Tumbuhan Thai Dengan Tahap Antioksidan Tinggi, Aktiviti Penghapusan Radikal Bebas, Aktiviti Anti-tirosinase Dan Anti-kolagenase

Hubungi:

Hubungi:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Moragot Chatatikun1 dan Anchalee Chiabchalard2

Abstrak

latar belakang:Sinaran ultraungu daripada cahaya matahari mendorong pengeluaran lebihan spesies oksigen reaktif (ROS) yang mengakibatkan penuaan foto kulit dan gangguan hiperpigmentasi. Sebatian pemutihan novel dan anti-kedut daripada produk semula jadi baru-baru ini menjadi semakin diminati. Tujuan kajian ini adalah untuk mencari produk yang mengurangkan ROS dalam 14 ekstrak tumbuhan Thai.

Kaedah:Untuk menentukan jumlah fenolik danflavonoidkandungan,antioksidanaktiviti,anti-tyrosinaseaktiviti, dan aktiviti anti kolagenase, kami membandingkan ekstrak 14 tumbuhan Thai yang disediakan menggunakan pelarut berbeza (eter petroleum, diklorometana dan etanol).Antioksidanaktiviti ditentukan oleh ujian DPPH dan ABTS.

Keputusan:Jumlah kandungan fenolik daripada 14 ekstrak tumbuhan Thai didapati pada tahap tertinggi dalam etanol diikuti oleh ekstrak diklorometana dan eter petroleum, manakalaflavonoidkandungan biasanya terdapat dalam pecahan diklorometana. Aktiviti mengais adalah antara 7 hingga 99 peratus mengais seperti yang dinilai oleh ujian DPPH dan ABTS. Ekstrak daun etanol Ardisia elliptica Thunb. mempunyai kandungan fenolik, aktiviti antioksidan, dan perencatan kolagenase tertinggi, manakala Cassia alata (L.) Roxb. ekstrak mempunyai yang paling kayaflavonoidkandungan. Menariknya, tiga ekstrak tumbuhan, yang merupakan pecahan etanol Annona squamosa L., Ardisia elliptica Thunb. dan Senna alata (L.) Roxb. mempunyai tinggiantioksidankandungan dan aktiviti dan dengan ketara menghalang kedua-duanyatyrosinasedan kolagenase.

Kesimpulan:Penemuan kami menunjukkan bahawa pecahan etanol Annona squamosa L., Ardisia elliptica Thunb. dan Senna alata(L.) Roxb. menunjukkan janji sebagai bahan berpotensi untuk produk kosmetik seperti agen anti kedutan dan produk pemutih kulit.

Kata kunci:Ardisia elliptica Thunb.,Antioksidankandungan, aktiviti mengais,Anti-tirosinaseaktiviti, Anti-collagenaseactivity

Flavonoid adalah salah satu unsurcistanche

Latar belakang

Sinaran ultraungu (UVR) daripada cahaya matahari adalah faktor risiko yang paling ketara untuk bukan melanoma dan kanser kulit melanoma [1]. Pendedahan berlebihan kepada cahaya matahari, khususnya UVA dan UVB, mendorong ekspresi berlebihan spesies oksigen reaktif (ROS) yang merosakkan lipid, protein, dan asid deoksiribonukleik. Kolagen adalah asas utama matriks ekstraselular dalam lapisan dermis kulit. ROS yang berlebihan meningkatkan ekspresi kolagenase, protease yang merendahkan kolagen yang boleh mengakibatkan penuaan foto dan kedutan pada kulit [2]. Di samping itu, pendedahan UV mendorong pengeluaran melanin yang mengakibatkan hiperpigmentasi.Tirosinaseadalah enzim utama yang memulakan pigmentasi kulit. Pertama, L-tirosin dihidroksilasi untuk membentuk 3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) oleh tyrosinase. Selepas itu, L-DOPA dioksidakan kepada DOPA kuinon oleh tyrosinase. DOPA kuinon seterusnya ditukar kepada DOPAchrome yang boleh ditukar kepada 5,6-dihydroxyindole(DHI) atau 5,6-dihydroxyindole-2-asid karboksilik (DHICA)[3]. Rawatan semasa untuk penuaan kulit melibatkan hydroxylacid untuk mengupas lapisan epidermis, retinoid untuk mengurangkan kulit kasar, dan pengisi kulit yang diberikan dengan menyuntik kolagen ke dalam kulit. Walau bagaimanapun, rawatan ini mempunyai kesan buruk, seperti hiperpigmentasi, keradangan, sitotoksisiti, kerengsaan, dan jangkitan bakteria [4]. Agen pemutihan kulit yang paling popular ialah hydroquinone, yang menghalangtyrosinase,tetapi kesan sampingannya termasuk dermatitis, edema, tindak balas alahan, dan ochronosis [5]. Baru-baru ini, penyelidik telah menumpukan pada produk semula jadi yang menghalang ROS akibat UV, menekan enzim, dan mengurangkan pembentukan melanin sebagai alternatif kepada rawatan semasa. Contohnya, phytocompounds aktif, seperti arbutin, aloesin, asid gentisic,flavonoid, hesperidin, likuoris, niacinamide, derivatif yis, dan polifenol, menghalang melanogenesis tanpa tomelanosit sitotoksisiti [6]. Oleh itu, tumbuhan boleh mengurangkan pembentukan kedutan dan hiperpigmentasi yang disebabkan oleh pendedahan cahaya matahari.

Matlamat kajian ini adalah untuk menganalisis 14 tumbuhan Thai yang diekstrak dengan tiga pelarut berbeza untuk potensinya sebagai bahan anti-kedut dan pemutihan kulit. Jumlahantioksidanfenol danflavonoidtelah dinilai untuk korelasi dengan aktiviti penghapusan radikal bebas, dan anti-kolagenase dananti-tirosinaseaktiviti. Ekstrak telahantioksidanyang menghilangkan radikal bebas dan menghalang enzim yang terlibat dalam pembentukan kedutan dan pigmen. Kami mengenal pasti Ardisia elliptica Thunb., Annona squamosa L., dan Senna alata (L.) Roxb ialah calon yang sangat menjanjikan untuk digunakan dalam produk kosmetik.

bina badan cistanche

Kaedah

Bahan kimia dan reagen

Reagen fenol Folin Ciocalteu, natrium karbonat(Na2CO3), asid gallik, kuersetin, 10 peratus aluminium klorida, etanol, 2, 2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH), asid askorbik, 2,2′-Azino- bis(3-ethylbenzthiazoline-6-asid sulfonik)(ABTS), kalium persulfat, asid kojic, cendawan tyrosinase (EC 1.14.18.1), 3,4-dihydroxy-L-phenylalanine(L- DOPA), N-[3-(2-furyl) acryloyl]-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA), kolagenase daripada Clostridium histolyticum (EC3.4.24.3), epigallocatechin gallate (EGCG) , natrium klorida, kalsium klorida dan dimetil sulfoksida (DMSO) telah dibeli daripada Sigma-Aldrich Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). Petroleum eter, diklorometana, etanol mutlak, metanol, disodium hidrogen fosfat, dan natrium dihidrogen fosfat telah dibeli dari Merck (Darmstadt, Jerman). Semua bahan kimia dan reagen adalah gred analitikal.

Bahan tumbuhan dan pengekstrakan

Tiga belas spesies daun Thai telah dikumpul dari Taman Herba Puteri Sirindhorn HRH, wilayah Rayong, Thailand. Manggis diperolehi dari wilayah Chanthaburi, Thailand. Tumbuhan ini telah disahkan dan disimpan di Herbarium, Jabatan Botani, Fakulti Sains, Universiti Chulalongkorn, Thailand. Nama saintifik, nombor baucar, dan bahagian tumbuhan ditunjukkan dalam Jadual 1. Tumbuhan diekstrak dengan menggunakan radas Soxhlet. Secara ringkasnya, 10 g tumbuhan kering diekstrak secara berasingan dengan petroleumeter, diklorometana dan etanol. Pelarut dikeluarkan menggunakan penyejat berputar vakum di bawah tekanan rendah menggunakan penumpu MiVac Quattro. Sampel pekat telah dilarutkan dalam DMSO pada 100 mg/ml dan disimpan pada -20 darjah sehingga digunakan. Hasil ekstrak kering dibentangkan dalam Jadual 1 sebagai peratus b/b bahan tumbuhan kering.

Penentuan jumlah kandungan fenolik

Jumlah kandungan fenolik ekstrak tumbuhan dinilai menggunakan kaedah Folin-Ciocalteu [7]. Secara ringkas, 50 ul ekstrak pada 1 mg/ml dalam air suling dicampurkan dengan 50 ul 10 peratus reagen Folin-Ciocalteu dan 50 ul 0.1 M Na2CO3. Campuran tindak balas telah diinkubasi selama 1 jam pada suhu bilik dalam gelap. Penyerapan pada 750 nm diukur dengan pembaca plat mikro (Biotek, Amerika Syarikat.). Asid gallic dari 1.56 hingga 100 ug/ml digunakan sebagai piawai. Jumlah kandungan fenolik ekstrak diekspresikan sebagai mg bersamaan asid gallik (GAE) setiap g bahan tumbuhan kering. Semua sampel dianalisis dalam tiga kali ganda.

Penentuan kandungan flavonoid

Jumlahflavonoidkandungan (TFC) ditentukan menggunakan ujian kolorimetrik alumunium klorida (AlCl3) [7]. Secara ringkas, 50 ul ekstrak pada 1 mg/ml dalam 80 peratus etanol telah dicampur dengan 50 ul larutan AlCl3 2 peratus dalam perigi plat dinding 96. Plat diinkubasi selama 15 minit pada suhu bilik. Penyerapan pada 435 nm telah mengukur menggunakan pembaca plat mikro. Quercetin dari 1.56 hingga 100 ug/ml berkhidmat sebagai standard. Jumlah kandungan flavonoid diekspresikan sebagai mg quercetin equivalents (QE) per g bahan tumbuhan kering. Sampel dianalisis dalam tiga kali ganda.

DPPH aktiviti scavenging

Ujian aktiviti scavenging DPPH dilakukan seperti yang diterangkan oleh Yamasaki et al. [8]. Penyelesaian DPPH baru disediakan untuk setiap ujian. Secara ringkasnya, 100 ekstrak ug/ml atau 1.56 hingga 100 ug/ml piawaian asid askorbik dalam metanol mutlak telah dicampur dengan 180 ul reagen DPPH dalam plat perigi 96. Campuran tindak balas diinkubasi selama 30 minit pada suhu bilik dalam gelap. Kemudian, penyerapan pada 517 nm diukur dengan pembaca plat mikro. Eksperimen telah dijalankan dalam tiga kali ganda. Serapan pada 517 nm DPPH ialah 0.70 ± 0.02 dan mengurangkan penyerapan diukur aktiviti pembersihan. Keupayaan mengais dikira sebagai aktiviti mengais ( peratus )=100 peratus × [(훥A517 kawalan - 훥A517 sampel)/ 훥A517 kawalan]. Peratusan aktiviti penghapusan DPPH ekstrak dibandingkan dengan asid askorbik, dan dinyatakan sebagai setara mgvitamin Cantioksidankapasiti (VCEAC) setiap bahan tumbuhan gdry. IC50 ditentukan daripada graf peratusan perencatan terhadap kepekatan (daripada 0.78–100 ug/ml setiap ekstrak).

Aktiviti mengais ABTS

Aktiviti penghapusan radikal bebas ABTS telah dilakukan seperti yang diterangkan sebelum ini [9]. Reagen kerja ABTS• ditambah telah disediakan dengan mencampurkan 7 mM ABTS• dan 2.45 mM kalium persulfat pada nisbah 8:12 isipadu/isipadu. Larutan kerja disimpan selama 16 hingga 18 jam pada suhu bilik dalam gelap. Larutan ABTS• tambah telah dicairkan dengan etanol mutlak untuk memberikan penyerapan pada 734 nm 0.70 ± 0.02. Kemudian, 100 ug/ml ekstrak atau 1.56 hingga 100 ug/ml piawaian asid askorbik dalam etanol mutlak ditambah kepada 180 ul ABTS• ditambah reagen kerja dalam telaga plat 96telaga. Plat diinkubasi selama 45 minit pada suhu bilik, dan penyerapan diukur pada 734 nm. Eksperimen telah dijalankan dalam tiga kali ganda. Kebolehpusingan dikira sebagai aktiviti mengais ( peratus )=100 × [(훥A734 kawalan - 훥A734 sampel)/ 훥A734 kawalan]. Peratusan aktiviti penghapusan ABTS ekstrak telah dibandingkan dengan asid askorbik, dan dibentangkan sebagai setara vitamin C.antioksidankapasiti (VCEAC)per g bahan tumbuhan kering. IC50 ditentukan daripada agraf peratus perencatan terhadap kepekatan (dari 15.62–1000 ug/ml setiap ekstrak).

Penentuan perencatan tyrosinase cendawan

Kaedah dopachrome dilakukan dengan sedikit pengubahsuaian [10]. Secara ringkasnya, 20 ul ekstrak tumbuhan atauDMSO (sebagai kawalan), 20 ul 203.3 unit/ml cendawan tyrosinase dan 140 ul daripada 20 mM fosfat penimbal pada pH 6.8 telah dipraeram selama 10 minit pada 25 darjah . Selepas pra-pengeraman, 20 ul 2.5 mM L-DOPA telah ditambah dan sampel kemudiannya diinkubasi selama 20 minit tambahan pada 25 darjah. Jumlah dopachrome diukur pada 492 nm dengan pembaca plat mikro. Asid Kojic (KA) berfungsi sebagai kawalan positif untuk perencatan. Perencatan peratus aktiviti tyrosinase ( peratus ) ialah peratus eksprestyrosinaseperencatan {{0}} × [(훥A492 kawalan –훥A492 sampel)/ 훥A492 kawalan]. Kepekatan akhir ekstrak dan asid kojik ialah 1 dan 0.1 mg/ml, masing-masing. IC50 ditentukan daripada agraf peratustyrosinaseperencatan terhadap kepekatan (dari 15.62–1000 ug/ml setiap ekstrak).

bina badan cistanche

Penentuan perencatan kolagenase

Perencatan kolagenase ditentukan oleh kaedah yang diterangkan sebelum ini [11]. Secara ringkas, 40 ul kolagenase daripadaClostridium histolyticum pada 0.25 unit/ml dalam penimbal Tricine 50 mM yang mengandungi 10 mM CaCl2 dan 400 mM NaCl, dan 10 ul penimbal Tricine 50 mM dicampur dengan10 ul daripada ekstrak atau DMSO (sebagai kawalan). Epigallocatechin gallate (EGCG) digunakan sebagai kawalan positif. Selepas 15-minit pengeraman pada suhu bilik, 50 ul N-[3-(2-furyl)acryloyl]-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA) telah ditambahkan. Penyerapan diukur pada 340 nm serta-merta dan berterusan selama 20 minit. Aktiviti enzim dinilai dengan penyerapan menurun semasa selang masa. Peratus perencatan aktiviti kolagenase dikira sebagai 100 × [(Aktiviti kawalan – Aktiviti sampel)/ Aktiviti kawalan]. Kepekatan akhir ekstrak dan epigallocatechin gallate ialah 1 dan 0.1 mg/ml, masing-masing. IC50 ditentukan daripada agraf peratus perencatan kolagenase terhadap kepekatan (dari 15.62–1000 ug/ml setiap ekstrak).

Analisis statistik

Semua eksperimen telah dijalankan dalam tiga kali ganda dan keputusan dinyatakan sebagai min ± ralat piawai. Pekali korelasi (R2) antaraantioksidankandungan dan aktiviti antioksidan ditentukan dengan menggunakan perisian SigmaPlotversion 12.2. Perbezaan antara kedua-dua min telah dinilai menggunakan ujian-t Pelajar. Perbezaan dianggap ketara apabila nilai P kurang daripada 0.05.

Keputusan

Hasil pengekstrakan

Jadual 1 menunjukkan nama saintifik, nombor baucar dan bahagian tumbuhan bagi 14 tumbuhan Thai yang digunakan dalam kajian ini. Peratus hasil ekstrak berjulat daripada 0.73 peratus hingga31.11 peratus mengikut berat (Jadual 1). Ardisia elliptica Thunb. mempunyai hasil tertinggi dalam eter petroleum (19.89 peratus ) ekstrak andetanol (31.11 peratus ), manakala Garcinia mangostanaL. mempunyai peratus hasil tertinggi daripada pengekstrakan diklorometana (11.07 peratus ).

Kandungan fenolik 14 tumbuhan Thai

Oleh itu, jumlah kandungan fenolik dalam tumbuhan ditentukan oleh kaedah Folin-Ciocalteu. Ekstrak mempunyai julat luas dalam bilangan fenol seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 2, dan nilai berubah sebanyak 33-kali ganda antara ekstrak. Ardisiaelliptica Thunb. mempunyai kandungan fenol tertinggi dalam ketiga-tiga jenis ekstrak, manakala kandungan fenolik terendah terdapat dalam Stemona curtissi Hook. f. petroleum etherextract.

Kandungan flavonoid 14 tumbuhan Thai

Sama seperti fenol, jumlahflavonoidkandungan berbeza dengan ketara antara spesies tumbuhan, antara 2.04 ± 0.16 hingga31.38 ± 0.81 mg QE setiap g bahan kering (Jadual 2). Secara amnya, pengekstrakan diklorometana menghasilkan yang paling tinggiflavonoidtahap berbanding dengan pelarut lain. Daripada semua ekstrak, kuantiti flavonoid tertinggi ditemui dalam ekstrak etanol daripada daun Senna alata (L.) Roxb (31.38 ± 0.81 mg QE perg bahan kering). Sebaliknya, Ardisia elliptica Thunb.(23.14 ± 1.10 mg QE per g bahan kering). mempunyai kandungan flavonoid terkaya dalam pecahan diklorometana. Selain itu, Ipomoea pes-caprae (L.) R.br. mempunyai kandungan flavonoid tertinggi di kalangan ekstrak eter petroleum (27.48 ± 2.59 mg QE per g bahan kering). Paras flavonoid yang paling rendah boleh dikesan adalah dalam ekstrak etanol daripada Daturametel L. Sebaliknya,flavonoidtidak ditemui dalam ekstrak petroleum eter dan diklorometana daripada Stemona curtisii Hook.f., dan ekstrak eter petroleum daripada Streblus asper Lour. dan Phyllanthus acidus (L.) Skeels. Jumlah kandungan flavonoid tidak berkorelasi dengan jumlah kandungan fenolik (R2=0.0284, Rajah 1a).

Aktiviti penghapusan radikal DPPH dalam ekstrak berbeza daripada 14 tumbuhan Thai

Aktiviti penghapusan radikal bebas menggunakan DPPH sebagai petunjuk adalah asasantioksidanujian [12]. Seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 3, aktiviti mengais ekstrak sangat berbeza-beza, antara 7.11 ± 0.59 peratus hingga 96.17 ± 0.05 peratus . Ekstrak etanol Ardisia ellipticaThunb mempunyai aktiviti pembersihan yang paling tinggi iaitu 96 peratus. Lebih-lebih lagi, yang terkuat seterusnyaantioksidan activities (>90 peratus ) diperhatikan dalam pecahan etanol daripada Stemonacurtisii Hook.f., Annona squamosa L., Phyllanthus acidus(L.) Skeels. dan Garcinia mangostana Linn. Dari segi pelarut lain, Ardisia elliptica Thunb juga mempunyai aktiviti mengais terkaya di kalangan pecahan eter petroleum, dan Garcinia mangostana L. mempunyai aktiviti antioksidan tertinggi dalam pecahan diklorometana. Keupayaan pemulungan terendah dikesan dalam Croton sublyratus Kurz dalam pecahan eter petroleum. Tiada aktiviti mengais yang dikesan dalam 7 ekstrak eter petroleum, dan 2 ekstrak diklorometana.

Aktiviti penghapusan radikal ABTS dalam ekstrak berbeza daripada 14 tumbuhan Thai

Antioksidanaktiviti fasa akueus dan lipid dalam tumbuhan juga telah dinilai dengan ujian penyahwarnaan menggunakan ABTS [13]. Sekali lagi, asid askorbik berfungsi sebagai standardantioksidan. As with the DPPH assay, scavenging activity in the ABTS assay varied greatly among the plant preparations with a similarly broad range from 8.03 ± 0.54% to 99.84 ± 0.07% (Table 4). Furthermore, the next strongest scavenging activities (> 90%) were observed in the same 4 ethanol fractions as shown by the DPPH assay. In addition, no scavenging activity was found in the same 5 petroleum ether extracts. In general, the values obtained with the ABTS assay were higher than the DPPH values. Hence, activity in the ethanol extract from Senna alata (L.) Roxb. was now observed as >90 peratus , dan aktiviti scavenger telah dikesan dalam semua ekstrak diklorometana, dan petroleum etherextracts daripada Annona squamosa L. dan Ipomoea pes-caprae(L.) R.br. yang tidak dikesan oleh ujian DPPH.

Perencatan aktiviti tyrosinase oleh ekstrak tumbuhan

Keupayaan sebatian daripada tumbuhan Thai untuk menghalang cendawantyrosinaseaktiviti dinilai menggunakan ujian invitro dengan L-DOPA sebagai substrat. Asid kojic berfungsi sebagai perencat yang diketahui dan menyebabkan perencatan maksimum 93.38 ± 1.63 peratus. Seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 5, hanya ekstrak etanol yang menghalang aktiviti tyrosinase dengan ketara, dengan Ardisia elliptica Thunb. persiapan menjadi pengecualian. Pecahan eter petroleum dan diklorometana Ardisia elliptica Thunb. menghalang aktiviti tyrosinase sebanyak lebih kurang 20 peratus . Pecahan etanol daripada Rhinacanthus nasutus (L.) Kurz (nilai IC 50 sebanyak 271.50 ug/ml) adalah perencat tyrosinase yang paling mujarab, diikuti oleh ekstrak etanol daripada Ardisia ellipticaThunb. dan Phyllanthus acidus (L.) Skeels. Pecahan etanol lain dengan ketara mengurangkan aktiviti enzimatik sebanyak lebih daripada 20 peratus (Jadual 5), manakala ekstrak selebihnya tidak mempunyai aktiviti perencatan yang boleh dikesan (data tidak ditunjukkan).

Perencatan aktiviti kolagenase oleh 14 tumbuhan

Ekstrak telah diuji untuk aktiviti anti-kolagenase menggunakan Clostridium histolyticum collagenase, dan N-[3-(2-furyl)acryloyl]-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA) sebagai substrat.Epigallatecatechin gallate ialah diketahui perencat kolagenase dan penurunan aktiviti enzim sebanyak 90.51 ± 2.79 peratus . Seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 5, hanya 4 ekstrak etanol yang mengandungi aktiviti perencatan kolagenase yang boleh dikesan. Daripada mereka yang menyebabkan perencatan, Ardisia elliptica Thunb. (Nilai IC 50 sebanyak157.78 ug/ml) mempamerkan tahap perencatan kolagenase tertinggi, diikuti oleh Annona squamosa L. (nilai IC 50 sebanyak426.67 ug/ml), Senna alata (L.) Roxb., dan Croton sublyratusKurz dalam pangkat pesanan. Ekstrak tumbuhan lain tidak menghalang aktiviti kolagenase dengan ketara di bawah keadaan tindak balas yang digunakan dalam kajian ini (data tidak ditunjukkan).

Perbincangan

Sinaran suria adalah faktor persekitaran yang penting dalam kerosakan kulit dan boleh menyebabkan kanser kulit [14]. Sinaran UV menyebabkan tindak balas pro-radang, kemerosotan matriks ekstraselular danantioksidankehabisan [15, 16]. UV menyebabkan pembentukan spesies oksigen reaktif (ROS) yang mendorong hiperpigmentasi dan ekspresi kolagenase [17, 18].Kajian kami menyiasat 14 tumbuhan Thai yang diekstrak dengan tiga pelarut berbeza untuk potensinya sebagai bahan anti-kedut dan pemutihan kulit. Dalam kajian ini, kami menggunakan eter petroleum, diklorometana dan etanol untuk pengekstrakan tumbuhan menggunakan radas Soxhlet. Ardisia elliptica Thunb. mempunyai hasil tertinggi dalam eter petroleum dan ekstrak etanol, manakala Garcinia mangostana L. mempunyai peratus hasil tertinggi daripada pengekstrakan diklorometana. Pelarut ini adalah siri pelarut organik dengan kekutuban yang semakin meningkat. Variasi antara peratus hasil bergantung pada spesies tumbuhan, dan mungkin mencerminkan perbezaan dalam komposisi kimia tumbuhan.

Fenolik adalah kumpulan fitokimia terbesar yang terdapat dalam tumbuhan dan ia mempunyai pelbagai aktiviti biologi dalam haiwan, termasuk manusia [19]. Jumlah kandungan fenolik dalam tumbuhan ditentukan oleh kaedah Folin Ciocalteu. Secara keseluruhannya, pecahan etanol mempunyai kandungan fenolik terkaya, diikuti oleh diklorometana, manakala petroleum eter dengan kekutuban rendah mempunyai kandungan fenolik yang paling rendah berbanding pelarut lain. Dalam kajian ini, Ardisia elliptica Thunb. mempunyai kandungan fenolik tertinggi dalam ketiga-tiga jenis ekstrak. Dalam kajian terdahulu, ekstrak daun diklorometana Ardisia elliptica Thunb.mempunyai kandungan fenolik 101 ± 1.3 mg GAE per g bahan tumbuhan kering, iaitu lebih daripada kandungan dalam ekstrak ranting [20]. Selain itu, ekstrak metanol buah Ardisia masak mengandungi 5.64 ± 0.37 g GAE setiap 100 g ekstrak [21]. Oleh itu, daun dan buah Ardisia ellipticaThunb. mempunyai kandungan fenolik yang tinggi yang boleh diekstrak dengan mudah dengan metanol, diklorometana, dan etanol.

Flavonoidadalah pigmen dalam bunga, daun, buah, dan biji. Sebatian ini adalah metabolit sekunder tumbuhan dan diedarkan secara meluas di kalangan spesies tumbuhan [22]. Seterusnya, kandungan flavonoid dalam tumbuhan Thai telah dinilai menggunakan ujian kolorimetrik aluminium klorida. Keputusan kami menunjukkan bahawa kuantiti flavonoid tertinggi ditemui dalam ekstrak etanol daripada Senna alata (L.) Roxbleaves. Dalam kajian terdahulu, kandungan flavonoid yang tinggi ditemui dalam air (4.25 mg QE setiap 100 g) dan pecahan metanol (3.97 mg QE setiap 100 g) Senna alata (L.) Roxb.[23]. Oleh itu, sediaan Senna alata (L.) Roxb mempunyai kandungan flavonoid yang tinggi apabila diekstrak dengan pelarut kekutuban yang tinggi termasuk etanol, metanol dan air. Ardisiaelliptica Thunb. mempunyai kandungan flavonoid terkaya dalam pecahan diklorometana. Buah tumbuhan ini juga mempunyai kandungan flavonoid yang tinggi iaitu 36.91 ± 2.37 mg QE per g ekstrak [24]. Oleh itu, buah dan daun Ardisia elliptica Thunb. adalah flavonoid yang kaya. Jumlah kandungan flavonoid tidak berkorelasi dengan jumlah kandungan fenolik. Walau bagaimanapun,flavonoidmempunyai banyak aktiviti biologi seperti perlindungan UVB [25], anti-radang [26], anti-hepatotoksisiti [27] dan anti-kanser [28].

Aktiviti penghapusan radikal bebas menggunakan DPPH dan ABTSassay. Dalam ujian DPPH, DPPH menerima hidrogenatom daripada anantioksidan[29]. Kami mendapati bahawa ekstrak etanol Ardisiaelliptica Thunb mempunyai aktiviti penghapusan yang paling tinggi. Penyiasat lain juga telah melaporkan pecahan diklorometana Ardisia elliptica Thunb.daun dan batang mempunyai tahap tinggiantioksidanaktiviti yang ditentukan oleh ujian DPPH, dan, oleh itu, tumbuhan ini sangat menarik untuk disiasat lebih lanjut sebagai rawatan herba [20]. Ekstrak daripada pecahan etanol dengan kekutuban yang tinggi jelas menunjukkan lebih baikantioksidanaktiviti daripada pecahan dengan kekutuban yang lebih rendah mengandungi diklorometana dan eter petroleum. Ekstrak etanol mengandungi tahap tertinggi aktiviti penghapusan radikal bebas berbanding dengan ekstrak lain, dan semua ekstrak etanol adalah aktif. Dalam ujian ABTS, ABTS ditukar kepada radikalisasinya dengan penambahan kalium persulfat. Dengan kehadiran antioksidan, kation ABTS reaktif (atau ABTS• tambah ) ditukar kepada bentuk semula jadi yang tidak berwarna [9]. Selaras dengan ujian DPPH, ekstrak etanol mengandungi tahap aktiviti pemulung yang paling tinggi berbanding dengan ekstrak lain. Sekali lagi, aktiviti penghapusan tertinggi inethanol, diklorometana, dan ekstrak eter petroleum adalah daripada tumbuhan yang sama seperti yang ditunjukkan oleh ujian DPPH. Keputusan ujian DPPH dan ABTS sangat berkorelasi seperti yang dijangkakan (Rajah 1f).

Walau bagaimanapun, jumlahflavonoidkandungan ekstrak tumbuhan tidak berkorelasi dengan aktiviti penghapus radikal bebas yang dikesan oleh ujian DPPH (Rajah 1c) atau oleh ujian ABTS (Rajah 1e). Penemuan kami tiada hubungan yang signifikan antaraflavonoidkandungan dan aktiviti pemulung menggunakan ujian ABTS adalah konsisten dengan keputusan penyiasat lain [30]. Sebaliknya, jumlah kandungan fenolik penyediaan tumbuhan berkorelasi positif dengan aktiviti pemulung yang diukur oleh ketidaksetujuan kedua-dua ujian (Rajah 1b dan d) dengan kajian terdahulu [31]. Secara ketara, aktiviti mengais bergantung kepada jumlah kandungan fenolik dan pelarut dengan kekutuban yang tinggi, seperti etanol dan diklorometana. Keputusan ini menunjukkan bahawa kandungan fenolik adalah juzuk utama denganantioksidanaktiviti di 14 loji Thai.

Melanin, pigmen utama warna kulit dan rambut, disintesis oleh melanosit dalam melanosom. Pengeluaran berlebihan dan pengumpulan melanin dalam kulit boleh menyebabkan gangguan pigmen dan masalah estetik. Hiperpigmentasi berlaku di kawasan kulit yang terdedah kepada matahari [32]. Dalam melanogenesis,tyrosinaseialah enzim utama dalam langkah mengehadkan kadar di mana L-tirosin dihidroksilasi kepada L-DOPA, yang selanjutnya dioksidakan kepada DOPAquinon. Selepas itu, ia ditukar kepada DOPAchrome yang merupakan substrat untuk sintesis melanin [3]. Downregulation oftyrosinaseaktiviti telah dicadangkan untuk bertanggungjawab untuk penurunan pengeluaran melanin. Perkembangan sebatian fitokimia pemutihan novel daripada produk semula jadi baru-baru ini menjadi trend yang semakin berkembang. Penemuan kami menunjukkan bahawa pecahan etanol daripada Rhinacanthus nasutus (L.) Kurz adalah perencat tyrosinase yang paling kuat, diikuti oleh ekstrak etanol daripada Ardisia elliptica Thunb. dan Phyllanthus acidus (L.) Skeels. Jelas sekali, 7 tumbuhan daripada 14tumbuhan mempunyai kandungan fenolik yang tinggi, terutamanya Ardisiaelliptica Thunb. dan Annona squamosa L. Selain itu, Senna alata (L.) Roxb. mempunyai yang terkayaflavonoidkandungan yang boleh menghalang aktiviti tyrosinase. Sebatian aktif daripada tumbuhan seperti arbutin, aloesin, asid gentisic, flavonoid, hesperidin, licorice, niacinamide, derivatif yis, dan polifenol, boleh menghalang melanogenesis tanpa sitotoksisiti kepada melanosit [6].

Kolagenase ialah zink peptidase transmembran yang memecahkan ikatan X-Gly kolagen. Kolagen ialah protein struktur yang banyak dan komponen matriks ekstraselular [33]. Penurunan kolagen dan gentian elastin meningkat dengan usia dan kerosakan akibat sinaran UV yang menyebabkan kulit berkedut[34]. Perencatan kolagenase telah dicadangkan untuk mencegah penuaan kulit. Daripada mereka yang menyebabkan perencatan dalam kajian kami, Ardisiaelliptica Thunb. mempamerkan tahap perencatan kolagenase tertinggi, diikuti oleh Annona squamosa L., Senna alata(L.) Roxb., dan Croton sublyratus Kurz dalam susunan pangkat. Dalam kajian terdahulu, ekstrak buah koko mempunyai asid fenolik danflavonoidyang menghalang aktiviti elastase dan kolagenase [35]. Terutamanya, tiga ekstrak etanol (Ardisia elliptica Thunb., Annona squamosa L., dan Senna alata (L.) Roxb. menghalang kedua-duanyatyrosinasedan kolagenase. Tumbuhan ini juga mempunyai paras fenolik dan flavonoid, danantioksidanaktiviti.Menariknya, ekstrak ini mempunyai kemungkinan kegunaan sebagai bahan untuk produk kosmetik.

Kesimpulan

Keputusan kami menunjukkan bahawa ekstrak 14 tumbuhan Thai mempunyai pelbagai darjah jumlah fenolik danflavonoidkandungan serta aktiviti penghapusan radikal bebas, bergantung pada pelarut pengekstrakan. Terdapat korelasi yang tinggi antara jumlah kandungan fenolik dan aktiviti pemusnahan radikal bebas yang dinilai oleh ujian DPPH dan ABTS. Pecahan etanol Ardisia ellipticaThunb. mempunyai kandungan fenolik yang paling tinggi, diikuti oleh Annona squamosa L. Kedua-dua tumbuhan merencatkan aktiviti tyrosinase dan kolagenase dengan ketara, manakala Rhinacanthusnasutus (L.) Kurz menunjukkan perencatan tyrosinase yang paling tinggi. Selain itu, Senna alata (L.) Roxb. adalah paling kaya dengan kandungan flavonoid, dan juga dipamerkantyrosinasedan tingkah laku perencatan kolagenase. Pecahan etanol daripada tiga tumbuhan, iaitu Annona squamosa L., Ardisia elliptica Thunb, dan Senna alata (L.) Roxb., berpotensi menjadi bahan dalam produk kosmetik untuk anti-kedutan serta pemutihan kulit. Kajian lanjut diperlukan untuk menyiasat komponen aktif dan keselamatan ekstrak ini.

bina badan cistanche

Rujukan

1. Moehrle M. Sukan luar dan kanser kulit. Clin Dermatol. 2008;26(1):12–5.

2. Lopez-Camarillo C, Ocampo EA, Casamichana ML, Perez-Plasencia C, Alvarez-Sanchez E, Marchat LA. Kinase protein dan faktor transkripsi pengaktifan sebagai tindak balas kepada sinaran UV kulit: implikasi untuk karsinogenesis. Int J Mol Sci. 2012;13(1):142–72.

3. Iwata M, Corn T, Iwata S, Everett MA, Fuller BB. Hubungan antara aktiviti tyrosinase dan warna kulit dalam kulup manusia. J Investig Dermatol.1990;95(1):9–15.

4. RS Stern. Rawatan Photoaging. N Engl J Med. 2004;350(15):1526–34.

5. Levin CY, Maibach H. Okronosis eksogen. Kemas kini tentang ciri klinikal, agen penyebab dan pilihan rawatan. Am J Clin Dermatol. 2001;2(4):213–7.

6. Zhu W, Gao J. Penggunaan ekstrak botani sebagai agen pencerah kulit topikaluntuk penambahbaikan gangguan pigmentasi kulit. J Investig DermatolSymp Proc. 2008;13(1):20–4.

7. Zongo C, Savadogo A, Ouattara L, Bassole IHN, Ouattara CAT, Ouattara AS,Barro N, Koudou J, TraoreI AS. Kandungan polifenol, aktiviti antioksidan dan antimikrobial Ampelocissus grantii (tukang roti) Planch. (Vitaceae): tumbuhan perubatan dari Burkina Faso. Int J Pharmacol. 2010;6(880–887)

8. Yamasaki K, Hashimoto A, Kokusenya Y, Miyamoto T, Sato T. Kaedah elektrokimia untuk menganggar kesan antioksidatif ekstrak metanol ubat mentah. Chem Pharm Bull (Tokyo). 1994;42(8):1663–5.

9. Re R, Pellegrini N, Proteggente A, Pannala A, Yang M, Rice-Evans C.Aktiviti antioksidan menggunakan ujian penyahwarnaan radikal ABTS yang dipertingkatkan. Percuma Radic Biol Med. 1999;26(9–10):1231–7.

10. Nithitanakool S, Pithayanukul P, Bavovada R, Saparpakorn P. Kajian dok molekul dan aktiviti anti-tirosinase ekstrak biji biji mangga Thai. Molekul. 2009;14(1):257–65.

11. Bonvicini F, Antognoni F, Ianello C, Maxia A, Poli F, Gentilomi GA. Aktiviti selektif dan relevan Pancratium Illyricum L. terhadap Candida Albican pencilan klinikal: kesan gabungan pada pertumbuhan yis dan virulensi. BMCComplement Altern Med. 2014;14(1):409.

12. Sharma OP, Bhat TK. Ujian antioksidan DPPH dikaji semula. Kimia Makanan. 2009;113(4):1202–5.

13. MacDonald-Wicks LK, Wood LG, Garg ML. Metodologi untuk penentuan kapasiti antioksidan biologi secara in vitro: kajian semula. J Sci Food Agric. 2006;86(13):2046–56.

14. Armstrong BK, Kricker A. Epidemiologi kanser kulit yang disebabkan oleh UV. JPhotochem Photobiol B Biol. 2001;63(1–3):8–18.

15. Bashir MM, Sharma MR, Werth VP. UVB dan sitokiness pro-radang secara sinergi mengaktifkan pengeluaran TNF dalam keratinosit melalui transkripsi gen yang dipertingkatkan. J Menyiasat Dermatol. 2009;129(4):994–1001.

16. Watson RE, Gibbs NK, Griffiths CE, Sherratt MJ. Kerosakan pada matriks ekstraselular kulit yang disebabkan oleh pendedahan UV. Isyarat Redoks Antioksida. 2014;21(7):1063–77.

17. D'Orazio J, Jarrett S, Amaro-Ortiz A, Scott T. Sinaran UV dan kulit. Int JMol Sci. 2013;14(6):12222–48.

18. Pittayapruek P, Meephansan J, Prapapan O, Komine M, Ohtsuki M. Peranan Metalloproteinases matriks dalam Penuaan Foto dan Fotokarsinogenesis. Int J MolSci. 2016;17(6):868.

19. Sulaiman CT, Balachandran I. Jumlah fenolik dan jumlah flavonoid tumbuhan ubatan India yang terpilih. India J Pharm Sci. 2012;74(3):258–60.

20. Mamat N, Jamal JA, Jantan I, Husain K. Xanthine Oxidase inhibitory andDPPH radical scavenging activities of some Primulaceae species. SainsMalaysiana. 2014;43(12):1827–33.

21. Wetwitayaklung P, Charoenteeraboon J, Limmatvapirat C, Phaechamud T.Aktiviti antioksidan beberapa buah Thai dan eksotik yang ditanam di Thailand.Res J Pharm, Biol Chem Sci. 2012;3(1):12–21.

22. Falcone Ferreyra ML, Rius SP, Casati P. Flavonoid: biosintesis, fungsi biologi, dan aplikasi bioteknologi. Sci Loji Depan. 2012;3:222.

23. Devendra K, Kiran D, Ritesh V, Satyendra B, Abhishek K. Untuk penilaian Jumlah Fenolik dan Flavonoid dalam Loji Chhattisgarh yang berbeza. JPharmacognosy Phytochem. 2013;2(4):116–8.

24. Siti-Azima AM, Northam A, Nurhuda M. Aktiviti antioksidan SyzygiumCumini dan ArdisiaElliptica berhubung dengan anggaran komposisi Fenolik dan sifat kromatiknya. Int J Biosci Biochem Bioinform. 2013;3(4):314–7.

25. Solovchenko A, Schmitz-Eiberger M. Kepentingan flavonoid kulit untuk perlindungan UV-B dalam buah epal. J Exp Bot. 2003;54(389):1977–84.

26. Gonzalez-Gallego J, Sanchez-Campos S, Tunon MJ. Sifat anti-radang flavonoid pemakanan. Nutr Hosp. 2007;22(3):287–93.

27. Sudha A, Sumathi K, Manikandaselvi S, Prabhu NM, Srinivasan P. Aktiviti anti hepatotoksik pecahan Flavonoid mentah Lippia Nodiflora L. kecederaan hati akibat onethanol pada tikus. Asian J Anim Sci. 2013;7(1):1–13.

28. Sak K. Sitotoksisiti flavonoid pemakanan pada jenis kanser manusia yang berbeza.Pharmacogn Rev. 2014;8(16):122–46.

29. Kedare SB, Singh RP. Kejadian dan pembangunan kaedah DPPH untuk ujian antioksidan. J Food Sci Technol. 2011;48(4):412–22.

30. Boo HO, Kim TS, Koshio K, Shin JH, Chon SU. Jumlah paras fenolik dan sifat antioksidan dalam ekstrak metanol daripada beberapa tumbuhan liar Vietnam. Korea J Plant Re. 2011;24(6):659–65.

31. Dudonne S, Vitrac X, Coutiere P, Woillez M, Merillon JM. Kajian perbandingan sifat antioksidan dan jumlah kandungan fenolik 30 ekstrak tumbuhan kepentingan industri menggunakan ujian DPPH, ABTS, FRAP, SOD, dan ORAC. J AgricFood Chem. 2009;57(5):1768–74.

32. Slominski A, Tobin DJ, Shibahara S, Wortsman J. Melanin pigmentasi kulit inmamalia dan peraturan hormonnya. Physiol Rev. 2004;84(4):1155–228.

33. Shoulders MD, Raines RT. Struktur dan kestabilan kolagen. Annu RevBiochem. 2009;78:929–58.

34. Cua AB, Wilhelm KP, Maibach HI. Sifat elastik kulit manusia: hubungan dengan umur, jantina, dan kawasan anatomi. Arch Dermatol Res. 1990;282(5):283–8.

35. Karim AA, Azlan A, Ismail A, Hashim P, Gani SSA, Zainudin BH, Abdullah NA.Komposisi fenolik, antioksidan, anti-kedut dan aktiviti perencatan tyrosinase ekstrak buah koko. BMC Complement Altern Med. 2014;14(381):1–13.