Leukemia Granulocytic Spontan dalam A NOD/Shi-scid IL-2R null Mouse

Abstrak:Di sini, kami melaporkan kes leukemia granulositik spontan dalam 51-lelaki NOD/Shi-scidIL-2R tetikus null (NOG). Tikus menunjukkananemia progresifdanpergerakan pernafasan yang kasar. Secara makroskopik, limpa telah berubah warna dan membesar. Secara histologi, sumsum tulangsternumdan tulang paha adalah sangat selular dan hampir terisi secara eksklusifsel neoplastik. Nukleus sel neoplastik adalah besar, bujur hingga sedikit tidak teratur, dan sebilangan kecil sel mempunyaibuah pinggang- atau nukleus berbentuk cincin.sel neoplastikmenyusup secara meluas ke organ, dan limpa dan hati terlibat dengan ketara. Secara imunohistokimia, populasi besar sel neoplastik dalam pulpa merah limpa dan sinusoid hati adalah positif untukmyeloperoxidase. Berdasarkan ciri histologi, kes ini didiagnosis denganleukemia granulositik. Maklumat novel ini padatumor spontanmungkin membantu untuk penggunaan yang sesuai untuk strain tikus ini dalam penyelidikan lanjut. (DOI: 10.1293/tox.2020-0092; J Toxicol Pathol 2021; 34: 241–244)

Kata kunci: leukemia granulositik, NOG tikus, tumor spontan

KLIK DI SINI UNTUK MENDAPATKAN EKSTRAK CISTANCHE ORGANIK SEMULAJADI DENGAN 25% ECHINACOSIDE DAN 9% ACTEOSIDE UNTUK FUNGSI BUAH PINGGANG

Perkhidmatan Sokongan Wecistanche-Pengeksport cistanche terbesar di China:

E-mel:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Beli Untuk Butiran Spesifikasi Lebih Lanjut:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Leukemia granulositik spontanjarang dilaporkan dalam beberapa strain tikus, walaupun agen kimia dan sinaran mengion boleh meningkatkan kejadian dalam beberapa strain tikus1, 2. NOD/Shi-scid IL-2R null (NOG) tikus adalah terukhaiwan yang kurang imun, dan menunjukkan kecacatan pada T-, B-, dan sel pembunuh semula jadi, dan makrofaj dan sel dendritik yang tidak berfungsi dengan kalah mati rantaian reseptor IL-2 (IL2R c) ke dalam strain NOD-scid3. Ketegangan tetikus ini digunakan untuk ujian bukan klinikal, seperti ujian tumorigenisiti, untuk menilai kualiti dan keselamatan produk biologi untuk ubat regeneratif menggunakan sel/tisu yang berasal dari manusia, kerana penyulitan sel xenogeneik yang ketara lebih baik4–6. Walaupun keadaan immunodeficient dan implikasinya untuk xenograf telah dikaji dengan baik, sedikit maklumat tersedia mengenai tumor spontan yang berlaku dalam ketegangan tikus ini, seperti limfoma timik,susu ibukelenjar adenoma/adenokarsinoma, karsinoma bronkioloalveolar, rhabdomyosarcoma, dan teratoma7. Di sini, kami melaporkan kes leukemia granulositik dalam 51-tetikus NOG jantan berusia seminggu.

Haiwan itu diperoleh daripada In-Vivo Science Inc. (Kanagawa, Jepun) pada usia 6 minggu dan tidak dirawat. Haiwan itu ditempatkan secara individu di dalam sangkar plastik dengan sistem sangkar pengudaraan individu (Maxi Miser Caging System; Oriental Giken Inc., Tokyo, Jepun) di dalam bilik sistem penghalang terkawal alam sekitar, yang dikekalkan pada suhu 22 ± 2 darjah dengan kelembapan 50 ± 20% dan 12-h kitaran terang/gelap. Tikus telah diberi diet pelet berautoklaf (CRF-1; Charles River Japan, Inc., Tokyo, Jepun) dengan air paip berautoklaf dan libitum. Haiwan itu dikendalikan mengikut protokol yang diluluskan oleh Jawatankuasa Penjagaan dan Penggunaan Haiwan Institusi CMIC Pharma Science Co., Ltd., yang diakreditasi oleh AAALAC International.

Tikus ini menunjukkan tanda-tanda kelemahan klinikal, seperti anemia, pergerakan pernafasan yang kasar, dan penurunan berat badan antara umur 49 dan 51 minggu. Haiwan itu telah dimatikan pada usia 51 minggu. Pada nekropsi, limpa berubah warna dan membesar. Tiada penemuan kasar yang tidak normal yang jelas diperhatikan dalam organ lain. Timus dan nodus limfa adalah atropik, sama seperti tikus NOG biasa.

Semua sampel organ dan tisu dikumpulkan secara rutin, difiksasi dalam 10% formalin buffer neutral, tertanam dalam parafin, dan dipotong pada kira-kira 3 μm. Untuk pemeriksaan patologi, bahagian itu diwarnai dengan hematoxylin dan eosin (HE). Bahagian limpa dan hati telah diwarnakan secara imunohistokimia untuk antibodi poliklonal anti-manusia myeloperoxidase (MPO) arnab (Dako Japan, Tokyo, Jepun) sebagai penanda sel myeloid, antibodi monoklonal CD3 anti-manusia arnab (Nichirei Biosciences Inc., Tokyo, Jepun ) sebagai penanda sel T dan antibodi monoklonal Pax{6}} anti-manusia arnab (Abcam Inc., Cambridge, UK) sebagai penanda sel B8. Bahagian diinkubasi dengan antibodi pada suhu bilik selama 1 jam, dan pengesanan imun dilakukan menggunakan Histofine® MOUSESTAIN KIT (Nichirei Biosciences Inc.) dengan 3,3'-diaminobenzidine/H2O2 sebagai kromogen. Bahagian imunostain pada masa itudiwarnakan balas dengan hematoxylin.

Secara histopatologi, sumsum tulang sternum dan femur adalah sangat selular dan hampir secara eksklusif dipenuhi dengan sel neoplastik (Rajah 1A). Tisu lemak telah disesarkan sepenuhnya. Kadangkala terdapat fokus selular yang terdiri daripada unsur eritroid dan megakaryocytic dalam sumsum, yang dianggap sebagai sisa-sisahematopoiesis biasa. Kebanyakan sel neoplastik menunjukkan rupa blastik, dicirikan oleh nukleus yang besar, bujur hingga tidak sekata, dan dengan kromatin retikular yang mengandungi satu atau lebih nukleolus yang menonjol. Terdapat sebilangan kecil sel dengan nukleus berbentuk buah pinggang atau cincin dan beberapa sel dengan nukleus lobed turut hadir (Rajah 1B). Butiran dalam sitoplasma sel neoplastik tidak jelas pada bahagian yang diwarnai dengan HE. Banyak angka mitosis ditemui dalam sumsum, dan badan apoptosis sekali-sekala juga diperhatikan. Sel-sel neoplastik secara ketara menyerang periosteum dan otot rangka di sekelilingnya. Terdapat penyusupan sel neoplastik yang meluas ke dalam organ dan tisu lain, dan limpa dan hati terlibat dengan ketara. Dalam limpa, sel neoplastik diperhatikan di seluruh pulpa merah (Rajah 2). Penyusupan kapsul sel neoplastik adalah jelas. Beberapa siri erythroid dan megakaryocytes yang sedang berkembang diperhatikan. Megakaryocytes yang mengandungi satu atau beberapa sel myeloid dalam sitoplasma, mencadangkan emperipolesis, kadang-kadang diperhatikan. Di dalam hati, sel neoplastik menyusup ke kapsul Glisson dan sinusoid hepatik secara meresap (Rajah 3). Sel neoplastik dengan nukleus berbentuk buah pinggang atau cincin juga jelas dalam beberapa saluran darah. Sesetengah hepatosit di kawasan periportal, dengan penyusupan sel neoplastik yang menonjol, menunjukkan degenerasi atau nekrosis, manakala struktur normal lobul hepatik kekal utuh. Penyusupan sel neoplastik juga ditemui dalam organ lain, termasuk dinding alveolar dan kawasan perivaskular paru-paru, antara stadium dalam buah pinggang, sinusoid dalam kelenjar adrenal, dan mukosa dan submukosa dalam saluran gastrik (perut dan usus). Secara imunohistokimia, populasi besar sel neoplastik dalam pulpa merah limpa (Rajah 4) dan sinusoid hati adalah positif untuk MPO. Sel positif CD3 dan Pax-5 tidak dikesan. Keputusan imunostaining CD3 dan Pax{11}} adalah serupa dengan hasil limpa tikus NOG biasa, yang secara histologi hipoplastik dan tidak menunjukkan sel positif CD3 atau Pax{13}}.

Penyiasatan imunohistokimia mendedahkan bahawa sel neoplastik berasal dari garis keturunan sel myeloid. Di sesetengah kawasan yang terlibat, terutamanya limpa dan hati, sebilangan kecil sel mempunyai bentuk buah pinggang, cincin atau lobus yang menunjukkan pembezaan siri myeloid. Penemuan ini menunjukkan bahawa sel neoplastik berasal daripada granulosit yang tidak matang. Kes myelopoiesis teruk mungkin terbukti dengan kehadiran semua jenis siri myeloid yang sedang berkembang, berbeza dengan penguasaan sel tidak matang dalam leukemia. Di samping itu, anemia progresif adalah tanda klinikal biasa leukemia granulositik, dan peningkatan dalam sel eritroid dan megakaryocytic adalah lemah1. Populasi kecil granulosit dengan nukleus lobed di kawasan yang terjejas tanpa keradangan yang jelas menunjukkan penemuan kes ini adalah myelopoiesis neoplastik dan bukan reaktif.

Dalam leukemia granulositik, sumsum tulang boleh digantikan oleh sel myeloid yang tidak matang dan matang. Dalam laporan terdahulu tentang strain tikus yang lain, sel neoplastik ini berbeza sepenuhnya menyusup ke hati, limpa, nodus limfa, dsb.2, dan sel-sel dalam limpa dan hati ini terletak terutamanya dalam pulpa merah dan sekitar kapsul Glisson1. Oleh itu, pengedaran sel leukemik dalam kes ini adalah sama dengan dalam kes sebelumnya. Berdasarkan morfologi sel, leukemia granulositik pada tikus dikelaskan kepada dua jenis: jenis juvana, yang setanding dengan leukemia myelogenous akut manusia, dan jenis matang kepada leukemia myelogenous kronik manusia1. Dalam kes juvana, sel-sel neoplastik dalam sumsum tulang, limpa, dan hati dikuasai oleh sel-sel yang tidak dibezakan dengan baik, manakala unsur-unsur myeloid yang mewakili pelbagai darjah kematangan dapat dilihat dan peratusan mieloblast adalah rendah dalam beberapa kes matang2, 9. Dalam kes juvana, kes ini, sel leukemia didominasi oleh bentuk yang tidak matang dengan nukleus yang besar, bujur hingga tidak teratur. Di samping itu, mengambil kira penemuan klinikal bahawa kemerosotan kesihatan umum, termasuk anemia progresif dan pergerakan semula pernafasan yang kasar, berkembang secara akut; oleh itu, kes sekarang diandaikan sebagai jenis juvana.

Rajah 1. Imej histologi sumsum tulang femur. A: Sel-sel neoplastik membiak secara meresap, dengan itu menggantikan sumsum tulang. B: Nukleusnya besar, berbentuk bujur hingga tidak sekata. Sebilangan kecil sel mempunyai nukleus berbentuk buah pinggang (kepala anak panah kuning), cincin (kepala anak panah hijau), atau lobus (kepala anak panah putih). Angka mitosis ditunjukkan oleh anak panah putih. DIA mengotorkan. Bar hitam=50 μm (A), 10 μm (B).

Dalam penerbitan sebelumnya mengenai tikus NOG, lesi neoplastik biasanya jarang berlaku; walau bagaimanapun, limfoma timik telah dilaporkan pada 0.82% dalam kumpulan umur antara 16 hingga 40 minggu7, 10. Sepanjang pengetahuan kami, leukemia granulositik ous spontan tidak pernah dilaporkan sebelum ini dalam tikus NOG. Dalam beberapa strain tikus, termasuk B6C3F1 dan BALB/c, leukemia granulositik jarang berlaku2, 11, dan tidak dilaporkan dalam kes tikus ini pada usia 12 bulan atau lebih muda. Kes ini mengalami leukemia granulositik pada usia 51 minggu, yang merupakan usia yang agak muda. Maklumat baru mengenai tumor spontan ini mungkin berguna untuk penggunaan yang sesuai untuk ketegangan tetikus ini dalam penyelidikan lanjut.