Kosmetik pemutihan mempunyai skala pasaran yang besar dan prospek pembangunan yang luas manakala produk pemutihan perubatan tradisional Cina sentiasa menjadi tumpuan penyelidikan. Dalam kajian ini, ekstrak aktif pemutihan Platycodon grandiflorum (PGE) telah diasingkan dan disucikan buat kali pertama, dan mekanisme aktiviti pemutihan dan komposisi kimia PGE telah dijelaskan. Sebanyak 45 komponen telah dikenal pasti melalui analisis spektrometri jisim kromatografi cecair (HPLC-MS) berprestasi tinggi, termasuk arbutin, syringin, asid klorogenik, glikosida E, platycodin D3, baicalin, platycodin D, luteolin. Kadar penghapusan PGE terhadap radikal bebas DPPH dan ABTS masing-masing adalah 98.03 peratus dan 84.30 peratus. Kadar perencatan PGE terhadap tyrosinase adalah sehingga 97.71 peratus. PGE mempunyai kesan anti-radang yang ketara pada makrofaj RAW264.7 yang dirangsang oleh lipopolysaccharide (LPS) dan mempunyai kesan perencatan yang ketara pada tyrosinase dan penjanaan melanin sel B16F10 yang dirangsang oleh a-MSH. Keputusan menunjukkan bahawa PGE mencapai kesan pemutihan sinergistik dengan menghalang pengaktifan radikal bebas oksigen pada tyrosinase, antioksidan, kesan anti-radang, aktiviti enzim, dan penjanaan melanin. Sebagai agen pemutih yang diekstrak daripada tumbuhan semula jadi, PGE mempunyai potensi yang sangat baik dalam menyelidik dan membangunkan kosmetik pemutihan tumbuhan, yang meletakkan asas untuk membangunkan dan menggunakan sumber Platycodon grandiflorum dan menyediakan asas teori untuk pembangunan kosmetik pemutihan hijau dan organik.
Menurut kajian yang berkaitan,cistancheadalah herba biasa yang dikenali sebagai "herba ajaib yang memanjangkan hayat". Komponen utamanya ialahCistanoside, yang mempunyai pelbagai kesan sepertiantioksidan, aanti-radang, dan promosi fungsi imun. Mekanisme antara cistanche danpemutihan kulitterletak pada kesan antioksidan glikosida cistanche. Melanin dalam kulit manusia dihasilkan oleh pengoksidaan tirosin yang dimangkin olehTyrosinase, dan tindak balas pengoksidaan memerlukan penyertaan oksigen, jadi radikal bebas oksigen dalam badan menjadi faktor penting yang mempengaruhi pengeluaran melanin. Cistanche mengandungi cistanoside, yang merupakan antioksidan dan boleh mengurangkan penjanaan radikal bebas dalam badan, dengan itumenghalang pengeluaran melanin.
Untuk maklumat lanjut:
david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501
1. Pengenalan
Dalam industri kecantikan global, terdapat pelbagai jenis kosmetik berfungsi pemutihan, dan bahagian pasaran dijangka terus berkembang. Untuk memenuhi permintaan yang semakin meningkat untuk agen pemutih kulit dalam formulasi kosmetik pemutihan dan mencapai kesan pemutihan kulit, industri kosmetik telah memperkenalkan beberapa bahan tambahan kimia, termasuk hidrokuinon, sistein, glutathione, vitamin A, dan glukokortikoid. Sebatian ini mempunyai kesan pemutihan yang baik; bagaimanapun, sesetengah daripada mereka mempunyai kesan sampingan toksik; contohnya, "rhododendron" menyebabkan bintik-bintik putih pada kulit pengguna,1 "Hydroquinone" mempunyai sifat sitotoksik dan mutagenik,2 "Glucocorticoid" boleh menyebabkan dermatitis yang bergantung kepada hormon.3 Pada masa ini, penambahan bahan-bahan ini (rhododendron, hydroquinone, glucocorticoid). ) kepada kosmetik tidak dibenarkan. Kesan produk bukan satu-satunya piawaian yang dipertimbangkan oleh pengguna semasa membeli kosmetik. Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, terdapat masalah keselamatan produk kosmetik yang berterusan dalam mengejar kesihatan. Penyelidik telah mendapati bahawa bahan aktif pemutihan yang diekstrak daripada herba semulajadi adalah kurang toksik dan mempunyai kesan sampingan yang jauh lebih sedikit. Peningkatan bilangan pengguna menghargai keselamatan produk. Tambahan pula, produk hijau, mesra alam dan organik telah menjadi lebih popular, seperti yang ditunjukkan oleh promosi banyak jenama jualan langsung. Oleh itu, penyelidikan dan penemuan bahan-bahan penjagaan kulit pemutihan yang selamat dan sihat telah menjadi trend dalam pembangunan moden. Mengaplikasikan ekstrak herba Cina daripada tumbuhan semula jadi sebagai bahan mentah dalam kosmetik secara beransur-ansur menjadi tumpuan penyelidikan dalam pembangunan produk pemutihan dan penjagaan kulit.4
Platycodon grandiflorum, bahan perubatan tradisional Cina, telah digunakan di China selama lebih 2000 tahun. Rekod terawal boleh dikesan kembali ke "Shennong herba klasik".5 Tindakan farmakologi tradisional Platycodon grandiose adalah untuk mengurangkan batuk dan ekspektoran. Platycodon grandiflorum mengandungi saponin, saluran, asid fenolik, sterol, dan polisakarida.6–8 Kerumitan dan kepelbagaian juzuk kimia menentukan kepelbagaian aktiviti biologi mereka.9 Penyelidikan farmakologi moden telah menunjukkan bahawa Platycodon grandiflorum mempunyai anti-radang, bakteriostatik, anti -tumor, anti-pengoksidaan, pengawalan imun, dan kesan farmakologi yang lain.10,11 Di Korea dan utara China, Platycodon grandiflorum digunakan secara meluas sebagai bahan mentah dalam makanan dan kosmetik. Kosmetik yang diperbuat daripada Platycodon grandiflorumas bahan mentah, seperti pati pemutih, susu pemutih, dan gel mandian pemutih, digemari oleh pengguna di Korea, Jepun, dan negara Asia yang lain.12 Ekstrak Platycodon grandiflorum juga disenaraikan dalam kosmetik mentah antarabangsa. katalog bahan.13 Walau bagaimanapun, bahan aktif pemutihan dan mekanisme tindakan Platycodon grandiflorum masih tidak jelas, dan beberapa kajian awal telah dijalankan ke atas aktiviti pemutihannya. Gong XJ et al. membandingkan aktiviti perencatan tyrosinase pelbagai herba Cina dan mendapati bahawa Platycodon grandiflorum mempunyai kesan perencatan yang paling kuat.14 Atas dasar ini, Xu BJ et al. menilai kesan pemutihan juzuk berkesan Platycodon grandiflorum melalui eksperimen perencatan tyrosinase dan mendapati juzuk berkesan Platycodon grandiflorum mungkin adalah jumlah kandungan saponin.15 Dalam kajian ini, untuk menjelaskan lagi bahan pemutihan aktif dan mekanisme pemutihan Platycodon grandiflorum , kami menggunakan ekstrak aktif pemutihan Platycodon grandiflorum yang diperolehi melalui kaedah pengesanan farmakodinamik sebagai objek kajian. Dengan mengkaji aktiviti dan komponen, kami menjelaskan komposisi bahan aktif pemutihan Platycodon grandiflorum dan meneroka mekanisme pemutihan bahan aktif pemutihan Platycodon grandiflorum. Kajian ini akan menyediakan asas teori untuk penggunaan Platycodon grandiflorum yang lebih baik sebagai bahan mentah untuk kosmetik pemutihan.
Kesan pemutihan kulit melibatkan pengurangan pengeluaran melanin dalam kulit. Melanin adalah pigmen utama untuk mengawal warna kulit dan rambut. Ia adalah sebatian molekul tinggi yang diedarkan secara meluas dalam haiwan dan tumbuhan. Apabila melanin berlebihan dihasilkan, melanin akan terkumpul di dalam kulit, membentuk bintik-bintik dan jeragat, yang boleh menyebabkan kanser kulit yang teruk.16 Oleh itu, untuk mengelakkan pigmentasi kulit yang berlebihan, adalah perlu untuk menghalang pengeluaran melanin. Melanosit terletak di lapisan basal epidermis dan dikawal oleh tyrosinase. Spesies oksigen reaktif mengaktifkan aktiviti tyrosinase, dan tyrosinase memangkinkan 3,4-dihydroxyphenylalanine (DOPA) untuk menghasilkan DOPA kuinon dan kemudian memangkin DOPA kuinon untuk menghasilkan melanin melalui autooksidasi dan tindak balas enzim. Oleh itu, perencatan percambahan tyrosinase dan melanosit boleh menghalang pengeluaran melanin dengan ketara.17 Selain itu, kesan antioksidan dan anti-radang yang baik boleh mengurangkan kerosakan yang disebabkan oleh pengoksidaan dan keradangan kulit, melambatkan penuaan kulit, dan mengekalkan kulit anjal dan licin dan dengan itu. memberikan kesan pemutihan sinergistik.18,19
Oleh itu, untuk mencari ekstrak aktif semulajadi daripada Platycodon grandiflorum dengan sifat pemutihan, antioksida dan anti-radang, kajian ini tertumpu terutamanya pada kesan ekstrak Platycodon grandiflorum (PGE) terhadap perencatan tyrosinase, perencatan tyrosinase intraselular, dan aktiviti perencatan sel. penjanaan melanin. Kajian ini bertujuan untuk menganalisis kesan perencatan PGE pada aktiviti tyrosinase dan penjanaan melanin dan menilai secara menyeluruh kesan pemutihan dan penjagaan kulit PGE serta kesan antioksidan dan anti-radangnya. Komposisi kimia PGE telah dikenal pasti dan dianalisis melalui kromatografi cecair berprestasi tinggi (HPLC) dan kromatografi cecair (LC)/spektrometri jisim (MS), dan bahan aktif pemutihan khusus PGE telah dijelaskan. Adalah penting untuk membangunkan produk Platycodon grandiflorum baharu dan menggalakkan pembangunan industri Platycodon grandiflorum.
2. Bahan-bahan dan cara-cara
2.1. Bahan
Asid format, metanol, 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), 2,20-casino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-asid sulfonic) (ABTS ), asetilacetone, NaOH, K2S2O8, dan reagen Ehrlich diperoleh daripada Loji Kimia Beijing. Platycodin D, arbutin, platycodin D3, glikosida E, syringin, asid klorogenik, baicalin, dan produk rujukan luteolin diperoleh daripada China Institute of Pharmaceutical Biological Products Identification. Asetonitril dan metanol tulen secara kromatografi diperoleh daripada JT Baker Co., Amerika Syarikat. Tyrosinase, L-tyrosine, sodium hyaluronate, dan hyaluronate diperoleh daripada Beijing Solebo Technology Co., Ltd. Sel 264.7 dan sel B16F10 asal telah dibeli dari Pusat Sumber Sel Institut Sains Biologi Shanghai, China, dan disimpan di dalam makmal sebuah kolej perubatan yang bergabung dengan Universiti Perubatan Cina Changchun. Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM), serum lembu janin, dan antibiotik (penisilin dan streptomycin) diperoleh daripada Gibco USA. Triton X-100, a-MSH, kit ELISA (NO, IL-6, TNF-a) dan kit pengiraan sel-8 (CCK-8) diperoleh daripada Changchun Baijin Biotechnology Co., Ltd. Air tulen diperoleh daripada Wahaha Food Co. Ltd.
2.2. Penyediaan ekstrak aktif pemutihan Platycodon grandiflorum
Platycodon grandiflorum dibekalkan oleh Hebei Renxin Pharmaceutical Co. Ltd. Platycodon grandiflorum dihancurkan menjadi serbuk, dipanaskan dan digunakan semula dengan larutan etanol 95 peratus tiga kali, 1 jam untuk setiap kali. Kemudian, produk itu ditapis, dan turasan diperoleh semula dan digabungkan dengan turasan yang diperoleh daripada tiga pengekstrakan. Turasan telah dikeringkan dan dicampur dengan air suling untuk resolusi, dan n-butanol (isipadu 1: 1) tepu dengan air diekstrak lima kali. Lapisan n-butanol telah digabungkan, larutan n-butanol telah dikeluarkan, dan PGE diperolehi. Kadar pengekstrakan PGE daripada Platycodon grandiflorum ialah 8.9 peratus .
2.3. Kultur sel
Sel melanoma tikus B16F10 dan sel RAW264.7 telah dikultur dalam DMEM ditambah dengan 10 peratus serum lembu janin, 100 U mL-1 penisilin, dan 100 g mL-1 streptomycin dalam udara lembap sebanyak 5 peratus CO2 pada 37 darjah C. Apabila sel telah ditanam kepada keadaan gabungan, mereka dicerna oleh trypsin dan sel-sel itu diluluskan setiap dua hari. Semua eksperimen dilakukan tiga kali dan diulang tiga kali untuk memastikan kebolehulangan.
2.4. Ujian daya maju sel
Untuk menilai keselamatan PGE, kesan PGE pada sel B16F10 dan RAW264.7 ditentukan melalui kaedah CCK-8 mengikut arahan pengilang.20 Pertama, sel B16F10 dan sel RAW264.7 telah dikultur dalam {{ 10}}plat telaga pada kepekatan 5 × 103 sel setiap telaga dan 1 × 10⒋ sel setiap telaga selama 24 jam dan kemudian dirawat dengan PGE atau DMEM pada kepekatan berbeza selama 72 jam. Selepas rawatan, 10 mL CCK{18}} reagen telah ditambahkan pada setiap telaga dan sel itu dikultur lagi selama 2 jam. Penyerapan pada 450 nm diukur menggunakan pembaca plat mikro.
2.5. Aktiviti antioksidan
Aktiviti antioksidan PGE ditentukan melalui ujian penghapusan radikal bebas DPPH dan ABTS, dan asid askorbik digunakan sebagai kawalan positif.21,22 Keputusan dinyatakan sebagai peratusan kadar perencatan.
Tambahan pula, larutan PGE, asid askorbik dan platikodin D dengan kepekatan yang berbeza ({{0}}.2, 0.4, 0.6, 0.8 , 1.0, dan 1.2 mg mL―1) telah ditambahkan pada tabung uji tersumbat. Kemudian, 2 mL larutan DPPH dimasukkan ke dalam setiap tabung uji; tiub telah dipusingkan, campuran dicampur dan dibenarkan bertindak balas dalam ruang gelap selama 30 min, dan penyerapan A1 pada 520 nm ditentukan. Kemudian, 2 mL metanol digunakan sebagai kumpulan kawalan dan bukannya larutan DPPH untuk menentukan nilai penyerapan A2. Nilai penyerapan A0 ditentukan dengan menggantikan larutan sampel dengan 2 mL metanol sebagai kumpulan kawalan kosong. Laraskan nilai penyerapan kepada 0 dengan metanol. Kadar penghapusan radikal DPPH dikira mengikut formula berikut:
Untuk menyediakan ABTS tambah $ibu minuman keras, 35.2 mg ABTS dan 6.139 mg kalium persulfat dicampurkan kepada isipadu tetap 10 mL. Arak dicairkan dengan metanol selepas 12–16 jam tindak balas pada suhu bilik sehingga nilai penyerapan larutan pada 734 nm adalah kira-kira 7.{{10}} × 0.2. Kemudian, 30 larutan PGE mL, asid askorbik dan platikodin D dengan kepekatan yang berbeza (0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.2 mg mL―1) telah dicampur dengan 220 mL larutan ABTS tambah c dalam plat berlabel enzim telaga 96-, dan penyerapan pada 734 nm diukur selepas tindak balas dalam gelap selama 6 minit.
dengan A0 ialah penyerapan sampel kosong, dan AS ialah penyerapan sampel yang akan diukur.
2.6. Aktiviti anti-radang yang disebabkan oleh lipopolysaccharide makrofaj RAW264.7
RAW264.7 makrofaj dalam 1 mL medium telah disemai ke dalam plat telaga 24-, dengan 1×104 sel setiap telaga, dan dikultur semalaman supaya sel melekat pada dinding. Sel-sel telah dibiakkan selama 24 jam selepas pendedahan kepada lipopolysaccharide (LPS) dan ekstrak PGE pada kepekatan yang berbeza (10, 50, 100 mg mL-1). Kepekatan NO, IL-6 dan TNF-a dalam supernatan sel ditentukan menggunakan kit ELISA, seperti yang diarahkan oleh pengilang.23
2.7. Aktiviti tyrosinase
Menggunakan kaedah yang dilaporkan dalam literatur, dengan penimbal fosfat (25 mmol, pH=6.8) sebagai pelarut, larutan substrat L-tirosin (0.5 mg mL―1), enzim tirosin larutan (50 U mL―1), dan larutan lain dalam 96-plat perigi sistem tindak balas jumlah 240 mL, bersama-sama dengan larutan substrat 120 mL, penimbal fosfat 40 mL, larutan sampel 40 mL dan pengisar. Kemudian, 40 mL larutan enzim tirosin telah ditambah kepada sistem di atas. Tindak balas suhu malar mandi air 37 darjah C selama 20 minit telah dicatatkan, dan penyerapan diukur pada 475 nm.24
di mana A ialah penyerapan larutan sampel digantikan dengan larutan penimbal setara, B ialah penyerapan larutan sampel, larutan tirosinase digantikan dengan larutan penimbal setara, C ialah penyerapan larutan sampel, dan D ialah penyerapan bagi larutan penimbal setara dan bukannya larutan tyrosinase (Jadual 1).
2.8. Aktiviti perencatan pembentukan melanin
Sel melanoma B16F10 dalam medium 1 mL telah disemai ke dalam plat kultur telaga 24-, dengan 1×104 sel setiap telaga dan dikultur semalaman untuk sel melekat pada dinding. Sel-sel telah dibiakkan dengan hormon perangsang a-melanocyte (100 nM a-MSH) selama 48 jam dan dikultur dengan kepekatan PGE dan arbutin yang berbeza (100, 150, 200 mg mL-1) selama 24, 48, dan 72 jam.
Selepas masa pentadbiran, sel telah dibasuh dua kali dengan PBS (pH=7.2) dan dicampur dengan PBS 200 mL yang mengandungi 1 peratus Triton X-100. Sel-sel telah dilisiskan dengan pembekuan dan pencairan. Selepas sistem disentrifugasi pada 12 000 rpm selama 30 minit, supernatan dikeluarkan, dan 1 M NaOH yang mengandungi 10 peratus dimetil sulfoksida (300 mL) telah ditambah ke dalam butiran sel; kemudian bertindak balas pada 80 darjah selama 2 jam untuk melisiskan melanin dalam sel.25 Penyerapan pada 450 nm ditentukan.
2.9. Aktiviti tyrosinase sel
Sel melanoma B16F10 dalam 1 mL medium telah disemai ke dalam 24-plat kultur perigi, dengan 1 × 104 sel setiap perigi, dan dikultur semalaman untuk sel melekat pada dinding. Sel-sel telah dikultur dengan hormon perangsang a-melanocyte (100 nM a-MSH) selama 48 jam dan dikultur dengan kepekatan yang berbeza (100, 150, 200 mg mL-1) PGE dan arbutin selama 24, 48, dan 72 jam. Selepas masa pentadbiran, sel telah dibasuh dua kali dengan PBS (pH =7.2) dan dicampur dengan PBS 200 mL yang mengandungi 1 peratus Triton X-100. Sel-sel telah dilisiskan dengan pembekuan dan pencairan. Selepas sentrifugasi pada 12 000 rpm selama 30 minit, supernatan didepositkan ke dalam 96-plat perigi, 100 mL setiap telaga, dan dicampur dengan larutan L-DOPA 100 mL 0.1 peratus. Selepas pengeraman pada 37 darjah selama 2 jam, penyerapan pada 475 nm segera ditentukan.26
2.10. Analisis komposisi kimia
2.10.1. Analisis HPLC.Penyelesaian sampel PGE dianalisis menggunakan sistem Shimadzu LC{{0}}AHT HPLC dengan pengesan serakan cahaya penyejat ELSD6000 (Alltech CHROM).27 Pemisahan kromatografi dilakukan pada Sepax Bio -Lajur C18 (4.6×250 mm, 5 mm, daripada Sepax Technologies, Delaware, Amerika Syarikat). Sistem fasa bergerak terdiri daripada fasa mudah alih A (asetonitril) dan fasa bergerak B (0.1 peratus air asid formik). Kecerunan pelarut dibentangkan dalam Jadual 2. Keadaan kromatografi adalah seperti berikut: kadar alir ialah 0.8 mL min―1, suhu pengesanan serakan cahaya penyejatan awal (ELSD) ialah 105×C, kadar aliran gas ialah 2.8 L min― 1, dan kuantiti suntikan ialah 20 L. Dua puluh kelompok PGE telah disediakan.
2.10.2. Analisis komposisi kimia PGE melalui HPLC digabungkan dengan spektrometri jisim.Teknologi LC/MS resolusi tinggi Q-Orbitrap telah digunakan dalam kombinasi dengan spektrometer jisim resolusi tinggi Q Exactive pada sistem kromatografi RS Ultimate 3000 untuk menganalisis dan mengenal pasti komposisi kimia larutan sampel PGE melalui MS.28 Keadaan MS adalah seperti berikut: sumber ion: sumber pengionan semburan elektrik; mod imbasan: suis pengimbasan ion positif dan negatif; kaedah pengesanan: jisim penuh/dd-MS2; peleraian: 70 000 (jisim penuh), 17 500 (dd-MS2); julat pengimbasan: 150.0–2000.0 m/z; voltan semburan elektrik: 3.8 kV (positif); suhu kapilari: 300 darjah C; gas perlanggaran: argon ketulenan tinggi (ketulenan $ 99.999 peratus ); gas sarung: nitrogen (ketulenan $ 99.999 peratus , 40 arb); gas tambahan: nitrogen (ketulenan $ 99.999 peratus , 350 darjah ); masa pemerolehan data: 30.0 min. Keadaan kromatografi: lajur grafik kromatik: RP-C18 (150× 2.1 mm, 1.8 mm, Welch); Kadar alir: 0.30 mL min― 1; fasa akueus: 0.1 peratus larutan akueus asid format; fasa organik: 0.1 peratus asid formik asetonitril; cecair pencuci jarum: metanol; suhu lajur: 35 darjah C; isipadu suntikan: 5.00 mL. Kecerunan pelarut ditunjukkan dalam Jadual 3.
2.11. Statistik data
Semua eksperimen dijalankan sekurang-kurangnya tiga kali. Data telah dilaporkan sebagai nilai min ± sisihan piawai. Analisis statistik telah dijalankan menggunakan SPSS 21.0 dan Origin 9.0. Untuk pelbagai perbandingan, data tertakluk kepada ANOVA sehala (Turkey's post hoc) dan ujian-t berpasangan untuk menentukan kepentingan statistik. p < 0.05 dianggap perbezaan yang signifikan secara statistik antara kumpulan.
3. Keputusan
3.1. Kesan PGE pada daya maju sel B16F10 dan 264.7 sel
Kesan PGE pada sel melanoma B16F10 dan makrofaj RAW264.7 telah dikesan melalui kaedah CCK-8. Sel-sel telah dirawat dengan kepekatan PGE yang berbeza selama 24 jam dan kemudian dikesan menggunakan kaedah CCK-8. Keputusan dinyatakan sebagai peratusan kelangsungan hidup berbanding kumpulan kawalan. Di bawah kepekatan PGE 10–100 mg mL―1 (daya maju sel: 99.42 ±1.951–107.17 ±2.601 peratus ), PGE tidak menunjukkan sitotoksisiti pada 264.7 sel (Rajah 1). Walau bagaimanapun, penurunan ketara dalam aktiviti sel berlaku pada kepekatan PGE 200 mg mL―1 (daya maju sel: 74.91 ±1.574 peratus ). Oleh itu, julat dos 10–100 mg mL―1 (Kadar pengekstrakan PGE dalam Platycodon Grandiflorum ialah 8.9 peratus . Kepekatan 10–100 mg mL―1 PGE bersamaan dengan 0.11–1.12 mg mL―1 Platycodon Grandiflorum. Menambah 1 mL medium yang mengandungi dadah setiap telaga adalah bersamaan dengan menambah 0.11–0.12 mg Platycodon Grandiflorum.) hendaklah dipilih. Di sini, 10 mg mL―1, 50 mg mL―1, dan 100 mg mL―1 (kepekatan bahan ubatan tumbuhan: 0.11 mg mL―1, 0.56 mg mL―1, 1.12 mg mL―1, masing-masing) dipilih sebagai kepekatan rendah, sederhana dan tinggi.
Aktiviti sel B16F10 adalah sedikit berbeza daripada 264.7 sel. Apabila kepekatan PGE ialah 10–200 mg mL―1 (daya maju sel: 99.03 ±1.965 peratus –91.48 ±1.382 peratus ), aktiviti sel B16F10 tidak berbeza dengan ketara daripada kumpulan kawalan. Walau bagaimanapun, apabila kepekatan adalah 250 mg mL―1 (daya maju sel: 85.69 ±2.284 peratus ), aktiviti sel B16F10 mula merosot, dan aktiviti sel di bawah kepekatan PGE sebanyak 1000 mg mL―1 (daya maju sel: 70.75 Oleh itu, julat dos 10–200 m3.337 peratus ) adalah yang paling rendah. g mL―1 (Kadar pengekstrakan PGE dalam Platycodon Grandiflorum ialah 8.9 peratus . Kepekatan 100–200 mg mL―1 PGE bersamaan dengan 1.12–2.24 mg mL―1 Platycodon Grandiflorum. Menambah 1 mL yang mengandungi ubat medium per telaga adalah bersamaan dengan menambah 1.12– 2.24 mg Platycodon Grandiflorum.) hendaklah dipilih. Di sini, 100 mg mL―1, 150 mg mL―1, dan 200 mg mL―1 (kepekatan bahan ubatan tumbuhan: 1.12 mg mL―1, 1.68 mg mL―1 2.24 mg mL―1, masing-masing ) dipilih sebagai kepekatan rendah, sederhana dan tinggi, masing-masing (Rajah 2).
3.2. Kapasiti antioksidan PGE
Ujian penghapusan radikal bebas DPPH dan ABTS digunakan untuk mengukur aktiviti antioksidan PGE. Aktiviti mengais PGE terhadap radikal DPPH dan ABTS ditentukan di bawah kepekatan PGE yang berbeza (0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 mg mL― 1). Platycodin D dan asid askorbik digunakan sebagai kawalan positif. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 3, aktiviti penghapusan PGE terhadap radikal bebas DPPH dan ABTS meningkat dalam cara yang bergantung kepada dos, sama dengan keputusan kumpulan kawalan positif. Apabila kepekatan PGE ialah 6.25 mg mL― 1, aktiviti mengais ke arah radikal DPPH ialah 98.03 ±0.60 peratus , hampir sama dengan aktiviti mengais asid askorbik. Selain itu, PGE juga menunjukkan aktiviti penghapusan yang kuat terhadap radikal ABTS (84.30 ±0.53 peratus), yang lebih tinggi daripada kumpulan kawalan platikodin D.
3.3. Kesan pengurangan PGE pada tindak balas keradangan LPS yang dirangsang oleh makrofaj RAW264.7
Mengikut keputusan kesan PGE pada aktiviti makrofaj RAW264.7 dalam Bahagian 3.1, kepekatan PGE 10, 50, dan 100 mg mL―1 masing-masing dipilih sebagai dos rendah, sederhana dan tinggi, untuk menguji kesannya. daripada PGE pada keradangan makrofaj RAW264.7 yang dirangsang LPS. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 4, bergantung kepada dos PGE mengurangkan pengeluaran NO dalam makrofaj RAW264.7 yang dirangsang LPS dan bergantung kepada dos mengurangkan tahap faktor keradangan IL-6 dan TNF-a.
3.4. Kesan PGE terhadap aktiviti tyrosinase cendawan, kandungan melanin dalam melanosit B16F10, dan aktiviti tyrosinase intraselular
Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 5, aktiviti perencatan tyrosinase PGE meningkat dengan ketara dengan peningkatan kepekatan ekstrak. Semakin tinggi kepekatan PGE, semakin kuat aktiviti perencatan tyrosinase. Aktiviti perencatan tyrosinase PGE pada 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, dan 3.0 mg mL―1 ialah 6{ {29}}.29 peratus , 79.32 peratus , 85.14 peratus , 95.23 peratus , 96.43 peratus dan 97.71 peratus . Walau bagaimanapun, apabila kepekatan PGE ialah 2.5–3.0 mg mL― 1, aktiviti perencatan tyrosinase tidak meningkat dengan ketara; oleh itu, tidak perlu menjalankan eksperimen dengan kepekatan yang lebih tinggi. Di bawah keadaan yang sama, kadar perencatan 3.0 mg mL Â 1 PGE (kepekatan bahan ubatan tumbuhan: 33.71 mg mL―1) adalah serupa dengan arbutin (3 mg mL―1, 96.97 ±1.849 peratus ) dan lebih tinggi daripada itu daripada platikodin D (3 mg mL―1, 81.67 ±2.331 peratus ).
Mengikut kesan PGE ke atas aktiviti melanosit B16F10 dalam Bahagian 3.1, kepekatan PGE 100, 150, dan 200 mg mL-1 PGE dipilih sebagai dos rendah, sederhana dan tinggi untuk menguji kesan PGE terhadap kandungan melanin. dan aktiviti tyrosinase B16F10 melanosit yang dirangsang oleh a-MSH. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 6, aktiviti tyrosinase sel B16F10 yang dirangsang oleh 100 nM a-MSH (kumpulan kawalan) adalah jauh lebih tinggi daripada sel yang tidak dirangsang. Dengan peningkatan kepekatan PGE, aktiviti perencatan tyrosinase dan pengeluaran melanin pada sel B16F10 meningkat dengan ketara dalam cara yang bergantung kepada dos. Dengan peningkatan dalam masa pentadbiran, aktiviti perencatan PGE pada sel B16F10 tyrosinase dan pengeluaran melanin meningkat secara beransur-ansur.
Untuk maklumat lanjut: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501
