Sifat Kimia Mannoglucan Daripada Cistanche Deserticola

Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com

1. Bahan

Pes oral untuk kuda daripada dua pengeluar berbeza digunakan yang mengandungi 10 mg/g (A) atau 20 mg/g (B) ivermectin, masing-masing. Ujian kuantitatif untuk ivermectin telah dilakukan dan kandungannya ialah 104.4–107.7 peratus daripada kepekatan yang diisytiharkan.

2. Ujian pelarutan

Ujian itu dilakukan dengan Ph. Eur. radas dayung (Ujian Pharma, Heinberg, Jerman), pada pengadukan 75 rpm atau 50 rpm, pada 37 -0.5 C. Sodium lauryl sulfate (BDH Chemicals, Poole, England) 0.5 peratus (w /v) larutan akueus digunakan sebagai medium pelarutan (900 ml). Pes (4 g A atau 2 g B) diletakkan ke dalam bekas dengan picagari dengan kanula (A) atau menjatuhkan sampel pada permukaan medium pelarutan (B). Selepas selang masa (15, 30, 45, 60 min, dan 2 jam), sampel medium pembubaran ditarik balik (2 ml), ditapis melalui penapis kaca, dan dianalisis.

3. Analisis HPLC

Penentuan ivermectin dilakukan dengan kaedah HPLC yang diubah suai seperti yang diterangkan dalam Ph. Eur. Larutan yang dianalisis telah dicairkan dengan metanol (1: 10). Sistem HPLC terdiri daripada lajur oktadesil (250 -4 mm; 5 mm; Lichrospher RP-18; Merck), penyepadu D-12500 A, pengesan UV-Vis L{{7} }, pam L-6200A (Merck-Hitachi, Darmstadt, Jerman). Campuran asetonitril: metanol: air (64: 24: 16) digunakan sebagai fasa bergerak dengan kadar alir 1.9 ml/min. Isipadu sampel yang disuntik ialah 20 ml dan pengesanan dilakukan pada 254 nm.

4. Kajian keterlarutan

Akses bahan itu digoncang dalam kelalang kaca tertutup rapat dengan pelarut yang sesuai (Jadual 1) selama 20 jam pada 37 0.1 C. Suspensi telah ditapis dan turasan, selepas pencairan dalam metanol, dianalisis oleh HPLC .

5. Kestabilan dalam larutan berasid

Larutan ivermectin dalam HCl {{0}}.1 M disimpan dalam botol kaca bertutup rapat pada 20 C dan 37 C. Kromatogram larutan direkodkan pada t ¼ 0 dan selepas 1, 2 dan 6 jam. Kawasan ivermectin (masa pengekalan 10.5 min) dan puncak tambahan dikira.

Rujukan

Panduan FDA untuk industri: Borang dos semipepejal tidak steril SUPAC-SS. Perubahan skala dan pasca kelulusan: kimia, pembuatan dan kawalan; ujian pelepasan in vitro dan dokumentasi bioequivalence in vivo. Mei 1997. Garis panduan FIP untuk ujian pembubaran produk oral pepejal (1997) Dissolute. Technol. 4: 5–14. Siewert M, Dressman J, Brown C, Shah VP (2003) Garis panduan FIP/AAPS untuk ujian pembubaran/in vitro bagi borang dos novel/khas, AAPS PharmSciTech, 4 (1) artikel 7 Pusat Penyelidikan Moden untuk Perubatan Tradisional Cina, Sekolah Sains Farmaseutikal, Pusat Sains Kesihatan Universiti Peking, Beijing, China

Xiang mei Wu, Pengfei Tu Diterima 13 Februari 2004, diterima 4 April 2004, Prof. Dr. Pengfei Tu, Pusat Penyelidikan Moden untuk Perubatan Tradisional Cina, Pusat Pengajian Sains Farmaseutikal, Pusat Sains Kesihatan Universiti Peking, No. 38, Xueyuan Road , Daerah Haidian, Beijing 100083, China Pengfeitu@bjmu.edu.cn Pharmazie 59: 815–816 (2004)

Mannoglucan baharu daripadaCistanche deserticoladari China dicirikan. Kompaun ini bertanggungjawab untuk rangsangan ringan percambahan limfosit T dan B yang disebabkan oleh mitogen.

Cistanche deserticolaYC Ma ialah holoparasit yang tumbuh pada akar tumbuhan dikotiledon Haloxylon ammodendron Bunge yang diedarkan secara meluas di barat laut China. Oleh kerana ia merupakan tonik penting dalam perubatan oriental, banyak komponen aktif dan aktiviti farmakologi telah dituntut (Karasawa et al. 1986; Yoshizawa et al. 1990). Sifat ini mungkin dikaitkan dengan beberapa komponen polisakaridaCistancheyang masih belum disiasat. Polisakarida pektik mitogenik dan polisakarida neutral telah diasingkan dan dicirikan daripadaCistanche deserticoladari Mongolia (Radna et al. 1996; Anna et al. 1997; Bozena et al. 1999). Di sini kami melaporkan sifat kimia mannoglucan baharu daripadaCistanche deserticoladari China, yang bertanggungjawab untuk rangsangan ringan percambahan limfosit T dan B yang disebabkan oleh mitogen. Selepas batangCistanche deserticolaYC Ma telah diekstrak dengan 95 peratus etanol, air suling sejuk digunakan untuk mengekstrak sisa. Ekstrak air sejuk dimendakkan dengan EtOH, protein dikeluarkan dan dialisis, mendapatkan CCDP polisakarida mentah. Polisakarida mentah dipecahkan pada lajur DEAE dan lajur Sephadex G-150 untuk menghasilkan polisakarida bebas protein (CDP-6), yang terdiri daripada glukosa (89.2 peratus ) dan mannose (1{{58} }.4 peratus ), dan purata Encik dianggarkan 6.8 -104. CDP polisakarida-6 menunjukkan [a 20 D 42 (c 1, H2O). Konfigurasi mutlak gula ditentukan oleh GC TMS (– )-2-butil glikosida. CDP-6 telah dimetilasi (Needs et al. 1993), dihidrolisiskan, ditukar kepada alditol asetat dan dianalisis oleh GC dan GC-MS (Jadual). Keputusan ini bersama-sama dengan data nisbah molar daripada analisis metilasi mencadangkan bahawa CDP-6 mempunyai kebanyakannya 1,6-Glcp terpaut dan tulang belakang 1,6- dipautkan pada takat yang lebih kecil bercabang di O{{ 24}} daripada mannose. Analisis metilasi dua polimer (CDP-6-1, CDP-6–2) daripada hidrolisis separa mengesahkan bahawa CDP-6 mempunyai tulang belakang yang terdiri daripada 1,6-sisa glukosil terpaut dan 1,6-sisa mannosyl terpaut, yang digantikan pada O-3 mannose dengan dahan yang terdiri daripada terminal, 1,6- residu glukosil terpaut dan 1,3,{{38} }sisa mannosyl berpaut. Mengikut nisbah molar dan literatur (Bozena et al. 1999; Bacon et al. 1996), spektrum 13C NMR CDP-6 menunjukkan isyarat disebabkan oleh karbon anomerik a-d-Glcp (C{{45} }} pada 98.4 ppm), bd-Map (C-1 pada 104.3–104.9 ppm) dan ad-Map (C-1 pada 100.0 ppm). Spektrum 1 H NMR CDP-6-2 dalam D2O menunjukkan isyarat proton sepadan dengan ad-Glcp (H-1 pada 4.94–4.95 ppm) dan a-d-Map (H-1 pada 4.96–5.00 ppm). Spektrum 13C NMR CDP-6-2 dalam D2O menunjukkan isyarat proton sepadan dengan aD-Glcp (C-1 pada 98.6 ppm) dan Peta iklan (C-1 pada 98.4ppm). Mannoglucan dilaporkan mempunyai 1,4-glukopirannan terpaut dan 1,4-tulang belakang mannopyrannan terpaut (Radjabi Nassab et al. 1984; Tanabe et al. 2000). CDP-6 mempunyai beberapa ciri struktur yang berbeza dengan-1,6-Glcp dan b-1 yang dipautkan,6-tulang belakang Peta terpaut, dan ia digantikan dengan cawangan mannoglucan (Gamb.). Untuk menyiasat penggunaanCistanche deserticoladalam perubatan rakyat, kesan CDP-6 pada sistem sel T dan B telah dinilai. Ia didapati sedikit merangsang pembiakan limfosit T dan B yang disebabkan oleh mitogen.

Percubaan

1. Prosedur am

Putaran optik telah diukur dengan polarimeter automatik W22-1S. Spektrum IR ditentukan pada spektrometer Perkin-Elmer 599B. Analisis GC dilakukan pada instrumen Agilent HP6890N, dilengkapi dengan pengesan FID. GC-MS telah dilakukan pada instrumen Finnigan Trace GC-MS. Kehomogenan dan En CDP-6 dianggarkan daripada lengkung penentukuran volum elusi dextrans standard, yang dilakukan pada

radas siri Agilent 1100 dengan lajur Shodex KS-805.1 spektrum H NMR dan 13C NMR telah direkodkan dengan instrumen INOVA-500. Kandungan protein dianalisis dengan kaedah Bradford (Andre et al. 1975). Monosakarida dianalisis mengenai aldotol asetat mereka selepas ia dihidrolisiskan (2 M TFA, 2 jam, 110 C), dikurangkan dan asetat. Hidrolisat dianalisis menggunakan TLC pada plat gel silika yang mengandungi 5 peratus natrium dihidrogen fosfat dalam BuOH-EtOAc-isopropyl alcohol-HOAC––H2Opyridine (3.5: 10: 6: 3.5: 3: 3) dan gula dikesan dengan menyembur dengan orsinol. -H2SO4. Alditol asetat yang terhasil dianalisis oleh GLC menggunakan lajur kapilari HP-5 (30 m 0.32 mm). CDP-6 telah dimetilasi oleh kaedah Ciucanu, diikuti oleh hidrolisis, dan dianalisis sebagai alditol asetat termetilasi separa oleh GC-MS. Selepas hidrolisis separa, produk telah didialisis dan diasingkan, memperoleh dua polimer, CDP-6-1 dan CDP-6–2.

2. Bahan tumbuhan

Tumbuhan itu dikumpulkan dari Wilayah Mongolia Dalam di China pada Ogos 2001 dan telah dikenal pasti oleh Hu-Biao Chen, Jabatan Perubatan Semula Jadi, Pusat Pengajian Sains Farmaseutikal, Pusat Sains Kesihatan Universiti Peking. Satu spesimen baucar [E-1-(9)] tumbuhan ini telah disimpan di Pusat Pengajian Sains Farmaseutikal, Universiti Peking. 3. Pengekstrakan, pengasingan dan penulenan polisakarida CDP-6 BatangCistanche deserticolaYC Ma (15{17}}0 g) telah diekstrak dengan 95 peratus etanol (6 L) di bawah refluks. Sisa-sisa tidak larut etanol kering telah dimaserasi tiga kali dengan air suling sejuk setiap 12 jam. Ekstrak air sejuk ditapis dan turasan disentrifugasi. Selepas pemendakan dengan empat isipadu EtOH (kacau dan berdiri selama 24 jam pada 4 C), hasil mendakan (35.5 g) diperolehi. Protein dalam mendakan telah dikeluarkan dengan kaedah Savage. Selepas pembubaran dalam air suling, sisa (25.5 g) telah dialisis dan diliofilkan (hasil: 10.6 g). Polisakarida mentah (8 g) telah dilarutkan dalam air suling (100 mL, 8 peratus b/v) dan diasingkan menggunakan lajur DEAE (70 5} cm, kecerunan 0–2 M NaCl, setiap 1.5 L). Satu pecahan tercair air (600 mg) diperolehi. Satu sampel (250 mg) telah ditulenkan oleh kromatografi resapan gel lajur pada lajur Sephadex G- 150 (4 - 80 cm, 1600 mL, 5 mL setiap pecahan). Pecahan CDP-6 (1500–1600 mL) dikumpulkan, didialisis dan dikeringkan beku. Selepas diasinkan oleh Sephadex G-25 (60 1 cm). CDP-6 (110 mg) telah diperoleh dan ditentukan sebagai satu puncak oleh HPSGC.

Pengakuan:Penulis mengucapkan terima kasih kepada Dr. Baomei Shao dan Prof. Xiaoming Gao, Pusat Pengajian Sains Perubatan Asas, Pusat Sains Kesihatan Universiti Peking, kerana mengukur aktiviti imunomodulasi CDP-6.