Abstrak

Ekstrak etanol akueus daripada batang serbuk Dendrobium loddigesii menghasilkan tiga fenolik baharu termasuk tiga-7-O-etil-9-O-(4-hidroksifenil)propionyl -diasilgliserol (1), (R){{ 7}},5,4ʹ-trihydroxy-3,3ʹ, -trimethoxybibenzyl (2) dan (S)-5,5′,7-trihydroxy-3′,4′ -dimethoxyfavanone (3), bersama-sama dengan sebelas analog yang diketahui. Struktur mereka ditentukan oleh analisis spektroskopi yang luas. Untuk mengenal pasti agen antioksida semulajadi, pemutih dan antipenuaan, kebolehan fenolik ini dinilai untuk menghilangkan radikal 1,2-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), kebolehannya untuk menghalang pengeluaran tyrosinase, dan kebolehan mereka untuk merangsang pengeluaran kolagen oleh ujian fibroblas-dewasa kulit manusia (HDFa). Didapati bahawa sebatian 1, 4–8, 13, dan 14 mempamerkan aktiviti penghapusan radikal DPPH yang ketara, sebatian 10 mempamerkan aktiviti perencatan tyrosinase (IC50 37.904 ug/mL), dan sebatian 9 menunjukkan pengeluaran kolagen yang ketara dengan nilai EC50 sebanyak 3.182 ug/mL. Keputusan ini menunjukkan bahawa juzuk fenolik daripada D. loddigesii mungkin calon antioksidan, pemutihan kulit dan/atau agen anti-penuaan.

Menurut kajian yang berkaitan,cistancheadalah perkara biasaherbayang dikenali sebagai "herba ajaib yang memanjangkan hayat". Komponen utamanya ialahcistanoside, yang mempunyai pelbagai kesan sepertiantioksidan, anti-radang, danpromosi fungsi imun. Mekanisme antara cistanche danpemutihan kulitterletak pada kesan antioksidan daripadaglikosida cistanche. Melanin dalam kulit manusia dihasilkan oleh pengoksidaantirosindimangkinkan oleh tyrosinase, dan tindak balas pengoksidaan memerlukan penyertaan oksigen, jadi radikal bebas oksigen dalam badan menjadi faktor penting yang mempengaruhi pengeluaran melanin. Cistanche mengandungi cistanoside, yang merupakan antioksidan dan boleh mengurangkan penjanaan radikal bebas dalam badan, dengan itumenghalang pengeluaran melanin.

Klik pada Suplemen Cistanche Tubulosa

Untuk maklumat lanjut:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Abstrak Grafik

1. Pengenalan

Genus Dendrobium (Orchidaceae) mengandungi kira-kira 1500 spesies di seluruh dunia, di mana kira-kira 80 spesies tumbuh di China [1]. Batang beberapa tumbuhan dalam genus ini dikenali sebagai "Shi-Hu", yang telah digunakan selama beribu-ribu tahun sebagai kedua-dua perubatan tradisional Cina dan ubat-ubatan rakyat untuk rawatan gastritis atropik kronik, penuaan kulit, demam, penyakit kardiovaskular, dan tonik untuk menggalakkan pengeluaran cecair badan [2]. Kajian terdahulu mengenai genus ini membawa kepada pengasingan siri polisakarida, sebatian fenolik, alkaloid, dan seskuiterpenoid [1, 3-5], beberapa daripadanya mempunyai pelbagai bioaktiviti termasuk anti-radang [6], antimikrob [2], antioksidan. [7], antitumor [8], pengagregatan antiplatelet [9], imunomodulator [10], dan terhadap aktiviti influenza A [11].

Dendrobium loddigesii, herba epifit saka, diedarkan secara meluas di kawasan barat daya China, seperti Guangxi, Guizhou, dan Wilayah Yunnan [12]. Batangnya telah digunakan dalam perubatan rakyat untuk merawat gastrik, demam, dan pening [13]. Dalam meneruskan pencarian produk semula jadi yang pelbagai struktur dan aktif secara biologi daripada genus ini [1, 5, 14–17], penyiasatan mendalam tentang juzuk aktif secara farmakologi daripada spesies tumbuhan ini telah dilakukan di sini. Hasilnya, tiga sebatian fenolik baharu (1–3) serta sebelas sebatian yang diketahui (Rajah 1) telah diasingkan daripada ekstrak etanol 80 peratus daripada batang D. loddigesii. Pengasingan, penjelasan struktur, dan penilaian biologi bagi sebatian ini dibentangkan di sini.

2 Keputusan dan Perbincangan

Sebatian 1, diperoleh sebagai pepejal putih, memberikan formula molekul C21H26O7 seperti yang ditentukan oleh ion (-)-HRESIMS pada m/z 389.1602 [M−H]− (kira untuk C21H25O7, 389.16{{ 28}}6) dengan sembilan darjah ketidaktepuan. Spektrum 1 H NMR 1 mengandungi tujuh proton aromatik pada δH 6.85 (1H, d, J=1.7 Hz), 6.75 (1H, d, J=8.0 Hz), 6.68 (1H). , dd, J = 8.0, 1.7 Hz), 7.01 (2H, d, J = 8.5 Hz) dan 6.68 (2H, d, J = 8.5 Hz), mencadangkan kehadiran cincin benzena 1,3,4-terganti tiga dan cincin benzena 1,4-tertukar ganti. Spektrum 13C NMRnya mempamerkan 21 resonans karbon termasuk dua metil (satu metoksi), empat metilena alifatik, sembilan methines (dua sp3, tujuh sp2 ), dan enam karbon kuaternari (satu karbonil, lima olefin termasuk tiga beroksigen). Korelasi HMBC (Rajah 2) bagi H-7/C-1 (δC 131.6), C-2 (δC 111.7), C-6 (δC 121.4), C -8 (δC 74.2), dan C-10 (δC 65.3); H-9/C-7 (δC 83.8) dan C-8 (δC 74.2); H{74}}/C{75}} (δC 15.6); 3-OMe (δH 3.81)/C-3 (δC 149.1), bersama-sama dengan korelasi H-7/H-8/H2-9 dan H{{ 87}}/H3-11 daripada spektrum COZY 1 H–1 H (Rajah 2) menunjukkan kehadiran 7-O-ethylguaiacylglycerol [18]. Telah dilaporkan bahawa J7,8 adalah kira-kira 5 Hz untuk isomer erythro dan 7 Hz untuk tiga isomer dalam kes picagari-gliserol dan derivatif diasilgliserol. Oleh itu, sebatian 1 dianggap sebagai tiga isomer dengan J7,8 (6.5 Hz) [18]. Korelasi HMBC bagi H-7ʹ (δH 2.79, t, J = 7.5 Hz)/C-8ʹ (δC 37.1), C-1ʹ (δC 132.7), C-2ʹ, 6ʹ (δC 130.2) dan C-9ʹ (δC 174.6), H-8ʹ (δH 2.59, t, J = 7.5 Hz)/C-7ʹ (δC 31.0), C-1ʹ, dan C-9ʹ, bersama-sama dengan puncak silang COZY H-8ʹ/H-7ʹ ditunjukkan kehadiran asid p-hidroksikoumarik [19]. Berdasarkan bukti yang diterangkan di atas, 1 dicadangkan untuk mempunyai bahagian 7-O-ethylguaiacylglycerol dan asid p-hidroksi-kuumarik melalui hubungan ester. Korelasi HMBC dari H-9 hingga C-9ʹ mencadangkan kaitan ester adalah antara C-9 dan C-9ʹ. Oleh itu, struktur 1 ditentukan seperti yang ditunjukkan.

(R){{0}},5,4ʹ-Trihydroxy-3,3ʹ, -trimethoxybibenzyl (2) diperolehi sebagai pepejal putih. Spektrum HRESIMS 2 memaparkan puncak ion kuasimolekul pada m/z 319.1180 [M−H]− (calcd. untuk C17H19O6, 319.1187) dengan 8 darjah tak tepu. Spektrum 1 H NMR 2 menunjukkan tiga kumpulan metoksil pada δH 3.75 (3H, s), 3.70 (3H, s), dan 3.17 (3H, s); satu proton metin beroksigen pada δH 4.13 (1H, t, J=6.8 Hz, H- ); dua isyarat metilena pada δH 2.73 (1H, dd, J=13.5, 6.9 Hz) dan 2.96 (1H, dd, J=13.5, 6.9 Hz); dan lima proton aromatik, muncul sebagai cincin aromatik 1,3,4,5-tetrasubstituted pada δH 6.28 (1H, d, J=1.8 Hz) dan 6.34 (1H, d, J{{ 60}}.8 Hz), dan 1,3,4-cincin aromatik digantikan tiga pada δH 6.49 (1H, d, J=2.0 Hz), 6.62 (1H, d, J=8.0 Hz) dan 6.52 (1H, dd, J = 8.0, 2.0 Hz). Spektrum 13CNMR dan DEPT 2 menunjukkan tiga oksimetilena, satu metilena, satu metin beroksigen, dan 12 karbon aromatik (lima beroksigen). Perbandingan data NMRnya (Jadual 1) dengan dendrocandin C [20] menunjukkan persamaan yang besar kecuali kehadiran satu lagi kumpulan metoksil, yang terletak pada C-3ʹ oleh korelasi HMBC daripada 3ʹ-OMe dan H-5ʹ kepada C-3ʹ (δC 148.4). Selain itu, berbilang interaksi HMBC (Rajah 2) 3-OMe dan H-2/C-3 (δC 149.5); -OMe/C- (δC 86.9) mencadangkan kumpulan metoksil lain pada C-3, dan C-, masing-masing. Konfigurasi mutlak pada C- ditentukan sebagai R berdasarkan putaran optik negatif ([훼] 26 D –12.46), serupa dengan afil D [훼] 20 D –20.3, MeOH) [15]. Sehubungan itu, struktur 2 ditentukan seperti yang ditunjukkan.

(S){{0}},7,5′-Trihydroxy-3′,4′-dimethoxyfavanone (3) diperolehi sebagai serbuk amorf kuning dan mempunyai molekul C17H16O7 (1{{69} } indeks kekurangan hidrogen) mengikut ion (−)-HRESIMS pada m/z 331.0819 [M – H]− (calcd 331.0823). Maksimum penyerapan UV pada 206 dan 294 nm menunjukkan kehadiran flavanone [21]. Spektrum 1 H NMR (Jadual 1) menunjukkan tiga isyarat dalam kawasan bukan aromatik diletakkan pada δH 5.29 (1H, dd, J=12.7, 3.1, H-2), 3.04 (1H, dd, J=17.1, 12.7, H-3ax) dan 2.71 (1H, dd, J=17.1, 3.1, H-3 eq), empat proton aromatik δH 5.87 (1H, d, J=2.2, H-6), 5.91 (1H, d, J=2.2, H-8), 6.62 (1H, d, J=2.0, H-2ʹ) dan 6.61 (1H, d, J=2.0, H-6ʹ), dua kumpulan metoksil δH 3.83 (3H, s) dan 3.77 (3H, s). Spektrum 13C NMR dan DEPT (Jadual 1) mengandungi resonans untuk 17 karbon termasuk dua metoksi, satu metilena, satu metin, satu karbonil dan 12 karbon aromatik. Analisis komprehensif data NMRnya menunjukkan bahawa struktur planarnya berkait rapat dengan dihydro tricin [22], kecuali untuk resonans OH-4ʹ dan OCH3-5ʹ dalam dihydro tricin telah ditukar dalam 3. Ini telah disahkan oleh HMBC cross- puncak (Rajah 2) dari H-2ʹ, H-6ʹ, dan OCH3-4ʹ hingga C-4ʹ (δC 137.7), dari H-6ʹ hingga C-5ʹ (δC 151.8). Konfigurasi mutlak pada C-2 telah didalilkan sebagai dalam bentuk S berdasarkan nilai putaran spesifik negatif (– 46.64, MeOH) dalam putaran optiknya [23]. Oleh itu, struktur sebatian 3 telah ditetapkan dengan jelas seperti yang ditunjukkan.

Sebelas sebatian yang diketahui telah dikenal pasti sebagai gementar 4 [24], mescalin 5 [25], 4,5,4′-trihydroxy- 3,3′-dimethoxybibenzyl 6 [26], 4′,5- dihydroxy-3,3′- dimethoxybibenzyl 7 [27], Tristin 8 [28], batatas dalam III 9 [27], 3,5,3′-hydroxybibenzyl 10 [29], aphyllous C 11 [15], dentiform A 12 [30], dihydroconiferyl dihydro-p-courate 13 [31], p-hydroxyphenyl trans-ferulate 14 [32] dengan analisis spektroskopi dan membandingkan data spektrumnya dengan literatur.

Sebatian fenolik, adalah bahagian penting dalam diet manusia dan dikenali sebagai antioksidan yang kuat kerana tindakan pemecahan rantai yang kuat dan ia boleh menyumbang secara langsung kepada aktiviti anti-oksidatif [33]. Ujian penghapusan radikal DPPH adalah salah satu kaedah yang paling biasa dan agak cepat digunakan untuk menilai aktiviti antioksidan. Sebatian yang boleh menderma atom hidrogen kepada radikal DPPH, dan kemudian menimbulkan bentuk pengurangan DPPH akan dianggap sebagai agen antioksidan yang berpotensi. Semua sebatian dinilai untuk aktiviti penghapusan radikal DPPH mereka. Keputusan sekarang (Jadual 2) menunjukkan bahawa majoriti sebatian fenolik (1, 4–8, 13, dan 14) menunjukkan aktiviti penting dengan kapasiti pemutihan antara 89.411 hingga 94.278 peratus pada 100 ug/mL.

Sebaliknya, tyrosinase ialah enzim yang mengandungi tembaga dan memainkan peranan penting dalam mengawal laluan biosintesis melanin dalam melanosit [34]. Oleh itu, perencat tyrosinase menjadi juzuk penting dalam kosmetik atau produk perubatan untuk hiperpigmentasi dan mengembangkan agen pemutih kulit. Dalam kajian ini, semua isolat telah dinilai untuk aktiviti perencatan tyrosinase mereka (Jadual 2). Asid kojic, agen pencerah kulit yang dikatakan, digunakan sebagai kawalan positif. 3,5,3'-hydroxybibenzyl (10) mendedahkan aktiviti perencatan yang ketara dengan nilai IC50 sebanyak 37.904 ug/mL. Aphyllals C (11) menunjukkan perencatan sederhana (IC50, 152.56 ug/mL). Semua sebatian yang tinggal tidak aktif pada kepekatan sehingga 200 ug/mL. Dalam kajian ini, dapat disimpulkan bahawa sebatian 10 dan 11 boleh menjadi calon yang berpotensi untuk rawatan penyakit kulit berkaitan biosintesis melanin.

Memandangkan spesies ini digunakan secara perubatan untuk penuaan kulit, kerana, kolagen adalah penting untuk kekuatan dan keanjalan kulit, dan degradasinya membawa kepada kedutan yang mengiringi penuaan [35]. Oleh itu, semua sebatian juga sengaja dinilai untuk kesannya terhadap pengeluaran kolagen dalam HDFa. Keputusan (Jadual 2) menunjukkan bahawa kompaun 9 merangsang aktiviti pengeluaran kolagen HDFa dengan ketara (EC50 3.182 ug/mL). Kompaun 6 dan 7 menunjukkan aktiviti yang lebih lemah, dengan pengeluaran kolagen masing-masing sebanyak 33.062 peratus dan 29.157 peratus pada 10 ug/mL. Keputusan sekarang bukan sahaja menyokong penggunaan etnofarmakologi D. loddigesii tetapi juga menyediakan templat struktur yang boleh dipercayai untuk membangunkan penyakit yang berkaitan dengan kekurangan kolagen seperti melecur dan ulser.

3 Eksperimen

3.1 Prosedur Eksperimen Am

3.2 Bahan Tumbuhan

Batang D. loddigesii dikumpulkan pada September 2014 dari Bandar Wenshan, Wilayah Yunnan, Republik Rakyat China, dan dikenal pasti oleh Profesor Hong Yu (Universiti Yunnan, Kunming, Republik Rakyat China). Spesimen baucar (No. 20,140,829) telah disimpan di Makmal Utama Fitokimia dan Sumber Tumbuhan Negeri di China Barat, Institut Botani Kunming, Akademi Sains China.

3.3 Pengekstrakan dan Pengasingan

Batang kering dan serbuk (10.2 kg) D. loddigesii diekstrak tiga kali dengan 80 peratus etanol di bawah suhu bilik dan tertumpu di bawah tekanan yang dikurangkan. Kemudian, sisa itu digantung dalam H2O dan dibahagikan dengan EtOAc untuk mendapatkan pecahan EtOAc (220} g), yang tertakluk kepada kromatografi lajur silika gel yang dicairkan dengan kecerunan petroleum eter/aseton (15:1 hingga { {110}}:1) untuk mendapatkan 22 pecahan (Fr.1–22). Fr.11 (6 g) telah tertakluk kepada silika gel CC yang dicairkan dengan CHCl3/MeOH (300:1), kemudian diikuti dengan lajur MCI (kecerunan MeOH/H2O, 60:40–95:5) dan silika gel CC (CHCl3/ MeOH, 200:1) untuk menghasilkan 12 (4 mg). Fr.13 (850 mg) diasingkan di atas lajur MCI (MeOH/ H2O, 60:40 hingga 95:5) untuk memberikan lima pecahan (Fr.13.1–Fr.13.5). Fr.13.4 (150 mg) memberikan sebatian 4 (3 mg) dan 5 (5 mg) oleh penyediaan HPLC (MeOH/H2O, 60:40). Fr.16 (19 g) telah dikromatografi pada lajur gel silika yang dielusi dengan CHCl3/MeOH (100:1 hingga 20:1) untuk menghasilkan 6 subfraksi (Fr.16.1–Fr.16.6). Fr.16.4 (2.3 g) telah digunakan lajur MCI yang dielusi dengan MeOH/H2O (50:50–100:0) dan kemudian dipecahkan lagi pada lajur Sephadex LH-20 (MeOH/ H2O, 90:10) kepada hasil 7 (716 mg) dan 13 (39 mg). Dengan menggunakan syarat yang sama Fr.16.4, Fr.16.6 (240 mg) memberikan kompaun 9 (7 mg). Fr.18 (10 g) dipisahkan oleh silika gel CC (CHCl3/MeOH, 100:1–20:1), kemudian melalui MCI (kecerunan MeOH/H2O, 50:50–100:0) dan Sephadex LH{{ 96}} (MeOH/H2O, 90:10) lajur untuk menghasilkan 3 (25 mg) dan 11 (4 mg). Fr.19 (20 g) telah tertakluk kepada lajur MCI yang dielusi dengan MeOH/H2O (30:70–100:0) untuk mendapatkan tujuh pecahan (Fr.19.1–Fr.19.7). Fr.19.5 (2.3 g) dipisahkan oleh lajur gel silika berulang (CHCl3/MeOH, 30:1) untuk menghasilkan 8 (15 mg) dan 10 (7 mg). Fr.19.6 (4.3 g) telah difraksinasi pada lajur gel silika (CHCl3/MeOH, 30:1) untuk memberikan 5 pecahan (Fr.19.6.1– Fr.19.6.5). Fr.19.6.1 (1.2 g) tertakluk kepada lajur gel silika (CHCl3/MeOH, 30:1) dan selepas penulenan oleh HPLC (MeOH/H2O, 45:55), menyediakan 1 (15 mg). Fr.19.6.3 (540 mg) telah digunakan pada lajur Sephadex LH-20 yang dicairkan dengan MeOH/H2O (90:10), dan kemudian disucikan lagi dengan HPLC semipreparatif (MeOH/H2O, 45:55) untuk memberikan 2 (6 mg) dan 6 (5 mg). Fr.20 (12 g) telah digunakan pada gel MCI (MeOH/H2O, 30:70–100:0) langkah kromatografi dan kemudian tertakluk kepada gel silika CC (CHCl3/MeOH, 30:1) untuk memberikan 14 (21). mg).tiga{{0}}O-Etil-9-O-(4-hidroksifenil) propionil-diasilgliserol (1): pepejal putih; [ ]D 26 – 3.72 (c 0.51, MeOH); UV (MeOH) λmaks (log ε) 203 (4.53), 225 (4.17), 280 (3.66) nm; IR (KBr) νmaks 3426, 1727, 1516, 829 cm−1; 1 H dan 13C NMR (CD3OD), lihat Jadual 1; ESIMS m/z 389 [M−H]−, HRESIMS m/z 389.1602 [M−H]− (kira. untuk C21H25O7, 389.1606).

(R)-4,5,4′-Trihydroxy-3,3ʹ, -trimethoxybibenzyl (2): serbuk amorfus putih; [ ]D 26 –12.46 (c 1.07, MeOH); UV (MeOH) λmaks (log ε) 204 (4.59), 286 (3.75) nm; IR (KBr) νmaks 3418, 1607, 1517, 1455, 1434, 796 cm−1; 1 H dan 13C NMR (CD3OD), lihat Jadual 1; ESIMS m/z 319 [M−H]−, HRESIMS m/z 319.1180 [M−H]− (kira. untuk C17H19O6, 319.1187).

(2S)-5,7,3ʹ-Trihydroxy-6,4,5-trimethoxyfavone (3): serbuk amorf kuning; [ ]D 26 – 46.64 (c 0.46, MeOH); UV (MeOH) λmaks (log ε) 206 (4.70), 294 (4.17) nm; IR (KBr) νmaks 3335, 2940, 1641, 1514, 1462, 1345, 1434, 1182, 1091, 998, 833 cm−1; 1 H dan 13C NMR (CD3OD), lihat Jadual 1; ESIMS m/z 331 [M−H]−, HRESIMS m/z 331.0819 [M−H]− (kira. untuk C17H15O7, 331.0823).

3.4 Ujian Aktiviti Penghapusan Radikal DPPH

Ujian aktiviti penghapusan radikal bebas telah dijalankan mengikut kaedah sebelumnya [36] dengan beberapa pengubahsuaian. Secara ringkas, 30 μL sampel (1000 ug/mL, dilarutkan dalam etanol) dan Trolox (1 mM) telah ditambah kepada 270 μL larutan DPPH (100 μM, dilarutkan dalam metanol), masing-masing. Tindak balas berlangsung selama 1 jam pada 37 darjah pada 96-plat mikro perigi. Penyerapan kemudiannya dibaca pada 515 nm dan peratusan jumlah aktiviti penghapusan radikal dikira menggunakan formula berikut: peratus perencatan =[(A0− A1)/A0]×100 peratus , di mana A0 ialah penyerapan bagi DPPH tanpa sampel (tindak balas kawalan) dan A1 ialah penyerapan DPPH yang diinkubasi bersama sampel. Semua ujian telah dijalankan dalam tiga kali ganda dan Trolox digunakan sebagai agen kawalan positif.

3.5 Ujian Perencatan Tirosinase Cendawan

Perencatan aktiviti tyrosinase ditentukan secara spektrofotometri mengikut kaedah yang diterangkan sebelum ini [36] dengan beberapa pengubahsuaian. Secara ringkas, kepekatan sebatian ujian yang berbeza telah disediakan dalam 10 peratus DMSO. Setiap larutan sampel (20 μM) dicampur dengan L-Dopa (1.25 mM), dan dicairkan dengan 970 μL 0.05 mM penampan natrium fosfat (PBS, pH 6.8) dalam tabung uji. Tindak balas dimulakan dengan menambah tyrosinase cendawan (25 U/mL). Campuran tindak balas diinkubasi selama 5 minit pada suhu bilik. Jumlah Dopachrome dalam campuran ditentukan oleh pengukuran penyerapan setiap telaga pada 490 nm. Asid kojic digunakan sebagai kawalan positif. Peratusan perencatan tyrosinase dikira mengikut persamaan berikut: Peratus perencatan=[(A0− A1)/A0] × 100 peratus , di mana A0 ialah penyerapan Dopachrome tanpa sebatian ujian (tindak balas kawalan) dan A1 ialah penyerapan Dopachrome yang diinkubasi dengan sebatian ujian.

3.6 Penghasilan Kolagen oleh Ujian HDFa

Penghargaan Projek ini disokong secara kewangan oleh Jabatan Sains dan Teknologi Wilayah Yunnan (No. 2017ZF003-04, 2015HB093 dan 2019HA001). Penulis berterima kasih kepada kakitangan kumpulan analisis Makmal Utama Fitokimia dan Sumber Tumbuhan Negeri di China Barat, Institut Botani Kunming, Akademi Sains China, untuk pengukuran semua spektrum.

Pematuhan Standard Etika

Buka AksesArtikel ini diedarkan di bawah syarat Creative Commons Attribution 4.0 Lesen Antarabangsa, yang membenarkan penggunaan, pengedaran dan pengeluaran semula tanpa had dalam mana-mana medium, dengan syarat anda memberikan kredit yang sewajarnya kepada pengarang asal dan sumber , sediakan pautan kepada lesen Creative Commons, dan nyatakan jika perubahan telah dibuat.

Rujukan

Untuk maklumat lanjut: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501