Kajian Mengenai Fungsi Kekebalan Neuroendokrin Cistanche Deserticola Dan Produk Mengukus Wain Berasnya dalam Model Tikus Aruh Glukokortikoid-Ⅱ

3.2.4. Imunohistokimia

Apoptosis neuron dikawal oleh banyak gen apoptosis dan antiapoptosis, terutamanya gen yang menggalakkan apoptosis Bax dan gen antiapoptosis daripada keluarga gen Bcl-2. Bcl-2 disetempatkan dalam organel penghasil oksigen reaktif seperti mitokondria, retikulum endoplasma dan membran nuklear. Bcl-2 mempunyai sedikit kesan ke atas radikal bebas oksigen tetapi bolehmencegah kerosakan oksidatif dalam sel. Bax mengangkut dari sitoplasma ke membran mitokondria, mengubah struktur membran mitokondria, dan menggalakkan pembebasan cytochrome c dan induksi apoptosis.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA UNTUK MENINGKATKAN FUNGSI SEKSUAL PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Terdapat ekspresi dalam sitoplasma adrenal protein Bax dan Bcl-2. Pewarnaan menunjukkan semua zarah kuning. Berbanding dengan kumpulan BC, ketumpatan optik purata protein Bax dalam kumpulan MC meningkat dengan ketara (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the average optical density in the CD-LD and WCD-LD groups decreased significantly (P < 0.01) (Figure 5(a)).

Rajah 5(b) menunjukkan bahawa berbanding kumpulan BC, purata ketumpatan optik protein Bcl-2 dalam kumpulan MC menurun dengan ketara (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and CD-HD groups increased significantly (P < 0.01), while those of the WCD-MD and CD-MD groups increased (P < 0.05).

Protein caspase-3 disetempatkan terutamanya dalam sitoplasma dalam bentuk asalnya dalam tisu normal dan mempunyai ekspresi yang rendah. Isyarat positif adalah kuning pucat atau kuning keperangan. Berbanding dengan kumpulan BC, ungkapan caspase-3 dalam kumpulan MC meningkat dengan ketara (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the expression of caspase-3 in the WCD-HD and WCD-MD groups increased (P < 0.05) (Figure 5(c)).

Dalam tisu biasa, ekspresi gen Fas dikurangkan, dan isyarat positif untuk hibridisasi in situ adalah kuning kecoklatan. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 5(d), berbanding kumpulan BC, purata ketumpatan optik protein Fas dalam kumpulan MC meningkat (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and WCD-LD groups improved (P < 0.05) (Figure 5(d)).

Protein FasL terletak terutamanya dalam membran sel atau sitoplasma, dan isyarat positifnya berwarna coklat. Berbanding dengan kumpulan BC, purata ketumpatan optik gen FasL dalam kumpulan MC meningkat dengan ketara (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density of the FasL gene in the WCD-HD, WCD-MD, CDHD, and CD-MD groups increased significantly (P < 0.01) (Figure 5(e)).

Keputusan menunjukkan bahawa CD dan WCD bolehmendorong apoptosis dalam sel radangdan mengurangkan kerosakan adrenal dengan menggalakkan ekspresi protein FasL dan mengikat protein Fas, mengaktifkan protein caspase-3 dan mencetuskan lata caspase. Kesan kumpulan WCD-HD adalah yang terbaik.

3.3. Penentuan Fungsi Imun

3.3.1. Indeks Organ Kekebalan

Berbanding dengan kumpulan BC, pekali timus dan indeks limpa kumpulan MC menurun dengan ketara (P< 0.01). Compared to the MC group, the WCD-MD group had the greatest difference (P < 0.05). The thymus coefficient was almost back to the normal level. For the spleen index, the WCDMD, WCD-LD, and CD-MD groups showed significant differences compared with that of the MC group (P < 0.01) (see Figure 6). Therefore, WCD and CD treatment could protect the immune organs, and the effects of WCD were better.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA UNTUK MENINGKATKAN FUNGSI SEKSUAL PHGS75% ECH 30% ACT 12%

3.3.2. Pengesanan Subset Limfosit T Dalam Darah Periferi

Peratusan sel CD4+ di kuadran kiri atas dan sel8+ CD di kuadran bawah kanan dalam BC dan setiap kumpulan ubat adalah lebih tinggi daripada kumpulan MC. Berbanding dengan kumpulan BC, nisbah CD4+ThCD8+ menurun dengan ketara dalam kumpulan MC (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the ratio of CD4+ThCD8+ increased significantly in the PC group, the WCD group, and the CD-HD group (P < 0.01) (Figure 7).

3.3.3. Penentuan Tahap IL-10, IL-6, IL-2, TNF-Α, Dan IFN-C Dalam Serum

Rajah 8 menunjukkan bahawa berbanding dengan kumpulan BC, tahap IL-6, TNF- dan IFN-c meningkat dengan ketara (P< 0.01). The level of IL-10 and IL-2 decreased in the MC group. Compared to that of the MC group, the level of IL-6, TNF-α, and IFN-c decreased and IL-10 and IL-2 increased in serum in each of the drug groups. The effect of WCD was better than the effect of CD, especially in the WCD-MD group, in which the effect was close to that of the PC group.

3.3.4. Keputusan Eksperimen Pemerhatian Mikroskop Tisu Lymus

Rajah 9 menunjukkan bahawa dalam kumpulan BC, sejumlah besar limfosit hadir. Limfosit dan retikulosit disusun longgar di tengah dengan thymocytes bulat atau bujur yang bertaburan. Tiada nekrosis, tiada penyusupan sel radang, dan tiada perubahan yang tidak normal.

Kumpulan MC menunjukkan sejumlah besar tisu nekrosis limfoid, dengan susunan limfosit dan retikulosit yang tidak teratur di tengah. Timosit bulat atau bujur hilang, degenerasi sel besar-besaran atau nekrosis jelas, dan terdapat penyusupan sel radang dengan perubahan patologi yang tidak normal.

Dalam kumpulan CD, ciri morfologi limfosit telah kembali normal, dan susunan limfosit pusat dan retikulosit hampir normal. Timosit bulat atau bujur telah pulih, tetapi sebilangan kecil limfosit degeneratif atau nekrotik dan sel radang yang menyusup kekal.

Dalam kumpulan WCD dan kumpulan PC, ciri morfologi limfosit telah diperbaiki dengan lebih baik. Limfosit dan retikulosit di tengah sejajar dengan baik, timosit bulat atau bujur hampir normal, tetapi masih terdapat sebilangan kecil limfosit yang menyusup dan degeneratif.

3.4. Ekspresi Gen Protein CaM

Nilai RQ (mRNA CaM -actin mRNA) dianggap untuk mengkaji ekspresi mRNA CaM. RQ kumpulan BC ialah 1. Ekspresi mRNA CaM dalam hipotalamus dalam kumpulan MC meningkat dengan ketara (P< 0.01), while the value decreased in the WCD-HD, WCD-MD, WCDLD, and CD-HD groups (P < 0.05) (Figure 10). The expression of CaM mRNA in the hypophysis in the MC group was lower than that in the BC group (P < 0.01). The expression in the WCD-HD, WCD-MD, WCD-LD, CD-HD, and CD-LD groups increased (P < 0.05), and the effect in the WCD groups was better than the effect in the CD groups.

4. Perbincangan

The Chinese Pharmacopoeia [2] merekodkan bahawa CD dan WCD boleh digunakan di klinik sebagai jenis utama rebusan kepingan. Selepas dikukus dengan wain beras, yangkesan antipenuaan dan tonifying buah pinggang-yangtelah dipertingkatkan. Melalui UPLC-QqQ-MS, kami mengesan perubahan kuantitatif dalam asas bahan kimia semasa proses pengukusan wain beras. Glikosida iridoid tidak stabil dan kandungan glikosida ini berkurangan, malah menjadi tidak dapat dikesan. Kandungan phenylethanol glycosides juga berubah, yang boleh menyebabkan perubahan dalam farmakodinamik dan kesan klinikal.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA UNTUK MENINGKATKAN FUNGSI SEKSUAL PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Model kekurangan buah pinggang-yang klasik telah direplikasi dengan suntikan subkutaneus kortikosteron [19]. Kortikosteron berlebihan boleh menghalang rahsia CRH dalam hipotalamus. Sementara itu, rahsia ACTH juga dihalang. Tahap hormon korteks adrenal menurun, dan dengan itu, fungsi paksi HPA dikurangkan. Hipofungsi paksi HPA adalah ciri biasa kekurangan buah pinggang-yang [20]. Kemudian tikus menunjukkan fenomena "kehabisan" dan gejala adalah sesuai dengan kekurangan buah pinggang-yang di klinik.

Dalam kumpulan MC, tahap CRH, ACTH, T, dan CORT dalam serum tikus menurun dengan ketara (P< 0.01). After being treated by CD and WCD, the content of CRH, ACTH, T, CORT, and cortisol all increased to some degree, and the effect of WCD-MD was the best, almost equal to that in the PC group. These results indicated that the relative hormone balance in the HPA axis had been destroyed in the MC group, CD and WCD could improve the functional recovery of abnormal adrenal axis hormone levels, but the effect of WCD was better.

Memodulasi perkadaran ahli keluarga Bcl-2 ialah salah satu mekanisme teras yang FasThFasL mengantara laluan reseptor kematian, dan keluarga Bcl-2 mengawal selia laluan mitokondria [21]. Faktor perencatan apoptosis Bcl-2 dan faktor pencetus apoptosis, seperti Bax, semuanya tergolong dalam keluarga Bcl-2 [22]. Apoptosis sel boleh ditentukan oleh nisbah relatif faktor penghalang apoptosis dan faktor pencetus apoptosis [23]. Mitokondria mempunyai fungsi pusat pemeriksaan untuk pelbagai bentuk apoptosis [24]. Kajian ini menunjukkan bahawa CD-MD dan WCD boleh menyimpulkan ungkapan Bax dan meningkatkan Bcl-2 kepadamemperbaiki kekurangan buah pinggang-yang. Fas adalah reseptor kematian utama yang mendorong apoptosis dengan pengikatan dengan ligan Fas (FasL) [25]. Ekspresi Fas dan FasL dalam kumpulan MC meningkat, manakala ungkapan ini meningkat dengan ketara dalam kumpulan WCD-MD (P< 0.01) compared with the MC group. Both FasThFasL and BaxThBcl-2 systems transduce apoptotic signals to the caspase family [26]. Caspase-3 is one of the pivotal proteinases that initiate cell apoptosis. The activation of caspase-3 indicates that apoptosis enters an irreversible stage [27]. The expression of caspase-3 in the MC group increased and increased significantly in the WCD-HD and WCD-MD groups (P < 0.05).

Kekurangan fungsi imun adalah salah satu manifestasi penting kekurangan buah pinggang-yang [28]. Dalam kajian ini, kami mendapati bahawa indeks limpa dan timus kumpulan WCD-MD pulih dengan ketara (P< 0.01, P < 0.05). The immune response of the immune system is regulated mainly by the Th subgroups [29]. IL-2 is the growth factor for T cells, secreted by T cells and macrophages, participates in inflammatory regulation, regulates immunity, and increases infection resistance [30]. The level of IL-2 in the MC group decreased (P < 0.01), and after treatment with CD and WCD, the level of IL-2 recovered. IL-6 and TNF-α are proinflammatory cytokines. Increased levels of IL-6 and TNF-α cytokines cause cytokine imbalances and exacerbate inflammation. The levels of IL-6 and TNF-α increased in the MC group, while after treatment, the levels of IL-6 and TNF-α decreased. T cells are divided into CD4 cells and CD8 cells, and the CD4+ThCD8+ ratio can be used as an important index of immune regulation [31]. CD4+ThCD8+ in the MC group decreased (P < 0.01), while in the WCD and CDHD groups increased (P < 0.01).

Paksi HPA adalah sistem pengawalseliaan yang paling penting kerana ia mengawal rembesan glukokortikoid dan sistem endokrin untuk mengekalkan fungsi rembesan korteks adrenal [32]. Ekspresi berlebihan mRNA CaM dalam tisu hipotalamus adalah berkaitan dengan kekurangan buah pinggang yang. CD dan WCD boleh menyekat saluran kalsium, menghalang ekspresi mRNA CaM dalam hipotalamus, dan mengurangkan kemasukan kalsium, sekali gus mengurangkan aktiviti kompleks Ca2+·CaM.

Pembentukan kekurangan buah pinggang-yang adalah proses perkembangan penyakit kronik. Buah pinggang bukan lagi konsep anatomi semata-mata, dan ia adalah istilah umum untuk sistem imuniti neuroendokrin dan genitouriner. Rangkaian neuroendokrin-imun (NEI) ialah sistem pengawalseliaan bersepadu yang penting [33]. CD dan WCD boleh mengawal fungsi paksi HPAT dan memperbaiki pemulihan kekurangan buah pinggang-yang. Keputusan ini menyediakan asas eksperimen untuk pencegahan klinikal dan rawatan kekurangan buah pinggang-yang.