-AP) telah ditambah dan diinkubasi pada 4 darjah semalaman. Campuran ini kemudiannya dibasuh lima kali dengan TBS ditambah 0.05 peratus Tween-20 (Bioteknologi Solar, Beijing, China) (TBS-T) selama 5 minit sebelum menambah antibodi sekunder (1∶2000) sebelum mengeram di bilik suhu selama 1 jam, mencuci lima kali dengan TBST selama 5 minit, tertakluk kepada pembangunan warna dengan chemiluminescence yang dipertingkatkan (ECL, Millipore, Billerica, MA, USA) dan mendedahkan menggunakan perisian ImageJ untuk analisis skala kelabu jalur.

Analisis statistik

Data dianalisis menggunakan perisian SPSS (IBM SPSS Statistics for Windows, versi 23.0. 2014, Armonk, NY, USA). Perbezaan antara kumpulan telah diuji menggunakan analisis varians sehala diikuti dengan ujian Tukey. Data dinyatakan sebagai min ± sisihan piawai. P <0.05 dianggap="">

luteolin

KEPUTUSAN

Kesan perlindungan rebusan Tongluo Digui pada buah pinggang tikus DN

Penunjuk biokimia seperti glukosa darah, hemoglobin terglikasi, kreatinin serum, kepekatan nitrogen urea darah dan {{0}}jam kepekatan protein air kencing diukur 16 minggu selepas gavage. (Jadual 1). Keputusan menunjukkan bahawa jika dibandingkan dengan kumpulan normal, glukosa darah, hemoglobin terglikasi, kreatinin serum, kepekatan nitrogen urea darah, 24-kepekatan protein air kencing jam, TP dan ALB adalah lebih tinggi dengan ketara dalam kumpulan model (P < {{="" 7}}.01),="" sekali="" gus="" menunjukkan="" bahawa="" kumpulan="" model="" telah="" merosakkan="" fungsi="" buah="" pinggang.="" dalam="" kumpulan="" val,="" kedua-dua="" kepekatan="" kreatinin="" serum="" dan="" kepekatan="" protein="" air="" kencing="" 24="" jam="" telah="" menurun="" (p=""><0.05). selain="" itu,="" dalam="" kumpulan="" rebusan="" tongluo="" digui,="" pengurangan="" ketara="" dalam="" glukosa="" darah,="" hba1c,="" kreatinin="" serum,="" dan="" kepekatan="" nitrogen="" urea="" diperhatikan,="" serta="" perkumuhan="" air="" kencing="" selama="" 24="" jam="" (p=""><0.01). kesan="" ini="" bergantung="" kepada="" dos.="" tiada="" perbezaan="" yang="" ketara="" dalam="" paras="" asid="" urik,="" insulin,="" alt,="" dan="" ast="" dalam="" setiap="" kumpulan="" tikus.="" diambil="" bersama,="" penemuan="" kami="" menunjukkan="" bahawa="" rebusan="" tongluo="" digui="" mengurangkan="" kerosakan="" buah="" pinggang="" dan="" meningkatkan="" fungsi="" buah="" pinggang="" dalam="" tikus="" dn="" dalam="" cara="" yang="" bergantung="" kepada="">

Perubahan dalam patologi buah pinggang tikus DN dinilai oleh pewarnaan PAS selepas rawatan merebus Tongluo Digui (Rajah 1). Berbanding dengan kumpulan normal, peningkatan ketara diperhatikan dalam sel mesangial glomerular dan stroma mesangial bersama-sama dengan pelebaran kawasan mesangial dalam kumpulan model. Kawasan mesangial glomerular meningkat dalam setiap tiga tahap dos merebus Tongluo Digui dan dalam kumpulan Val. Tambahan pula, empat kumpulan rawatan ini telah mengurangkan lebar matriks mesangial berbanding dengan kumpulan model, dan kawasan mesangial glomerular dalam kumpulan merebus Tongluo Digui dos tinggi adalah kurang daripada kumpulan Val. Penemuan ini menunjukkan bahawa rebusan Tongluo Digui melambatkan perkembangan lesi glomerular DN.

Kesan rebusan Tongluo Digui pada kecederaan podosit glomerular dalam tikus DN

Analisis Western blot digunakan untuk menentukan ekspresi protein penanda podocyte nephrin dan podocin (Rajah 2). Berbanding dengan kumpulan normal, ekspresi kedua-dua protein dalam kumpulan model telah berkurangan dengan ketara (P < 0.01),="" menunjukkan="" kecederaan="" podosit.="" di="" samping="" itu,="" ekspresi="" nefrin="" dan="" podocin="" telah="" dikawal="" selia="" dalam="" kumpulan="" rebusan="" tongluo="" digui="" berbanding="" dengan="" kumpulan="" model="" (="" p=""><>

Kesan rebusan Tongluo Digui pada autophagy podocyte glomerular dalam tikus DN

Perubahan dalam autofagosom dalam podosit glomerular diperhatikan di bawah TEM (Rajah 3). Keputusan menunjukkan autofagosom dalam podosit glomerular kumpulan normal. Autofagosom podocyte tidak hadir dalam kumpulan model, dan proses kaki podocyte juga hilang. Dalam tiga kumpulan dos rebusan Tongluo Digui dan kumpulan valsartan, kami memerhatikan autofagosom podosit glomerular, yang mencadangkan bahawa merebus Tongluo Digui meningkatkan autophagy podocyte dalam tikus DN. Western blot digunakan untuk mengesan ekspresi protein berkaitan autophagy P62, beclin-1, dan LC3 Ⅱ (Rajah 4). Berbanding dengan kumpulan biasa, ungkapan beclin-1 dan LC3Ⅱ dalam kumpulan model telah menurun dengan ketara (P < 0.01),="" manakala="" ungkapan="" p62="" meningkat="" dengan="" ketara="" (p="">< 0.01).="" penemuan="" ini="" menunjukkan="" bahawa="" autophagy="" telah="" dilemahkan="" dalam="" tikus="" dn.="" berbanding="" dengan="" kumpulan="" model,="" kumpulan="" dos="" tinggi="" merebus="" tongluo="" digui="" mempunyai="" ungkapan="" beclin-1="" dan="" lc3ⅱ="" terkawal="" naik="" (p=""><0.05), bersama-sama="" dengan="" ungkapan="" terkawal="" bawah="" p62.="" bersama-sama,="" keputusan="" ini="" menunjukkan="" bahawa="" kesan="" perlindungan="" buah="" pinggang="" rebusan="" tongluo="" digui="" dalam="" tikus="" dengan="" dn="" mungkin="" berkaitan="" dengan="" autophagy="" yang="" dipertingkatkan="" dalam="" sel-sel="" buah="">

Rebusan Tongluo Digui meningkatkan autophagy podosit glomerular dalam tikus DN dengan menghalang fosforilasi mTOR

Perencatan fosforilasi mTOR meningkatkan autophagy (Rajah 5). Berbanding dengan kumpulan biasa, fosforilasi mTOR dalam kumpulan model telah dipertingkatkan (P < 0.01),="" manakala="" dalam="" kumpulan="" rebusan="" tongluo="" digui="" ia="" telah="" dihalang="" (p=""><0.05). ini="" mencadangkan="" bahawa="" merebus="" tongluo="" digui="" meningkatkan="" autophagy="" podocyte="" dengan="" menghalang="" pengaktifan="" laluan="" isyarat="" mtor.="" kajian="" terdahulu="" telah="" menunjukkan="" bahawa="" autophagy="" melindungi="" podosit="" dan="" meningkatkan="" fungsi="" buah="">

PERBINCANGAN

DN terutamanya dicirikan oleh tanda dan gejala seperti kehadiran protein kencing, glukosa darah tinggi, polidipsia, polifagia, dan poliuria. Simptom-simptomnya adalah serupa dengan perubatan tradisional Cina, seperti "Xiao Ke", "Guan Ge" dan "edema". Kejadian dan perkembangan DN tidak dapat dipisahkan daripada asas patologi kekurangan yin dan stasis darah.6 Dengan perkembangan kekurangan Yin dan stasis darah, buah pinggang rosak secara beransur-ansur, dengan itu menunjukkan kehilangan protein kencing, yang seterusnya membawa kepada pembentukan mikrotrombus dan fibrosis buah pinggang. Pesakit DN tidak dapat tidak menderita penyakit buah pinggang peringkat akhir.11

Rebusan Tongluo Digui telah ditubuhkan oleh Zhang Binghou, seorang doktor perubatan tradisional Cina yang terkenal, dan berdasarkan pengalaman bertahun-tahun dalam rawatan DN.12, 13 rebusan Tougluo Digui terdiri daripada Shuichi (Hirudo), Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis), Dihuang (Radix Rehmanniae), Huangqi (Radix Astragali Perparata), Danggui (Radix Angelicae Sinensis), Ze Xie (Rhizoma Alismatis), Dahuang (Radix et Rhizoma Rhei), Gancio (Radix Glycyrrhizae). Antaranya, Shuizhi (Hirudo) dan Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) adalah ubat raja, yang kami percaya memainkan peranan dalam menyuburkan Yin dan menggalakkan peredaran darah di DN. Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) meningkatkan imuniti badan dan keadaan rembesan serta melambatkan penuaan.14 Shuizhi (Hirudo) mempunyai kesan anti-koagulan, anti-tumor, anti-radang dan anti-fibrotik antara tindakan farmakologi lain, dan boleh meningkatkan buah pinggang. perubahan patologi dalam DN untuk mengurangkan kreatinin serum dan kepekatan nitrogen urea darah dengan ketara, dan mengurangkan perkumuhan protein dalam air kencing.15,16 Dalam DN, kecederaan podosit memainkan peranan penting dalam halangan penapisan membran bawah tanah glomerular dan dalam pembentukan proteinuria.17 Nephrin dan podocin ialah kedua-dua protein membran-liang pada permukaan podosit. Kedua-dua protein berinteraksi untuk membentuk kompleks yang memainkan peranan penting dalam fungsi penghalang penapisan glomerular.18 Taburan ekspresi protein yang tidak normal membawa kepada darjah proteinuria yang berbeza.19 Dalam kajian ini, tikus DN jenis 1 yang disebabkan oleh STZ menunjukkan peningkatan. dalam perkumuhan protein dalam air kencing dan fungsi buah pinggang terjejas selama 24 jam. Selain itu, pewarnaan PAS menunjukkan bahawa bilangan sel mesangial dan matriks mesangial meningkat dalam kumpulan model, dengan itu menunjukkan bahawa model itu berjaya ditubuhkan. Dos rebusan Tongluo Digui yang berbeza mengurangkan kepekatan protein air kencing dan kreatinin serum 24 jam dan memperbaiki patologi buah pinggang tikus DN dengan pengurangan sel mesangial dan matriks. Analisis Western blot menunjukkan bahawa ekspresi nefrin dan podocin dalam kumpulan rebusan Tongluo Digui adalah lebih tinggi berbanding dengan kumpulan model, menunjukkan bahawa formula ini melambatkan perkembangan DN dalam tikus dengan melindungi podosit.

Autophagy ialah laluan untuk degradasi protein lisosom dalam sel dan memainkan peranan penting dalam pembersihan protein yang rosak atau tertekan berlebihan yang mengekalkan homeostasis dan integriti sel.20 Autophagy adalah penting kepada homeostasis lisosom podosit dalam diabetes, dan autophagy yang dipertingkatkan boleh mengurangkan kecederaan podosit. .5 Selepas secara khusus menyingkirkan gen berkaitan autophagy Atg5 dalam podosit, tikus secara beransur-ansur menunjukkan pengagregatan protein di mana-mana, kerosakan mitokondria, dan aktiviti autophagy dalam podosit; podosit menjadi rosak dan proses kaki hilang dan bergabung, yang menunjukkan bahawa autophagy dikekalkan. Mengekalkan fungsi podosit normal adalah penting.21,22 Dalam kajian ini, kami menyiasat kesan rebusan Tongluo Digui ke atas autophagy dalam podosit glomerular menggunakan analisis TEM dan Western blot. TEM menunjukkan bahawa bilangan autofagosom podosit dalam setiap kumpulan dos merebus Tongluo Digui meningkat berbanding dengan kumpulan model. Selain itu, Western blot menunjukkan ekspresi protein berkaitan autophagy LC3, beclin-1, dan p62. Berbanding dengan kumpulan model, ungkapan LC3Ⅱ dan beclin{11}} telah meningkat dengan ketara dalam kumpulan merebus Tongluo Digui, manakala ekspresi protein p62 menurun dengan ketara. Penemuan ini menunjukkan bahawa rebusan Tongluo Digui meningkatkan tahap autophagy dalam podosit glomerular.

Protein sasaran Rapamycin (mTOR) ialah salah satu pengawal selia utama autophagy.23 Ia diedarkan secara meluas dalam korteks buah pinggang dan medula dan memainkan peranan dalam perkembangan kecederaan podosit DN.24,25 Dalam situasi glukosa dan tekanan tinggi, mTOR diaktifkan dan terfosforilasi, yang membawa kepada fosforilasi sasaran hilirannya dan perencatan autophagy. Liu et al 26 menunjukkan bahawa perencat mTOR, rapamycin, secara khusus terikat kepada mTOR kinase dan menghalang aktiviti mTOR, autophagy podocyte dipertingkatkan, dan fungsi buah pinggang yang dilindungi. Kami mendapati bahawa fosforilasi mTOR telah dipertingkatkan dalam kumpulan model dan merebus Tongluo Digui menghalang proses ini, yang mencadangkan bahawa merebus Tongluo Digui meningkatkan autophagy dalam podosit dan boleh menghalang pengaktifan laluan isyarat mTOR.

Ringkasnya, rebusan Tongluo Digui boleh menghalang autophagy dalam podosit, melindungi podosit glomerular, mengekalkan integriti membran penapisan glomerular, mengurangkan perkumuhan protein air kencing selama 24 jam, dan melambatkan perkembangan DN dengan menghalang pengaktifan mTOR. Penemuan ini memberikan pandangan tentang pemahaman lanjut tentang kesan perlindungan rebusan Tongluo Digui dalam DN, bagaimanapun, mekanisme asas yang terlibat masih perlu dijelaskan.

apa itu cistancheuntuk penyakit buah pinggang

RUJUKAN
1 Tesch GH. Nefropati diabetik - adakah ini gangguan imun? Clin Sci 2017; 131(16): 2183-2199.
2 Li JJ, Kwak SJ, Jung DS, et al. Biologi podocyte dalam nefropati diabetik. Buah Pinggang Int Suppl 2007; (106): S36-S42.
3 Liu N, Xu L, Shi Y, Zhuang S. Podocyte autophagy: sasaran terapeutik yang berpotensi untuk mencegah perkembangan nefropati diabetik. J Diabetes Res 2017; 2017(4): 1-6.
4 Mizushima N, Komatsu M. Autophagy: pengubahsuaian sel dan tisu. Sel 2011; 147(4): 728-741.
5 Tagawa A, Yasuda M, Kume S, et al. Autophagy podocyte terjejas memburukkan lagi proteinuria dalam nefropati diabetik. Diabetes 2016; 65(3): 755-767.
6 Sun C, Xie QY, Meng QG. Kajian mengenai undang-undang pengedaran sindrom TCM nefropati diabetik. Beijing Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao 2015; 38(4): 266-270.
7 Szkudelski T. Mekanisme tindakan aloksan dan streptozotocin dalam sel B pankreas tikus. Physiol Res 2001; 50(6):537-546.
8 Dang WY, Hou LY, Wu HM, Yan XM, Zheng XF, Hao J. Keberkesanan rebusan Qingre Lishi Yishen pada fibrosis glomerular immunoglobulin A nefropati dalam model tikus. J Tradit Chin Med 2019; 39(4): 516-523.
9 Lu MK, Gong XG, Guan KL. mTOR dalam fungsi podocyte: adakah rapamycin baik untuk nefropati diabetik? Kitaran Sel 2011; 10(20): 3415-3416.
10 Hartleben B, Godel M, Meyer-Schlesinger C, et al. Autophagy mempengaruhi kerentanan penyakit glomerular dan mengekalkan homeostasis podosit dalam tikus yang semakin tua. J Clin Invest 2010; 120(4): 1084-1096.
11 Sun GD, Li CY, Cui WP, et al. Kajian herba Perubatan Tradisional Cina untuk rawatan nefropati diabetik. J Diabetes Res 2016; 2016: 5749857.
12 Zhao WJ, Cai Z, Meng Y, et al. Penggunaan kaedah Yin buah pinggang berkhasiat Zhang Binghou dalam merawat penyakit buah pinggang kronik. Beijing Zhong Yi Yao 2016; 35(4): 341-343.
13 Duan YF, Zhang HB. Pengenalan pengalaman permohonan Profesor Zhang Binghou. Xin Zhong Yi 2012; 44 (4): 147-149.
14 Yu XJ, Chen SH, Lu GY. Tinjauan penyelidikan mengenai farmakodinamik kulit kura-kura "Ziyin Bushen". Dang Dai Yi Xue 2009; 15(10): 15-17.
15 Pang XX, Tong Y, Li HP, Han JR. Penyelidikan kemajuan lintah dan ekstraknya dalam rawatan nefropati diabetik. Guang Ming Zhong Yi 2019; 34(1): 168-171.
16 Zhang ZL, Dong H. Kemajuan penyelidikan lintah dan bahan aktifnya dalam rawatan nefropati diabetikZhong Xi Yi Jie He Yan Jiu 2018; 10(02): 106- 110.
17 Dai H, Liu Q, Liu B. Kemajuan penyelidikan mengenai mekanisme pengurangan podosit dalam nefropati diabetik. J Diabetes Res 2017; 2017: 2615286.
18 Martin CE, Jones N. Nephrin memberi isyarat dalam podocyte: pandangan terkini peraturan isyarat pada diafragma celah dan seterusnya. Endokrinol Depan (Lausanne) 2018; 9: 302.
19 Jaakko P, Karl T. Susunan molekul penghalang penapisan glomerular. Biochem Bioph Res Co 2010; 396(1): 164-169.
20 Noboru M, Beth L, Ana Maria C, Klionsky DJ. Autophagy melawan penyakit melalui pencernaan diri selular. Alam 2008; 451(7182): 1069.
21 Lenoir O, Jasiek M, Henrique C, et al. Sel endothelial
dan podocyte autophagy secara sinergis melindungi daripada glomerulosklerosis yang disebabkan oleh diabetes. Autophagy 2015; 11(7): 1130-1145.
22 Ilatovskaya DV, Levchenko V, Lowing A, Shuyskiy LS, Palygin O, Staruschenko A. Kecederaan podocyte dalam nefropati diabetik: implikasi pengaktifan yang bergantung kepada angiotensin Ⅱ saluran TRPC. Sci Rep 2015; 5: 17637.
23 Rabanal-Ruiz Y, Otten EG, Korolchuk VI. mTORC1 sebagai pintu masuk utama ke autophagy. Esei Biochem 2017; 61 (6): 565-584.
24 Kim YC, Guan KL. mTOR: sasaran farmakologi untuk peraturan autophagy. J Clin Invest 2015; 125(1): 25-32.
25 Li XY, Wang SS, Han Z, et al. Triptolide memulihkan autophagy untuk mengurangkan fibrosis buah pinggang diabetes melalui laluan miR-141-3p/PTEN/Akt/mTOR. Asid Nukleik Mol Ther 2017; 9: 48-56.
26 Liu L, Yang L, Chang B, Zhang J, Guo Y, Yang X. Kesan perlindungan rapamycin pada autophagy sel dalam tisu buah pinggang tikus dengan nefropati diabetik melalui laluan isyarat mTORS6K1-LC3 Ⅱ. Ren Fail 2018; 40(1): 492-497.