Menilai Sifat Antioksidan, Pemutihan Dan Antipenuaan Hidrolisat Protein Beras

Hubungi:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Hui-Ju Chen 1,2, Fan-Jhen Dai 2, Cheng-You Chen 3, Siao-Ling Fan 2, Ji-Hong Zheng 4, Yu-Chun Huang 2,Chi-Fai Chau 1, Yung-Sheng Lin 3, 4,5,* dan Chin-Shuh Chen 1,*

Abstrak:Hidrolisat protein yang berasal dari tumbuhan mempunyai potensi aplikasi dalam pemakanan. Proteinhidrolisis beras (RPHs), sumber protein yang sangat baik, telah menarik perhatian untuk pembangunan kosmetik. Walau bagaimanapun, beberapa kajian telah melaporkan potensi penggunaan analisis RPH, dan kajian ini mengkaji merekaantioksidanaktiviti dan aktiviti perencatan enzim pengupasan kulit. Keputusan menunjukkan bahawa jumlah kepekatan fenolik dan flavonoid ialah2.06 ± 0.13 mg bersamaan asid gallik/g RPH dan 25.96 ± 0.52 µg setara kuersetin/g RPH, masing-masing. RPH menunjukkan aktiviti bergantung kepada dos untuk menghilangkan radikal bebas daripada 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil [kepekatan perencatan separuh maksimum (IC50)=42.58 ± 2.1 mg/g RPH]dan 2 ,20-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-asid sulfonik) (IC50=2.11 ± 0.88 mg/g RPHs), kapasiti pengurangan bergantung dos (6.95 ± 1.40 mg vitamin C setara/g RPH) dan kapasiti penyerapan radikal oksigen (473 µmol Trolox setara/g RPH). Kepekatan larutan RPH yang diperlukan untuk mencapai 50 peratus perencatan hyaluronidase dantyrosinaseaktiviti ditentukan masing-masing adalah 8.91 dan 107.6 mg/mL. Kajian ini menunjukkan bahawa RPH mempunyaiantioksidan, aktiviti antihyaluronidase, dan antityrosinase untuk aplikasi kosmetik masa hadapan.

Kata kunci:hidrolisat protein beras;antioksidan; hyaluronidase;tyrosinase; kosmetik

cistanchepemutihankesanpada kulit keanti pengoksidaan

1. Pengenalan

Pendedahan sinaran ultraungu bertanggungjawab untuk penuaan foto (atau penuaan ekstrinsik); Sebaliknya, spesies oksigen reaktif yang dihasilkan dalam metabolisme sel dan kemerosotan fungsi biologi bertanggungjawab untuk penuaan intrinsik [1,2]. Makanan yang diproses selalunya mengandungi semula jadiantioksidanseperti katekin, asid askorbik, tokoferol, asid rosmarinik, dan ekstrak fenolik daripada pelbagai tumbuhan. Penyelidikan yang dijalankan terhadap antioksidan semula jadi kini mempertimbangkan asal-usul bukan tradisi. Bersumber secara semulajadiantioksidanlebih diingini daripada dihasilkan secara kimiaantioksidankerana beberapa antioksidan sintetik telah dilaporkan sebagai karsinogenik [3]. Beras (Oryza sativa) adalah makanan ruji utama untuk orang di seluruh dunia, terutamanya mereka yang tinggal di Asia. Pengeluaran beras tahunan dunia adalah kira-kira 741 juta tan [4]. Di negara Asia, beras dilaporkan merupakan sumber 75 peratus daripada pengambilan tenaga lebih 2 bilion orang [5]. Pengeluaran beras yang meluas menghasilkan jumlah pengeluaran hasil sampingan yang sepadan. Produk sisa daripada proses pengeluaran beras mengandungi sebahagian besar protein bijirin (~60–85 peratus ) tetapi dibuang atau digunakan untuk memberi makan haiwan [6–8]. Peptida yang diperoleh daripada pelbagai hidrolisat protein dilaporkan bertindak sebagai berpotensiantioksidan[9]. Oleh itu, antioksidan semulajadi dan bukan toksik boleh diekstrak daripada hidrolisat protein makanan. Ramai sarjana telah menggunakan model kaya-lipid dan melaporkan hidrolisat protein serta susu, zein, dan peptida protein soya mempunyai ciri-ciri antioksidan yang penting, termasuk penghapusan radikal bebas, perencatan makanan dan peroksidasi lipid in-vitro, dan pengkelat logam peralihan [10- 12].

Asid hyaluronik (HA) membantu meremajakan kulit kerana ia meningkatkan kelikatan, mengandungi kelembapan, dan menjadikan cecair ekstrasel kurang telap. Kerana kapasiti menahan air yang sangat baik, HA meningkatkan keremajaan, kelembapan, dan kehalusan kulit serta mengurangkan tahap kedutan [13,14]. Malangnya, tahap HAin kulit secara semula jadi berkurangan dengan usia. Hyaluronidase ialah enzim yang memusnahkan HA, menyebabkan kehilangan kekuatan kulit, fleksibiliti, dan kelembapan, yang seterusnya, membawa kepada penuaan kulit. Oleh itu, kedutan boleh dirawat dengan menghalang hyaluronidase dan mengekalkan kandungan HA kulit [15,16]. Enzim penghasil melanintyrosinasemenyumbang secara penting kepada langkah menghadkan kadar proses melalui mana melanin dihasilkan. Oleh itu, gangguan pigmentasi biasanya dirawat dan pencerahan kulit dicapai dengan menghalang atau menurunkan kawal selia.tyrosinaseaktiviti [17,18].

Dalam beberapa kajian, hidrolisat protein bijirin dan peptida yang boleh diperolehi daripadanya telah didapati mempunyai antioksida, antihipertensi, dan antitumoraktiviti [19,20]. Sumbangan positif kepada kesihatan manusia peptida dan protein yang berasal dari makanan secara beransur-ansur diiktiraf [21]. Pengguna semakin menuntut industri kosmetik dan penjagaan kesihatan menggunakan sebatian bioaktif semula jadi. Proteinhidrolisat beras (RPHs) telah menarik perhatian sebagai sumber protein yang sangat baik. Walau bagaimanapun, beberapa kajian telah melaporkan pencirian dan analisis fungsi RPH. Oleh itu, kajian ini menilai aktiviti antioksidan dan hyaluronidase dantyrosinase-aktiviti perencatan RPH.

2. Keputusan dan Perbincangan

2.1. Jumlah Kepekatan Fenolik (TPC) dan Jumlah Kandungan Flavonoid (TFC)

Piawaian dalam ujian TPC ialah asid gallik dengan beberapa kepekatan. Penyerapan tinggi menunjukkan TPC yang lebih tinggi. TPC sampel RPH diperoleh dengan memasukkan nilai penyerapan optik sampel RPH ke dalam lengkung penentukuran asid gallic. Memplot kepekatan RPH melawan kepekatan fenolik (Rajah 1a), purata TPC sebanyak 2.06 ± 0.13 mg GAE/g RPH telah diperolehi. TFC sebanyak 25.96 ± 0.52 µg QE/gRPHs diperoleh dengan mengikuti prosedur yang serupa (Rajah 1b). Rajah 1c mengaitkan lagi TPC dan TFC bagi sampel RPH. Ia mendedahkan bahawa hubungan antara TPC dan TFC boleh dinyatakan sebagai y=0.0121x campur 0.0659, dengan x dan y ialah TPC dan TFC, masing-masing.

TPC RPH termasuk kepekatan asid amino fenolik dan sebatian fenolik peptida. Interaksi sebatian protein-fenolik secara amnya melibatkan ikatan scovalen dan bukan kovalen. Sebatian fenolik dibebaskan semasa hidrolisis enzimatik. Enzim khusus mungkin paling mampu memusnahkan kompleks protein-polifenol; ini mengakibatkan lebih banyak sebatian fenolik dan peptida dengan kumpulan fenolik, seperti tirosin, dibebaskan [22]. Kolerasi yang kuat telah dilaporkan antara jumlah kandungan polifenol bijirin dan aktiviti biologinya. Polifenol terkenal mempunyai aktiviti antioksidan yang kuat [23]. Walaupun didapati dalam jumlah yang kurang, terpenes [24] orsesquiterpenes [25] dalam beras juga boleh menyumbang kepada aktiviti antioksidan.

2.2. Aktiviti Antioksidan

2.2.1. Aktiviti Pemusnahan Radikal Radikal Bebas DPPH

Rajah 2 menggambarkan aktiviti penghapusan radikal bebas DPPH dalam larutan RPH. Kepekatan larutan yang lebih tinggi didapati menghasilkan aktiviti yang lebih tinggi. Kepekatan perencatan separuh maksimum (IC50), iaitu kepekatan ekstrak yang mana separuh daripada semua radikal bebas DPPH boleh dibuang, ialah 42.58 ± 2.1 mg/mL peptida beras.

2.2.2. Aktiviti Pemusnahan Radikal Bebas ABTS

Aktiviti penghapusan radikal bebas ABTS RPH, yang digambarkan dalam Rajah 3, adalah lebih tinggi apabila kepekatan ekstrak yang lebih besar digunakan. IC50 ialah 2.11 ± 0.88 mg/mL peptida beras. Keputusan ini menunjukkan bahawa RPH mempunyai aktiviti penghapusan radikal bebas ABTS yang kuat. Asid amino yang mengandungi sulfur, termasuk Met dan Cys, dan asid amino hidrofobik, termasuk Ala, Val, Ile, Leu, Met, Cys, Tyr, Phe, Try, dan Pro, mungkin merupakan faktor penting yang berkaitan dengan radikal bebas ABTS. aktiviti mengais.

Dalam kajian ini, nilai IC50 bagi aktiviti penghapusan radikal bebas ABTS adalah lebih rendah daripada aktiviti penghapusan radikal bebas DPPH, bersetuju dengan keputusan kulit dan isirong biji jarak Jatropha curcas L. [28] dan biji buah jujube dan pulpa kulit [29]. Penemuan ini juga sepadan dengan laporan hidrolisis protein dedak padi dengan sampel 43.98–66.25 µmoL Trolox setara/g dan sampel 403.28–430.12 µmoL Trolox setara/g untuk aktiviti penghapusan radikal bebas DPPH dan aktiviti penghapusan radikal bebas ABTS [27].

Satu sebab yang mungkin adalah perbezaan keterlarutan antara radikal bebas DPPH (larut dalam minyak) dan radikal bebas ABTS (larut dalam minyak/air) [30,31]. Potensi antioksidan hidrolisat protein dedak padi dipengaruhi oleh profil berat molekulnya, komposisi asid amino dan hidrofobisiti [32].

2.2.3. Kapasiti Pengurangan

Penemuan ujian kapasiti pengurangan untuk RPH ditunjukkan dalam Rajah 4. Kapasiti pengurangan meningkat dengan kepekatan RPH. Kapasiti pengurangan ialah 6.95 ± 1.40 mg VCE/g RPH, menunjukkan bahawa RPH adalah antioksidan yang berkesan.

2.2.4. Kapasiti Penyerapan Radikal Oksigen (ORAC)

Ujian ORAC mempunyai kelebihan berbanding pendekatan lain untuk penentuan aktiviti antioksidan, termasuk bahan tindak balas yang digunakan sebagai radikal peroksi dengan mekanisme tindak balas yang serupa dan potensi redoks kepada oksidan fisiologi; cas keseluruhan dan keadaan protonasi yangantioksidanbertindak balas menyerupai dalam tubuh manusia [33]. Kaedah ORAC juga mempunyai kaitan biologi dengan keberkesanan antioksidan dalam tubuh manusia. Rajah 5 menggambarkan keputusan analisis ORAC RPH dan piawaian Trolox dalam pelbagai kepekatan. ORAC diperoleh daripada persamaan regresi lengkung penentukuran yang mengaitkan AUC bersih dengan kepekatan Trolox. Keputusan menunjukkan bahawa RPHs mempunyai ORAC sebanyak 473 µmol TE/g RPHs.

Peptida atau asid amino antioksidan boleh didapati dengan hidrolisis protein enzimatik, menghasilkan sangat aktif terhadap oksidan [34]. Pengkelat ion logam, perencatan peroksidasi lipid, dan penghapusan radikal bebas peptida aktif secara biologi bertanggungjawab untuk aktiviti antioksidannya. Radikal bebas boleh dipadamkan dan ekspresi protein dan enzim pengurangan tekanan oksidatif dan dikawal oleh peptida antioksidan. Keberkesanan antioksidan hidrolisat protein dan peptida dilaporkan bergantung pada urutan asid amino dan saiz peptida, yang dipengaruhi oleh keadaan hidrolisis, sumber protein, dan jenis protease [35]. Menurut Adebiyi et al. [36], protein dedak padi yang boleh dihadam terbesar boleh dipecahkan kepada kepingan yang lebih kecil oleh subtilisin, menghasilkan hasil dan kandungan protein yang lebih besar. TPC hidrolisat dan aktiviti antioksidan mungkin dipengaruhi oleh kekhususan enzim. Oleh itu, aktiviti antioksidan peptida mungkin dipengaruhi oleh ciri-ciri sumber protein, kekhususan enzim, dan tahap hidrolisis [37].

Terdapat banyak laporan menggunakan protease (seperti Alcalase, nama komersial asubtilisin A daripada spesies Bacillus) untuk menghidrolisis protein yang berasal dari tumbuhan untuk mendapatkan peptida antioksidan. Dalam hal ini, protein soya adalah salah satu protein yang paling dilaporkan [38]. Tambahan pula, hidrolisis Alcalase protein dedak padi juga ditemui. Di bawah keadaan optimum, Alcalasehydrolysis dedak beras pulut menghasilkan hidrolisat protein dengan nilai IC50 sebanyak0.87 ± 0.02 mg/mL dalam DPPH penghapusan radikal bebas [39]. Dalam kajian kami, nilai IC50 RPH ialah 42.58 ± 2.1 mg/mL. Walaupun nilai IC50 dalam penghapusan radikal bebas DPPH dalam kajian ini tidak seberkesan daripada protein dedak padi, penghapusan radikal bebas ABTS(IC50=2.11 mg/mL) adalah lebih berkesan daripada hidrolisat protein soya yang diperoleh oleh Alcalasehydrolysis ( IC50=2.93 mg/mL) [40].

2.3. Aktiviti Perencatan Hyaluronidase

Enzim proteolitik, hyaluronidase, ditemui dalam dermis dan memangkinkan degradasi HA dalam matriks ekstraselular [41]. Kajian ini menggunakan asid tannic sebagai kawalan positif untuk tujuan perbandingan. Rajah 6 mendedahkan bahawa asid tannic mempunyai perencatan aktiviti hyaluronidase yang lebih tinggi; IC50 ialah 0.14 mg/mL, serupa dengan nilai yang diperolehi oleh Nishida et al. (0.121 mg/mL; 71.1 mM) [42]. Sebaliknya, IC50 sebanyak 8.91 mg/mL telah dikira untuk penyelesaian RPH. Keputusan penyelesaian RPH ini sepadan dengan nilai IC50 kami sebelum ini, 7.61 mg/mL [43]. Protein, polisakarida, dan sebatian asal tumbuhan dan sintetik adalah antara julat sebatian yang mengandungi perencat hyaluronidase. Inhibitor ini membantu mengekalkan keseimbangan sintesis-degradasi HA [44]. Kepekatan HA yang rendah dalam kulit mengakibatkan kekeringan dan kedutan. Oleh itu, perencatan aktiviti hyaluronidase adalah laluan di mana morfologi kulit boleh diperbaiki dan penuaannya ditangguhkan.

2.4. Aktiviti Perencatan Tirosinase

Hidrolisis protein daripada sumber semula jadi mempunyai potensi untuk menghalangaktiviti tyrosinase. Ujian perencatan tyrosinase in-vitro biasanya digunakan untuk menilai bagaimana agen pemutih kulit secara langsung mempengaruhi aktiviti tyrosinase [45]. Dengan mengambil bahagian dalam langkah menghadkan kadar melaninsintesis, tyrosinase memangkinkan hidroksilasi L-tirosin kepada L-DOPAdan kemudian pengoksidaan yang terakhir kepada o-dopaquinon. Apabila ia adalah wajar untuk menghalang biosintesis melanin, perencatan aktiviti L-tirosinase boleh menjadi penting. di sini,tyrosinasedigunakan untuk mengukur aktiviti antitirosinase RPH. Seperti yang digambarkan dalam Rajah 7, kepekatan107.6 mg/mL mencapai 50 peratus perencatan aktiviti tyrosinase. Asid askorbik mempamerkan aktiviti perencatan hightyrosinase (IC50=0.098 mg/mL), yang serupa dengan 0.102 mg/mLthat Seo et al. dilaporkan [46].

Hidrolisat protein dedak padi dipamerkan dengan ketara tinggityrosinase-aktiviti perencatan [47,48]. Aktiviti perencatan tyrosinase larutan RPH mungkin terhasil daripada profil asid amino peptida. Schurink et al. menerangkan bahawa berkesantyrosinase-peptida penghambat terdiri daripada sisa arginin dan fenilalanin [49]. Aktiviti perencatan tyrosinase boleh diperbaiki dengan sisa asid amino hidrofobik (cth, alanin), dan pengeluaran melanin boleh terganggu oleh alanin [50]. Selain itu, Zhang et al. juga melaporkan bahawa hidrolisis protein beras boleh mengurangkan kandungan melanin dan aktiviti tyrosinase dalam model sel yang disebabkan oleh UVB [51].

bina badan cistanche

2.5. Profil Asid Amino dan MW RPH

Kandungan protein beras selepas penyingkiran kanji dalam kajian ini ialah 23.56 peratus berat berat, dan tahap hidrolisis sampel yang dihidrolisis oleh protease ialah 9.36 peratus . Jadual 1 memperincikan komposisi asid amino dalam RPH. Dalam sampel, setiap 100 g mengandungi 5.18 g asid amino. Mengenai komponen asid amino, RPH adalah kaya dengan alanin, leucine, arginin, asid glutamat, dan asid aspartik. Setiap 100 g sampel mengandungi 1.73 g asid amino hidrofobik (alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, fenilalanin, dan sistein) secara keseluruhan. Keputusan ini berbeza sama sekali daripada laporan kami sebelum ini [43] dalam larutan amilase dan suhu rawatannya untuk menghilangkan kanji. Kandungan asid amino hidrofobik adalah 1.90 kali lebih tinggi daripada laporan kami sebelum ini. Suhu rawatan yang lebih rendah (60 ◦C) dalam kajian ini boleh menghalang denaturasi protein dalam kuantiti yang banyak, supaya aktiviti asid amino dapat dipelihara dengan lebih baik. Di samping itu, kesimpulan yang sama juga diperoleh daripada amilase kulat dan glukoamilase lain untuk mengakarifikasikan kanji dalam dedak beras putih [52].

Penyelidikan telah menemui asid amino hidrofobik untuk menyerupaiantioksidandengan meningkatkan keterlarutan berasaskan lipid dalam hidrolisat protein dan peptida daripada pelbagai sumber protein, dengan itu menggalakkan interaksi dengan radikal bebas [38,53]. Beberapa asid amino telah dilaporkan oleh Chen et al. [54] secara amnyaantioksidan; asid yang disebutkan termasuk triptofan, sistein, metionin, tirosin, dan histidin. Dalam kajian ini, asid amino aromatik (phenylalanine, tyrosine dan tryptophan) terdiri daripada 0.53 g/100 g RPHs. Oleh itu, asid amino yang berasal dari peptida ini mungkin bertanggungjawab untuk aktiviti antioksidan RPH.

Di samping itu, protein yang dihidrolisiskan kepada peptida yang lebih pendek mempunyai taburan MW yang berbeza, dan beberapa kumpulan hidrofobik yang dilipat di bahagian dalam molekul protein semulajadi yang lengkap biasanya terdedah kepada fasa akueus. Ini berkaitan dengan molekul protein yang disusun semula secara struktur dan oleh itu dengan sifat fungsi protein [55,56]. Data tricine-SDS-PAGE menunjukkan bahawa MW RPH berada dalam julat 5-35 kDa (Rajah 8a).

Rajah 8b menggambarkan kandungan relatif pelbagai MW dalam RPH. Secara keseluruhan, 45.24 peratus daripada protein berada dalam jalur utama (MW ≈ 2.4 kDa). Keputusan yang sama diperolehi mengenai peptida hidrolisat protein dedak padi. Aktiviti antioksidan tertinggi yang diperolehi oleh Thamnarathip et al. [37] ialah untuk peptida MW=6–50 kDa. Di samping itu, hubungan wujud antara fungsi hidrolisat protein dan taburan MW dan komposisi asid amino [57]. Ini menerangkan aktiviti antioksidan RPH yang diperhatikan dalam kajian ini.

2.6. Ujian Ketoksikan Sel

Ketoksikan sel rendah diperlukan untuk aplikasi masa hadapan. Untuk menilai sitotoksisiti dan biokompatibiliti RPH, daya maju sel 264.7 sel mentah dalam larutan RPH diukur melalui kaedah MTT. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 9, daya maju sel adalah melebihi 100 peratus apabila dirawat dengan 25-2000 µg/mL RPH selama 24 jam dan 48 jam. Keputusan menunjukkan sitotoksisiti RPH yang sangat rendah. Oleh itu, RPH boleh berpotensi digunakan sebagai aplikasi kosmetik dengan sitotoksisiti yang sangat rendah.

3. Bahan dan Kaedah

3.1. Reagen

Besi(III) klorida, 2,20-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-asid sulfonik) (ABTS), Trolox(6-hidroksi-2,5 ,7,8-tetramethylchroman-2-asid karboksilik), l-3,4-dihydroxyphenylalanine(L-DOPA), 1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl (DPPH), dan asid trichloroacetic diperolehi daripada Alfa Aesar (Tewksbury, MA, USA). 2,20-azobis(2-methylpropionamidine) dihydrochloride (AAPH), reagen fenol Folin–Ciocalteu, asid gallic, asid askorbik, cendawantyrosinase, dan natrium fluorescein diperoleh daripada Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, Amerika Syarikat).Natrium karbonat diperolehi daripada Riedel-de Haën (Seelze, Jerman). Akhirnya, kalium ferricyanide, natrium hidrogen fosfat, dan natrium dihidrogen fosfat diperoleh daripada Showa Chemical (Tokyo, Jepun).

3.2. Penyediaan RPH

RPH telah disediakan seperti yang diterangkan sebelum ini, kecuali amilase kulat telah diterima pakai untuk mensakkarkan kanji dalam tepung beras, mengelakkan kerosakan kepada asid amino yang disebabkan oleh hidrolisis bakterialamylase pada suhu tinggi [43,58]. Seratus gram tepung beras direndam dalam 1000 mL air suling yang mengandungi 0.5 peratus amilase kulat (Genencor, NY, USA); campuran itu kemudiannya dipanaskan selama 24 jam hingga 60 ◦C ( pH 4.2), selepas itu ia dibiarkan sejuk ke suhu bilik. Sentrifugasi dilakukan selama 10 minit pada 1968× g untuk mengalihkan baki supernatan. Selepas 20-air lipatan dan 2 mL 0.1 peratus hydrolyticprotease (Healthmate, Changhua, Taiwan) ditambahkan pada bahagian tidak larut, larutan digoncang dan diinkubasi selama 4 jam pada suhu 55 ◦C. Kaedah pH-stat digunakan untuk mengekalkan pH larutan pada tahap optimum, dan pemanasan 85 ◦C kemudiannya dilakukan selama 10 minit penyahaktifan forenzim. Pecahan tidak larut yang tinggal telah dikeluarkan melalui sentrifugasi selama 15 minit pada 3075 × g. Liofilisasi dilakukan pada supernatan, yang kemudian disimpan pada -20 ◦C sebelum digunakan.

3.3. Aktiviti Antioksidan RPH

3.3.1. Jumlah Kepekatan Fenolik (TPC)

Kaedah Folin–Ciocalteu untuk menemui TPC RPH telah digunakan [59]. Mula-mula, 200 µL reagen fenol Folin–Ciocalteu (0.3M) telah dicampur secara seragam melalui5-min goncangan dengan 200 µL larutan RPH, dan kepada campuran ini, 400 µL air ternyahiion(DI) dan 200 µL larutan natrium karbonat 10 peratus (b/v) telah ditambah. Larutan campuran menjalani pengeraman selama 60 minit dalam kegelapan pada suhu bilik. Ia telah disentrifugasi selama 15 minit pada 3000 rpm. Pengukuran menggunakan 100 µL supernatan. Untuk menentukan TPC (unit: mg) bersamaan asid gallik (GAE) bagi setiap gram sampel RPH kering (unit: mg GAE/g RPH), data penyerapan optik telah dimasukkan ke lengkung piawai yang mewakili asid gallik. Penyerapan diperoleh pada 700 nm dengan menggunakan EpochMicroplate Spectrophotometer (BioTek, VT, USA).

3.3.2. Jumlah Kandungan Flavonoid (TFC)

TFC diperolehi mengikut pendekatan Wathoni et al. dengan pengubahsuaian kecil [60]. Pertama, 500 µL setiap sampel dan 2 peratus (b/v) larutan aluminium klorida telah dicampur. Larutan tindak balas dicampur dengan teliti dan dibiarkan selama 10 minit, dan penyerapan pada 415 nm dinilai. Hasilnya dilaporkan dalam mikrogram setara kuersetin (QE) setiap gram sampel RPH kering (µg QE/g RPHs).

bina badan cistanche

3.3.3. Aktiviti Pemusnahan Radikal Bebas DPPH

Mula-mula, larutan etanol 198 µM DPPH (50} µL) dan larutan RPH atau air DI (masing-masing 0.5 µL;sampel dan kawalan) dicampur dan kemudian dibiarkan selama 30 minit dalam keadaan gelap pada suhu bilik. Penyerapan larutan pada 517 nm kemudiannya diperolehi. Aktiviti scavenging relatif telah dikira dengan menentukan perbezaan penyerapan antara sampel dan kawalan. Aktiviti penghapusan radikal bebas DPPH yang tinggi dicerminkan oleh penyerapan optik yang rendah. Dalam penilaian aktiviti penghapusan radikal bebas DPPH penyelesaian RPH, standard yang digunakan ialah vitamin C [61–63].

3.3.4. Aktiviti Pemusnahan Radikal Bebas ABTS

Pendekatan yang dilaporkan oleh Wu et al. telah digunakan untuk menilai aktiviti antioksida penyelesaian RPH [64]. Mula-mula, larutan stok 7 mM ABTS (250 µL) telah bertindak balas dengan 2.45 mM kalium persulfat (250 µL) untuk menghasilkan kation radikal bebas ABTS (ABTS• tambah ), dengan campuran disimpan selama 16 jam pada 4 ◦C dalam kegelapan sebelum ia digunakan. Selepas penyamaan dalam kegelapan pada suhu bilik, 0.1 M phosphate-buffered saline (PBS; pH 7.4) telah digunakan untuk mencairkan larutan kepada penyerapan 0.70 ± 0.02 pada 734 nm. Kemudian, kepada 180 µL larutan ABTS yang telah dicairkan, 20 µL Trolox (kawalan positif) atau larutan RPH (sampel) telah ditambah. Campuran kemudiannya tertakluk kepada 10 minit pengeraman suhu bilik. Kajian ini menentukan penyerapan optik pada 734 nm; penyerapan yang lebih rendah sepadan dengan aktiviti penghapusan radikal bebas ABTS yang lebih tinggi. Piawaian yang digunakan untuk menilai aktiviti penghapusan radikal bebas ABTS RPHsolution ialah Trolox antioksidan.

3.3.5. Kapasiti Pengurangan

Ujian kuasa antioksidan penurun ferik digunakan untuk menentukan jumlah aktiviti antioksidan RPHsolution. Seperti yang dilaporkan oleh Lin et al. [29], larutan RPH (200 µL) dicampur secara seragam dengan 1 peratus (w/v) K3Fe(CN)6 dan penimbal PBS 0.2 M (pH 6.6; 100 µL setiap satu) .Selama 20 minit, mandi air 50 ◦C digunakan untuk memanaskan campuran; selepas mengeluarkan campuran dari tab mandi, ia disejukkan dengan cepat selama 3 minit. Selepas itu, penambahan 10 peratus (b/v) asid trichloroacetic (100 µL) dan 10-min sentrifugasi pada 3000 rpm telah dilakukan. Ini diikuti dengan pengekstrakan supernatan (400 µL) dan pencampuran seragamnya dengan0. 1 peratus (b/v) FeCl3 (100 µL) dan air DI (400 µL). Fe4[Fe(CN)6]3 diperolehi melalui10-tindak balas min campuran ini dalam kegelapan. Selepas itu, penyerapan optik yang lebih tinggi (diukur pada 700 nm) menunjukkan kapasiti pengurangan yang lebih tinggi. Vitamin C standard telah digunakan untuk menentukan kandungan setara vitamin C (VCE) bagi setiap gram RPH.

3.3.6. Kapasiti Penyerapan Radikal Oksigen (ORAC)

Kajian ini memperoleh ORAC dengan mengubah suai kaedah yang dilaporkan sebelum ini [65]. Selepas pelarutan sampel RPH dalam air suling, larutan RPH (50 µL) dicampur dengan fluorescein (10 µM) dalam 96-plat mikrotiter perigi. Penyelesaian menjalani pengeraman 15-min pada 37 ◦C diikuti dengan penambahan 50 µL AAPH (500 mM). Setiap 5 minit dan lebih daripada 120 minit, pendarfluor direkodkan (λex dan λem=485 dan 528 nm, masing-masing). Kapasiti antioksidan RPH ditemui daripada kinetik pereputan pendarfluor dengan mengira kawasan di bawah lengkung (AUC ). Dalam pengiraan RPH ORAC, standardnya ialah 15–250 µM Trolox. ORAC dilaporkan sebagai mikromol Trolox setara (TE) pergram sampel RPH kering (µmol TE/g RPHs).

3.4. Aktiviti Perencatan Hyaluronidase

Ujian perencatan hyaluronidase telah dilakukan menggunakan {{0}}plat mikro telaga dan kaedah yang dilaporkan sebelum ini dengan sedikit pengubahsuaian [40]. N-acetylglucosamine telah dibebaskan dengan bertindak balas hyaluronidase dengan substrat HA. Dengan adanya sebarang perencat, pelepasan N-asetilglukosamin dikurangkan, dengan pelepasan ini dikesan dengan mendapatkan penyerapan 600-nm. HA telah dimendakkan dengan larutan albumin berasid yang terdiri daripada0.1 M penampan asetat (pH 3.9) dan albumin serum lembu (1 mg/mL). Penyelesaian sampel dan 5 mg/mL hyaluronidase telah menjalani pengeraman 20-min pada 37 ◦C. Kepada campuran inkubasi, HA (1{{20}}}0 µL; 5.0 mg/mL dalam penimbal asetat 0.1 M) kemudiannya ditambah. Pengeraman selanjutnya pada suhu 37 ◦C selama 40 minit telah dilakukan. 0.1 mL 0.4 M larutan borat beralkali telah ditambah untuk menghentikan tindak balas enzim.

3.5. Aktiviti Perencatan Tirosinase

Kajian ini menilai aktiviti antityrosinase RPH dengan menggunakan protokol yang dilaporkan sebelum ini dengan pengubahsuaian [66]. Larutan enzim (135 U/mL) telah disediakan dengan melarutkan tyrosinase dalam penimbal fosfat 20 mM (pH 6.8). Selain itu, DIwater digunakan untuk penyediaan larutan L-DOPA 1.25 mM. Kemudian, 40 µL pelbagai kepekatan larutan sampel RPH dicampur dengan 40 µL larutan tyrosinase dan 120 µL larutan L-DOPA. Selama 30 minit, campuran ini disimpan pada suhu 37 ◦C dalam ujian perencatan RPHtyrosinaseaktiviti. Spektrofotometer (FLUOstar Omega MicroplateReader, BMG Labtech GmbH, Jerman) telah digunakan untuk mendapatkan serapan 475-nm. Semua pengukuran dilakukan tiga kali. Penyerapan kumpulan yang sepadan apabilatyrosinasetidak hadir ditolak. Kadar perencatan enzim ditentukan sebagai

3.6. Pencirian RPH

3.6.1. Profil Asid Amino

Kajian ini menemui komposisi asid amino RPH. Pertama, selama 24 jam dan pada 115 ◦C, 4 M asid metanesulfonik digunakan untuk menghidrolisis sampel dalam tiub bertutup yang dikosongkan. Dua sistem penyampaian pelarut Waters 510 dan penganalisis asid amino (L 8900; Hitachi, Tokyo, Jepun) telah digunakan untuk pengasingan asid amino terbitan pada lajur aSpherisorb ODS2 berukuran 25 m × 64.6 mm. Kajian ini menggunakan pelarut berikut: (a) natrium asetat (0.14 M) dan trietilamin (850 µL/L; pH 5.6) dan (b) 60 peratus asetonitril, yang mana kecerunannya ialah 0 peratus selama 2 minit; 0–42 peratus selama 15.5 minit (lengkung cembung); dan 100 peratus selama 4 minit. Sampel pendua telah diambil untuk pengukuran profil asid amino pada 254 nm [67,68].

3.6.2. Berat Molekul (MW) Protein

Selaras dengan kaedah Schägger [69] dan dalam keadaan mengurangkan, kajian ini memperoleh taburan MW melalui elektroforesis tricine–sodium dodecyl sulfate (SDS)–polyacrylamidegel (PAGE) dengan sedikit pengubahsuaian. Penampan sampel (30 g/L SDS, 0.375 MTris-HCl, 0.125 g/L Coomassie Brilliant Blue G-250 dan 75 g/ L gliserol; pH 7) digunakan untuk menyuraikan sampel kering beku, dengan sentrifugasi kemudian dilakukan sebelum pemuatan. Sebanyak 20 µL 2-mercaptoethanol telah ditambahkan pada 1 mL sampel tricine-SDS-PAGE. Sampel dipanaskan pada 100 ◦C selama 90 s. Telaga sampel telah dimuatkan dengan setiap sampel dan Julat Luas Piawai Protein Tidak Tercemar (Makmal Bio-Rad, Jerman) dengan menggunakan picagari mikro. Elektroforesis kemudiannya dilakukan—mula-mula pada pemalar 30 mV sehingga keseluruhan sampel terkandung dalam gel tindanan dan selepas itu sehingga siap pada 100 mV malar. Selepas itu, 0.02 peratus larutan Coomassie Brilliant Blue R-250 disapu untuk pewarnaan gel. Penahanan latar belakang mutlak gel dilakukan dengan menggoncang gel dalam 10 peratus asid asetik semalaman. Akhirnya, imej gel dianalisis untuk mengenal pasti jalur protein dalam lorong; analisis ini dilakukan di ImageJ (USNational Institutes of Health, Bethesda, MD, USA). Penanda piawai digunakan untuk mendapatkan lengkung penentukuran dari mana MW dianggarkan. Secara ringkas, langkah pertama ialah menentukan panjang setiap jalur penghijrahan (Rf) dari bahagian atas gel pemisah. Langkah kedua ialah pengiraan keluk penentukuran dengan menggunakan Rf dan log (MW) untuk penanda piawai dengan MW tertentu. Penentuan MW dilakukan menggunakan Rf jalur protein dalam RPH.

3.7. Ujian Sitotoksisiti

Sel 264.7 mentah telah dikultur dalam glukosa tinggi Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM) yang mengandungi 10 peratus serum lembu janin (FBS), 4.5 g/L Glukosa, 1 peratus larutan antibiotik(100 unit/ mL penisilin dan 100 µg/mL Streptomycin), 4 mM L-Glutamin dan 1.5 g/Lsodium bikarbonat pada 37 ◦C dan 5 peratus CO2. Ketoksikan sel 264.7 sel mentah untuk RPH diukur dengan kaedah ujian proliferasi 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5 diphenyl-tetrazolium bromide (MTT) . Kira-kira 1 × 104sel setiap telaga disalut dalam 96-plat perigi. Selepas 24 jam, pelbagai kepekatan RPH (0–2000 µg/mL) telah ditambah ke dalam sel. Selepas 24 dan 48 jam pengeraman, 100 µL larutan MTT (0.5 mg/mL) telah ditambah. Formazancrystals biru diperhatikan apabila diperiksa di bawah mikroskop. DMEM telah dikeluarkan dan 100 µL dimetil sulfoksida (DMSO) ditambah setiap telaga. Penyerapan diukur menggunakan pembaca plat mikrotiter. Daya maju sel ( peratus ) kemudiannya dikira sebagai [A570 (sel dirawat) − A570 (latar belakang)] / [A570 (sel tidak dirawat) − A570 (latar belakang)] × 100 peratus [70].

3.8. Analisis statistik

Laporan bagi setiap sampel hidrolisis ialah nilai purata daripada tiga eksperimen dan penentuan berulang bebas. Keputusan yang dinyatakan dalam min ± sisihan piawai(SD) telah dianalisis dengan ANOVA sehala dan ujian post hoc Duncan menggunakan Sistem Analisis Statistik (versi 20.0; SPSS, Armonk, NY, USA). Nilai p < 0.05="" dianggap="" sebagai="" kepentingan="">

4. Kesimpulan

Kajian ini mengkaji fungsi RPH. Keputusan eksperimen mendedahkan bahawa RPH mengandungi sebatian fenolik dan flavonoid dan mempamerkan pelbagai aktiviti antioksidan, seperti aktiviti penghapusan DPPH dan ABTS, kapasiti pengurangan, dan ORAC. Selain itu, RPH berkesan menghalangtyrosinasedan aktiviti hyaluronidase. Protease merupakan faktor kritikal yang mempengaruhi corak MW RPH. Analisis RPH menunjukkan potensi mereka untuk digunakan sebagai bahan dalam kosmetik.

bina badan cistanche

Rujukan

1. Ichihashi, M.; Ando, ​​H.; Yoshida, M.; Niki, Y.; Matsui, M. Penggambaran kulit. Med Anti-Penuaan. 2009, 6, 46–59. [CrossRef]

2. Kim, J.-S.; Kim, D.; Kim, H.-J.; Jang, A. Kesan perlindungan keldai menyembunyikan hidrolisat gelatin pada fotopenuaan kulit manusia yang disebabkan oleh UVB. Proses. Biokim. 2018, 67, 118–126. [CrossRef]

3. Carocho, M.; Ferreira, IC Kajian tentang antioksidan, prooksidan dan kontroversi yang berkaitan: Sebatian semula jadi dan sintetik, metodologi penapisan dan analisis serta perspektif masa depan. Kimia Makanan. Toksik. 2013, 51, 15–25. [CrossRef]

4. Guo, X.; Zhang, J.; Mungkin.; Tian, ​​S. Pengoptimuman hidrolisis terhad protein dalam sisa beras dan pencirian sifat fungsi produk. J. Proc Makanan. Pelihara. 2013, 37, 245–253. [CrossRef]

5. Park, H.-Y.; Lee, K.-W.; Choi, H.-D. Juzuk dedak beras: Aktiviti imunomodulator dan terapeutik. Fungsi Makanan. 2017, 8,935–943. [CrossRef] [PubMed]

6. Zhou, K.; Pengetinan, C.; Sun, S. Kesan hidrolisat protein beras yang disediakan oleh protease mikrob dan ultrafiltrasi ke atas radikal bebas dan pengoksidaan lipid daging. LWT 2013, 50, 331–335. [CrossRef]

7. Piu', LD; Tassoni, A.; Serrazanetti, DI; Ferri, M.; Babini, E.; Tagliazucchi, D.; Gianotti, A. Eksploitasi cecair industri kanji oleh-produk untuk menghasilkan peptida bioaktif daripada protein terhidrolisis beras. Kimia Makanan. 2014, 155, 199–206. [CrossRef]

8. Ferri, M.; Graen-Heedfeld, J.; Bretz, K.; Guillon, F.; Michelini, E.; Calabretta, MM; Lamborghini, M.; Gruarin, N.; Roda, A.;Kraft, A.; et al. Pecahan Peptida Diperolehi daripada Produk Sampingan Beras Melalui Pertunjukan Proses Mesra Alam Dalam Bioaktiviti Berkaitan VitroHealth. PLOS ONE 2017, 12, e0170954. [CrossRef]

9. Wen, C.; Zhang, J.; Zhang, H.; Duan, Y.; Ma, H. Peptida antioksidan yang berasal dari protein tumbuhan: Pengasingan, pengenalpastian, mekanisme tindakan dan aplikasi dalam sistem makanan: Kajian semula. Trends Food Sci. Technol. 2020, 105, 308–322. [CrossRef]

10. Phelan, M.; Aherne, A.; FitzGerald, RJ; O'Brien, NM Casein peptida bioaktif: Kesan biologi, kegunaan industri, aspek keselamatan dan status kawal selia. Int. Dairy J. 2009, 19, 643–654. [CrossRef]

11. Udenigwe, CC; Aluko, RE Peptida bioaktif yang berasal dari protein makanan: Pengeluaran, pemprosesan dan potensi manfaat kesihatan. J.Food Sci. 2012, 77, 11–24. [CrossRef] [PubMed]

12. Fardet, A.; Rock, E. Potensi antioksidan in vitro dan in vivo susu, yogurt, susu dan keju yang ditapai: Kajian semula naratif bagi bukti. Nutr. Res. Wahyu 2018, 31, 52–70. [CrossRef]

13. Leach, JB; Kathryn, AB; Charles, WPJ; Christine, ES Hidrogel asid hyaluronik terpaut fotosilang: Perancah kejuruteraan tisu semulajadi yang boleh terbiodegradasi. Bioteknol. Bioeng. 2003, 82, 578–589. [CrossRef]

14. Jegasothy, SM; Zabolotniaia, V.; Bielfeldt, S. Keberkesanan Asid Nano-hialuronik Topikal Baharu dalam Manusia. J. Clin. Aesthet.Dermatol. 2014, 7, 27–29.

15. Ndlovu, G.; Fouche, G.; Tselanyane, M.; Cordier, W.; Steenkamp, ​​V. Penentuan in vitro potensi anti-penuaan empat tumbuhan ubatan Afrika selatan. Pelengkap BMC. Altern. Med. 2013, 13, 304. [CrossRef]

16. Jiratchayamaethasakul, C.; Ding, Y.; Hwang, O.; Saya, S.-T.; Jang, Y.; Myung, S.-W.; Lee, JM; Kim, H.-S.; Ko, S.-C.; Lee, S.-H.Penyaringan in vitro elastase, kolagenase, hyaluronidase, dan aktiviti perencatan dan antioksidan tyrosinase daripada 22 ekstrak halophyteplant untuk kosmeseutikal baru. ikan. Aquat. Sci. 2020, 23, 1–9. [CrossRef]

17. Kang, M.; Park, S.-H.; Oh, SW; Lee, SE; Yoo, JA; Nho, YH; Lee, S.; Han, BS; Cho, JY; Lee, J. Kesan anti-melanogenik resorsinol dimediasi oleh penindasan isyarat cAMP dan pengaktifan isyarat p38 MAPK. Biosci. Bioteknol. Biochem.2018, 82, 1188–1196. [CrossRef]

18. Chatatikun, M.; Yamauchi, T.; Yamasaki, K.; Aiba, S.; Chiabchalard, A. Kesan antimelanogenik daun Croton roxburghii dan Crotonsublyratus dalam sel B16F10 yang dirangsang MSH. J. Tradit. Pelengkap. Med. 2019, 9, 66–72. [CrossRef] [PubMed]

19. Rizzello, CG; Nionelli, L.; Coda, R.; Gobbetti, M. Sintesis Peptida Pencegahan Kanser Lunasin oleh Bakteria Asid Laktik Semasa Penapaian Asam. Nutr. Kanser 2012, 64, 111–120. [CrossRef] [PubMed]

20. Rizzello, CG; Tagliazucchi, D.; Babini, E.; Rutella, GS; Saa, DLT; Gianotti, A. Peptida bioaktif daripada matriks makanan sayuran: Trend penyelidikan dan bioteknologi baru untuk sintesis dan pemulihan. J. Fungsi. Makanan 2016, 27, 549–569. [CrossRef]

21. Coscueta, ER; Campos, DA; Osório, H.; Nerli, BB; Pintado, M. Hidrolisis protein soya enzimatik: Alat untuk penghasilan bahan makanan biofungsional. Kimia Makanan. X 2019, 1, 100006. [CrossRef]

22. Aydemir, LY; Yemenicioglu, A. Adakah Antioksidan Fenolik Terikat Protein dalam Denyutan Ghaib Sebahagian daripada Iceberg? J. Tumbuhan. Biokim.Fisiol. 2013, 1, 1–3. [CrossRef]

23. Huang, SH; Ng, LT Kuantifikasi kandungan polifenol dan juzuk bioaktif beberapa varieti padi komersial di Taiwan. J. Kompos Makanan. dubur. 2012, 26, 122–127. [CrossRef]

24. Yoshitomi, K.; Taniguchi, S.; Tanaka, K.; Uji, Y.; Akimitsu, K.; Gomi, K. Rice terpene synthase 24 (OsTPS24) mengekodkan sintase monoterpene responsif melati yang menghasilkan -terpinene antibakteria terhadap patogen beras. J. Tumbuhan. Fisiol. 2016, 191,120–126. [CrossRef]

25. Kamolsukyeunyong, W.; Sukhaket, W.; Pitija, K.; Thorngkham, P.; Mahatheeranont, S.; Toojinda, T.; Vanavihit, A. BerasSesquiterpene Memainkan Peranan Penting dalam Antixenosis terhadap wereng coklat dalam Beras. Tumbuhan 2021, 10, 1049. [CrossRef][PubMed]

26. Liu, Y.; Wang, Z.; Li, H.; Liang, M.; Yang, L. Aktiviti antioksidan in vitro protein beras dipengaruhi oleh tahap alkali dan pencernaan protease gastrousus. J. Sci. Pertanian Makanan. 2016, 96, 4940–4950. [CrossRef] [PubMed]

27. Phongthai, S.; D'Amico, S.; Schoenlechner, R.; Homthawornchoo, W.; Rawdkuen, S. Pecahan dan sifat antioksidan hidrolisat protein dedak padi yang dirangsang oleh pencernaan gastrousus in vitro. Kimia Makanan. 2018, 240, 156–164. [CrossRef][PubMed]

28. Huang, S.-L.; Wang, W.-H.; Zhong, X.-Y.; Lin, C.-T.; Lin, W.-S.; Chang, M.-Y.; Lin, Y.-S. Sifat Antioksidan Jatropha curcas L. Ekstrak Kulit Biji dan Irung. Appl. Sci. 2020, 10, 3279. [CrossRef]

29. Lin, Y.-S.; Lin, W.-S.; Tung, J.-W.; Cheng, Y.-C.; Chang, M.-Y.; Chen, C.-Y.; Huang, S.-L. Kapasiti Antioksidan Biji Buah Jujube dan Pulpa Kulit. Appl. Sci. 2020, 10, 6007. [CrossRef]

30. Shahi, Z.; Sayyed-Alangi, SZ; Najafian, L. Kesan jenis enzim dan masa proses ke atas darjah hidrolisis, jalur elektroforesis dan sifat antioksidan bagi protein terhidrolisis yang diperoleh daripada Bunium persicum Bioss yang dinyahlemak. tekan kek. Heliyon 2020, 6,e03365. [CrossRef] [PubMed]

31. Xie, H.; Huang, J.; Woo, MW; Hu, J.; Xiong, H.; Zhao, Q. Kesan penyahaktifan enzim sejuk dan panas pada sifat struktur dan fungsi hidrolisat protein ampas beras. Kimia Makanan. 2021, 345, 128784. [CrossRef]

32. Rani, S.; Pooja, K.; Pal, GK Penerokaan hidrolisat dan peptida protein beras dengan rujukan khas kepada potensi antioksidan:Pendekatan terbitan pengiraan untuk penentuan bioaktiviti. Trends Food Sci. Technol. 2018, 80, 61–70. [CrossRef]

33. Bisby, RH; Brooke, R.; Navaratnam, S. Kesan potensi pengoksidaan antioksidan dalam ujian kapasiti penyerapan radikal oksigen (ORAC). Kimia Makanan. 2008, 108, 1002–1007. [CrossRef]

34. Elias, RJ; Kellerby, SS; Decker, E. Aktiviti Antioksidan Protein dan Peptida. Crit. Rev. Sains Makanan. Nutr. 2008, 48, 430–441.[CrossRef] [PubMed]

35. Saya, Y.; Li-Chan, E.; Jiang, B. (Eds.) Protein dan Peptida Bioaktif sebagai Makanan Berfungsi dan Nutraseutikal; Wiley-Blackwell:Hoboken, NJ, Amerika Syarikat, 2010; ms 29–42.

36. Adebiyi, AP; Adebiyi, AO; Yamashita, J.; Ogawa, T.; Muramoto, K. Pemurnian dan pencirian peptida antioksida yang diperoleh daripada hidrolisat protein dedak padi. Eur. Makanan Re. Technol. 2008, 228, 553–563. [CrossRef]

37. Thamnarathip, P.; Jangchud, K.; Nitisinprasert, S.; Vardhanabhuti, B. Pengenalpastian berat molekul peptida daripada hidrolisis branprotein beras dengan aktiviti antioksidan yang tinggi. J. Bijirin Sci. 2016, 69, 329–335. [CrossRef]

38. Tacias-Pascacio, VG; Morellon-Sterling, R.; Siar, E.-H.; Tavano, O.; Berenguer-Murcia, Á.; Fernandez-Lafuente, R. Penggunaan Alcalasein penghasilan peptida bioaktif: Kajian semula. Int. J. Biol. Makromol. 2020, 165, 2143–2196. [CrossRef] [PubMed]

39. Sarringkarin, W.; Laokuldilok, T. Pengoptimuman keadaan pengeluaran protein dedak pulut hidrolisis dengan sifat antioksidan. CMU J. Nat. Sci. 2017, 16, 1–18. [CrossRef]

40. Zhang, Q.; Tong, X.; Qi, B.; Wang, Z.; Li, Y.; Sui, X.; Jiang, L. Perubahan dalam aktiviti antioksidan kacang soya terhidrolisis Alcalase di bawah simulasi pencernaan gastrousus dan pengangkutan transepithelial. J. Fungsi. Makanan 2018, 42, 298–305. [CrossRef]

41. Tu, PTB; Tawata, S. Sifat Anti-Oksidan, Anti-Penuaan dan Anti-Melanogenik Minyak Pati daripada Dua Varieti Alpinia zerumbet. Molekul 2015, 20, 16723–16740. [CrossRef]

42. Nishida, Y.; Sugahara, S.; Wada, K.; Toyohisa, D.; Tanaka, T.; Ono, M.; Yasuda, S. Kesan perencatan ekstrak etil asetat daripada mentol Scilla scilloides pada aktiviti lipoksigenase dan hyaluronidase. Pharm. biol. 2014, 52, 1351–1357. [CrossRef]

43. Chen, H.-J.; Dai, F.-J.; Kipas, S.-L.; Huang, Y.-C.; Chau, C.-F.; Lin, Y.-S.; Chen, C.-S. Kinetik Perencatan Hyaluronidase oleh Beras(Oryza sativa L.) Protein Hidrolisat. Appl. Sci. 2020, 10, 9087. [CrossRef]

44. Girish, K.; Kemparaju, K. Gam ajaib hyaluronan dan pemadamnya hyaluronidase: Gambaran keseluruhan biologi. Life Sci. 2007, 80,1921–1943. [CrossRef] [PubMed]

45. Zolghadri, S.; Bahrain, A.; Khan, MTH; Munoz-Munoz, J.; Garcia-Molina, F.; Garcia-Canovas, F.; Saboury, AA Kajian komprehensif mengenai perencat tyrosinase. J. Enzim. Inhib. Med. Kimia. 2019, 34, 279–309. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Seo, EJ; Hong, ES; Choi, MH; Kim, KS; Lee, SJ Antioksidan dan kesan pemutihan kulit daripada ekstrak Rhamnus yoshinoi. KoreanJ. Sains Makanan. Technol. 2010, 42, 750–754.

47. Ochiai, A.; Tanaka, S.; Tanaka, T.; Taniguchi, M. Rice Bran Protein sebagai Sumber Mujarab Peptida Antimelanogenik dengan Aktiviti Inhibitory Tyrosinase. J. Nat. Prod. 2016, 79, 2545–2551. [CrossRef] [PubMed]

48. Kubglomsong, S.; Theerakulkait, C.; Reed, RL; Yang, L.; Maier, CS; Stevens, JF Pengasingan dan Pengenalpastian Tirosinase Inhibitory dan Copper-Chelating Peptides from Hydrolyzed Rice-Bran-Derived Albumin. J. Agric. Kimia Makanan. 2018, 66, 8346–8354.[CrossRef]

49. Schurink, M.; van Berkel, WJ; Wichers, H.; Boeriu, CG Novel peptida dengan aktiviti perencatan tyrosinase. Peptida 2007, 28,485–495. [CrossRef]

50. Ishikawa, M.; Kawase, I.; Ishii, F. Gabungan Asid Amino Mengurangkan Pigmentasi dalam Sel Melanoma B16F0. biol. Pharm.Bull. 2007, 30, 677–681. [CrossRef] [PubMed]

51. Zhang, R.; Wei, Y.; Li, M.; Cai, M.; Gu, R.; Mungkin.; Chen, L.; Wang, J. Kesan melanogenesis hidrolisis protein beras dan peptida cirinya Leu-Leu-Lys, Leu-Pro-Lys, dan pyroGlu-Lys pada sel melanosit epidermis manusia yang disebabkan oleh UVB. FoodFunct. 2020, 11, 8757–8767. [CrossRef]

52. Wang, Y.; Cai, D.; Beliau, M.; Wang, Z.; Qin, P.; Tan, T. Pengeluaran fermentatif terbuka asid l-laktik menggunakan dedak beras putih secara sakarifikasi dan penapaian serentak. Bioresour. Technol. 2015, 198, 664–672. [CrossRef] [PubMed]

53. Pan, M.; Jiang, TS; Pan, JL Aktiviti Antioksidan Hidrolisat Protein Biji Rapi. Bioproses Makanan. Technol. 2009, 4, 1144–1152.[CrossRef]

54. Chen, HM; Muramoto, K.; Yamauchi, F.; Nokihara, K. Aktiviti antioksidan peptida yang direka bentuk berdasarkan peptida antioksida yang diasingkan daripada pencernaan protein kacang soya. J. Agric. Kimia Makanan. 1996, 44, 2619–2623. [CrossRef]

55. Liu, Q.; Kong, B.; Xiong, YL; Xia, X. Aktiviti antioksidan dan sifat fungsi hidrolisis protein plasma babi dipengaruhi oleh tahap hidrolisis. Kimia Makanan. 2010, 118, 403–410. [CrossRef]

56. Lemes, A.; Sala, L.; Bijih, JDC; Braga, ARC; Egea, MB; Fernandes, KF Tinjauan Kemajuan Terkini dalam Peptida Bioaktif Tersulit daripada Sisa Kaya dengan Protein. Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 950. [CrossRef] [PubMed]

57. Wang, J.-S.; Zhao, M.-M.; Zhao, Q.-Z.; Jiang, Y.-M. Sifat antioksidan papain hidrolisat gluten gandum dalam sistem pengoksidaan yang berbeza. Kimia Makanan. 2007, 101, 1658–1663. [CrossRef]

58. Gao, M.-T.; Kaneko, M.; Hirata, M.; Toorisaka, E.; Hano, T. Penggunaan dedak padi sebagai sumber nutrien untuk pengeluaran asid laktik fermentatif. Bioresour. Technol. 2008, 99, 3659–3664. [CrossRef] [PubMed]

59. Huang, WY; Lin, YR; Ho, RF; Liu, HY; Lin, YS Kesan larutan air pada mengekstrak daun teh hijau. Sci. World J. 2013,2013, 368350. [CrossRef]

60. Wathoni, N.; Shan, CY; Shan, WY; Rostinawati, T.; Indradi, RB; Pratiwi, R.; Muchtaridi, M. Pencirian dan aktiviti antioksidan pektin daripada kulit manggis Indonesia (Garcinia mangostana L.). Heliyon 2019, 5, e02299. [CrossRef]

61. Tsai, C.-C.; Chan, C.-F.; Huang, W.-Y.; Lin, J.-S.; Chan, P.; Liu, H.-Y.; Lin, Y.-S. Aplikasi Lactobacillus rhamnosus SpentCulture Supernatant dalam Aplikasi Antioksidasi Kosmetik, Pemutihan dan Pengekalan Lembapan. Molekul 2013, 18, 14161–14171.[CrossRef]

62. Huang, W.-Y.; Lee, P.-C.; Hsu, J.-C.; Lin, Y.-R.; Chen, H.-J.; Lin, Y.-S. Kesan Kualiti Air terhadap Pembubaran Serbuk Ekstrak Yerba Mate. Sci. Dunia J. 2014, 2014, 1–6. [CrossRef] [PubMed]

63. Chan, C.-F.; Wu, C.-T.; Huang, W.-Y.; Lin, W.-S.; Wu, H.-W.; Huang, T.-K.; Chang, M.-Y.; Lin, Y.-S. Antioksidasi dan Melanogenesis Perencatan Pelbagai Ekstrak Dendrobium tosaense. Molekul 2018, 23, 1810. [CrossRef] [PubMed]64. Wu, C.-T.; Agrawal, DC; Huang, W.-Y.; Hsu, H.-C.; Yang, S.-J.; Huang, S.-L.; Lin, Y.-S. Analisis Kefungsian Ekstrak CoffeeGround Dibelanjakan yang Diperolehi dengan Kaedah Hidroterma. J. Chem. 2019, 2019, 1–8. [CrossRef]

65. Dorta, E.; Rodríguez-Rodríguez, EM; Jiménez-Quezada, A.; Fuentes-Lemus, E.; Speisky, H.; Lissi, E.; López-Alarcón, C. Penggunaan Ujian Kapasiti Penyerapan Radikal Oksigen (ORAC) untuk Meramalkan Kapasiti Produk Sampingan Mangga (Mangifera indica L.) untuk Menghalang Pengoksidaan Protein Daging. Dubur Makanan. Kaedah 2016, 10, 330–338. [CrossRef]

66. Lin, Y.-S.; Chen, H.-J.; Huang, J.-P.; Lee, P.-C.; Tsai, C.-R.; Hsu, T.-F.; Huang, W.-Y. Kinetik Aktiviti Perencatan Tirosinase Menggunakan Ekstrak Daun Vitis vinifera. BioMed Res. Int. 2017, 2017, 5232680. [CrossRef] [PubMed]

67. Bidlingmeyer, BA; Cohen, SA; Tarvin, TL Analisis pantas asid amino menggunakan derivatisasi pra-lajur. J. Chromatogr. BBiomed. Sci. Appl. 1984, 336, 93–104. [CrossRef]

68. Asai, TT; Oikawa, F.; Yoshikawa, K.; Inoue, N.; Sato, K. Peptida Kolagen Terhasil Makanan, Prolyl-Hydroxyproline (Pro-Hyp), danHydroxyprolyl-Glycine (Hyp-Gly) Meningkatkan Pertumbuhan Fibroblast Kulit Tikus Kultur Utama Menggunakan Serum Lembu Janin Bebas daripada Hydroxyprolyl Peptide. Int. J. Mol. Sci. 2019, 21, 229. [CrossRef]

69. Schägger, H. Tricine–SDS–PAGE. Nat. Protoc. 2006, 1, 16–22. [CrossRef]

70. Diao, J.; Chi, Z.; Guo, Z.; Zhang, L. Hidrolisis protein kacang hijau memodulasi tindak balas imun melalui laluan NF-kB inlipopolysaccharide-stimulated RAW 264.7 makrofaj. J. Sains Makanan. 2019, 84, 2652–2657.[CrossRef]