Perfusi Buah Pinggang Normotermik Ex-vivo Berpanjangan: Kesan Komposisi Perfus
Feb 26, 2022
Abstrak
Perfusi mesin normotermik (NMP) pendermabuah pinggang memberi peluang untuk pemeliharaan graf yang lebih baik dan penilaian organ ex-vivo pra-pemindahan objektif. Pada masa ini, banyak penyelesaian perfusi wujud untuk NMP buah pinggang. Kajian ini bertujuan untuk menilai empat penyelesaian perfusi yang berbeza secara bersebelahan dan menentukan pengaruh komposisi perfusate yang berbeza pada diukur.buah pinggangparameter perfusi. babibuah pinggangdan darah diperoleh dari rumah penyembelihan.buah pinggangmenjalani NMP pada 37˚C selama 7 jam, dengan 4 penyelesaian perfusi berbeza (n=5 setiap kumpulan). Kumpulan 1 terdiri daripada sel darah merah (RBC) dan larutan perfusi berdasarkan Williams' Medium E. Kumpulan 2 terdiri daripada RBC, albumin dan komposisi elektrolit yang seimbang. Kumpulan 3 mengandungi RBC dan medium berdasarkan penyelesaian NMP klinikal British. Kumpulan 4 mengandungi RBC dan medium yang digunakan dalam 24-ujian perfusi jam. Corak aliran NMP untuk penyelesaian 1 dan 2 adalah serupa, penyelesaian 3 dan 4 menunjukkan kadar aliran yang lebih rendah tetapi lebih stabil. Bahan reaktif asid Thiobarbituric adalah lebih tinggi secara ketara dalam larutan 1 dan 4 berbanding kumpulan lain. Tahap penanda kecederaan N-acetyl- -D glucosaminidase adalah jauh lebih rendah dalam larutan 2 berbanding dengan larutan 3 dan 4. Kajian ini menggambarkan bahawa komposisi minyak wangi semasa NMP memberi impak yang ketara kepada parameter perfusi dan kecederaan yang diukur dan dengan itu mempengaruhi tafsiran penanda daya maju yang berpotensi. Penyelidikan lanjut diperlukan untuk menyiasat pengaruh individu komponen perfusi utama untuk menentukan keadaan paling optimum semasa NMP dan akhirnya membangunkan kriteria penilaian organ sejagat.
Kata kunci:fungsi buah pinggang; buah pinggang; kecederaan buah pinggang; buah pinggang meresap; tiub buah pinggang
CISTANCHE AKAN MEMPERBAIKI FUNGSI BUAH PINGGANG/BUAH PINGGANG
pengenalan
Di seluruh dunia, penderma standardbuah pinggangkaedah pemeliharaan ialah simpanan sejuk statik (SCS). Walau bagaimanapun, di Belanda perfusi mesin hipotermia (HMP) digunakan secara klinikal untuk memelihara semua penderma yang meninggal dunia.buah pinggang.HMP menunjukkan penurunan dalam fungsi cantuman tertunda dan 1- dan 3-tahun yang lebih baikbuah pinggangsurvival rasuah berbanding dengan pemeliharaan SCS [1,2]. Untuk meminimumkan jurang yang besar antara penawaran dan permintaan untuk pendermabuah pinggang,penderma mati yang tidak optimumbuah pinggangsemakin digunakan. Disebabkan peningkatan penggunaan penderma kualiti yang kurang optimum inibuah pinggang,adalah amat penting untuk mewujudkan strategi yang lebih dioptimumkan untuk penilaian pra-pemindahan yang mantap dan objektif serta pemeliharaan. Penggunaan perfusi mesin normotermik (NMP) untuk penderma yang meninggal dunia inibuah pinggangsemakin dipertimbangkan. Kajian pra-klinikal telah menunjukkan bahawa NMP boleh membawa kepada hasil pemindahan yang lebih baik berbanding dengan SCS sahaja [3]. Sebagai derma selepas kematian jantung dan penderma kriteria lanjutanbuah pinggangkurang bertolak ansur dengan penyimpanan hipotermik berbanding dengan organ yang diperoleh daripada prosedur penderma kriteria standard, organ penderma berkualiti marginal boleh mendapat manfaat daripada pemeliharaan NMP [4,5]. Pada masa ini, hanya satu klinikalbuah pinggangPercubaan NMP sedang dijalankan di UK, dengan tempoh perfusi pra-pemindahan yang agak singkat selama 1 jam [6]. Untuk penilaian organ dan resusitasi yang mencukupi, walau bagaimanapun, masa NMP yang lebih lama adalah perlu [7]. Kaedah ini memberi peluang untuk diagnostik organ pra-pemindahan, pemeliharaan yang lebih baik, dan campur tangan ex-vivo sebelum pemindahan untuk menambah baik selepas pemindahanfungsi buah pinggang. Pada masa kini, banyak pusat pemindahan telah mula melabur dalam strategi perfusi ex-vivo normothermic yang menjanjikan ini. Di antara pusat-pusat ini, pelbagai jenis penyelesaian perfusi NMP wujud. Keragaman besar dalam komposisi boleh menghalang matlamat utama untuk menentukan kriteria penilaian NMP yang seragam dan mantap. Heterogenitas ini sebahagiannya didorong oleh pemahaman yang terhad pada masa ini tentang formulasi tepat penyelesaian NMP. Kemungkinan besar, larutan perfusi normotermik mesti mengandungi pembawa oksigen, koloid, dan komposisi elektrolit yang seimbang [8]. Komposisi ini juga akan bergantung pada tempoh NMP, kerana tempoh perfusi yang lebih lama akan memerlukan komposisi perfusi yang dioptimumkan untuk mengekalkan persekitaran hampir fisiologi yang stabil sepanjang keseluruhan perfusi. Kajian ini menilai empat penyelesaian perfusi normotermik yang berbeza, tiga penyelesaian sedia ada yang biasa digunakan yang tiada perubahan dibuat dan satu penyelesaian yang direka bentuk baru. Kami menjalankan NMP yang berpanjangan (7j) dalam seekor babibuah pinggangmodel derma. Matlamat kami adalah untuk menganalisis sejauh mana komposisi minyak wangi yang berbeza secara keseluruhan memberi kesan keseimbangan elektrolit,fungsi buah pinggang, dan penanda kecederaan yang diukur semasa NMP.
Bahan dan kaedah
Buah pinggang dan pengambilan darahbabi yang berdaya majubuah pinggangdaripada babi landrace domestik (menabur; jenis Topigs 20) dan darah diperoleh daripada rumah penyembelihan tempatan (Kroon Vlees, Groningen, Belanda). Babi dikejutkan dengan renjatan elektrik dwi-temporal dan kemudiannya dibuang mengikut prosedur rumah penyembelihan biasa. Darah autologous dikumpul dan heparin (5000 unit antarabangsa per ml (IU), LEO1 pharma, Ballerup, Denmark) ditambah untuk mengelakkan darah daripada membeku.buah pinggangtelah diambil dengan cepat selepas kematian peredaran darah babi, mengakibatkan kira-kira 20 minit iskemia hangat (WI) sebelum pemeliharaan sejuk. Selepas tempoh WI,buah pinggangtelah disiram dan disejukkan dengan 180 ml natrium klorida (NaCl) (0.9 peratus ) (Baxter BV, Utrecht, Belanda) pada suhu 4˚C, yang menandakan permulaan iskemia sejuk (CI).buah pinggangtelah dibedah bebas daripada tisu lemak berlebihan dan saluran darah terdedah. Seterusnya,buah pinggangtelah disambungkan kepada abuah pinggangPeranti HMP Pengangkutan Bantuan (Organ Assist, Groningen, Nether-lands). Mesin HMP ini dipeliharabuah pinggangdengan larutan perfusi mesin UW sejuk (0–4˚C) (larutan Belzer UW-MP, Bridge to Life Ltd, Columbia, SC) selama 2–4 jam menggunakan HMP pulsatil beroksigen pada tekanan arteri purata 25 mmHg . Darah autologous heparinised telah leukosit habis menggunakan penapis leukosit (BioR 02 ditambah BS PF, Fresenius Kabi, Zeist, Belanda), disentrifugasi dan seterusnya, plasma supernatan telah dikeluarkan.
Penyelesaian perfusiEmpat kumpulan percubaan telah ditakrifkan (n=5 setiap kumpulan), dengan penyelesaian NMP yang berbeza dalam setiap kumpulan. Sebelumbuah pinggangpengambilan semula, penyelesaian perfusi yang akan digunakan semasa eksperimen telah ditentukan. Kesemua empat penyelesaian perfusi mengandungi sel darah merah babi autologous (RBC), tetapi komposisi setiap medium NMP adalah berbeza (Jadual 1). Di makmal kami, pengalaman yang mencukupi telah diperoleh dengan perfusi babibuah pinggangdan hati tikus menggunakan Williams' Medium E (WME) (Life Technologies Ltd, Bleiswijk, Belanda) [9–11]. Minyak wangi ini tidak mengandungi vasodilator dan kami memutuskan untuk tidak membuat
perubahan kepada penyelesaian awal. Penyelesaian perfusi kumpulan 2 telah dibangunkan oleh kumpulan kami untuk mengandungi elektrolit dalam kepekatan fisiologi dan memberikan tekanan osmotik koloid fisiologi pada membran glomerular. Perfusate kumpulan 3 ialah penyelesaian British NMP yang digunakan secara klinikal tanpa koloid, yang kini digunakan dalam percubaan terkawal rawak yang membandingkan 1j NMP dengan SCS penderma yang telah meninggal dunia.buah pinggangdi United Kingdom [12]. Bagi kumpulan 4, penyelesaian ini berjaya digunakan dalam kajian autotransplantasi babi di Aarhus, Denmark [13]. Ia berdasarkan minyak wangi yang direka oleh Weissenbacher et al., yang menggabungkan manusia terbuangbuah pinggangdalam tempoh 24 jam [7]. Sebagai tambahan kepada konstituen yang disebutkan di atas, perfusate dalam kumpulan 1 ditambah dengan glukosa apabila kepekatan menurun di bawah 4 mmol/l. Air kencing yang dihasilkan adalah
setiap jam digantikan dengan WME. Dalam kumpulan 2 pam infusi picagari memasukkan jumlah nutrisi parenteral (SmofKabiven) (Fresenius Kabi Nederland BV, Zeist, Belanda) pada kadar 0.5 ml/insulin tangan (10{{1{ {12}}}}0 IU, juga Novo Nordisk A/S) pada kadar 0.005 ml/j. Selepas setiap jam, pengeluaran air kencing diedarkan semula dalam kumpulan 2 untuk mengekalkan keseimbangan elektrolit yang stabil. Dalam kumpulan ketiga, 170 ml RBC tulen dicampurkan dengan 120 ml garam, adenin, glukosa dan manitol (SAG-M), yang membawa kepada hematokrit 0.5-0.65 l/l, untuk meniru komposisi unit tipikal yang digunakan secara klinikal. RBCs (yang digunakan dalam perfusate NMP klinikal British). Semasa eksperimen ini, tiga pam infusi picagari digunakan untuk memasukkan Flolan (GlaxoSmithKline BV, Zeist, Belanda) pada kadar 5 ml/j, glukosa 5 peratus (Baxter BV, Utrecht, Belanda) pada kadar 4 ml/ h dan campuran 150 ml Synthamin-17 10 peratus (Baxter Healthcare Ltd., Norfolk, United Kingdom), 6 ml natrium bikarbonat (NaHCO 3 ) 8.4 peratus (B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Jerman) , 30 IU insulin (1000 IU, Novo Nordisk A/S, Bagsværd, Den-mark) dan Cernevit (Baxter BV, Utrecht, Belanda) pada kadar 20 ml/j, mengikut protokol kajian klinikal UK semasa. Pengeluaran air kencing diganti setiap jam oleh Ringers laktat (juga Baxter BV). Semasa NMP kumpulan keempat, pam infusi picagari yang diselitkan verapamil (2.5 mg/ml, juga Sandoz BV) dilarutkan dalam garam pada kadar 0.3 ml/j. Pengeluaran air kencing juga diedarkan semula dalam kumpulan ini selepas setiap jam untuk mengekalkan keseimbangan elektrolit yang stabil. Jumlah sampel dalam setiap kumpulan telah diperbetulkan dengan komponen yang berbeza. Jumlah dalam kumpulan 1 digantikan dengan WME, dalam kumpulan 2 dengan medium perfusi, dalam kumpulan 3 dengan Ringers laktat dan dalam kumpulan 4 dengan Sterofundin1 (juga B. Braun).
Persediaan NMPPersediaan perfusi adalah sama dengan yang diterangkan sebelum ini oleh kumpulan kami [14]. Thebuah pinggangtelah disapu dalam fesyen pulsatil asinusoid, dengan kekerapan 60 nadi seminit, set ata, tidak dikawal selia maklum balas, tekanan 110/70 mmHg dan beroksigen dengan 95 peratus oksigen/5 peratus karbon dioksida (karbogen) semasa semua eksperimen. Tahap oksigen suprafisiologi ini adalah prosedur standard dalam keempat-empat protokol sedia ada. Perfusi dikawal oleh antara muka elektronik dan perisian kawalan yang dibuat khas (Perisian LabView, National Instruments Netherlands BV, Woerden, Belanda). Rajah skematik litar perfusi normotermik ditunjukkan dalam Rajah 1.
Analisis air kencing dan perfusSetiap jam, perfusi arteri dan sampel air kencing diambil. Dalam kumpulan 2 dan 4, di mana air kencing diedarkan semula, sampel perfusate diambil sebelum peredaran semula air kencing. Sampel gas darah arteri perfusate dianalisis selepas 0, 240 dan 420 minit NMP. Parameter perfusi didokumenkan setiap setengah jam. Kepekatan laktat dehidrogenase (LDH) dan aspartat aminotransferase (ASAT), natrium, kalium, glukosa dan kreatinin diukur dengan ujian klinikal standard dalam perfusate. Pembersihan kreatinin, perkumuhan pecahan kreatinin setiap 100g (kreatinin FE/100g), dan perkumuhan natrium pecahan (FENa plus) dikira untuk menentukanfungsi buah pinggang. Persamaan boleh didapati di Lampiran S1. Kedua-dua N-acetyl- -D glucosaminidase (NAG) (juga Sigma-Aldrich), sebagai penandabuah pinggangdisfungsi/kecederaan tiub, dan bahan reaktif asid thiobarbituric (TBARS) (Lipid Peroxidation–malondialdehyde (MDA)) Kit Ujian, Sigma-Aldrich BV, Zwijndrecht, Belanda), untuk mengukur tekanan oksidatif, diukur dalam perfusate.
HistologiBiopsi aneedle bahagian ataskorteks buah pinggangtelah diambil sebelum permulaan NMP. Pada akhir setiap eksperimen, sampel tisu pembedahan dari korteks atas telah dikumpulkan. Biopsi ini adalah
Analisis statistikAnalisis data dilakukan menggunakan GraphPad Prism Versi 8.3.1 (perisian GraphPad Inc., La Jolla, CA, USA). Untuk semua pembolehubah yang diukur secara longitudinal berterusan, seperti ASAT dan LDH, kawasan di bawah lengkung (AUC) telah dikira. ANOVA sehala dengan pelbagai perbandingan digunakan untuk membandingkan nilai AUC antara kumpulan jika data diedarkan secara normal (ujian Shapiro Wilk) dan mempunyai kehomogenan varians (diuji melalui ujian Bartlett). Jika data gagal andaian ini, ujian Kruskal-Wallis dengan ujian perbandingan berbilang Dunn telah digunakan. Nilai p dua belah 0.05 atau kurang dianggap menunjukkan kepentingan statistik.
Keputusan
Parameter perfusiDalam Jadual 2, data (min, minimum dan maksimum) mengenai iskemia panas dan sejuk, tempoh HMP dan berat sebelum permulaan dan selepas NMP serta berat delta (perbezaan berat pada t=420 berbanding t {{2 }}) dibentangkan. Berat Delta adalah lebih tinggi dengan ketara dalam kumpulan 1 berbanding dengan kumpulan 2 (p=0.041). Tiada perbezaan ketara lain antara nilai semua kumpulan eksperimen. Semasa NMPbuah pinggangaliran arteri meningkat semasa 60 minit pertama reperfusi dalam kumpulan 1 dan 2. Selepas 60 minit kadar aliran biasanya mula menurun. Perfusi dalam kumpulan 3 dan 4 bermula dengan nilai aliran yang lebih rendah tetapi menunjukkan aliran yang lebih malar sepanjang NMP. Nilai akhir selepas 7 jam NMP adalah kira-kira 75 ml/min/100g dalam semua kumpulan (Rajah 2).
Analisis air kencing dan perfusData individu mengenai parameter fungsi dan kecederaan sepanjang perfusi boleh didapati dalam Jadual 3.Fungsi buah pinggang.Kumpulan 3 menunjukkan tahap pengeluaran air kencing tertinggi (Rajah 3). Diuresis kumulatif dalam kumpulan 3 adalah lebih tinggi secara ketara berbanding dengan kumpulan 1 (p=0.003), kumpulan 2 (p < 0.001)="" dan="" kumpulan="" 4="" (p="0.008).">buah pinggangdalam kumpulan 2 tidak menghasilkan air kencing pada t=180 dan t=300, membawa kepada tahap purata pengeluaran air kencing terkumpul yang lebih rendah pada t=360 dan t=420. Tahap natrium dan kalium berbeza dengan ketara antara kumpulan (Rajah 4). Tahap pada t=0 menunjukkan nilai permulaan awal pada perfusi. Terutama kumpulan 3 menunjukkan prestasi yang tinggi
Semasa perfusi, pH dalam kumpulan 3 menurun tanpa penstabilan manakala kumpulan lain mencapai tahap yang lebih seimbang kira-kira 7.4 selepas 7 jam NMP (Rajah 5). Pelepasan kreatinin adalah rendah dalam semua kumpulan (Rajah 6A dan 6B). Namun begitu, ia adalah jauh lebih tinggi daripada kumpulan 3 berbanding kumpulan 2 (p=0.039). Perkumuhan pecahan kreatinin setiap 100g (Rajah 6C dan 6D) adalah lebih tinggi dengan ketara dalam kumpulan 3 berbanding kumpulan 1 (p=0.026), kumpulan 2 (p=0.017), dan kumpulan 4 ( p=0.045). FENa plus adalah tinggi dalam semua kumpulan, menunjukkan bahawa fungsi tiub terjejas teruk (Rajah 6E dan 6F) dalam kerosakan iskemik inibuah pinggang. FENa tambah dalam kumpulan 3 adalah jauh lebih tinggi berbanding kumpulan 2 (p=0.037) dan kumpulan 4 (p=0.019). Semua kumpulan lain tidak berbeza dengan ketara.Kecederaan buah pinggang.Tahap ASAT semasa NMP telah dianalisis (Rajah 7A dan 7B) sebagai penanda untuk kecederaan sel am. Purata AUC ditentukan untuk setiap kumpulan. Tahap dalam kumpulan 4 adalah jauh lebih tinggi berbanding kumpulan 1 (p=0.022) dan kumpulan 2 (p=0.011). Tahap LDH juga diukur dalam perfusate sebagai penanda kecederaan umum (Rajah 7C dan 7D). AUC dikira yang menunjukkan tahap LDH paling rendah dalam kumpulan 1 dan 2. Kumpulan 2 adalah jauh lebih rendah berbanding kumpulan 4 (p=0.020). Kumpulan 1 menunjukkan tahap yang jauh lebih rendah berbanding kumpulan 4 (p=0.022). Tahap NAG adalah jauh lebih tinggi dalam kumpulan 3 berbanding dengan kumpulan 1 (p=0.043) dan kumpulan 2 (p=0.006) (Rajah 8A dan 8B). TBARS, kepekatan malondialdehid (MDA), diukur dalam keempat-empat kumpulan sebagai penanda untuk peroksidasi lipid (Rajah 8C dan 8D). Tahap MDA adalah jauh lebih tinggi dalam kumpulan 1 jika dibandingkan dengan kumpulan 2 (p=0.003) dan kumpulan 3 (p < 0.001).="" kumpulan="" 2="" menunjukkan="" tahap="" mda="" yang="" jauh="" lebih="" rendah="" berbanding="" kumpulan="" 4="" (p="0.006)." kumpulan="" 3="" menunjukkan="" tahap="" yang="" jauh="" lebih="" rendah="" berbanding="" kumpulan="" 4=""><>
Histologi
Plot titik dalam Rajah 9 menunjukkanbuah pinggangkerosakan tubular/ATN, dilatasi tiub dan skor dilatasi glomerular sebelum permulaan NMP (t {{0}}) dan selepas 7 jam NMP (t=420). Nilai awal nekrosis histologi dan dilatasi tiub adalah setanding antara kumpulan, dengan hanya perbezaan kecil dalam skor titik akhir. Dilatasi glomerular pada t=420 adalah jauh lebih rendah dalam kumpulan 2 berbanding dengan 3 kumpulan lain. Angka histologi bagi setiap kumpulan boleh didapati dalam induksi lipatan S1 Rajah Bax dan Bcl-2, masing-masing penunjuk untuk ekspresi gen pro dan anti-apoptosis, kedua-duanya menunjukkan perubahan dalam tahap NMP titik akhir berbanding tahap pada t=0 (Rajah 10). Ekspresi gen Delta Bax (perbezaan antara t=0 dan t=420) dikira dalam semua kumpulan dan jauh lebih tinggi dalam kumpulan 1 berbanding kumpulan 2 (p=0.046), kumpulan 3 (p < 0.001)="" dan="" kumpulan="" 4="" (p="0.003)." ungkapan="" bcl-2="" menurun="" dalam="" semua="" kumpulan="" selepas="" 7="" jam="" perfusi="" tanpa="" perbezaan="" ketara="" antara="">
Perbincangan
Minat umum dalambuah pinggangteknik perfusi mesin ex-vivo normothermic semakin meningkat, tetapi bukti klinikal kekal terhad dengan hanya satu percubaan NMP klinikal yang berterusan. Kajian pra-klinikal yang meluas telah dijalankan untuk menyiasat potensi NMP. Sebilangan besar yang berbezabuah pinggangperfus normothermic wujud di kalangan kumpulan penyelidikan yang berbeza. Walau bagaimanapun, persoalan sejauh mana kesan komposisi minyak wangifungsi buah pinggangdan bagaimana ia mempengaruhi tafsiran penanda daya maju berpotensi kekal. Oleh itu, kajian ini menilai pengaruh empat penyelesaian perfusi ex-vivo normotermik berbeza secara bersebelahan padafungsi buah pinggangdankecederaan buah pinggangsemasa NMP berpanjangan menggunakan babibuah pinggangderma selepas model kematian peredaran darah.
menilai terpencilfungsi buah pinggangsebelum pemindahan. Hosgood dan rakan sekerja memberikan bukti klinikal pertama tentang kemungkinan penilaian daya maju pra-pemindahan semasabuah pinggangNMP. Penyelesaian perfusi mereka kini paling banyak digunakan semasa NMP dan pada mulanya dibangunkan untuk menilaifungsi buah pinggangsebelum pemindahan dalam tempoh masa 1-2 jam [16].buah pinggangyang diserap dengan larutan ini biasanya menunjukkan pengeluaran air kencing yang tinggi [17]. Sesungguhnya, pengeluaran air kencing yang paling tinggi diperhatikan dalam kumpulan 3, yang berdasarkan perfusi UK klinikal ini, yang membawa kepada perkumuhan air kencing yang lebih lengkap daripada jumlah beredar minyak wangi dalam kumpulan ini selama 7 jam NMP. Kehilangan berterusan isipadu cecair perfusi yang beredar perlu dikompensasikan dengan penambahan sekejap-sekejap isipadu laktat Ringer yang serupa, mengikut protokol klinikal untuk penyelesaian perfusi ini. Dalam kajian kami, ini mengakibatkan perubahan besar pada komposisi elektrolit dan pH, kerana air kencing tidak diedarkan semula. Pengeluaran air kencing yang tinggi ini kemungkinan besar boleh dikaitkan dengan ketiadaan koloid dalam hanya larutan perfusi ini. Ketiga-tiga larutan perfusi kumpulan lain mengandungi sejumlah besar albumin. Dalam ruang intravaskular, albumin adalah komponen utama yang mengekalkan tekanan osmotik koloid normal [18]. Keseimbangan antara tekanan hidrostatik dan tekanan osmotik koloid menghasilkan kadar ultrafiltrasi fisiologi ke atas membran glomerular [19]. Kaths et al. menunjukkan bahawa pengeluaran air kencing semasa NMP tidak berkorelasi dengan fungsi selepas pemindahan. Mereka membuat hipotesis bahawa pengeluaran air kencing sebahagian besarnya dipengaruhi oleh komposisi perfusate, khususnya tekanan onkotik dan osmolariti, yang selaras dengan keputusan kami [20].
CISTANCHE AKAN MEMPERBAIKI KEGAGALAN BUAH PINGGANG/BUAH PINGGANG
Organ yang bertanggungjawab utama untuk pengawalan elektrolit ialahbuah pinggangtetapi terdapat bukti bahawabuah pinggangitu sendiri juga mendapat manfaat daripada keseimbangan dalam elektrolit. Telah ditetapkan bahawa ketidakseimbangan dalam kalium dan khususnya hipokalemia, boleh membawa kepada pelbagai perubahan dalamfungsi buah pinggangtermasuk pengangkutan tiub terjejas, keupayaan menumpukan air kencing terjejas, penyerapan semula natrium yang diubah, dan asidosis intraselular [21-23]. Untuk mengambil kira kehilangan air kencing yang tidak dapat dielakkan bagi elektrolit perfusi penting, Weissenbacher et al. mencadangkan penggunaan peredaran semula air kencing semasa NMP. Mereka menunjukkan bahawa ia memudahkan penyelenggaraan jumlah perfusate dan homeostasis yang betul pada manusia yang dibuangbuah pinggang, walaupun selepas 24 jam NMP [7]. Kepekatan albumin yang diukur dalam perfusate menurun dari semasa ke semasa semasa perfusi. Penurunan ini berkemungkinan besar disebabkan oleh pematuhan albumin pada tiub litar perfusi plastik dan hanya sejumlah kecil yang boleh dikaitkan dengan kehilangan dalam air kencing yang dihasilkan, yang juga diperhatikan dalam kajian NMP yang lain [24]. Kehilangan albumin dalam kencing ini boleh dijelaskan oleh kerosakan akibat iskemia hangat pada sel endothelial dengan gangguan diafragma penapis yang mengakibatkan proteinuria, yang selaras dengan tahap albuminuria kami yang diperhatikan semasa NMP [25].
Kami tidak dapat menjelaskan sepenuhnya mekanisme perbezaan antara kumpulan yang kami perhatikanbuah pinggangpenambahan berat badan semasa NMP. Pemeriksaan histologi tidak menentukan kemungkinan kawasan pembentukan edema. Penyiasatan lanjut diperlukan untuk menjelaskan mekanisme pertambahan berat badan yang berpotensi berbilang faktor berkaitan dengan penyelesaian perfusi yang digunakan. Pelbagai parameter perfusi diukur, di manabuah pinggangaliran menunjukkan perbezaan yang paling ketara.buah pinggangaliran dalam kumpulan 3 dan 4 mengekalkan tahap paling stabil sepanjang 7-tempoh NMP jam. Penyelesaian dalam kumpulan ini telah ditambah dengan vasodilator manakala penyelesaian dalam dua kumpulan pertama tidak. Vasodilator endogen menggalakkan kelonggaran otot licin vaskular dan dengan itu mengawal aliran darah serantau [26]. Oleh kerana kumpulan 1 dan 2 tidak ditambah dengan vasodilator, kekejangan vasokular boleh mengakibatkan penguranganbuah pinggangaliran arteri. Selain itu, terdapat bukti bahawa aliran medula dan kortikal boleh dikawal secara individu [27,28]. Data awal yang tidak diterbitkan daripada kumpulan kami, berdasarkan pengukuran aliran MRI (ASL) berfungsi yang tepat dan kuantitatif semasa NMP sangat menyokong mekanisme ini. Dalam eksperimen tersebut,buah pinggangaliran semasa jam pertama NMP adalah terutamanya medullar, yang beralih kepada aliran kortikal selepas lebih daripada satu jam perfusi. Pengagihan semula aliran serantau ini mungkin menjelaskan puncak yang dilihat dalam perfusi kumpulan 1 dan 2, mungkin disebabkan oleh shunting medula pada jam pertama. Penambahan vasodilator pada permulaan NMP boleh meningkatkan mikroperfusi yang kebanyakannya kortikal serta-merta pada permulaan NMP, menghasilkan aliran yang lebih stabil seperti yang diperhatikan dalam kumpulan 3 dan 4. Oleh itu, jika corak aliran yang stabil dan kemungkinan lebih fisiologi kebanyakannya kortikal perfusi dikehendaki semasa NMP, mungkin dinasihatkan untuk menambah vasodilator pada larutan perfusi. Sebagai alternatif, pembasuhan RBC berulang sebelum perfusi boleh berkuranganbuah pinggangvasoconstriction dengan mengurangkan aktiviti vasoconstrictive RBCs [29].
Fungsi buah pinggangsemasa NMP telah terjejas dengan ketara dalam semua babibuah pinggang, mungkin disebabkan oleh kerosakan iskemia panas awal dan kekurangan mekanisme pengawalseliaan humoral fisiologi, seperti yang didorong oleh hormon anti-diuretik dan aldosteron. Pelepasan kreatinin adalah rendah dan nilai FENa plus yang tinggi diperhatikan dalam semua kumpulan. Peningkatan mendadak dalam FENa plus selepas 3 jam NMP dalam kumpulan 2 mungkin disebabkan oleh ketiadaan pengeluaran air kencing dalam beberapabuah pinggangpada t=240 dan t=300, manakala pada akhir perfusibuah pinggangmula mengeluarkan air kencing semula. Nilai tinggi FENa plus adalah mungkin hasil daripada nekrosis tiub seperti yang juga telah dilaporkan dalam kajian terdahulu [30,31]. Di samping itu, pelepasan kreatinin in-vivo dan paras FENa tambah banyak dipengaruhi oleh peraturan humoral. Sebagai peraturan humoral
kekurangan semasa eksperimen NMP, pelepasan kreatinin fisiologi dan tahap tambah FENa tidak dijangka dalam persediaan NMP kami.
Untuk mengukur kecederaan kepadabuah pinggangsel, tahap ASAT dan LDH diukur. Tahap tertinggi diperhatikan dalam kumpulan 3 dan 4, menunjukkan bahawa kebanyakan kecederaan berlaku dalam kedua-dua kumpulan ini. Kaths et al. menunjukkan bahawa peningkatan tahap ASAT semasa NMP berkorelasi dengan pasca pemindahanfungsi buah pinggangdan oleh itu ASAT mungkin merupakan biomarker penilaian daya maju organ yang penting [20]. Pengaruh komposisi minyak wangi yang berbeza pada tahap ASAT yang diukur menekankan kepentingan untuk menyelaraskan protokol NMP di kalangan pusat pemindahan, untuk membolehkan tafsiran konsisten data NMP pada asas global. Tahap NAG, penanda untuk integriti tiub yang diubah dan kerosakan tiub [32,33], adalah tertinggi dalam kumpulan 3 menunjukkan bahawa kebanyakan kecederaan tiub berlaku dalam kumpulan ini. Tahap TBARS diukur untuk mengukur tekanan oksidatif semasa perfusi. Tahap tertinggi diperhatikan dalam kumpulan 1 dan 4, menunjukkan bahawabuah pinggangdalam kumpulan ini mengalami tekanan oksidatif tertinggi, yang boleh mengakibatkan fungsi selular terjejas [34]. Peralihan nisbah Bax/Bcl-2 selepas 7 jam NMP berbanding biopsi sebelum NMP mungkin adalah hasil daripada tempoh iskemia panas awal, dan bukannya kesan yang berpotensi merosakkan yang berlaku semasa NMP. Kecederaan iskemia berikutan reperfusi akibatnya mendorong litar apoptosis pengawalseliaan, yang memainkan peranan penting dalam proses pembaikan tubul proksimal yang rosak [35]. Walaupun banyak penanda kecederaan normotermik telah dicadangkan, sehingga kini tiada satu pun yang disahkan dalam percubaan klinikal yang berkuasa. Kajian mengaitkan pelbagai penanda kecederaan yang menjanjikan yang diukur semasa NMP dengan pasca pemindahanfungsi buah pinggangdiperlukan untuk menjelaskan biomarker berpotensi yang harus dimasukkan dalam kriteria penilaian daya maju ex-vivo normothermic.
CISTANCHE AKAN MEMPERBAIKI JANGKITAN BUAH PINGGANG/BUAH PINGGANG
Persediaan NMP kami telah digunakan bersama dengan model babi DCDbuah pinggangderma di rumah sembelih manabuah pinggangtelah digunakan. Batasan kajian ini ialah prosedur rumah penyembelihan adalah berdasarkan exsanguination diikuti dengan hentian jantung, yang menjadikannya berbeza sedikit daripada model DCD sebenar di mana penahanan peredaran darah terhasil daripada iskemia jantung dan/atau kegagalan. Walau bagaimanapun, kami memerhatikannyabuah pinggangdalam kajian kami menunjukkan kecederaan iskemia yang serupa dengan yang berlaku selepas DCD [36,37]. Oleh itu, kami merasakan bahawa model DCD pusat penyembelihan sekarang akan membantu mengurangkan penggunaan haiwan makmal sambil mengekalkan kebolehpercayaan dan kebolehulangan yang penting. Walaupun kumpulan eksperimen kami agak kecil, saiz kumpulan kami adalah setanding dengan kumpulan babi lainbuah pinggangkajian perfusi mesin [17,38-40]. Parameter perfusi NMP yang kami rekodkan dalam kumpulan 3, yang berdasarkan penyelesaian perfusi klinikal British yang digunakan oleh Hosgood et al., tidak dapat dibandingkan sepenuhnya dengan keputusan yang dilaporkan sebelum ini oleh kumpulan Leicester/Cambridge [6,12]. Dalam kajian kami,buah pinggangmenjalani tempoh NMP yang lebih lama dan telah diserap dengan tekanan arteri purata yang lebih tinggi. Lebih jauh lagi,buah pinggangdiserap oleh Hosgood et al. telah dipindahkan selepas perfusi mesin. Untuk perbandingan yang boleh dipercayai sepenuhnya antara empat penyelesaian perfusi, kajian masa depan harus merangkumi pemindahanbuah pinggangselepas NMP kerana ini akan membolehkan penilaian susulan dan fungsi sebenar dalam vivo.
Kesimpulannya, perfusi babibuah pinggangterbukti boleh dilaksanakan dengan keempat-empat penyelesaian diuji. Walau bagaimanapun, terdapat perbezaan yang ketara antara paras elektrolit,fungsi buah pinggangparameter, dan penanda kecederaan dalam empat kumpulan. Perbezaan ini, digabungkan dengan heterogeniti semasa dalam penyelesaian perfusi yang digunakan di kalangan kumpulan, menghalang perkembangan kriteria penilaian NMP yang diseragamkan. Kami merasakan bahawa dalam kedua-dua eksperimen dan klinikal NMP adalah penting untuk menetapkan dengan teliti tujuan tepat dan tempoh yang dikehendaki bagi NMP, kerana masing-masing boleh meminta pelarasan yang diperlukan dalam protokol perfusi dan perfusi. Adalah penting untuk menekankan bahawa kajian ini memfokuskan pada kesan minyak wangi sedia ada secara keseluruhan pada hasil yang diukur, dan bukannya menyiasat peranan komponen minyak wangi individu. Kajian lanjut diperlukan untuk menjelaskan pengaruh individu dan kebaikan setiap ramuan minyak wangi semasa NMP
