Pemetaan Landskap Proteomik Penyakit Behçet yang Diselesaikan Organ Menggunakan Proteomik Plasma Mendalam Untuk Mengenalpasti Ekspresi Protein 2 Pengikat Hyaluronik Berkaitan Dengan Penglibatan Vaskular

Objektif.

Kajian ini dijalankan untuk menjelaskan patogenesis dan heterogeniti penyakit Behçet (BD) yang melibatkan organ berbeza menggunakan proteomik mendalam untuk mengenal pasti biomarker untuk penilaian klinikal dan rawatan pesakit dengan BD.

Kaedah.

Kami mengukur tahap ekspresi protein dalam sampel plasma daripada 98 pesakit dengan BD dan 31 kawalan sihat menggunakan platform proteomik kami yang mendalam dengan spektrometer jisim pemerolehan bebas data dan mikroarray antibodi. Kami melakukan analisis bioinformatik proses biologi dan laluan isyarat yang telah diubah dalam kumpulan BD dan membina landskap proteomik patogenesis BD yang diselesaikan oleh organ. Kami kemudian mengesahkan biomarker keterukan penyakit dan subset vaskular dalam kohort bebas daripada 108 pesakit BD dan 29 kawalan sihat menggunakan ujian imunosorben berkaitan enzim.

cistanche tubulosa-meningkatkan sistem imun

Keputusan.

Kumpulan BD mempunyai 220 protein yang dinyatakan secara berbeza, yang mendiskriminasi antara pesakit BD (88.6%) dan kawalan sihat (95.5%). Analisis bioinformatik mendedahkan proses biologi berbeza yang dikaitkan dengan patogen BD, termasuk pengaktifan pelengkap, penyembuhan luka, angiogenesis, dan imuniti pengantara leukosit. Tambahan pula, landskap proteomik yang dibina bagi BD yang diselesaikan oleh organ mengenal pasti ciri proteomik BD yang dikaitkan dengan organ dan sasaran protein yang berbeza yang boleh digunakan untuk pembangunan rawatan. Protein pengikat hyaluronik 2, tenascin, dan serpin A3 telah disahkan sebagai biomarker berpotensi untuk penilaian klinikal BD vaskular dan sasaran rawatan.

Kesimpulan.

Keputusan kami memberikan pandangan yang berharga tentang patogenesis BD yang diselesaikan organ dari segi ciri proteomik dan biomarker berpotensi untuk penilaian klinikal dan terapi berpotensi untuk BD vaskular.

PENGENALAN

Penyakit Behçet (BD) ialah vaskulitis kronik multisistemik yang sangat berleluasa dalam populasi di sepanjang laluan perdagangan purba yang dikenali sebagai Jalan Sutera. Kajian 2016 mendapati bahawa kelaziman BD di Turki ialah 602 setiap 100,000 dalam populasi remaja/dewasa (1). BD sangat heterogen, dan pesakit hadir dengan penglibatan multiorgan, termasuk ulser mulut, ulser alat kelamin, uveitis dan lesi kulit; BD boleh membawa maut akibat pecah aneurisma vaskular atau komplikasi neurologi yang teruk. Ciri-ciri molekul BD yang dikaitkan dengan organ yang berbeza tidak diketahui. Kaedah diagnostik klinikal dan pilihan rawatan seterusnya bergantung terutamanya kepada gejala klinikal. Walau bagaimanapun, tiada biomarker tersedia yang membenarkan pembezaan BD berdasarkan penglibatan organ yang berbeza. Berbanding dengan genomik, proteomik menawarkan pendekatan alternatif untuk memperoleh maklumat yang banyak tentang patogenesis BD dan mencari biomarker untuk diagnosis dan terapi BD. Lee et al menemui 22 protein yang dinyatakan secara berbeza menggunakan 2-elektroforesis dimensi digabungkan dengan spektrometri jisim masa penerbangan yang dibantu matriks/pengionan bersamaan spektrometri jisim (2). Tiga protein unik dalam BD usus (fibrin, apolipoprotein A-IV, dan serum amyloid A) telah disahkan selanjutnya dalam kohort bebas menggunakan ujian imunosorben berkaitan enzim (ELISA). Menggunakan tatasusunan manik sitokin Bio-Rad yang mengandungi 25 sitokin keradangan, Lopalco et al mendapati bahawa gp130/interleukin dirembeskan-6 (IL-6) reseptor , merembeskan reseptor IL-6 , IL{{19} }, dan paras serum limfopoietin stromal thymic telah dipertingkatkan dengan ketara dalam subset BD dengan manifestasi mukokutaneus dan penglibatan okular berbanding dengan subkumpulan dengan hanya penglibatan mukokutaneus (3). Walau bagaimanapun, maklumat yang diperolehi dalam kajian ini adalah terhad kerana kumpulan protein dan pesakit adalah kecil dan biomarker yang dikenal pasti tidak disahkan dengan baik. Untuk kajian ini, kami menjalankan, untuk pengetahuan kami, pemprofilan proteom plasma komprehensif pertama BD menggunakan platform proteomik mendalam kami yang disepadukan dengan spektrometer jisim pemerolehan bebas data (DIA-MS) dengan microarrays antibodi yang boleh disesuaikan (4). Dengan data proteomik, kami menganalisis protein yang dinyatakan secara berbeza antara pesakit BD dan kumpulan kawalan yang sihat dan proses biologi dan laluan protein ini mengenai patogenesis BD. Tambahan pula, kami membina landskap BD yang diselesaikan organ dan mengenal pasti ciri-ciri proteomik setiap organ. Biomarker BD vaskular dan keterukan penyakit telah disahkan dalam kohort bebas.

PESAKIT DAN KAEDAH

Kajian ini telah diluluskan oleh Jawatankuasa Etika Perubatan Hospital Kolej Perubatan Kesatuan Peking (JS-2049). Artikel ini tidak mengandungi data yang boleh dikenal pasti untuk mana-mana pesakit BD atau peserta kawalan sihat. Kohort penemuan termasuk 98 pesakit BD dan 31 kawalan sihat. Proteom plasma diukur secara mendalam menggunakan DIA-MS dan microarray antibodi. Analisis bioinformatik digunakan untuk mengenal pasti mekanisme biologi yang diubah dalam kumpulan BD dan untuk membina landskap proteomik BD yang diselesaikan oleh organ. Biomarker plasma calon telah disahkan menggunakan ELISA dalam kohort bebas yang terdiri daripada kawalan sihat dan pesakit dengan arteritis BD dan Takayasu. Ciri klinikal dan maklumat rawatan bagi kohort penemuan dan pengesahan ditunjukkan dalam Jadual Tambahan 1-6, dan prosedur percubaan terperinci diterangkan dalam Bahan Tambahan, tersedia di tapak web Arthritis & Rheumatologi di https://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348.

KEPUTUSAN

Ciri-ciri pesakit. Ciri-ciri klinikal pesakit dengan BD dan penggunaan glucocorticoids (GCs) dan imunosupresan mereka pada masa pengumpulan darah ditunjukkan dalam Jadual Tambahan 1, boleh didapati di laman web Arthritis & Rheumatologi di https://onlinelibrary.wiley.com/doi / 10.1002/art.42348. Dalam analisis proteomik kami, tiada perbezaan ketara dalam jantina dan umur diperhatikan antara 98 pesakit dengan BD dan 31 kawalan sihat (kohort penemuan) (Jadual Tambahan 1). Dalam kumpulan BD, 45, 38, dan 15 pesakit masing-masing mempunyai BD ringan, sederhana dan teruk. Semua pesakit BD mempunyai ulser mulut, dan > 20% mempunyai ulser alat kelamin (80.6%), lesi kulit (65.3%), lesi mata (23.5%), dan penglibatan vaskular (22.4%). Penglibatan vaskular pesakit BD dalam kohort penemuan ditunjukkan dalam Jadual Tambahan 2, dan ciri kohort pengesahan yang digunakan untuk mengesahkan ekspresi biomarker calon ditunjukkan dalam Jadual Tambahan 3-5 (tersedia di laman web Arthritis & Rheumatologi dihttps://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348).

cistanche tubulosa-meningkatkan sistem imun

Klik di sini untuk melihat produk Cistanche Enhance Immunity

【Minta lebih lanjut】 E-mel:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Pemprofilan mendalam proteom plasma pada pesakit dengan BD menggunakan DIA-MS dan microarray antibodi. Ilustrasi skematik kajian pemprofilan protein ditunjukkan dalam Rajah 1A dan Rajah Tambahan 1, tersedia di tapak web Arthritis & Rheumatologi di https://onlinelibrary.wiley.com/doi/ 10.1{{11} }02/art.42348. Semua sampel plasma daripada pesakit BD dan kawalan sihat diukur menggunakan platform proteomik plasma mendalam kami yang terdiri daripada DIA-MS dan microarray antibodi dengan kebolehulangan tinggi. Pekali korelasi Spearman bagi pengesanan protein plasma menggunakan mikroarray antibodi ialah 0.98 dan 0.93 di dalam dan di antara tatasusunan yang berbeza, masing-masing (Rajah Tambahan 2A dan 2B, tersedia di laman web Arthritis & Rheumatologi di https ://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348). Pekali korelasi Spearman bagi pengesanan protein plasma menggunakan DIA-MS ialah 0.92 (julat 0.87-0.96; Rajah Tambahan 2C). Imej imbasan wakil oleh microarray antibodi untuk pesakit BD dan kawalan sihat ditunjukkan dalam Rajah Tambahan 3, boleh didapati di https:// onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348. Keputusan menunjukkan bahawa, secara keseluruhan, protein plasma pesakit BD telah dikawal selia berbanding dengan protein plasma kawalan sihat. Dengan platform proteomik plasma kami yang mendalam, kami mengenal pasti 759 protein (Rajah Tambahan 1, 4, dan 5, tersedia di laman web Arthritis & Rheumatologi di https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348), yang telah diedarkan pada kira-kira 10 pesanan magnitud dalam plasma (Rajah 1B). Protein ini termasuk 410 biomarker protein (Pangkalan Data Biomarker Protein Plasma Penyakit Manusia, dalam talian di http://biokb.ncpsb. org. cn/hdpp/#/) dan 388 sasaran terapeutik yang sedang diluluskan atau sedang menjalani penyelidikan dalam ujian klinikal yang berterusan (Terapi Pangkalan Data Sasaran, dalam talian di http://db.idrblab.net/ttd/) (Rajah 1B). Anotasi fungsi biomarker dan sasaran terapeutik ini menunjukkan bahawa protein ini tergolong dalam pelbagai penyakit autoimun dan autoradang, termasuk BD, lupus nefritis, ankylosing spondylitis, dan vasculitis (Rajah 1C dan 1D dan Jadual Tambahan 7 dan 8, tersedia pada Arthritis & Rheumatologi. laman web di https://onlinelibrary.wiley.com/doi/ 10.1002/art.42348). Keputusan ini menunjukkan bahawa protein plasma yang dikesan dengan platform kami berkait rapat dengan kejadian dan perkembangan BD.

Rajah 1. Pemprofilan protein sampel plasma daripada pesakit dengan penyakit Behçet (BD) menggunakan platform proteomik yang mendalam dengan spektrometri jisim pemerolehan bebas data (DIA-MS) dan analisis microarray antibodi. Aliran Kerja kajian proteomik kami tentang BD. B, Taburan kepekatan protein plasma yang dikesan dengan DIA-MS dan mikroarray antibodi mengikut kepekatan rujukan dalam pangkalan data proteome plasma manusia (//www.plasmaproteomedatabase.org/). C, Penyakit yang berkaitan dengan biomarker protein yang dikesan, yang dikenal pasti menggunakan pangkalan data biomarker protein plasma penyakit manusia (HDPP) (//biokb.ncpsb.org.cn/hdpp/#/). D, Penyakit yang berkaitan dengan protein sasaran terapeutik yang dikesan, yang dikenal pasti menggunakan pangkalan data sasaran terapeutik (TTD) (//db.idrblab.net/ttd/). Saiz bulatan dalam C dan D sepadan dengan bilangan protein yang diperkaya dalam setiap penyakit. HC=kawalan sihat; FASP=penyediaan sampel berbantukan penapis; QE-HF=Orbitrap (ThermoFisher) Hibrid HF Eksaktif spektrometer jisim; Strep-PE=streptavidin-phycoerythrin; ELISA=ujian imunosorben berkaitan enzim; IgA=immunoglobulin A.

Analisis seluruh protein bagi protein plasma yang dinyatakan secara berbeza yang dikaitkan dengan BD. Rajah Tambahan 1, boleh didapati di https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/ art.42348, menunjukkan carta alir bagaimana protein yang dinyatakan secara berbeza daripada keputusan mikroarray DIA-MS dan antibodi dikenal pasti dan disepadukan. Sebanyak 493 protein disasarkan oleh DIA-MS, di mana 379 protein dikekalkan dengan<29 missing values in the BD group and < 7 missing values in the healthy control group. After 36 proteins with potential contaminations from blood cells (5) were removed, we analyzed 343 additional proteins for hypothesis testing, of which 166 proteins showed a statistically significant difference between the BD and healthy control groups. The antibody microarray detected 549 proteins. After 5 control proteins were removed, we retained 544 proteins for further analysis; of these, 74 proteins showed statistically significant differences between the BD group and the healthy control group (Supplementary Figure 1). In total, 220 (29.0%) of 759 proteins were significantly differently expressed between the BD group and the healthy control group (P < 0.05), as shown using our in-depth proteomics platform comprising DIA-MS and the antibody microarray (Figure 2A and Supplementary Figures 1 and 5, available at https:// onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348). The number of differentially expressed proteins is 10-fold more than previously reported (2,3,6). Among these proteins, 5 were identified as potential plasma or serum biomarkers in proteomics research for patients with BD, including haptoglobin, apoprotein, transthyretin, immunoglobulin light chain, and immunoglobulin heavy chain. Furthermore, growth arrest–specific 6, resistin, von Willebrand factor (VWF), and others were also identified to be increased in the BD group (Figure 2B). We identified 215 new proteins associated with BD, including serpin A3 (SERPINA3), glycosylphosphatidylinositol specific phospholipase D1 (GPLD1), and attractin (ATRN) (Figure 2C).

cistanche tubulosa-meningkatkan sistem imun

Untuk menentukan sama ada pesakit dengan BD boleh dibezakan daripada kawalan sihat, kami melakukan analisis pengelompokan hierarki tidak berat sebelah bagi 220 protein yang dinyatakan secara berbeza (P < 0.05), di mana { {3}}.0% pesakit dengan BD dan 86.4% daripada kawalan sihat dikelompokkan (Tambahan Rajah 6, tersedia di tapak web Arthritis & Rheumatologi di https://onlinelibrary.wiley. com/doi/ 10.1002/art.42348). Di antara 130 protein yang dinyatakan secara berbeza (P <0.01), kami mendapati bahawa 88.6% pesakit dengan BD dan 95.5% daripada kawalan sihat telah berkumpul (Rajah 2D). Analisis diskriminasi kuasa dua separa selanjutnya mendedahkan bahawa pesakit dalam kumpulan BD jelas dapat dibezakan daripada kawalan sihat mengikut klasifikasi protein yang dinyatakan secara berbeza (Tambahan Rajah 7, tersedia di laman web Arthritis & Rheumatologi di https://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348). Pengayaan penyakit menggunakan platform DisGeNET (7) selanjutnya menunjukkan bahawa protein yang dinyatakan secara berbeza ini dikaitkan dengan keradangan dan penyakit autoimun dan vaskular, termasuk BD dan vaskulitis (Rajah 2E dan Jadual Tambahan 9, tersedia di laman web Arthritis & Rheumatologi di https ://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348). Dalam analisis bioinformatik kami menggunakan Cytoscape dan CluGo, 8 proses biologi utama berikut dalam BD telah dikenalpasti: 1) pengaktifan pelengkap, 2) pengawalan paras zarah lipoprotein plasma, 3) penyembuhan luka, 4) angiogenesis, 5) imuniti pengantara leukosit, 6 ) aktiviti peptidase, 7) peraturan positif pengaktifan sel, dan 8) penghijrahan leukosit (Rajah 2F dan Jadual Tambahan 10, boleh didapati di laman web Arthritis & Rheumatology di https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348 ). Proses biologi ini menumpu kepada mekanisme patologi keradangan dan pembekuan semasa perkembangan BD, di mana profil lipid dan pengubahsuaian oleh tekanan oksidatif semasa keradangan membawa kepada disfungsi endothelial dan kejadian vaskular (8-11).

Secara konsisten, laluan paling ketara daripada pangkalan data KEGG (tersedia di http://www.genome.ad.jp/kegg) ialah pelengkap dan lata pembekuan (Rajah 3A), di mana 38 protein (P < 0.05 ) telah dikenal pasti, termasuk 19 komponen pelengkap (C) (C1QA, C1QB, C1QC, C1S, C2, C4B, rantai alfa protein pengikat C4b [C4BPA], C5, C6, C7, rantai alfa C8, rantai beta C8, gamma C8 rantai [C8G], C9, faktor pelengkap [CF] B, CFH, protein berkaitan CFH 4 [CFHR4], CFI dan protein seperti reseptor komponen 1), 5 faktor pembekuan (F11, F12, F13B, F5 dan F9 ), 4 protein berkaitan pembekuan (pengaktif plasminogen jenis tisu [PLAT], protein C, protein antikoagulan S [PROS1] dan VWF), dan 5 protein keluarga serpin (SERPINA1, SERPINC1, SERPIND1, SERPINF2 dan SERPING1). Dua puluh lima protein dalam lata adalah sasaran dadah untuk rawatan terapeutik (Rajah 3B). Menariknya, kebanyakan protein termasuk dalam laluan KEGG dan pelengkap dan lata pembekuan bertindih dengan yang terlibat dalam proses biologi pembekuan darah / penyembuhan luka yang paling diperkaya (Rajah 3B dan Jadual Tambahan 10, boleh didapati di https:// onlinelibrary.wiley.com/ doi/10.1002/art.42348.). Beberapa laluan jangkitan patogen telah dikenal pasti menggunakan analisis laluan KEGG dalam kajian, termasuk jangkitan Staphylococcus aureus, penyakit prion, pertusis, jangkitan papillomavirus manusia, jangkitan virus herpes simplex 1, dan interaksi protein virus dengan reseptor sitokin dan sitokin, yang menonjolkan peranan jangkitan patogen. dalam BD (Tambahan Rajah 8A, boleh didapati di laman web Arthritis & Rheumatologi dihttps://onlinelibrary.

Rajah 2. Protein dinyatakan secara berbeza antara pesakit BD dan kumpulan kawalan sihat yang dikenal pasti oleh DIA-MS dan microarray antibodi. Plot Gunung Berapi yang menggambarkan protein yang tidak terkawal dalam pesakit BD berbanding kumpulan kawalan yang sihat. Protein terkawal naik dan turun dengan ketara (P < 0.05) masing-masing ditunjukkan sebagai titik merah dan biru. B, Plot taburan menunjukkan intensiti ekspresi protein perwakilan dalam plasma pesakit BD dan kawalan sihat. Simbol mewakili sampel individu; garis mendatar menunjukkan median. C, rajah Venn membandingkan bilangan protein yang dinyatakan secara berbeza pada pesakit dengan BD yang dikenal pasti dalam kajian kami dengan yang dikenal pasti dalam kajian terdahulu. D, Analisis pengelompokan hierarki bagi protein yang dinyatakan secara berbeza (P < 0.01) antara BD dan kumpulan kawalan sihat, di mana 88.6% pesakit dengan BD dan 95.5% HC telah dikelompokkan. Kawasan segi empat tepat putus-putus menunjukkan setiap kumpulan bersama-sama dengan protein yang sangat dinyatakan. E, Pengayaan penyakit (diperolehi daripada platform DisGeNET) yang dikaitkan dengan protein yang tidak terkawal dalam pesakit BD berbanding kawalan yang sihat (log10 [nilai q] < −15). F, Proses biologi yang diperkaya dengan ketara dikenal pasti menggunakan protein yang dinyatakan secara berbeza dalam pesakit BD berbanding kawalan kesihatan (P < 0.05). *=P < 0.05; **=P < 0.01; ***=P < 0.001; ****=P < 0.0001. penahanan pertumbuhan GAS6 =–khusus 6; RETN=resistin; VWF=von Willebrand factor; SERPINA3=serpin A3 ( 1-antichymotrypsin); GPLD1=glikosilphosphatidylinositol khusus fosfolipase D1; ATRN=attractin (lihat Rajah 1 untuk definisi lain).

Rajah 3. Laluan isyarat yang dikaitkan dengan patogenesis BD. A, Laluan isyarat yang diperkaya dengan ketara yang dikaitkan dengan protein yang dinyatakan secara berbeza dalam pesakit BD berbanding kawalan sihat yang dikenal pasti menggunakan pangkalan data KEGG dan Reactome (P < 0.01). Fon merah menunjukkan laluan yang berkaitan dengan pembekuan darah dan pengaktifan pelengkap. B, Lata pelengkap dan pembekuan, yang dikenal pasti menggunakan pangkalan data KEGG, menunjukkan persatuan yang paling ketara dengan protein yang dinyatakan secara berbeza dalam pesakit BD berbanding kawalan yang sihat. Protein tandatangan yang boleh disasarkan oleh ubat yang diketahui diluluskan ditunjukkan. C dan D, Domain protein yang diperkaya dengan ketara (C) dan komponen selular (D) yang dikenal pasti oleh protein yang dinyatakan dengan ketara dalam pesakit BD berbanding kawalan sihat (P <0.01). Dalam A, C, dan D, panjang bar menunjukkan asas log 10 nilai P, dan nombor di sebelah bar menunjukkan bilangan protein yang terlibat dalam setiap kategori. IGF=faktor pertumbuhan seperti insulin; IGFBP=protein pengikat faktor pertumbuhan seperti insulin; C=pelengkap; ER=retikulum endoplasma; ECM=matriks ekstraselular; CUB=melengkapkan C1r/C1s, Uegf dan Bmp1; EGF=faktor pertumbuhan epidermis; Naik=dikawal selia; Ke bawah=dikawal ke bawah (lihat Rajah 1 untuk definisi lain).

wiley.com/doi/10.1002/art.42348) (12–17). Laluan KEGG jangkitan Staphylococcus aureus yang melibatkan 13 protein yang dinyatakan secara berbeza (P <0.05) telah diperkaya dengan ketara (sesetengahnya ditandakan dalam Rajah Tambahan 8B), yang melibatkan peranan jangkitan Staphylococcus aureus dalam patogenesis BD (18, 19). Akhir sekali, analisis pengayaan mengenal pasti domain pelengkap, termasuk domain yang banyak dalam protein kawalan pelengkap, ulangan Sushi, kompleks/perforin serangan membran, domain komponen C1q pelengkap dan domain CUB (untuk pelengkap C1r/C1s, Uegf, dan Bmp1 ) (Rajah 3C). Analisis pengayaan komponen selular mendedahkan bahawa protein terkawal diperkaya, antara lain, matriks ekstraselular yang mengandungi kolagen, lumen granul rembesan, granul alfa platelet, dan zarah lipoprotein plasma, tetapi protein terkawal ke bawah diperkaya terutamanya dalam ruang ekstraselular dan eksosom (Rajah 3D).

Untuk menyiasat pengaruh rawatan pada protein plasma, kami mengumpulkan pesakit dengan BD mengikut rawatan dengan GC dan imunosupresan. Pesakit dengan BD dengan atau tanpa rawatan boleh dibezakan dengan jelas daripada kawalan sihat (Tambahan Rajah 9A, tersedia di tapak web Arthritis & Rheumatologi di https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art. 42348). Analisis menunjukkan bahawa kebanyakan proses biologi yang berubah pada pesakit dengan BD yang dirawat berbanding pesakit BD yang tidak dirawat dengan GC dan imunosupresan berkaitan dengan peraturan tindak balas imunologi (Tambahan Rajah 9B). Kami juga membandingkan ekspresi pembezaan protein plasma antara pesakit BD tanpa rawatan dan pesakit BD yang menerima rawatan GC dan imunosupresan. Hasilnya mengenal pasti 68 protein yang dinyatakan secara berbeza (P <0.05) yang terlibat dalam, sebagai contoh, pengawalan paras zarah lipoprotein plasma dan aktiviti pelepasan dan endopeptidase jenis serine (Tambahan Rajah 10, boleh didapati di laman web Arthritis & Rheumatologi di https:// onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348).

Landskap proteomik BD yang diselesaikan oleh organ. BD ialah penyakit yang sangat heterogen dengan penglibatan multiorgan, dengan manifestasi fenotip yang berbeza (Jadual Tambahan 1, boleh didapati di https://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art .42348). Kajian telah cuba untuk mengkategorikan BD berdasarkan manifestasi klinikal (20-23). Untuk menyiasat heterogeniti di kalangan pesakit dengan BD berdasarkan data proteomik, kami melakukan pengelompokan konsensus tanpa pengawasan pada 220 protein yang dinyatakan secara berbeza (Rajah 4A). Analisis komponen utama mendedahkan pemisahan yang berbeza bagi subjenis I dan subjenis II daripada subjenis III (Rajah 4B). Protein khusus subtipe I terlibat terutamanya dalam pembekuan darah dan pengaktifan pelengkap, protein spesifik subtipe II terutamanya terlibat dalam metabolisme glukosa dan protein-lipid, dan protein khusus subtipe III mengambil bahagian dalam tindak balas keradangan (Rajah 4D dan Rajah Tambahan 11, boleh didapati di laman web Arthritis & Rheumatologi di https://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348). Walaupun tiada perbezaan yang signifikan secara statistik mengenai ciri klinikal ditemui di kalangan kumpulan BD subtaip proteomik, kami mendapati bahawa subtipe I dan subtipe II adalah serupa (Rajah 4B), yang konsisten dengan keputusan analisis komponen utama. Pesakit dengan BD dengan subjenis I dan subjenis II mempunyai peratusan simptom yang teruk yang lebih tinggi, termasuk penglibatan sistem saraf (13.8% dalam subtipe I dan 8.2% dalam subtipe II berbanding 0% dalam subtipe III) dan penglibatan vaskular (27.6% dalam subtipe I dan 22.4 % antara subjenis II berbanding 0% antara subjenis III). Walaupun pesakit dengan BD dengan subtipe III mempunyai simptom yang agak ringan hingga sederhana, mereka menunjukkan peratusan lesi kulit yang lebih tinggi (87.5% dalam subtipe III berbanding 51.7% dalam subtipe I dan 65.3% dalam subtipe II) (Rajah 4E, Jadual Tambahan. 11, boleh didapati di laman web Arthritis & Rheumatology di https://onlinelibrary. wiley.com/doi/10.1002/art.42348). Terdapat bukti terkumpul yang menunjukkan perubahan dalam pelbagai proses biologi semasa perkembangan BD, termasuk autoinflammation, ketidakseimbangan redoks, perubahan metabolik, dislipidemia, dan disfungsi pembekuan (8,24-27). Oleh itu, keputusan kami mencadangkan bahawa, walaupun pesakit BD yang tergolong dalam kumpulan proteomik subtipe I dan subtipe II mempunyai keterukan BD yang lebih tinggi, mekanisme biologi untuk 2 kumpulan mungkin berbeza.

sistem imun yang meningkatkan tumbuhan cistanche

Kami melakukan analisis kelompok kohort BD berdasarkan data klinikal (jantina, umur, skor keterukan dan manifestasi klinikal) menggunakan {{0}}analisis kelompok langkah (23). Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 4E, pesakit BD dikelaskan kepada 2 kelompok (kluster 1 dan 2), di mana pesakit dikategorikan mengikut gejala seperti ulser mulut, lesi kulit, lesi mata dan ulser alat kelamin. Pesakit BD dalam kluster 1 mempunyai insiden yang lebih besar daripada fenotip arthritis yang melibatkan gejala arthralgia (40.0%) dan gastrousus (8.9%), vaskular (48.9%), dan penglibatan sistem saraf (22.2%) berbanding pesakit BD dalam kluster 2. Seterusnya, kami membandingkan klasifikasi klinikal dan proteomik dalam kohort BD yang sama. Keputusan menunjukkan bahawa pesakit dalam klasifikasi subtipe I dan II proteomik dan dalam kelompok klinikal 1 berkongsi ciri klinikal yang sama, dengan pesakit menunjukkan penglibatan multiorgan (iaitu, gastrousus, vaskular, dan sistem saraf) dan keterukan penyakit yang lebih tinggi (Rajah 4E). Sebaliknya, pesakit dalam klasifikasi subtipe III proteomik dan dalam kluster klinikal 2 menunjukkan ciri klinikal yang sama, tanpa menunjukkan penglibatan gastrousus, vaskular, dan sistem saraf. Penemuan ini boleh disokong lagi oleh analisis pengelompokan hierarki tidak berat sebelah (Rajah 4F), di mana pesakit dalam subjenis proteomik III dikelompokkan dengan kelompok klinikal 2 dan pesakit dalam subjenis proteomik I dan II dikelompokkan dengan kelompok klinikal 1. Keputusan ini menunjukkan potensi utiliti. klasifikasi proteomik dalam menunjukkan heterogeniti dan keterukan BD. Strategi terapeutik untuk pesakit dengan BD sebahagian besarnya bergantung pada ciri klinikal dan organ yang terlibat. Walau bagaimanapun, ciri-ciri proteomik BD yang diselesaikan oleh organ tidak diketahui.

Rajah 4. Klasifikasi pesakit BD menggunakan proteomik plasma dan pembolehubah klinikal. A, Peta haba matriks konsensus yang menunjukkan perkadaran bersama pesakit BD dengan setiap subjenis proteomik. B, Analisis komponen utama subtipe proteomik I, II, dan III dalam pesakit BD, menunjukkan perbezaan yang luar biasa antara kelompok. C, Analisis pengelompokan hierarki bagi protein yang dinyatakan secara berbeza (P < 0.05, perbezaan ungkapan purata P > 0.2) dalam 3 subtipe proteomik dalam pesakit BD. D, Kumpulan berfungsi proses biologi mengikut protein khusus yang berkaitan dengan 3 subjenis. E, Taburan ciri demografi dan klinikal pesakit BD mengikut subtipe proteomik dan kelompok klasifikasi klinikal. F, Taburan setiap ciri klinikal mengikut subjenis proteomik dan kelompok klasifikasi klinikal dalam kohort BD, berdasarkan analisis pengelompokan hierarki tidak berat sebelah. Lihat Rajah 1 untuk definisi.

Rajah 5. Pemetaan landskap BD yang diselesaikan organ menggunakan proteomik plasma. A, Landskap Proteomik BD yang diselesaikan oleh organ. Kiri: Rajah yang menggambarkan perubahan lipatan dalam ekspresi protein dalam pesakit BD berbanding kawalan sihat mengikut fenotip. 3 blok mewakili, dari kiri ke kanan, kawalan sihat, pesakit BD tanpa (wo) simptom yang sepadan, dan pesakit BD dengan simptom yang sepadan. Keamatan warna setiap blok adalah berkadar dengan perubahan lipatan dalam ekspresi protein antara BD dan kumpulan kawalan yang sihat. Merah dan biru masing-masing menunjukkan protein terkawal naik dan terkawal turun. Betul, proses biologi yang dikaitkan dengan setiap protein yang dinyatakan secara berbeza, dengan keamatan kelabu segi empat sama yang menunjukkan log10-nilai P dan nombor yang menunjukkan bilangan protein yang terlibat dalam setiap kategori. B, Korelasi (Pearson atau Spearman) antara ekspresi protein pengikat hyaluronan 2 (HABP2), tenascin C (TNC) dan serpin A3 ( 1-antichymotrypsin) (SERPINA3) dan skor keterukan pesakit BD. Teduhan menunjukkan 95% CI. C, Plot biola menunjukkan keamatan ekspresi HABP2, TNC, dan SERPINA3 berbanding keparahan penyakit dalam kawalan sihat dan kumpulan BD yang ringan, sederhana dan teruk. Simbol mewakili sampel individu; garis mendatar merah bertitik menunjukkan median, dengan garis hitam bertitik atas dan bawah menunjukkan julat antara kuartil. *=P < 0.{{20}}5; **=P < 0.01; ***=P < 0.001; ****=P < 0.0001. Lihat Rajah 1 untuk definisi.

Oleh itu, kami mengenal pasti 58 protein yang dinyatakan secara khusus dalam kumpulan pesakit yang berbeza dengan BD yang menunjukkan fenotip organ yang berbeza (Rajah 5A). Carian kami dalam pangkalan data DrugBank (tersedia di https://go.drugbank.com/) mendedahkan bahawa 26 protein, iaitu, apolipoprotein A-IV, CFI, ceruloplasmin (CP), glutamat dehidrogenase 1 (GLUD1), protein pengikat hyaluronik 2 (HABP2), F5, SERPINC1, SERPINA3, transferin receptor protein 1 (TFRC), VWF, SERPINF2, CD44, Fc region receptor III-A, alanine aminotransferase 1, leukotriene A-4 hydrolase, proprotein convertase subtilisin/jenis kexin 9, angiotensinogen, C8G, haptoglobin, peptidyl-prolyl cis-trans isomerase A, selenoprotein P, SERPIND1, SERPING1, C4BPA, lymphotoxin alpha, C4B, dan intertrypsin heavy chain 4, adalah sasaran ubat terapeutik yang digunakan di klinik atau dalam pembangunan (Jadual Tambahan 12, boleh didapati di laman web Arthritis & Rheumatology di https://onlinelibrary.wiley.com/doi/ 10.1002/art.42348.). Di antara fenotip, fenotip arthritis yang melibatkan gejala arthralgia diperkaya dengan proses biologi yang berkaitan dengan autoimun, termasuk pengawalan tindak balas imun humoral yang dimediasi oleh imunoglobulin yang beredar, pengawalan imuniti pengantara sel B, dan pengawalan tindak balas imun yang dimediasi imunoglobulin. ; fenotip gastrousus dikaitkan dengan peraturan pengaktifan pelengkap dan imuniti pengantara sel B; fenotip yang terlibat jantung dikaitkan dengan aktiviti reseptor sitokin, pengawalan proses metabolik kolagen, dan pembongkaran matriks ekstraselular; fenotip epididymitis dikaitkan dengan tindak balas fasa akut; dan fenotip lesi kulit dikaitkan dengan aktiviti perencat endopeptidase jenis serine, pembekuan darah, tindak balas imun humoral yang dimediasi oleh imunoglobulin yang beredar, dan proses lain (Rajah 5A dan Jadual Tambahan 13, boleh didapati di laman web Arthritis & Rheumatology di https://onlinelibrary .wiley.com/doi/ 10.1002/art.42348).

Fenotip vaskular mempunyai bilangan terbesar protein yang dinyatakan secara berbeza, termasuk GLUD1, tenascin C (TNC), ligan chemokine motif XC 2, faktor pertumbuhan epidermis yang mengandungi protein matriks ekstraselular fibulin 1, HABP2, F5, ATRN, SERPINC1, GPLD1, seperti insulin protein pengikat faktor pertumbuhan 6, pengikat lektin mannose 2, SEPRINA3, TFRC, VWF, SERPINF2, dan ahli keluarga ribonuklease A 4 (Rajah 5A). Analisis bioinformatik selanjutnya mendedahkan bahawa protein yang dinyatakan secara berbeza ini terlibat dalam degranulasi platelet, pembekuan darah, fosforilasi protein pasca translasi, aktiviti perencat endopeptidase jenis serine, dan tindak balas keradangan akut, antara fungsi lain. Kesemua keputusan ini menunjukkan landskap proteomik BD yang diselesaikan oleh organ, dari mana ubat yang diperibadikan boleh dibangunkan untuk protein sasaran dalam setiap fenotip organ.

manfaat cistanche untuk lelaki-menguatkan sistem imun

Identification of plasma proteins related to BD severity. Among the 220 unique differentially expressed proteins (P < 0.05), 28 were positively correlated with the severity of BD (Figures 5B and 5C and Supplementary Figure 12, available on the Arthritis & Rheumatology website at https://onlinelibrary. wiley.com/doi/10.1002/art.42348). Seven proteins displayed a linear correlation with the severity score, namely, TNC, HABP2, SERPINA3, F5, ATRN, C4B, and CFH (Figure 5B and Supplementary Figure 12A). The expression of these 7 proteins was up-regulated in the severe BD group compared with the mild and moderate BD groups and the healthy control group, as indicated in the scatter plot in Figure 5C (see also Supplementary Figure 12A). Next, we selected and validated 7 protein candidates (TNC, HABP2, SERPINA3, ATRN, C4BPA, GPLD1, and C5) in an independent cohort composed of 108 patients with BD and 29 healthy controls by using quantitative ELISA (Supplementary Table 3, available at https://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348). The reproducibility of the ELISA for the validation of plasma proteins was >0.9 (Tambahan Rajah 13, boleh didapati di https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/ art.42348). Tahap plasma tinggi HABP2, TNC, dan SERPINA3 telah disahkan dalam kumpulan BD berbanding dengan kumpulan kawalan sihat (Rajah 6A), serta korelasinya dengan keterukan penyakit (Rajah 6B dan 6C). Kami juga membandingkan ungkapan HABP2, seperti yang dinilai menggunakan ELISA, antara pesakit BD (n=39) dan kumpulan kawalan pesakit dengan arteritis Takayasu (n=8) dan kawalan sihat (n=10 ) (Tambahan Rajah 14 dan Jadual Tambahan 5, boleh didapati di laman web Arthritis & Rheumatologi di https:// onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348.). Keputusan menunjukkan bahawa kepekatan HABP2 jauh lebih tinggi dalam kumpulan BD daripada kepekatan dalam arteritis Takayasu dan kumpulan kawalan yang sihat (Tambahan Rajah 14), menunjukkan kekhususan HABP2 sebagai biomarker yang berpotensi untuk diagnosis BD.

Mengikut skor keterukan Krause, gejala vaskular mempunyai berat maksimum. Oleh itu, kami membahagikan pesakit kepada kumpulan BD vaskular dan BD bukan vaskular mengikut kehadiran trombosis vena, stenosis arteri, oklusi, pelebaran, atau aneurisme (Jadual Tambahan 4, boleh didapati di https://onlinelibrary. wiley.com/doi/1 0.10{{20}}2/art.42348). Kami membandingkan tahap ekspresi HABP2, TNC, dan SERPINA3 antara BD vaskular, BD bukan vaskular, dan kumpulan kawalan yang sihat. Keputusan menunjukkan bahawa 3 protein telah dikawal dengan ketara dalam kumpulan BD vaskular (Rajah 6D). Analisis lengkung ciri pengendalian penerima untuk HABP2, TNC dan SERPINA3 juga dilakukan, di mana potongan, sensitiviti dan kekhususan ditentukan (Jadual Tambahan 14, tersedia di https://onlinelibrary.wiley.com/doi/1{{24 }}.1002/art. 42348.). Keputusan menunjukkan bahawa HABP2 (kawasan di bawah lengkung [AUC] 0.68, kepekaan 0.69, dan kekhususan 0.69) dan TNC (AUC 0.71, kepekaan 0.58, dan kekhususan 0.77) boleh membezakan vaskular daripada BD bukan vaskular. Tahap 3 biomarker dibandingkan antara pesakit dengan BD vaskular yang tidak aktif dan aktif. Keputusan menunjukkan bahawa tahap ekspresi HABP2, TNC, dan SERPINA3 secara konsisten lebih tinggi pada pesakit dengan BD tanpa mengira aktiviti BD vaskular (Tambahan Rajah 15, tersedia di laman web Arthritis & Rheumatologi di https://onlinelibrary.wiley.com/doi /10.1002/art.42348).

Rajah 6. Pengesahan biomarker BD vaskular seperti yang dinilai oleh ELISA dalam kohort bebas. A, C dan D, Kepekatan plasma (Conc) protein pengikat hyaluronan 2 (HABP2), tenascin C (TNC) dan serpin A3 ( 1-antichymotrypsin) (SERPINA3) dalam kumpulan kawalan sihat berbanding semua BD pesakit (A), berbanding pesakit BD dalam kumpulan penyakit ringan, sederhana dan teruk (C), dan berbanding pesakit BD (N-VBD) dan BD vaskular (VBD) (D). B, Korelasi (Pearson atau Spearman) antara kepekatan HABP2, TNC, dan SERPINA3 dan skor keterukan BD. Teduhan menunjukkan 95% CI. *=P < 0.05; **=P < 0.01; ***=P < 0.001; ****=P < 0.0001. Lihat Rajah 1 untuk definisi.

Analisis korelasi antara protein plasma, skor Borang Aktiviti Semasa Penyakit Behçet dan data klinikal. HABP2, TNC dan SERPINA3 menunjukkan tahap tinggi dalam kumpulan BD aktif berbanding dengan BD tidak aktif dan kumpulan kawalan sihat (P < 0.001) (Tambahan Rajah 16A, tersedia pada Arthritis & Rheumatologi laman web di https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348). Tahap SERPINA3 telah dinaikkan dalam kumpulan dengan skor Borang Aktiviti Semasa Penyakit Behçet (BDCAF) yang tinggi (Tambahan Rajah 16B). Selain itu, pada pesakit dengan BD, tahap skor SERPINA3 dan BDCAF berkorelasi secara positif (r=0.39, p=0.0036), manakala tahap HABP2 dan TNC tidak menunjukkan korelasi positif dengan markah BDCAF. Kami selanjutnya menganalisis korelasi antara tahap plasma pesakit dan data klinikal (Tambahan Rajah 17A dan Jadual Tambahan 15, boleh didapati di https://onlinelibrary.wiley.com/doi/ 10.1002/art.42348.). Pekali korelasi r > 0.3 telah diserlahkan dalam plot kord. Plot serakan perwakilan ditunjukkan dalam Rajah Tambahan S17B–G. Keputusan menunjukkan bahawa tahap HABP2, TNC, dan SERPINA3 berkorelasi positif dengan tahap protein C-reaktif, kiraan neutrofil, lebar pengedaran sel darah merah, nisbah neutrofil kepada limfosit, kiraan platelet, dan lebar pengedaran platelet. Semua keputusan ini menunjukkan bahawa HABP2, TNC, dan SERPINA3 secara fungsional dikaitkan dengan keradangan, fungsi endothelial, dan pengaktifan platelet dan boleh berfungsi sebagai biomarker untuk menunjukkan keterukan dan aktiviti BD, yang harus disahkan dalam kohort klinikal yang berbeza pada masa hadapan. .

PERBINCANGAN

BD adalah vaskulitis sistemik dengan persembahan klinikal heterogen yang mencerminkan mekanisme patogenik yang berbeza yang bertanggungjawab untuk mendorong keradangan dalam arteri dan urat semua saiz dalam tisu dan organ manusia. Dalam kajian ini, kami mengenal pasti satu set besar protein disregulasi (n=220) dalam kumpulan pesakit BD yang mengambil bahagian dalam proses biologi yang berbeza, dan kami menggunakan analisis bioinformatik untuk menentukan interaksi imun-keradangan, kehadiran trombosis, dan peranan patologi yang dimediasi oleh sistem pelengkap dalam BD. Analisis KEGG selanjutnya mendedahkan persatuan BD dengan pelengkap dan lata pembekuan dan jangkitan bakteria. Sistem pelengkap mengantara imuniti semula jadi dan keradangan untuk mempertahankan diri daripada patogen melalui degranulasi, kemotaksis, fagositosis, laluan isyarat reseptor sel B, dan lisis sel oleh kompleks serangan membran, manakala lata pembekuan terlibat dalam tindak balas anti-radang, vasodilatasi, peningkatan kebolehtelapan endothelial, dan pengaktifan platelet. Menggunakan data persatuan seluruh genom, Bakir-Gungor et al menunjukkan bahawa pelengkap dan lata pembekuan adalah 1 daripada 6 laluan bersama antara pesakit BD Turki dan Jepun, yang menyokong keputusan kami dari latar belakang genetik dan seterusnya menunjukkan mekanisme keradangan dan vaskulopati / trombofilia dalam patogenesis BD (28). Imuniti pengantara leukosit, peraturan positif pengaktifan sel, dan penghijrahan leukosit menunjukkan tindak balas imun dan keradangan aktif dalam BD. Neutrofil diaktifkan untuk menghasilkan radikal bebas oksigen dan perangkap ekstraselular neutrofil, menyebabkan kerosakan keradangan dalam sel endothelial vaskular, trombosis vena, dan aneurisme. Spesies oksigen reaktif yang dihasilkan oleh neutrofil aktif juga boleh menyebabkan pengoksidaan dan pengubahsuaian lipid dan lipoprotein, terutamanya lipoprotein berketumpatan rendah, seperti yang ditunjukkan dengan peningkatan peroksidasi lipid (9,11), yang seterusnya meningkatkan risiko kardiovaskular (9,10) dan, dalam giliran, meningkatkan tindak balas keradangan (10). Peristiwa ini adalah selaras dengan proses biologi pengawalan paras zarah lipoprotein plasma dan pembentukan semula kompleks protein-lipid yang diperhatikan dalam kajian kami. Bukti daripada kajian kami adalah konsisten dengan penemuan dari Emmi et al yang menghubungkan pengeluaran spesies oksigen reaktif leukosit dan peroksidasi lipid plasma (8).

Analisis kluster konsensus menggunakan proteomik mendedahkan heterogeniti pesakit dengan BD. Pesakit dengan subjenis I mempunyai simptom yang lebih teruk, yang mungkin dikaitkan dengan proses biologi aktif pembekuan darah dan pengaktifan pelengkap. Sebaliknya, pesakit dengan subtipe III mempunyai simptom yang agak ringan, dan tindak balas keradangan mungkin merupakan proses patologi utama dalam subkumpulan ini. Tambahan pula, kami mengenal pasti ciri-ciri proteomik pesakit dengan BD dengan penglibatan organ yang berbeza. Analisis bioinformatik kami secara berkesan menggambarkan fungsi ciri protein setiap fenotip organ, seperti yang ditunjukkan oleh persatuan antara autoimun dan fenotip arthritis dengan gejala arthralgia (29-31). Kejadian vaskular utama, lesi okular, dan penglibatan neurologi adalah punca utama morbiditi dan kematian (16). Rawatan BD bergantung pada jenis organ yang terlibat dan keterukan penyakit dalam sistem organ tersebut. Walau bagaimanapun, sepanjang pengetahuan kami, tiada terapi sasaran untuk BD tersedia setakat ini. Keputusan kami menunjukkan bahawa prosedur diagnostik dan terapeutik untuk setiap BD yang diselesaikan organ mungkin berbeza kerana heterogeniti mekanisme patogenik. Sesetengah protein utama boleh menjadi sasaran dadah untuk fenotip, termasuk lesi gastrousus, saraf, mata, sendi dan vaskular.

Peratusan pesakit dengan BD vaskular di kalangan kaum dan etnik yang berbeza adalah antara 7.7% hingga 43% (32); penyakit ini hampir selalu dikaitkan dengan trombosis arteriovenous berisiko tinggi dan/atau aneurisme, keterukan penyakit yang tinggi dan kadar berulang 5-tahun kumulatif sebanyak 38.4% (33). Faktor imuniti dan keradangan dianggap menyumbang kepada penglibatan dan manifestasi vaskular dalam BD. Kerosakan pada sel endothelial diketahui mengakibatkan kecenderungan untuk risiko trombotik (34). Tambahan pula, dinding salur yang terjejas berikutan fibrosis boleh menyebabkan dinding arteri yang lemah dan peregangan dinding salur dengan aneurisme berikutnya (35,36). Penyimpangan, penyempitan, dan oklusi juga mungkin disebabkan semasa keradangan akut dan selepas fibrosis (37), manakala keradangan kronik seterusnya menggalakkan sifat vasodilator yang tidak berfungsi pada endothelium (38). HABP2, juga dipanggil protease pengaktifan faktor VII, pada asalnya ditemui melalui keupayaannya untuk mengikat asid hyaluronik, glikosaminoglikan yang mempunyai peranan dalam peraturan penghalang sel endothelial (39), dan terlibat dalam pembekuan darah dan fibrinolisis (40). Kajian terdahulu telah melaporkan bahawa HABP2 boleh mengaktifkan keradangan, apoptosis, dan pertumbuhan sel dalam otot licin vaskular dan sel endothelial (41-43) dan boleh berfungsi sebagai pengawal selia integriti dan kebolehtelapan vaskular melalui reseptor diaktifkan protease (PARs; serupa dengan trombin. )/RhoA/ Laluan isyarat protein kinase (ROCK) berkaitan Rho (44). Mendiamkan (menggunakan RNA kecil yang mengganggu) HABP2 atau PAR/ RhoA/ROCK menghalang HABP2-gangguan penghalang sel endothelial (44). TNC ialah glikoprotein matriks ekstraselular proinflamasi yang menyumbang kepada pembentukan dan pecah plak dengan mengaktifkan platelet atau mengawal selia pengaktif plasminogen tisu (45). Tahap TNC serum telah dikaitkan dengan keterukan aterosklerosis (46), dan ekspresi TNC sementara telah ditunjukkan untuk dikawal selia semasa kerosakan vaskular tetapi dibersihkan selepas pembaikan selesai (45).

SERPINA3, juga dikenali sebagai 1-antichymotrypsin, menghalang beberapa protease serin, terutamanya cathepsin G (47). Sebagai tambahan kepada sel radang, sel otot licin yang kurang berkontraksi boleh dibezakan kepada fenotip seperti makrofaj, yang mungkin juga merupakan sumber sitokin dan SERPINA3 di tapak kecederaan dinding kapal (48). Kajian terdahulu telah menunjukkan bahawa peranan aktif SERPINA3 dalam mengawal selia secara negatif percambahan sel otot licin vaskular (49) atau menghalang pengumpulan neutrofil (47) boleh meramalkan berlakunya kejadian kardiovaskular yang buruk. Walau bagaimanapun, sama ada SERPINA3 memainkan peranan semasa patogenesis vaskulitis pada pesakit dengan BD atau merupakan produk daripada proses patogen masih tidak jelas. Terutamanya, asid hyaluronik ubat HABP2 ialah glycosaminoglycan anionik, bukan bersulfat yang menunjukkan anti-radang, pembaikan luka, penjanaan semula tisu dan sifat penting lain; asid hyaluronik telah disiasat dalam rawatan kanser, oftalmologi, arthrologi, pneumologi, rhinologi, dan urologi dan untuk kegunaan lain (50). Terdapat beberapa molekul kecil (zink asetat, zink sulfat, zink, zink klorida) menyasarkan SERPINA3 (Jadual Tambahan 12, boleh didapati di https://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348). Keputusan ini menunjukkan bahawa biomarker yang dikenal pasti dalam kerja kami juga boleh menjadi sasaran dalam pembangunan terapi baru untuk pesakit BD. Kajian kami mempunyai beberapa batasan. Pertama, bilangan sampel plasma adalah terhad; biomarker yang dikenal pasti dalam kajian kami harus disahkan dalam kohort yang berbeza dan lebih besar dengan penyakit autoinflamasi dan autoimun yang berbeza sebagai kawalan. Kedua, keputusan perlu disahkan dalam kohort pesakit BD yang naif terhadap rawatan. Ketiga, fungsi biologi protein biomarker dalam patogenesis BD perlu diperiksa dalam kajian masa depan menggunakan model sel dan haiwan.

Secara keseluruhan, ini, untuk pengetahuan kami, kajian pertama yang menganalisis secara komprehensif ciri-ciri proteomik BD yang diselesaikan oleh organ. Hasilnya memberikan pandangan asas tentang heterogeniti dan patogenesis BD dan menyerlahkan protein plasma (HABP2, TNC, dan SERPINA3) sebagai biomarker yang berpotensi untuk penilaian klinikal masa depan dan rawatan BD vaskular.

RUJUKAN

1. Bas¸ Y, Seçkin HY, Kalkan G, et al. Penyiasatan penyakit Behçet dan kekerapan stomatitis aphthous berulang: kelaziman tertinggi di Turki. Balkan Med J 2016;33:390–5.

2. Lee HJ, Kim JH, Kim SW, et al. Analisis proteomik amiloid serum sebagai penanda berpotensi dalam penyakit Behçet usus. Dig Disc Sci 2017;62:1953–62.

3. Lopalco G, Lucherini OM, Lopalco A, et al. Tanda tangan sitokin dalam penyakit Behçet mucocutaneous dan okular. Front Immunol 2017; 8:200.

4. Xu M, Deng J, Xu K, et al. Proteomik serum yang mendalam mendedahkan biomarker keterukan psoriasis dan tindak balas terhadap perubatan tradisional Cina. Theranostics 2019;9:2475–88.

5. Geyer PE, Voytik E, Treit PV, et al. Pemprofilan protein plasma untuk mengesan dan mengelakkan bias berkaitan sampel dalam kajian biomarker. EMBO Mol Med 2019;11:e10427.

6. Mao L, Dong H, Yang P, et al. MALDI-TOF/TOF-MS mendedahkan peningkatan serum haptoglobin dan amiloid A dalam penyakit Behcet. J Proteome Res 2008;7:4500–7.

7. Piñero J, Ramírez-Anguita JM, Saüch-Pitarch J, et al. Platform pengetahuan DisGeNET untuk genomik penyakit: kemas kini 2019. Asid Nukleik Res 2020;48:D845–55.

8. Emmi G, Bagni G, Lastraioli E, et al. Profil miRNA beredar unik menyerlahkan keradangan trombo dalam sindrom Behçet. Ann Rheum Dis 2022;81:386–97.

9. Orem A, Yandi YE, Vanizor B, et al. Penilaian autoantibodi terhadap lipoprotein berketumpatan rendah (LDL) yang diubah suai secara oksidatif, kerentanan LDL kepada pengoksidaan, lipid serum dan tahap hidroperoksida lipid, jumlah status antioksidan, aktiviti enzim antioksidan, dan disfungsi endothelial pada pesakit dengan penyakit Behçet. Clin Biochem 2002; 35:217–24.

10. Kayatas K, Karatoprak C, Cebeci F, et al. Kehadiran paras lipid yang rendah pada pesakit dengan penyakit Behcet sebagai pelindung terhadap aterosklerosis. Eur Rev Med Pharmacol Sci 2013;17:2330–4.

11. Buldanlioglu S, Turkmen S, Ayabakan HB, et al. Nitrik oksida, peroksidasi lipid, dan sistem pertahanan antioksidan pada pesakit dengan penyakit Behçet yang aktif atau tidak aktif. Br J Dermatol 2005;153:526–30.

12. Cho SB, Zheng Z, Ahn KJ, et al. Kereaktifan IgA serum terhadap GroEL Streptococcus sanguinis dan ribonukleoprotein nuklear heterogen manusia A2/B1 pada pesakit dengan penyakit Behçet. Br J Dermatol 2013;168:977–83.

13. Zheng Z, Sohn S, Ahn KJ, et al. Kereaktifan serum terhadap virus herpes simplex jenis 1 UL48 protein dalam pesakit penyakit Behçet dan model tikus seperti penyakit Behçet. Acta Derm Venereol 2015;95:952–8.

14. Lule S, Colpak AI, Balci-Peynircioglu B, et al. Serum penyakit Behçet adalah imunoreaktif kepada medium neurofilamen yang berkongsi epitop biasa kepada HSP bakteria-65, pencetus yang diduga. J Autoimun 2017;84: 87–96.

15. Tong B, Liu X, Xiao J, et al. Imunopatogenesis penyakit Behcet. Immunol Depan 2019;10:665.

16. Greco A, De Virgilio A, Ralli M, et al. Penyakit Behçet: pandangan baharu tentang patofisiologi, ciri klinikal dan pilihan rawatan. Autoimun Rev 2018;17:567–75.

17. Marta M, Santos E, Coutinho E, et al. Peranan jangkitan dalam penyakit Behçet dan sindrom neuro-Behçet. Autoimun Rev 2015;14: 609–15.

18. Hatemi G, Bahar H, Uysal S, et al. Lesi kulit pustular dalam sindrom Behcet tidak steril. Ann Rheum Dis 2004;63:1450–2.

19. Galeone M, Colucci R, D'Erme AM, et al. Potensi etiologi berjangkit penyakit Behçet. Patolog Res Int 2012;2012:595380.

20. Karaca M, Hatemi G, Sut N, et al. Gugusan lesi papulopustular/artritis sindrom Behçet juga berkumpul dalam keluarga. Rheumatologi (Oxford) 2012;51:1053–60.

21. Tascilar K, Melikoglu M, Ugurlu S, et al. Penglibatan vaskular dalam sindrom Behçet: analisis retrospektif persatuan dan perjalanan masa. Rheumatologi (Oxford) 2014;53:2018–22.

22. Zou J, Luo JF, Shen Y, et al. Analisis kelompok fenotip pesakit dengan sindrom Behçet: kajian kohort besar dari pusat rujukan di China. Arthritis Res Ther 2021;23:45.

23. Soejima Y, Kirino Y, Takeno M, et al. Perubahan dalam perkadaran kluster klinikal menyumbang kepada evolusi fenotip penyakit Behçet di Jepun. Arthritis Res Ther 2021;23:49.

24. Leiba M, Seligsohn U, Sidi Y, et al. Faktor trombofilik bukanlah penyebab utama trombosis dalam penyakit Behçet. Ann Rheum Dis 2004;63:1445–9.

25. Becatti M, Emmi G, Silvestri E, et al. Pengaktifan neutrofil menggalakkan pengoksidaan fibrinogen dan pembentukan trombus dalam penyakit Behçet. Edaran 2016;133:302–11.

26. Zheng W, Wu X, Goudarzi M, et al. Perubahan metabolik yang dikaitkan dengan penyakit Behçet. Arthritis Res Ther 2018;20:214.

27. Xu J, Su G, Huang X, et al. Analisis metabolik humor akueus mengenal pasti asid amino yang menyimpang dan metabolisme asid lemak dalam penyakit VogtKoyanagi-Harada dan Behcet. Immunol Depan 2021;12: 587393.

28. Bakir-Gungor B, Remmers EF, Meguro A, et al. Pengenalpastian kemungkinan laluan patogenik dalam penyakit Behçet menggunakan data kajian persatuan seluruh genom daripada dua populasi berbeza. Eur J Hum Genet 2015;23:678–87.

29. Tong D, Lönnblom E, Yau AC, et al. Epitope kongsi kolagen jenis XI dan jenis II diiktiraf oleh antibodi patogen pada tikus dan manusia dengan arthritis. Immunol Depan 2018;9:451.

30. Durlik-Popinska K, _ Zarnowiec P, Lechowicz Ł, et al. Antibodi yang diasingkan daripada pesakit arthritis rheumatoid terhadap lipopolysaccharide Proteus mirabilis O3 (S1959) yang mengandungi lisin boleh bertindak balas dengan kolagen jenis I. Int J Mol Sci 2020;21:9635.

31. Jung JH, Han KD, Lee YB et al. Penyakit Behçet dikaitkan dengan pelbagai sklerosis dan arthritis rheumatoid: kajian berasaskan populasi Korea. Dermatologi 2021:1–6.

32. Düzgün N, Ates¸ A, Aydintug OT, et al. Ciri-ciri penglibatan vaskular dalam penyakit Behçet. Scand J Rheumatol 2006;35:65–8.

33. Tascilar K, Melikoglu M, Ugurlu S, et al. Penglibatan vaskular dalam sindrom Behçet: analisis retrospektif persatuan dan perjalanan masa. Rheumatologi (Oxford) 2014;53:2018–22.

34. Le Joncour A, Martos R, Loyau S, et al. Peranan kritikal perangkap ekstraselular neutrofil (NETs) pada pesakit dengan penyakit Behcet. Ann Rheum Dis 2019;78:1274–82.

35. Al-Basheer M, Hadadin F. Jenis pembentukan aneurisme penyakit vaskular-Behcet. Jantung Paru Circ 2007;16:407–9.

36. Chambers JC, Haskard DO, Kooner JS. Fungsi endothelial vaskular dan mekanisme tekanan oksidatif pada pesakit dengan sindrom Behçet. J Am Coll Cardiol 2001;37:517–20.

37. Demirtürk OS, Tünel HS, Alemdaroglu U. Manifestasi vaskular penyakit Behçet. Dalam: Gonul M, Kartal S, editor. Penyakit Behcet. London: IntechOpen; 2017.

38. Aksu K, Donmez A, Keser G. Trombosis yang disebabkan oleh keradangan: mekanisme, persatuan penyakit dan pengurusan. Curr Pharm Des 2012;18:1478–93.

39. Choi-Miura NH, Tobe T, Sumiya J, et al. Pemurnian dan pencirian protein pengikat hyaluronan baru (PHBP) daripada plasma manusia: ia mempunyai tiga EGF, kringle, dan domain protease serine, serupa dengan pengaktif faktor pertumbuhan hepatosit. J Biochem 1996;119: 1157–65.

40. Kanse SM, Parahuleva M, Muhl L, et al. Faktor VII-mengaktifkan protease (FSAP): fungsi vaskular dan peranan dalam aterosklerosis. Thromb Haemost 2008;99:286–9.

41. Byskov K, Boettger T, Ruehle PF, et al. Faktor VII mengaktifkan protease (FSAP) mengawal ekspresi gen keradangan dalam otot licin vaskular dan sel endothelial. Aterosklerosis 2017;265: 133–9.

42. Parahuleva MS, Mej R, Hölschermann H, et al. Peraturan fungsi monosit/makrofaj oleh faktor VII mengaktifkan protease (FSAP). Aterosklerosis 2013;230:365–72.

43. Kannemeier C, Al-Fakhri N, Preissner KT et al. Protease pengaktifan Faktor VII (FSAP) menghalang percambahan sel pengantara faktor pertumbuhan dan penghijrahan sel otot licin vaskular. FASEB J 2004;18: 728–30.

44. Mambetsariev N, Mirzapoiazova T, Mambetsariev B, et al. Protein pengikat asid hyaluronik 2 ialah pengawal selia baru integriti vaskular. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2010;30:483–90.

45. Midwood KS, Hussenet T, Langlois B, et al. Kemajuan dalam biologi tenascin-C. Cell Mol Life Sci 2011;68:3175–99.

46. ​​Gao W, Li J, Ni H, et al. Tenascin C: biomarker yang berpotensi untuk meramalkan keterukan aterosklerosis koronari. J Atheroscler Thromb 2019;26:31–8.

47. Sanchez-Navarro A, Gonzalez-Soria I, Caldiño-Bohn R, et al. Pandangan integratif serpin dalam kesihatan dan penyakit: sumbangan SerpinA3. Am J Physiol Cell Physiol 2021;320:C106–18.

48. Sorokin V, Woo CC. Peranan Serpina3 dalam biologi vaskular. Int J Cardiol 2020;304:154–5.

49. Qian LL, Ji JJ, Guo JQ, et al. Peranan pelindung serpina3c sebagai perencat thrombin novel terhadap aterosklerosis pada tikus. Clin Sci (Lond) 2021;135:447–63.

50. Fallacara A, Baldini E, Manfredini S, et al. Asid hyaluronik pada alaf ketiga. Polimer (Basel) 2018;10.