BAHAGIAN 1 Liposom Phenylethanol Glycoside Menghalang Pengaktifan HSC Terinduksi PDGF Melalui Peraturan Laluan Isyarat FAK/PI3K/Akt
Mar 06, 2022
Shi-Lei Zhang 1, Long Ma 1, Jun Zhao 2, Shu-Ping You 1, Xiao-Ting Ma 1, Xiao-Yan Ye dan Tao Liu 1,*
1 Jabatan Toksikologi, Pusat Pengajian Kesihatan Awam, Universiti Perubatan Xinjiang, Wilayah Autonomi Uyghur Xinjiang, Jalan Xinyi No.393, Urumqi 830011, China
2 Makmal Utama untuk Perubatan Uighur, Institut Materia Medica Xinjiang, Wilayah Autonomi Uighur Xinjiang, Daerah Tianshan, Jalan Selatan Xinhua No. 140, Urumqi 830004, China
Untuk maklumat lanjut sila hubungi:Joanna.jia@wecistanche.com
Cistanche deserticola mempunyai banyak kesan, klik di sini untuk mengetahui lebih lanjut
Abstrak: Cistanche tubulosaadalah ubat herba tradisional Cina yang digunakan secara meluas untuk mengawal imuniti, danglikosida fenilethanoid(CPhGs) adalah antara komponen utama yang bertanggungjawab untuk aktiviti ini. Walau bagaimanapun, penggunaan CPhGs terjejas secara negatif oleh penyerapan yang lemah dan penggunaan oral yang rendah. Penghantaran ubat yang disasarkan adalah hala tuju pembangunan yang penting untuk farmaseutik. Kajian terdahulu telah menunjukkan bahawa CPhG boleh menghalang pengaliran laluan isyarat dalam TGF-p1 / smad dan menghalang pengaktifan sel stellate hepatik (HSCs). Matlamat kajian ini adalah untuk menilai kesan fibrosis anti-hepatik liposom CPhG dengan menghalang pengaktifan HSC, menggalakkan apoptosis, menyekat kitaran sel, menyekat pengaliran laluan isyarat dalam focal adhesion kinase(FAK)/phosphatidylinositol-3- kinase(PI3K)/protein kinase B(Akt), dan menentukan ia adalah aktiviti hepatoprotektif in vitro. Kajian pelepasan in vitro menunjukkan bahawa liposom CPhG mempunyai kesan pelepasan berterusan berbanding CPhG ubat. Proliferasi HSC telah dihalang selepas rawatan dengan liposom CPhG (29.45,14.72, 7.36 ^ g/mL), dengan nilai IC50 42.54 Rg/mL dalam ujian MTT. Kepekatan liposom CPhG yang berbeza boleh menghalang percambahan HSC, menggalakkan apoptosis, dan menyekat kitaran sel. Kaedah MTT menunjukkan perencatan jelas percambahan HSC selepas liposom CPhG dan rawatan faktor pertumbuhan-BB(rrPDGF-BB) yang diperolehi oleh Platelet Tikus Rekombinan. Tahap kolagen-1, perencat metallopeptidase 1 (TIMP-1), aktin otot licin (a-SMA) dan PI3K/Akt terfosforilasi telah dikurangkan dan matriks metalloproteinase-1 (MMP{ {23}}) telah dikawal selia, dengan prarawatan dengan kepekatan liposom CPhG yang berbeza. Selain itu, 29.45 Rg / mL liposom CPhG boleh mengurangkan ekspresi protein FAK dan protein PI3K dan Akt terfosforilasi di hiliran FAK oleh overexpression gen FAK. Eksperimen ini menunjukkan bahawa liposom CPhG boleh menghalang pengaktifan HSC dengan menghalang FAK dan kemudian mengurangkan ekspresi Akt / PI3K terfosforilasi, dengan itu memberikan pandangan baru tentang penggunaan CPhG untuk fibrosis hati.
Kata kunci: glikosida fenilethanoidliposom; sel stellate hepatik; percambahan; apoptosis; kitaran sel; FAK/PI3K/Akt,
faktor, seperti TGF-p1, alkohol, toksin, dan steatosis, boleh mengakibatkan pengaktifan HSC. PDGF juga boleh membawa kepada pengaktifan HSC [4]. Pada masa ini, strategi terapeutik yang mensasarkan HSC untuk mencegah fibrosis hati termasuk perencatan pengaktifan, percambahan, dan kitaran sel HSC, serta rangsangan apoptosis HSC [5].
Cistanche tubulosa(keluarga Orobanchaceae), tumbuhan parasit, ditanam secara meluas di wilayah selatan Xinjiang di China.C. tubulosatelah ditunjukkan untuk membentangkan pelbagai aktiviti, termasuk meningkatkan imuniti organisma, meningkatkan daya tahan organisma, menyuburkan buah pinggang, merawat mati pucuk, dan meningkatkan kecerdasan;
1. Pengenalan
ia juga mempunyai ciri anti-pengoksidaan dan anti-penuaan [6]. Tumbuhan ini mengandungi glikosida phenylethanoid (CPhGs), iridoid, dan polisakarida, di mana CPhGs adalah beberapa spesies bioaktif aktif utama [7]. Dalam kajian terdahulu, kami mendapati bahawa CPhGs boleh menyekat pengaliran laluan isyarat dalam TGF-p1/smad, menghalang pengaktifan HSC, dan memberi kesan pencegahan terhadap fibrosis hepatik yang disebabkan oleh albumin serum lembu pada tikus [7,8]. Walau bagaimanapun, CPhG mempunyai keterlarutan air yang baik dan keterlarutan lipid yang lemah dan dipengaruhi oleh faktor luaran seperti keasidan dan enzim penguraian, yang mengurangkan kestabilan dan keberkesanan CPhG [9]. Selepas pentadbiran intragastrik, CPhGs tidak stabil dalam saluran gastrousus tikus, dan hidrolisis ikatan glikosida boleh berlaku dengan mudah. Bioavailabiliti oral tikus hanya 0.83 peratus , jadi sukar untuk menentukan peranan terapeutiknya [10]. Oleh itu, kita mesti mencari ubat antifibrotik yang selamat, berkesan, mampan dan disasarkan untuk HSC untuk meningkatkan keberkesanan terapeutik mereka. Sistem penyampaian ubat nanopartikel menyediakan strategi alternatif untuk mengatasi kekurangan ini kerana kelebihannya, termasuk kapasiti pemuatan ubat yang tinggi dan peredaran darah yang panjang [11]. Mereka mempunyai pertalian yang kuat dengan hati dan boleh terus menghantar ubat ke dalam sel melalui endositosis dan gabungan. Liposom yang tidak diubah suai terutamanya diedarkan dalam tisu atau organ yang dibangunkan oleh sistem retikuloendothelial (RES) dan mempunyai fungsi menyasarkan hati secara pasif [12]. Oleh itu, liposom CPhG telah disediakan oleh penyebaran membran dan enkapsulasi sekunder untuk memberikan kesan anti-fibrosis. Dalam kajian ini, kami bertujuan untuk menyiasat kesan liposom CPhG pada percambahan HSC, apoptosis, dan kitaran sel, serta mekanismenya.
2. Keputusan
2.1. Sifat Fizikal LiposomCPhG
Sifat fizikal liposom CPhG yang disediakan seperti berikut: Saiz zarah ialah (216.7 ± 3.47) nm, potensi Zeta ialah (-55.6 ± 1.3) mV. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 1, zarah adalah seperti bulat, disalut dengan ketebalan seragam pada permukaan, dan taburan saiz zarah adalah seragam. Kecekapan pemuatan dadah dan pengkapsulan liposom CPhG ialah (3.71 ± 0.32) peratus dan (38.46 士 7.85) peratus .
2.2. Pelepasan In Vitro daripada Liposom CPhG dan CPhG
Anggaran kadar pelepasan kumulatif telah dikira dan diplot sebagai fungsi masa untuk liposom CPhG dan CPhGs (Rajah 2). Dalam kajian ini; kadar pelepasan CPhG selepas 12 jam dinormalkan kepada 100 peratus, manakala liposom CPhG adalah hampir 100 peratus selepas 24 jam, dan kadar pelepasan CPhG meningkat mengikut masa. Data dianalisis dengan menggunakan model pemasangan yang berbeza untuk mekanisme pelepasan terkawal, termasuk persamaan tertib sifar, tertib pertama dan Higuchi. Persamaan yang dipasang dan pekali korelasi untuk tiga model keluaran ditunjukkan dalam Jadual 1.
Model terbaik yang sesuai untuk CPhG dan liposom CPhG ialah persamaan Higuchi dan tertib pertama. Kajian pelepasan in vitro liposom CPhG tidak menunjukkan sebarang kesan pecah. Fungsi pengedaran yang paling sesuai telah dipilih untuk mengira parameter pembubaran T50 (pembubaran 50 peratus ). Keputusan menunjukkan bahawa purata masa pengekalan liposom CPhG adalah lebih lama daripada CPhGs, dan T50 liposom CPhG ialah 9.39 jam. Berbanding dengan 1.69 jam untuk CPhGs, liposom CPhG mempamerkan kesan pelepasan berterusan yang jelas (Jadual 2).
Kami mula-mula menyiasat kesan sitotoksik liposom CPhG pada HSC dengan ujian MTT in vitro. HSC telah terdedah kepada kepekatan liposom CPhG yang berbeza, antara 0 hingga 117.79 卩g/mL selama 24 jam. Liposom CPhG mengurangkan daya maju HSC dalam cara yang bergantung kepada dos, dan nilai IC50nya ialah 42.535 (cth/mL. Kesan liposom CPhG (29.45, 14.72, dan 7.36 ^g/mL) pada sel pada 24, 48 dan 72 jam ditunjukkan dalam Rajah 3. Selepas rawatan dengan liposom CPhG, percambahan HSC telah dihalang dengan ketara pada titik masa yang berbeza (Rajah 3).
Pelepasan laktat dehidrogenase (LDH) HSC dikesan selepas 24 jam rawatan dengan kepekatan liposom CPhG yang berbeza. Keputusan ditunjukkan dalam Jadual 3. HSC yang dirawat dengan liposom CPhG tidak mempunyai kesan yang ketara terhadap pelepasan LDH.
2.4. Liposom CPhG Menginduksi Apoptosis HSC dan Menahan Kitaran Sel
HSC telah terdedah kepada liposom CPhG (29.45,14.72,7.36 卩g/mL) selama 24 jam, dan pewarnaan berganda annexin-V-FITC/PE telah dijalankan untuk mengesan apoptosis melalui sitometri aliran, seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 4a. Jumlah apoptosis sel secara statistik meningkat berbanding kumpulan kawalan (p < 0.05).="" selepas="" 24="" jam="" rawatan="" pada="" hsc="" untuk="" setiap="" kumpulan="" dos,="" liposom="" cphg="" (29.45="" ^="" g="" ml)="" boleh="" mendorong="" apoptosis="" lewat="" hsc,="" dan="" peratusan="" sel="" apoptosis="" lewat="" adalah="" lebih="" tinggi="" daripada="" sel="" apoptosis="" awal.="" perkadaran="" sel="" apoptosis="" awal="" adalah="" lebih="" tinggi="" daripada="" sel="" apoptosis="" lewat="" dalam="" liposom="" cphg="" (14.72="" dan="" 7.36="" |^g/ml)="" yang="" dirawat.="" keputusan="" ini="" jelas="" menunjukkan="" bahawa="" liposom="" cphg="" mendorong="" apoptosis="" hepatosit,="" terutamanya="" pada="" peringkat="" akhir="" hsc.="" di="" samping="" itu,="" jumlah="" apoptosis="" meningkat="" dengan="" dos="" liposom="" cphg.="" keputusan="" ini="" menunjukkan="" bahawa="" liposom="" cphg="" boleh="" menghalang="" pengaktifan="" hsc="" dan="" fibrosis="" hepatik="" dengan="" mendorong="" apoptosis="">
Untuk menentukan kesan liposom CPhG pada kitaran sel HSC, HSC telah dirawat dengan liposom CPhG pada kepekatan 29.45, 14.72, dan 7.36 昭 / mL selama 24 jam, dan dianalisis oleh sitometri aliran (Rajah 4b). Keputusan menunjukkan bahawa perkadaran sel dalam fasa G0/G1 meningkat dengan ketara (p < {{10}}.05),="" manakala="" peratusan="" sel="" dalam="" fasa="" s="" adalah="" ketara.="" dikurangkan="" (p="">< 0.05).="" selain="" itu,="" perkadaran="" sel="" dalam="" fasa="" g2/m="" telah="" berkurangan="" dengan="" ketara="" jika="" dibandingkan="" dengan="" kumpulan="" kawalan=""><0.05). taken="" together,="" these="" results="" exhibit="" the="" cell="" cycle="" modulatory="" activity="" of="" the="" cphg="" liposomes="" in="" hscs,="" which="" may="" relate="" to="" their="" anti-proliferative="" and="" apoptosis-inducing="">
2.5. St udy tentang Mekanisme Tindakan C PhG Liposomes In Vitro
2.5.1. Liposom CPhG Menghalang Pembiakan HSC dengan Rangsangan rrPDGF-BB
Untuk menyiasat lebih lanjut kesan liposom CPhG pada percambahan yang dirangsang oleh rrPDGF-BB HSC, ujian MTT dilakukan untuk mengukur daya maju HSC yang dirawat dengan kepekatan pratetap liposom CPhG selama 24, 48, dan 72 jam ( Rajah 5).
Selepas 24 jam rawatan dengan HSC yang dirangsang oleh rrPDGF-BB dan 29.45,14.721 dan 7.36 昭/mL liposom CPhG, kadar survival sel dalam setiap kumpulan dos masing-masing ialah 67.5 peratus, 75.3 peratus, dan 89.2 peratus. Selepas 48 jam, kadar survival adalah 49.2 peratus, 58.6 peratus, dan 73.5 peratus, masing-masing dalam sel.
daripada setiap kumpulan dos. Selepas 72 jam rawatan, kadar kemandirian sel dalam setiap kumpulan dos adalah masing-masing 45.3 peratus, 59.2 peratus, dan 79.2 peratus. Keputusan menunjukkan bahawa liposom CPhG mempunyai kesan perencatan yang ketara pada HSC yang dirangsang oleh rrPDGF-BB, dan kesan perencatan ini menjadi lebih jelas apabila dos meningkat. Adalah dicadangkan bahawa kesan perencatan liposom CPhG pada HSC menyumbang kepada aktiviti anti-proliferasi CPhGliposomo.
2.5.2. Liposom CPhG Menghalang Pengaktifan HSC Secara In Vitro
HSC dalam ruang Disse menghasilkan komponen ECM seperti kolagen-1,(s-SMA, dan kolagen III. Faktor lain yang mengawal pembangunan ECM, seperti MMP dan TIMP, juga dihasilkan oleh HSC [5]. Untuk menyiasat lebih lanjut mekanisme yang disebabkan oleh rrPDGF-BB dalam HSC, kami menilai ekspresi protein berkaitan ECM, termasuk kolagen-1, Cosma, kolagen III, MMP-1 dan TIMP{{8} }. Rajah 6a menunjukkan bahawa kumpulan liposom CPhG (29.45,14.72, 7.36 4g/mL) boleh mengurangkan tahap ekspresi mRNA kolagen-1, a-SMA dan TIMP{{18} } dan meningkatkan tahap ekspresi mRNA MMP{19}} lebih daripada kumpulan rrPDGF-BB.
Rajah 6. Kesan liposom CPhG pada ekspresi kolagen-1, a-SMA, TIMP-1 dan MMP-1 dalam HSC. (a ) Ekspresi mRNA kolagen-1, a-SMA, TIMP-1 dan MMP-1 dalam HSC (ujian RT-PCR). (b) Ekspresi protein kolagen{{10}} dan a-SMA. A, kumpulan kawalan; B, kumpulan dirawat rrPDGF-BB; C, rrPDGF-BB ditambah liposom CPhG 29.45 g/mL kumpulan yang dirawat; D, liposom rrPDGF-BB campur CPhG 14.72(_kumpulan terawat ig/mL; E, liposom rrPDGF-BB tambah CPhG 7.3 6 卩g/m L kumpulan rawatan; Data dinyatakan sebagai min 土 SD . ** p < 0.01,="" berbeza="" dengan="" ketara="" berbanding="" kumpulan="" hsc="" yang="" diaktifkan="" rrpdgf-bb.="" #="" p="">< 0.05,="" berbeza="" secara="" ketara="" bersama="" kumpulan="" kawalan.="" 6-aktin="" digunakan="" sebagai="" kawalan="">
Liposom CPhG juga meningkatkan tahap mRNA MMP-1. Tahap a-SMA dan kolagen-1 sangat dinyatakan dalam HSC diaktifkan rrPDGF-BB. Sebaliknya, liposom CPhG menurunkan tahap a-SMA dan kolagen-1 (Rajah6b). Terutamanya pada kepekatan tinggi (29.45 ^g/mL), liposom CPhG mengurangkan peningkatan kolagen-1 dan ekspresi a-SMA melalui rrPDGF-BB.
2.53 Liposom CPhG Menghalang Laluan Isyarat PI3K/Akt
PI3K/Akt ialah laluan transduksi isyarat penting yang dimediasi oleh reseptor tyrosine kinase. Laluan isyarat PI3K/Akt bertindak sebagai sensor sebagai tindak balas kepada rangsangan ekstraselular dan mengantara isyarat selular, dengan itu memainkan peranan penting dalam apoptosis dan percambahan sel dengan menjejaskan aktiviti molekul effector hiliran [13]. Untuk mengesahkan sama ada laluan PI3K/Akt mengambil bahagian dalam kesan anti-proliferasi liposom CPhG pada HSC, tahap ekspresi dan fosforilasi PI3K/Akt telah diperiksa oleh analisis blot barat. Keputusan menunjukkan bahawa tahap p-PI3K dan p-Akt secara konsisten menurun dalam HSC selepas rawatan 24 jam dengan liposom CPhG, menunjukkan bahawa kesan anti-proliferasi liposom CPhG terhadap HSC adalah berkaitan dengan penyahaktifan laluan PI3K / Akt. , seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 7.
2.5.4. Liiposom CPhG Boleh Mengurangi Selia Ekspresi Protein Laluan PI3K /Akt dalam HSC daripada Plasmid Ekspresi Berlebihan FAK Pengantaraan rrPDGF-BB
FAK ialah gen kritikal yang mengawal laluan isyarat PI3K/Akt. FAK yang diaktifkan boleh memfosforilasi PI3K, yang seterusnya membawa kepada fosforilasi Akt. FAK mengantara transduksi isyarat reseptor kinase tyrosine-protein, integrin, dan laluan lain ke sel, yang merupakan persimpangan dan hab beberapa laluan intrasel semasa pengaktifan HSC. Oleh itu, kami membuat spekulasi
bahawa liposom CPhG mungkin menyekat aktiviti laluan isyarat PI3K/Akt dengan menjejaskan pengaktifan FAK. Kami kemudiannya mengesahkan hipotesis ini dengan menunjukkan ekspresi berlebihan gen FAK.
(pEX{{0}}}NC) ditambah liposom CPhG 29.45 Lg/mL kumpulan menurun dengan ketara (p < 0.01).
estern blotting dengan antibodi primer tertentu. ** p < 0.01,="" berbeza="" dengan="" ketara="" berbanding="">
rangsangan rrPDGF-BB ditambah pEX-3-kumpulan FAK. tambah p < 0.05,="" jauh="" berbeza="" berbanding="" dengan="" kumpulan="" dirawat="" rrpdgf-bb.="" &="" p=""><0.01, berbeza="" dengan="" ketara="" berbanding="" dengan="" rangsangan="">
serta kumpulan pEX-3-NC. -aktin digunakan sebagai kawalan dalaman.
cistanche boleh anti-kanser
3. Perbincangan
CPhG telah terbukti mempunyai pelbagai aktiviti biologi, termasuk aktiviti anti-radang [14,15], aktiviti anti-osteoporosis [16,17], kesan sedatif [18], aktiviti antikeletihan [19], kesan neuroprotektif [ 20], dan aktiviti hepatoprotektif [21,22]. Yang et al. mendapati bahawa ekstrak daripadaC. tubulosaboleh melambatkan dengan ketara kemajuan fibrosis hati kimia eksperimen dengan menghalang sintesis kolagen dan mengurangkan tekanan oksidatif [22]. Walau bagaimanapun, keberkesanan CPhG sebagai
pelindung haba dihadkan oleh kebolehtelapan yang lemah dan bioavailabiliti yang rendah [23]. Oleh itu, adalah perlu untuk mengembangkan aplikasi CPhG dengan membangunkan sistem penyampaian yang cekap untuk mengatasi halangan ini.
Dalam tahun-tahun kebelakangan ini, kedua-dua penyelidikan ubat dan penyelidikan klinikal telah mengesahkan bahawa penggunaan zarah nano sebagai pembawa ubat boleh meningkatkan keberkesanan ubat dalam vivo. Liposom adalah sebahagian daripada zarah nano yang paling penting [24].
Liposom boleh digunakan sebagai pembawa ubat untuk berjaya menyampaikan ubat anti-radang, ubat antikanser, antibiotik, ubat antikulat, dan kategori ubat lain yang berbeza [25]. Liposom juga boleh meningkatkan kestabilan dadah, meningkatkan keterlarutan dadah, dan menggalakkan biokompatibiliti [26]. Sebaliknya, kajian telah menunjukkan bahawa sistem penyampaian ubat bagi zarah nano pepejal (dalam julat 10-1000 nm) boleh menumpukan 80 peratus daripada dos ubat dalam hati, membolehkan ubat masuk sel hati [27]. Jing Zhu et al. mendapati bahawa galanin-liposom mempunyai kesan penyasaran hati yang baik [28]. Oleh itu, kesan penyasaran pasif ubat-ubatan nano-Cina boleh digunakan untuk merawat penyakit hati atau penyakit lain. Saiz zarah liposom CPhG yang disediakan dalam kajian ini, yang mempunyai tahap tertentu penyasaran hati, ialah (216.7 ± 3.47) nm. Tingkah laku pelepasan dadah adalah sifat penting sistem penyampaian dadah nano. Oleh kerana CPhG mempunyai keterlarutan air yang baik, larutan penimbal PBS (pH=6.0) digunakan sebagai medium pelepas. Daripada keluk pelepasan, dapat dilihat bahawa sebelum 2 jam, peratusan pelepasan liposom CPhG adalah kurang daripada 40 peratus, tiada pelepasan mendadak berlaku, dan terdapat kesan pelepasan berterusan tertentu berbanding dengan pelepasan CPhG. Daripada persamaan lengkung pelepasan yang dipasang, pelepasan liposom CPhG dalam larutan penimbal fosfat pada pH=6.0 adalah konsisten dengan persamaan Higuchi.
cistanchebolehanti-apoptosis
Dalam penyakit hati kronik, pengaktifan berterusan HSC membawa kepada fibrosis hati [29]. Oleh itu, menghalang pengaktifan, percambahan dan kitaran sel HSC, atau mendorong apoptosis HSC, mungkin merupakan titik permulaan baharu untuk terapi sasaran fibrosis hati [30-33]. Banyak kajian telah mendapati bahawa apoptosis adalah kunci untuk membalikkan fibrosis hepatik dengan menggalakkan apoptosis [34]. Perkembangan fibrosis hati bergantung kepada pengaktifan HSC, yang mungkin menawarkan potensi untuk menghalang pengaktifan HSC dan mendorong apoptosis untuk mencegah atau merawat fibrosis hati [35,36]. LDH ialah enzim dalam sitosol sel, yang dikeluarkan dalam media kultur apabila membran sel rosak. Atas sebab ini, kami melakukan kajian in vitro mengenai kadar daya maju sel, kandungan LDH dalam sel, dan apoptosis dan kitaran sel HSC yang terdedah kepada liposom CPhG. Keputusan menunjukkan bahawa liposom CPhG sangat menghalang daya maju dan percambahan HSC dan meningkatkan peratusan sel apoptosis dalam cara yang bergantung kepada kepekatan. Selain itu, keputusan kitaran sel menunjukkan bahawa liposom CPhG boleh mendorong penangkapan kitaran sel dalam fasa G1. Keputusan menunjukkan bahawa kunci untuk liposom CPhG untuk mencegah dan merawat fibrosis hepatik adalah untuk mengawal percambahan sel, apoptosis, dan kitaran sel. Berbanding dengan kumpulan kawalan kosong, kandungan LDH antara setiap kumpulan mempunyai trend yang meningkat secara beransur-ansur. Walau bagaimanapun, tiada perbezaan yang ketara (p > 0.05), menunjukkan bahawa walaupun aktiviti berkurangan untuk HSC yang terjejas oleh liposom CPhG, kebanyakan membran sel kekal utuh. Perencatan pembiakan HSC oleh liposom CPhG bukan disebabkan oleh ketoksikan ubat kepada sel.
PDGF adalah faktor paling kritikal yang mempengaruhi percambahan HSC. Reseptor PDGF (PDGF-Ra dan -p) tergolong dalam keluarga reseptor tyrosine kinase. PDGF-AA mengikat secara eksklusif kepada PDGF-Ra, manakala rantai PDGF-B mengikat dan dimerisasi dengan kedua-dua PDGF-Ra dan -p [37]. Berikutan pengikatan ligan kepada PDGF-R, reseptor dimerisasi, yang kemudiannya membawa kepada fosforilasi sisa tirosin dalaman dan kepada pengaktifan beberapa laluan isyarat hiliran, akhirnya mendorong percambahan dan penghijrahan HSC yang diaktifkan. Proses ini mengakibatkan pengeluaran dan pemendapan kolagen dan ECM lain yang berlebihan, dengan itu menggalakkan perkembangan dan perkembangan fibrosis hati [38]. Breitkopf et al. menunjukkan bahawa overexpression hepatik PDGF-BB mengakibatkan percambahan HSC dan fibrosis hati [39]. Dalam kajian kami, kami menggunakan rrPDGF-BB sebagai perangsang untuk mengaktifkan HSC, dan setiap kumpulan liposom CPhG berdos boleh menghalang percambahan HSC dan menunjukkan hubungan kesan dos yang jelas. Adalah dicadangkan bahawa kesan perencatan liposom CPhG pada HSC menyumbang kepada aktiviti anti-proliferasi liposom CPhG.
Pengaktifan HSC dikaitkan dengan banyak perubahan dalam corak ekspresi gen sel. Khususnya, perubahan dalam ekspresi gen kolagen-1 dan a-SMA paling banyak dikaitkan dengan sifat fibrosis HSC yang diaktifkan [40]. MMP ialah endopeptidase yang bergantung kepada zink yang memainkan peranan penting dalam degradasi semua komponen protein ECM di bawah keadaan fisiologi dan patologi. MMP dan TIMP mengantara sintesis dan degradasi ECM, masing-masing. MMP boleh menggalakkan kemerosotan ECM. Keseimbangan halus antara MMP dan TIMP menentukan berlakunya fibrosis hati [29]. Berbanding dengan kumpulan rrPDGF-BB, ekspresi TIMP-1, a-SMA dan kolagen-1 dalam kumpulan liposom CPhG meningkat dengan ketara, manakala ekspresi MMP-9 menurun. Rawatan liposom CPhG terutamanya membalikkan ekspresi abnormal yang disebabkan oleh rrPDGF-BB dalam HSC. Data ini menunjukkan bahawa liposom CPhG berkemungkinan menghalang penjanaan ECM dengan memulihkan keseimbangan antara MMP dan TIMP, dengan itu meningkatkan tahap MMP-1 dan mengurangkan ekspresi TIMP-1, a-SMA dan kolagen{14}} dan berpotensi menggalakkan degradasi matriks ekstraselular.
FAK ialah sejenis kompleks lekatan fokus. PDGF juga boleh mengaktifkan FAK dengan berinteraksi dengan protein ECM melalui integrin [41]. Kompleks lekatan fokus menyediakan sensor langsung untuk integriti persekitaran ekstraselular. Pengaktifan FAK menghasilkan pengaktifan PI3K. PI3K telah ditunjukkan terlibat dalam percambahan beberapa jenis sel [42]. Peranan pentingnya dalam HSC ditunjukkan melalui penggunaan perencat khusus PI3K LY294002 dan wortmannin untuk menyekat mitogenesis dan chemotaxis yang disebabkan oleh PDGF tanpa menjejaskan autofosforilasi reseptor PDGF [43]. PI3K direkrut ke dalam reseptor PDGF terfosforilasi dimerisasi, yang mengaktifkan protein kinase C (PKC), Akt, dan p70S6 kinase (p70S6K) [44]. Telah dilaporkan bahawa FAK dominan-negatif (Ad-FAKCD) digunakan untuk menyekat aktiviti FAK dan menghalang pengaktifan PI3K yang disebabkan oleh percambahan PDGF dan HSC selepas rawatan PDGF [45]. Oleh itu, kami membuat hipotesis bahawa laluan FAK/PI3K/Akt adalah sasaran yang mungkin untuk liposom CPhG.
Keputusan kami menunjukkan bahawa berbanding dengan rangsangan rrPDGF-BB ditambah kumpulan X-3-FAK, tahap ekspresi protein FAK, PI3K terfosforilasi dan Akt terfosforilasi telah dikurangkan dalam rangsangan rrPDGF-BB ditambah X-3-FAK ditambah liposom CPhG 29.45 Lg/mL kumpulan. Keputusan ini menunjukkan bahawa liposom CPhG 29.45 Lg/mL boleh mengurangkan ekspresi protein FAK dan protein PI3K dan Akt terfosforilasi di hilir FAK.
Dengan mendalami penyelidikan mengenai kimia dan farmakologi ubat-ubatan tradisional Cina, semakin banyak bahan aktif ubat-ubatan tradisional Cina telah ditemui dan disahkan. Paclitaxel, artemisinin, dan ubat lain telah diiktiraf secara meluas sebagai ubat rawatan barisan pertama untuk penyakit berkaitan di seluruh dunia. Walau bagaimanapun, pada masa yang sama, didapati bahawa walaupun kesan farmakologi in vitro banyak ramuan perubatan Cina adalah sangat kuat, ia mempunyai keterlarutan air yang lemah, separuh hayat yang singkat, kestabilan yang lemah, bioavailabiliti rendah, kesan sampingan toksik, dan banyak lagi. masalah lain yang sangat mengehadkan penggunaan perubatan dan klinikal mereka. Sistem penyampaian ubat nano ialah sistem penyampaian ubat baharu yang berpotensi besar untuk dibangunkan dan merupakan tempat tumpuan dalam penyelidikan farmaseutik moden. Aplikasinya dalam penyelidikan dan pembangunan bentuk baru ubat-ubatan tradisional Cina bukan sahaja menambah baik bentuk tradisional ubat-ubatan Cina tetapi juga meningkatkan kesan kuratif ubat-ubatan tradisional Cina pada tahap tertentu dan meningkatkan kestabilan ubat-ubatan dalam vivo. Selain itu, liposom yang tidak diubah suai kebanyakannya diserap oleh RES, bergantung pada saiz zarahnya, sifat permukaan, dan faktor lain. Mereka juga disasarkan secara pasif ke hati. Untuk meningkatkan kecekapan penyasaran hati liposom biasa, kepekatan tisu sasaran boleh ditingkatkan dengan menyambung ligan tertentu atau kumpulan berfungsi tertentu.
Oleh itu, dalam penyelidikan masa depan, kita harus mementingkan sifat fizikal dan kimia pengekstrakan dan penulenan CPhG, seperti keterlarutan, kestabilan, keasidan, dan kealkalian, serta kajian biofarmaseutik dan farmakokinetik. Kita harus mewujudkan teori reka bentuk formulasi yang unik, platform teknologi penyediaan, dan kaedah penilaian kualiti untuk CPhG dan juga membangunkan pelbagai sistem pemuatan dadah nano untuk CPhG, untuk memastikan CPhG digunakan dengan sebaik mungkin. Menggunakan sepenuhnya kelebihan ini akan menjadi hala tuju penyelidikan masa depan kami.
