Mengatasi Kekurangan Imun Dengan Allogrooming
Oct 19, 2023
Ringkasan ringkas:
Kami menyiasat sama ada dua spesies anai-anai yang berkait rapat berbeza dalam pergantungan mereka pada imuniti sosial atau individu terhadap dua spesies kulat patogen, yang semuanya dikumpulkan dari lokasi yang sama. Keputusan kami menunjukkan bahawa dandanan bersama (allogrooming) sangat berkesan untuk mengehadkan jangkitan maut sehingga tahap yang boleh mengimbangi pertahanan imun individu yang agak lemah. Selepas patogen ditemui, anai-anai menggunakan strategi alternatif untuk penjarakan sosial dan mengehadkan penyebaran penyakit berjangkit dan sebaliknya berkumpul untuk membersihkan satu sama lain. Variasi dalam keamatan tindak balas tingkah laku ini menunjukkan tindak balas bernuansa kepada tahap ancaman.
faedah tambahan cistanche-meningkatkan imuniti
Abstrak:
Allogrooming nampaknya penting dalam kebanyakan haiwan sosial untuk perlindungan daripada pendedahan rutin kepada parasit. Dalam serangga sosial, nampaknya penting untuk penyingkiran propagul patogen dari kutikula sebelum mereka boleh memulakan kitaran berjangkit. Bagi anai-anai bawah tanah, ini termasuk spora kulat yang biasa ditemui di dalam tanah, seperti Metarhizium conidia, yang boleh cepat bercambah dan menembusi kutikula. Kami menyiasat sama ada terdapat perbezaan dalam pergantungan pada imuniti sosial dan semula jadi dalam dua anai-anai bawah tanah yang berkait rapat untuk perlindungan daripada jangkitan maut oleh dua spesies Metarhizium yang ditemui tempatan. Keputusan kami menunjukkan bahawa imuniti semula jadi yang agak lemah dalam satu spesies anai-anai diimbangi oleh pembahagian yang lebih mampan. Ini termasuk alogrooming dipertingkatkan sebagai tindak balas kepada kepekatan konidia yang mencerminkan lebih banyak pencemaran rutin kutikula serta kepada pencemaran kutikula berat yang menimbulkan tindak balas kecemasan rangkaian.
Kata kunci:
imuniti sosial; imuniti semula jadi; entomopatogen; tingkah laku penggera; terminal
cistanche tubulosa-meningkatkan sistem imun
Klik di sini untuk melihat produk Cistanche Enhance Immunity
【Minta lebih lanjut】 E-mel:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
1. Pengenalan
Mekanisme pertahanan sosial boleh menjadi sangat berkesan untuk mengatasi kerentanan kepada penyakit berjangkit walaupun pergaulan memihak kepada penyebarannya [1,2]. Dalam anai-anai dan semut, evolusi mekanisme sosial pertahanan imun yang berkesan nampaknya telah meredakan tekanan terpilih pada mekanisme imun semula jadi individu [3-6]. Selepas patogen ditemui, ancaman penyakit dalam serangga sosial akan bergantung kepada keberkesanan pertahanan barisan hadapan semula jadi, yang termasuk halangan fizikal kepada jangkitan. Banyak patogen kulat menghasilkan spora aseksual (konidia) yang boleh terus menembusi kutikula serangga. Pertahanan imun sosial yang membantu melindungi kutikula, termasuk antikulat allogrooming dan dirembeskan, nampaknya amat penting dalam anai-anai untuk pertahanan terhadap Metarhizium spp [7-9]. Metarhizium conidia terdapat di mana-mana di dalam tanah yang dilalui oleh banyak anai-anai semasa mencari makanan dan mencapai kepekatan yang mengekalkan ancaman jangkitan yang berterusan [10]. Anai-anai mencari makan, seperti spesies genus Reticulitermes bergerak melalui tanah untuk meluaskan julat koloni mereka dan mengakses pelbagai tempat makan, yang biasanya sumber kayu yang terletak di permukaan tanah [11]. Rangkaian bawah tanah koloni mereka boleh menjangkau lebih dari puluhan meter, mengandungi lebih seratus ribu individu, dan mencapai kepadatan lebih seratus koloni sehektar [12]. Mereka berkembang daripada nenek moyang dengan koloni terhad kepada sekeping kayu [13,14]. Peralihan ini akan mengakibatkan peningkatan pertemuan dengan pemangsa, patogen dan pesaing serta bertepatan dengan evolusi kasta pekerja sejati yang berdedikasi yang biasanya mengetepikan pembiakan langsung. Kebersihan yang lebih baik mungkin menjadi kritikal untuk peralihan ini dan radiasi seterusnya dan kejayaan ekologi anai-anai semasa, yang sumbangannya kepada pereputan kayu boleh melebihi penguraian mikrob [15,16] dan yang kelihatan bersedia untuk berkembang pesat secara global apabila suhu meningkat [17] . Semasa peralihan kepada mencari makanan, kelonggaran tekanan terpilih pada gen imun semula jadi bertepatan dengan intensifikasinya pada dua gen yang menghasilkan protein antikulat yang dirembeskan [6]. Protein ini nampaknya penting untuk penyingkiran konidia kulat dengan alogrooming. Tekanan selektif yang berbeza pada komponen mekanisme pertahanan semula jadi dan sosial individu pada masa lalu menunjukkan bahawa terus ada pertukaran adaptif dalam pergantungan anai-anai pada imuniti semula jadi dan sosial individu untuk perlindungan daripada penyakit kulat. Ini disokong oleh pemerhatian bahawa ekspresi gen imun semula jadi lebih rendah dalam kumpulan berbanding individu pekerja Reticulitermes yang telah terdedah kepada Metarhizium conidia [18]. Allogrooming mengurangkan keperluan untuk mengaktifkan sistem imun dalaman. Dalam kajian ini, kami menyiasat perbezaan dalam imuniti sosial dan semula jadi dalam dua spesies anai-anai bawah tanah terhadap dua spesies tempatan Metarhizium yang bertemu satu sama lain secara semula jadi. Spesies Metarhizium telah diasingkan daripada tanah di bawah atau di sebelah balak di mana anai-anai dikumpulkan. Dua spesies anai-anai, Reticulitermes virginicus dan Reticulitermes flavipes telah dikumpulkan dari lokasi yang sama di Maryland. Walaupun mereka kelihatan agonistik, mereka sering dijumpai mencari makan bersebelahan atau kadang-kadang dalam log yang sama. Keagresifan interspesifik antara pekerja kerap mengakibatkan luka maut dalam ujian agonisme hidangan Petri [19]. Aktiviti antikulat pencuci kutikula pekerja R. virginicus sebelum ini telah terbukti lebih berkesan untuk menyahaktifkan Metarhizium conidia daripada pencucian daripada pekerja R. flavipes [20]. Ini menunjukkan bahawa walaupun kedua-dua anai-anai ini berkait rapat dan menghadapi patogen yang sama, mereka mungkin berbeza dalam pergantungan mereka pada imuniti semula jadi atau sosial individu. Kami menggunakan pendekatan perbandingan untuk menyiasat sama ada terdapat perbezaan antara pergantungan dan penyepaduan imuniti sosial dan semula jadi dan sama ada terdapat potensi pertukaran antara kedua-duanya. Imuniti sosial yang dipertingkatkan mungkin dikaitkan dengan mekanisme imun semula jadi yang kurang berkesan, yang mungkin termasuk potensi antikulat yang dirembes, dan sebaliknya. Imuniti individu yang lebih lemah boleh dikompensasikan oleh imuniti sosial yang lebih berkesan. Kemandirian pekerja anai-anai instar lewat dalam kumpulan dua belas, berpasangan atau bujang telah disiasat selepas mereka dicabar dengan kulat sama ada daripada Metarhizium robertsii atau Metarhizium brunneum. Sekumpulan 12 pekerja telah terdedah secara ringkas kepada dos kulat yang tinggi. Kepekatan yang berpotensi membawa maut ini menyebabkan tindak balas tingkah laku yang serupa dengan yang diperhatikan apabila anai-anai menemui mayat bersporulasi, dalam beberapa kes menimbulkan peningkatan yang ketara dalam tindak balas penggera yang mengakibatkan pergerakan ayunan membujur yang cepat, LOM [21-23]. Kekerapan LOM dalam 12 minit pertama selepas anai-anai terdedah kepada konidia daripada strain dan spesies Metarhizium yang berbeza dikaitkan secara positif dengan kekerapan serangan allogrooming. LOM, yang lebih mudah untuk diukur daripada allogrooming, oleh itu boleh digunakan sebagai ukuran tidak langsung tahap allogrooming. Pengesanan kulat nampaknya tertangguh sehingga permukaan anai-anai tercemar dengan konidia, yang menunjukkan bahawa reseptor pengecaman yang dikaitkan dengan bahagian mulut adalah penting untuk permulaan penggera yang tinggi dan alogrooming. Sepasang dan tunggal terdedah kepada dos rendah kulat yang lebih berkemungkinan mencerminkan tahap pendedahan yang dihadapi anai-anai apabila mereka membina galeri melalui tanah, berbeza dengan pertemuan langsung dengan mayat bersporulasi. Tidak seperti anai-anai tunggal, pasangan anai-anai hampir tahan sepenuhnya terhadap jangkitan maut pada dos ini selama 10 hari. Untuk mengasingkan imuniti sosial dan semula jadi pada dos yang rendah ini, sepasang anai-anai dipisahkan pada titik masa yang berbeza sejurus selepas cabaran dengan konidia kulat, dan kemandirian pasangan ini dibandingkan dengan individu tunggal yang tidak mempunyai peluang untuk interaksi sosial selepas cabaran kulat. Allogrooming dan LOMs diperhatikan sebelum titik masa pemisahan pasangan anai-anai. Di samping itu, aktiviti antikulat ekstrak mentah keseluruhan anai-anai telah diuji untuk menilai lagi perbezaan dalam imuniti semula jadi antara kedua-dua spesies anai-anai sebagai tindak balas kepada kedua-dua spesies kulat.
Kebaikan cistanche tubulosa-menguatkan sistem imun
2. Kaedah
2.1. Kajian Organisma
Anai-anai R. flavipes dan R. virginicus, dan kulat M. brunneum dan M. Roberts, dikumpul daripada hutan luruh pertumbuhan sekunder di Baltimore County (Pleasant Hills dan Monkton), Maryland. Spesies anai-anai telah dikenal pasti menggunakan ujian agonisme intra dan interspesifik [19] dan jujukan rRNA mitokondria [4]. Spesies Metarhizium telah diasingkan daripada sampel tanah berhampiran tapak pengumpulan anai-anai (<30 cm) using a baiting technique with Tenebrio molitor larvae [24]. The conidia and mycelia of two clonal lines of the species were used for DNA purification with a QIAGEN DNeasy Blood and Tissue kit. The 50 regions of translation elongation factor 1-alpha were PCR-amplified using PCR primers EF1T and EF2T [25]. These regions were Sanger-sequenced (Psomagen, Rockville, MD) for species identification. Foraging groups of R. flavipes and R. virginicus (>1000) dan kayu di mana mereka memberi makan dikumpulkan dan disimpan dalam bekas plastik di bawah keadaan gelap dan lembap pada suhu 25 ◦C. Anai-anai yang tergolong dalam spesies yang sama dikumpulkan dari tapak yang dipisahkan sekurang-kurangnya 60 m, yang biasanya mencukupi untuk memastikan koleksi adalah dari koloni yang berbeza [12]. Koleksi berasingan ini dirujuk sebagai koloni di bawah. Anai-anai dikumpul pada musim panas 2018 dan 2019 untuk eksperimen dengan kumpulan 12 serta eksperimen in vitro dengan ekstrak mentah anai-anai, dan pada 2021 dan 2022 untuk eksperimen dengan pasangan dan tunggal. Anai-anai digunakan dalam eksperimen masing-masing dalam tempoh 4 bulan pengumpulan. Pekerja dikeluarkan perlahan-lahan daripada kepingan kayu dan diselenggarakan dalam kumpulan cawan Petri berdiameter 12 55 mm yang dialas dengan kertas penapis lembap (Whatman 1) selama 24 jam dalam cahaya ambien sebelum digunakan untuk eksperimen kami. Ini membolehkan mereka menyesuaikan diri dengan cahaya dan membersihkan permukaan kutikula mereka daripada serpihan zarah sebelum pendedahan kulat. Kami tidak menyertakan askar kerana mereka tidak mengasuh rakan sarang, mewakili 1–2% daripada tanah jajahan, dan tidak didapati secara konsisten dalam kumpulan mencari makan.
2.2. Survivorship dan Respons Penggera untuk Kumpulan Dua Belas
Kumpulan 12 pekerja R. flavipes atau R. virginicus telah terdedah kepada dos tinggi 10 6 konidia mL−1 0.05% Tween 80 (MilliporeSigma , Burlington, MA, USA) atau 0.05% Tween 80 untuk kawalan. Tween 80 disertakan untuk membantu memecahkan gumpalan konidia semasa menyediakan penggantungan. Sehari sebelum rawatan ini, kesemua 12 anai-anai telah ditandakan dengan titik kecil cat enamel berwarna pada bahagian dorsal perut mereka supaya mereka boleh dikenal pasti secara individu. Allogrooming memang mengalihkan cat daripada beberapa individu, tetapi individu ini masih boleh dikenal pasti secara individu pada masa kematian dengan meninjau mangsa yang terselamat dan dengan variasi individu semulajadi dalam pekerja, seperti tahap pewarnaan gelap dalam perut. Anai-anai yang digunakan untuk setiap replika 12 anai-anai yang dicabar dan kawalan adalah daripada koloni yang berbeza. Lima koloni telah digunakan untuk kedua-dua R. flavipes dan R. virginicus (n=480 pekerja). Eksperimen dengan koloni M. Roberts diulang selepas tiga bulan untuk menguji konsistensi dalam survivorship. Secara keseluruhan, terdapat 60 replika 12 atau 11 anai-anai (n=709). Dalam 11 replika anai-anai mati sebelum pendedahan kulat, yang nampaknya disebabkan oleh pengendalian semasa menanda cat. Anai-anai terdedah kepada konidia yang disediakan daripada budaya klon sama ada M. Roberts atau M. brunneum. Pekerja telah ditambah ke dalam tiub 1.5 mL yang mengandungi 500 µL pencairan konidia, atau 0.05% Tween 80 untuk kawalan, dengan corong plastik kecil dan digoncang perlahan-lahan selama 10 saat untuk memastikan rendaman lengkap. Pekerja kemudiannya didepositkan ke atas kertas turas untuk menyerap cecair berlebihan, dipindahkan ke piring Petri berdiameter 55 mm yang dialas dengan kertas turas lembap (Whatman 1), dan video dirakam selama 12 minit. Kematian dipantau setiap hari selama dua minggu. Individu yang mati dibuang, permukaannya disterilkan dengan 70% etanol, dan diletakkan di atas kertas penapis lembap dalam piring Petri (55 mm) dikekalkan pada 24 ◦C dan kelembapan 100% untuk pengesahan jangkitan Metarhizium (pertumbuhan muscardine hijau selepas 3-4 hari). Jumlah bilangan LOM yang diperhatikan dalam video selama 12 minit telah dijaringkan untuk setiap anai-anai. LOM berlangsung antara 2-7 s dan terpaksa dihentikan dan kemudian disambung semula untuk dijaringkan sebagai acara berasingan [23].
2.3. Survivorship dan Allogrooming untuk Pasangan dan Singleton
Kemandirian pasangan anai-anai dibandingkan dengan anai-anai tunggal selepas terdedah kepada dos rendah (104 konidia mL−1 ) konidia yang tidak menyebabkan kematian yang berlebihan dan berkemungkinan mencerminkan kepekatan yang dihadapi anai-anai apabila bergerak melalui tanah [10] . Pasangan dan singleton dibandingkan untuk mengukur kelangsungan hidup yang diberikan oleh mekanisme pertahanan sosial. Kumpulan 12 pekerja pada mulanya dicabar dengan atau tanpa kulat seperti yang diterangkan di atas, kecuali penggantungan konidia kira-kira 107 konidia mL−1 disediakan dalam 0.1% Tween 80 dan dipusingkan dengan kuat sebelum dicairkan dengan air steril kepada 104 konidia mL−1. Tween 80 tidak termasuk dalam pencairan kerana penggantungan konidia individu boleh dikekalkan pada kepekatan rendah dan kerana surfaktan boleh mengganggu lekatan konidia pada kutikula. Individu ini tidak bertanda cat. Sejurus selepas rawatan dan sebelum anai-anai berpeluang berinteraksi, mereka dibahagikan kepada pasangan atau tunggal dalam telaga 24-plat kultur sel plastik telaga (CELLTREAT Scientific, Pepperell, MA). Setiap perigi dialas dengan kertas turas yang telah dibasahi (Whatman 1). Bagi setiap gabungan anai-anai/kulat (n=4), empat pasang anai-anai telah diasingkan kepada tunggal selepas 15 minit, 2 jam, 5.5 jam, 8 jam dan 27 jam (n=160), dan untuk setiap kombinasi anai-anai/kulat 12 anai-anai yang tidak pernah berpeluang berinteraksi telah diasingkan kepada anai-anai tunggal yang dirawat atau dikawal (n=96). Anai-anai individu ini juga dibahagikan kepada 24-plat perigi yang dialas dengan kertas penapis. Kematian anai-anai kemudiannya dipantau selama sepuluh hari, dan individu yang mati telah dikeluarkan untuk pengesahan jangkitan oleh Metarhizium. Satu koloni telah digunakan untuk kedua-dua R. flavipes yang dirawat dengan M. robertsii atau M. brunneum dan R. virginicus dirawat dengan M. robertsii atau M. brunneum (n=256). Enam pasangan yang tidak dirawat juga telah dikekalkan dalam 24-plat perigi selama 10 hari untuk setiap spesies. Eksperimen yang berasingan dengan koloni yang sama memfokuskan pada merekodkan alogrooming sebelum masa pemisahan pasangan pada 15 min, 2 h, 5.5 h, 8 h, dan 27 h. Enam pasangan berbeza bagi setiap spesies anai-anai telah dirawat dengan setiap kulat atau air untuk kawalan dan dijaringkan untuk allogrooming selama 15 minit sebelum titik masa pengasingan (n=180). Peristiwa allorooming dijaringkan apabila sentuhan mulut ke badan antara dua anai-anai melibatkan pergerakan bahagian mulut (palps), dan tempoh setiap peristiwa allogrooming tanpa gangguan direkodkan. Allogrooming telah dijaringkan oleh seorang pemerhati tunggal yang buta terhadap rawatan yang telah diterima oleh anai-anai. LOM juga dijaringkan tetapi boleh diabaikan dan tidak digunakan dalam analisis. Penjagaan diri tidak diperhatikan.
Kebaikan cistanche tubulosa-menguatkan sistem imun
2.4. Aktiviti Antikulat In Vitro
Dua belas pekerja dari koloni 5 R. flavipes atau R. virginicus telah didiamkan sejuk dalam 1.5 mL tiub Eppendorf, dan 120 µL air steril yang sejuk telah ditambahkan pada setiap tiub. Pekerja dari kedua-dua spesies yang digunakan dalam kajian ini adalah kira-kira saiz yang sama (panjang 4-5 mm). Anai-anai dihomogenkan dengan alu plastik, dan ekstrak diempar pada 16,000 g selama 2 minit. Supernatan telah disterilkan dengan penapis Ultrafree 0.22 µm (MilliporeSigma, Burlington, MA, USA). Sepuluh µL turasan diinkubasi selama 24 jam dengan sepuluh µL yang mengandungi 100 konidia M. robertsii atau M. brunneum dan 20 µL 100 µg mL−1 ampicillin untuk mengelakkan pencemaran bakteria. Kawalan termasuk 10 µL air steril sebagai ganti ekstrak mentah. Dua ulangan untuk setiap campuran diinkubasi disebarkan pada agar dextrose kentang (PDA) ditambah dengan 50 µg mL−1 ampicillin (60 mm cawan Petri) dan diinkubasi di RT dalam gelap selama 4-5 hari. Aktiviti antikulat diukur dengan membandingkan unit pembentuk koloni (CFU) dalam rawatan ekstrak mentah kepada kawalan.
2.5. Perangkaan
Anggaran Kaplan-Meier bagi masa kemandirian purata digunakan untuk perbandingan berpasangan bagi kemandirian. Nisbah bahaya kematian (HRs) dikira dengan analisis regresi Cox. Kami menggunakan regresi Cox untuk menyiasat perbezaan dalam kematian antara individu yang mempamerkan LOM atau tidak mempamerkan LOM semasa mengawal pembolehubah kategori lain (rawatan atau kawalan kulat, spesies kulat, spesies anai-anai, koloni asal). LOM dikategorikan sebagai tidak hadir atau hadir pada individu kerana kekerapan outlier dan kekurangan normal. Dalam analisis kelangsungan hidup dengan pasangan anai-anai dan tunggal, HR adalah berdasarkan perbandingan antara pasangan yang dirawat konidia (dipisahkan pada titik masa yang berbeza) dan tunggal yang dirawat konidia. Oleh itu, HR ini menyediakan ukuran kelangsungan hidup yang diberikan oleh mekanisme pertahanan sosial sambil mengawal mekanisme pertahanan individu. Perkaitan antara masa yang dihabiskan sebagai pasangan dan perubahan dalam HR diukur dengan korelasi Pearson. Pengagihan LOM antara rawatan yang berbeza dibandingkan dengan ujian Kruskal-Wallis dengan pembetulan Bonferroni untuk ujian berbilang untuk perbandingan berpasangan. Purata CFU atau tempoh acara alogrooming dibandingkan dengan ujian ANOVA dengan pembetulan Bonferroni untuk perbandingan berpasangan. Kami menggunakan IBM SPSS Statistics (versi 28) untuk ujian statistik.
3. Keputusan
3.1. Kemandirian dan Penggera Kumpulan Dua Belas Tercabar
The Cox regression model of survivorship that included categorical variables for fungal treatment, LOMs, termite species, fungi species, and a colony of origin was significant (Chi-square = 246.29, df = 12, p < 0.001). Challenged termites were 9.28 times more likely to die than untreated termites (Wald = 143.05, p < 0.001) while controlling for the other variables. Termites that displayed LOMs (n = 422) were 1.52 times more likely to survive (Wald = 8.30, p = 0.004) than individuals that did not display LOMs (n = 286). R. virginicus workers were 2.08 times more likely to die than R. flavipes workers (Wald = 6.31, p = 0.012). Fungal species did not contribute significantly to the model (Wald = 0.841, p = 0.359). The colony of origin contributed significantly to the model (Wald = 50.16, p < 0.001), which is consistent with previously reported colony variation in Reticulitermes resistance to Metarhizium infections [24]. Survivorship did not differ between the same colony when the experiment was repeated 3 months later with workers that were exposed to M. Roberts (Breslow pairwise comparison, Chi-square = 0.342, p = 0.559). Most deaths in the challenged termites were attributable to Metarhizium infection (>90% pengesahan). Bagi anai-anai yang dicabar dengan M. Roberts, 129 kematian telah diperhatikan dalam kalangan 237 individu dan purata masa hidup untuk R. virginicus (9.10 hari) adalah jauh lebih rendah berbanding R. flavipes (10. 98 hari)(Breslow=10.05, df=1, p=0.002) (Rajah 1). Bagi anai-anai yang dicabar dengan M. brunneum, 79 kematian telah diperhatikan dalam kalangan 120 individu dan purata masa hidup untuk R. flavipes (9.70 hari) adalah lebih rendah daripada R. virginicus (10.68 hari) tetapi tidak ketara (Breslow=2 .74, df=1, p=0.098). Taburan LOM (Rajah 2) di kalangan rawatan kulat dan kawalan adalah berbeza dengan ketara (Kruskal–Wallis=176.897, df=5, p < 0.001). Kekerapan LOM tidak berbeza dengan ketara antara rawatan M. brunneum dan kawalan masing-masing untuk R. flavipes (p=0.097) dan R. virginicus (p=1 diselaraskan}.000 ). Walau bagaimanapun, kekerapan LOM adalah lebih besar untuk rawatan M. Roberts berbanding kawalan masing-masing untuk R. flavipes (p < 0.001 diselaraskan) dan R. virginicus (p < 0.001 diselaraskan) (Rajah 2). Untuk rawatan M. Roberts, kekerapan R. flavipes LOMs adalah jauh lebih besar daripada R. virginicus LOMs (dilaraskan p <0.001). Walau bagaimanapun, untuk rawatan M. brunneum, kekerapan R. flavipes LOMs tidak jauh berbeza daripada R. virginicus LOMs (p=1 diselaraskan}.000). Berbeza dengan M. brunneum, kumpulan 12 anai-anai yang dicabar dengan M. Roberts conidia menghasilkan tindak balas tingkah laku yang ketara.
3.2. Kemandirian Pasangan Tercabar dan Bujang
Kemandirian pasangan anai-anai yang dipisahkan pada masa berbeza sejurus selepas cabaran patogen dibandingkan dengan kemandirian ikan tunggal yang dicabar dengan nisbah bahaya kematian (HR). HR 1 sepadan dengan kemandirian yang sama dalam pasangan yang dipisahkan dan tunggal selama sepuluh hari. Nilai kurang daripada satu menunjukkan bahawa terdapat pengurangan kematian dalam pasangan yang dipisahkan berbanding dengan tunggal. Korelasi antara masa yang dihabiskan sebagai pasangan dan pengurangan dalam HR hanya ketara untuk R. flavipes yang dirawat dengan sama ada M. Roberts (r=−0.978, p=0.{ {7}}04) atau M. brunneum (r=−0.983, p=0.003), dan bukan untuk R. virginicus yang dirawat dengan salah satu M. Roberts (r=−0.643, p=0.242) atau M. brunneum (r=−0.812, p=0.095). Ini juga ditunjukkan dalam nilai R2 daripada regresi linear yang ditunjukkan dalam Rajah 3 (masa telah diubah log untuk pengiraan korelasi Pearson dan nilai R2). Tiada kematian diperhatikan dalam pasangan yang tidak dirawat (6 pasang untuk setiap spesies anai-anai) dan satu kematian dalam 16 pasangan yang dirawat (4 pasang untuk setiap gabungan anai-anai/kulat) yang tidak pernah dipisahkan selama 10 hari.
Rajah 1. Kemandirian untuk kumpulan 12. Rf sepadan dengan R. flavipes, Rv dengan R. virginicus, Encik dengan M. robertsii dan Mb dengan M. brunneum. Perbezaan survival yang ketara untuk perbandingan berpasangan adalah berdasarkan ujian Breslow (ujian Wilcoxon umum). * Perbezaan ketara antara rawatan, NS tiada perbezaan ketara antara rawatan (m.s< 0.025 Bonferroni adjusted α). The distribution of LOMs (Figure 2) among fungal and control treatments was significantly different (Kruskal–Wallis = 176.897, df = 5, p < 0.001). The frequency of LOMs was not significantly different between M. brunneum treatments and their respective controls for R. flavipes (adjusted p = 0.097) and R. virginicus (adjusted p = 1.000). However, the frequency of LOMs was significantly greater for M. robertsii treatments compared to their respective controls for R. flavipes (adjusted p < 0.001) and R. virginicus (adjusted p < 0.001) (Figure 2). For the M. robertsii treatment, the frequency of R. flavipes LOMs was significantly greater than R. virginicus LOMs (adjusted p < 0.001). However, for the M. brunneum treatment, the frequency of R. flavipes LOMs was not significantly different from R. virginicus LOMs (adjusted p = 1.000). In contrast to M. brunneum, groups of 12 termites challenged with M. robertsii conidia resulted in a significant behavioral response.
Rajah 1. Kemandirian untuk kumpulan 12. Rf sepadan dengan R. flavipes, Rv dengan R. virginicus, Encik dengan M. robertsii dan Mb dengan M. brunneum. Perbezaan survival yang ketara untuk perbandingan berpasangan adalah berdasarkan ujian Breslow (ujian Wilcoxon umum). * Perbezaan ketara antara rawatan, NS tiada perbezaan ketara antara rawatan (m.s< 0.025 Bonferroni adjusted α). For the survivorship of pathogen-challenged single termites (Figure 4), 47 deaths were observed among 48 individuals, and the mean survival time for R. flavipes (4.21 days) was significantly lower than for R. virginicus (6.17 days)(Breslow, chi-square = 33.927, df = 1, p < 0.001). This relationship held for both species of fungi: For M. robertsii exposure, the mean survival time for R. flavipes (4.25 days) was significantly lower than for R. virginicus (5.83 days) (chi-square = 16.133, df = 1, p < 0.001); For M. brunneum exposure, the mean survival time for R. flavipes (4.17 days) was significantly lower than for R. virginicus (6.50 days) (chi-square = 20.994, df = 1, p < 0.001). 3.3. Antifungal Activity of Crude Extracts The two species of fungi were analyzed separately (the viability of conidia on PDA differs between the two species). For M. robertsii, mean colony-forming units (CFUs) among fungal and control treatments were significantly different (F = 18.08, df = 2, p < 0.001) (Figure 5a). Crude extracts of R. virginicus but not R. flavipes workers showed significant antifungal activity against M. robertsii compared to the control (adjusted p < 0.001 and p = 1.000, respectively). The antifungal activity of R. virginicus extracts against M. robertsii was significantly greater than the antifungal activity of R. flavipes extracts against M. robertsii (adjusted p < 0.001). For M. brunneum, mean CFUs (Figure 5b) among fungal and control treatments were significantly different (F = 27.26, df = 2, p < 0.001). Crude extracts of R. virginicus but not R. flavipes showed significant antifungal activity against M. brunneum compared to the control (adjusted p < 0.001 and p = 0.072, respectively). The antifungal activity of R. virginicus extracts against M. brunneum was significantly greater than the antifungal activity of R. flavipes against M. brunneum (adjusted p < 0.001).
3.3. Aktiviti Antikulat Ekstrak Mentah
Kedua-dua spesies kulat dianalisis secara berasingan (daya maju konidia pada PDA berbeza antara kedua-dua spesies). Bagi M. robertsii, min unit pembentuk koloni (CFU) antara rawatan kulat dan kawalan adalah berbeza dengan ketara (F=18.08, df=2, p < 0 .001) (Rajah 5a). Ekstrak mentah R. virginicus tetapi bukan pekerja R. flavipes menunjukkan aktiviti antikulat yang ketara terhadap M. robertsii berbanding kawalan (p < {{19} diselaraskan).001 dan p=1.{{ 10}}, masing-masing). Aktiviti antikulat ekstrak R. virginicus terhadap M. robertsii adalah jauh lebih besar daripada aktiviti antikulat ekstrak R. flavipes terhadap M. robertsii (p terlaras < 0.001). Bagi M. brunneum, purata CFU (Rajah 5b) antara rawatan kulat dan kawalan adalah berbeza dengan ketara (F=27.26, df=2, p < 0.001). Ekstrak mentah R. virginicus tetapi bukan R. flavipes menunjukkan aktiviti antikulat yang ketara terhadap M. brunneum berbanding kawalan (masing-masing p < 0.001 dan p=0.072 diselaraskan). Aktiviti antikulat ekstrak R. virginicus terhadap M. brunneum adalah jauh lebih besar daripada aktiviti antikulat R. flavipes terhadap M. brunneum (p terlaras < 0.001).
Rajah 2. Tindak balas penggera kepada cabaran kulat. Boxplots mewakili pengedaran LOM (LOM yang dijaringkan dalam 709 individu bertanda cat). Kotak sepadan dengan jarak antara kuartil atas dan bawah dari median (IQR). Misai sepadan dengan 1.5 × IQR. Bulatan dan asterisk menggambarkan outlier masing-masing melebihi 1.5 × IQR atau 3 × IQR. Huruf yang berbeza menunjukkan perbezaan yang ketara antara pengedaran untuk rawatan kulat dan kawalan (Bonferroni diselaraskan). Rf sepadan dengan R. flavipes, Rv dengan R. virginicus, Encik dengan M. robertsii dan Mb dengan M. brunneum.
3.4. Allogrooming antara Pasangan Tercabar
Kekerapan serangan alogrooming menurun dengan ketara dengan cabaran kulat (min cabaran {{0}}.55, min kawalan=8.80, t=−4.461, p < {{20}}.001). Walau bagaimanapun, purata tempoh pengagihan meningkat dengan ketara dengan cabaran kulat (min cabaran=19.01 s, min kawalan=5.62 s, t=4.876, p < 0.001). Tempoh pertembungan alogrooming untuk setiap interaksi antara pasangan anai-anai berbeza dengan ketara merentas rawatan dan kawalan (F=7.166, df=5, p < 0.001) (Rajah 6). Tempoh alogrooming bagi setiap peristiwa telah dinaikkan dengan ketara dalam pasangan R. flavipes yang dirawat dengan M. robertsii (p < 0.001 diselaraskan) atau M. brunneum (p diselaraskan=0.037) berbanding dengan kawalan tetapi tidak dalam pasangan R. virginicus yang dirawat. dengan M. robertsii (p diselaraskan=1.000) atau M. brunneum (p diselaraskan=1.000) berbanding dengan kawalan.
Rajah 3. Kemandirian dua anai-anai berbanding seekor dibandingkan dengan nisbah bahaya kematian (n=80 pasangan, 96 ekor tunggal). Rf sepadan dengan R. flavipes, Rv dengan R. virginicus, Encik dengan M. robertsii dan Mb dengan M. brunneum. Masa telah diubah log untuk pengiraan nilai R2.
Rajah 4. Kemandirian anai-anai tunggal selepas cabaran kulat (n=96). Rf sepadan dengan R. flavipes, Rv dengan R. virginicus, Encik dengan M. robertsii dan Mb dengan M. brunneum. Lihat teks untuk butiran tentang perbezaan statistik antara rawatan. Perbezaan survival yang ketara untuk perbandingan berpasangan adalah berdasarkan ujian Breslow (ujian Wilcoxon umum). * Perbezaan ketara antara rawatan (p < 0.025 Bonferroni dilaraskan ).
Rajah 5. Aktiviti antikulat ekstrak mentah terhadap M. robertsii (a) dan M. brunneum (b). Nilai di atas bar mewakili min CFU (± SD), dan huruf yang berbeza menunjukkan perbezaan yang ketara (Bonferroni diselaraskan). Rf sepadan dengan R. flavipes dan Rv dengan R. virginicus. Analisis menggunakan dua replika daripada 5 koloni daripada setiap spesies anai-anai, 6 replika untuk kawalan Rf, dan 2 replika untuk kawalan Rv.
Rajah 6. Tempoh alogrooming setiap interaksi (n=161 acara allogrooming). Nilai di atas bar mewakili tempoh purata interaksi alogrooming (± SD), dan kombinasi huruf yang berbeza menunjukkan perbezaan yang ketara (Bonferroni diselaraskan). Rf sepadan dengan R. flavipes, Rv dengan R. virginicus, Encik dengan M. robertsii, dan Mb dengan M. brunneum.
4. Perbincangan
R. flavipes bergantung pada mekanisme sosial pertahanan terhadap patogen kulat tempatan pada tahap yang lebih besar daripada R. virginicus. Bagi pekerja R. flavipes yang dicabar dengan sama ada spesies Metarhizium, terdapat korelasi negatif yang kuat antara masa dua anai-anai dihabiskan bersama dan kebarangkalian mereka mati berbanding anai-anai tunggal yang dicabar. Nisbah bahaya kematian berbanding anai-anai tunggal yang dicabar telah dikurangkan separuh dalam kira-kira dua jam (Rajah 3). Oleh itu, interaksi sosial awal kelihatan penting untuk kelangsungan hidup apabila pekerja R. flavipes menghadapi kepekatan rendah Metarhizium conidia. Sebaliknya, pekerja R. virginicus menunjukkan korelasi yang lemah antara masa dua anai-anai dihabiskan bersama dan kebarangkalian mereka mati. Juga, berbeza dengan R. virginicus, pasangan pekerja R. flavipes dengan ketara meningkatkan tempoh serangan allogrooming selepas cabaran kulat (Rajah 6). Pengesanan konidia pada kutikula rakan sarang berkemungkinan menyebabkan peningkatan ini. Penyingkiran konidia yang lebih berkesan daripada permukaan kutikula dengan meningkatkan tempoh serangan allogrooming nampaknya menyumbang kepada imuniti sosial unggul R. flavipes. Keputusan kami juga menunjukkan bahawa R. virginicus bergantung pada mekanisme pertahanan semula jadi individu terhadap patogen kulat tempatan pada tahap yang lebih besar daripada R. flavipes. Kematian pekerja R. flavipes tunggal yang dicabar dengan salah satu daripada spesies Metarhizium adalah jauh lebih tinggi daripada kematian pekerja R. virginicus (Rajah 4). Aktiviti antikulat pencuci kutikula pekerja R. virginicus terhadap Metarhizium conidia sebelum ini telah terbukti lebih kuat daripada aktiviti pekerja R. flavipes [20]. Aktiviti antikulat ekstrak mentah keseluruhan anai-anai juga lebih kuat dalam R. virginicus berbanding R. flavipes (Rajah 5). Ekstrak ini termasuk sebatian daripada simbion usus, yang, bersama-sama dengan sebatian antikulat anai-anai, juga boleh menyumbang untuk menghapuskan konidia yang tertelan [26]. Variasi dalam nisbah bahaya kematian dan korelasinya yang lemah dengan masa pemisahan dalam pekerja R. virginicus adalah konsisten dengan pergantungan yang lebih besar pada mekanisme pertahanan imun semula jadi yang berbeza-beza di kalangan individu dan bukannya mekanisme imun sosial. R. flavipes juga menunjukkan pergantungan yang lebih besar pada imuniti sosial apabila kumpulan 12 pekerja terdedah secara ringkas kepada kepekatan M. robertsii conidia yang tinggi. Sejurus selepas terdedah kepada M. robertsii conidia, kedua-dua spesies anai-anai menunjukkan LOM yang tinggi. Aktiviti penggera ini adalah lebih tinggi dengan ketara dalam R. flavipes berbanding R. virginicus (Rajah 2), dan rintangan kepada jangkitan maut juga jauh lebih tinggi dalam R. flavipes berbanding R. virginicus (Rajah 1). Sebaliknya, terdapat tindak balas penggera yang tinggi tetapi lemah terhadap M. brunneum conidia. Selaras dengan keputusan ini, sebelum ini telah ditunjukkan bahawa penggera yang tinggi dalam R. flavipes sebagai tindak balas kepada konidia daripada strain dan spesies Metarhizium yang berbeza dikaitkan dengan allogrooming dan survival yang tinggi [23]. Pekerja R. flavipes mungkin mempunyai ambang yang lebih rendah daripada pekerja R. virginicus untuk mengenali dan bertindak balas secara kolektif dan berkesan terhadap pencemaran kutikula dengan M. robertsii conidia. M. robertsii, yang merupakan spesies Metarhizium yang paling lazim di tapak kajian kami [24], mungkin mewakili ancaman kepada R. flavipes yang memerlukan tindak balas imun sosial yang kuat kerana anai-anai ini mempunyai pertahanan imun semula jadi yang agak lemah terhadapnya. Keberkesanan sebatian antikulat yang dikaitkan dengan rembesan kelenjar air liur mungkin penting untuk pertahanan individu yang diperhatikan dalam kajian ini [20]. Sebatian ini terdapat pada permukaan pekerja sebelum cabaran kulat kerana ia dinyatakan secara konstitutif dan sentiasa disebarkan oleh tahap asas alogrooming, yang oleh itu mengintegrasikan pertahanan individu dan sosial. Gestalt ini mungkin termasuk termisin peptida antikulat kecil seperti defensin, yang dirembeskan ke dalam kelenjar air liur dan sangat penting untuk pertahanan terhadap jangkitan maut oleh Metarhizium [27]. Kajian R. flavipes dan R. virginicus dari tapak pengumpulan yang sama di Maryland yang digunakan dalam kajian ini mendedahkan bahawa termicin baru-baru ini menghadapi sapuan terpilih yang mengakibatkan pengurangan polimorfisme nukleotida, dan pengurangan ini lebih besar dalam R. flavipes daripada R. virginicus [28].
cistanche tubulosa-meningkatkan sistem imun
Sapuan mungkin telah dan mungkin berterusan, lebih teruk untuk R. flavipes kerana R. virginicus mempunyai mekanisme imun semula jadi yang lebih berkesan yang mengurangkan pergantungannya pada termisin untuk pertahanan terhadap wabak kulat baru-baru ini. Sebagai alternatif, kekangan penyesuaian terhadap evolusi anai-anai (kekurangan variasi genetik) mungkin menyebabkan R. flavipes mempunyai senjata yang lebih lemah dalam menghadapi wabak kulat baru. Kekangan terhadap perubahan adaptif dalam termicin di bawah tekanan terpilih yang kuat juga jelas dalam Nasutitermes Australia [29]. Proses stokastik pertindihan gen nampaknya telah melepaskan kekangan ini dalam keturunan nasute yang berbeza, yang mengakibatkan evolusi berulang dua termisin dengan cas molekul yang berbeza. Ini mungkin telah memberi manfaat kepada pertahanan antikulat kerana dua terminal dengan sifat cas yang berbeza menyekat peluang untuk evolusi rintangan kulat kepada mereka. Anai-anai yang mempamerkan penggera (LOM) selepas terdedah kepada dos konidia yang tinggi berkemungkinan kecil untuk mati dalam tempoh dua minggu berbanding individu yang tidak menunjukkan penggera. LOM berkorelasi positif dengan pengagregatan pekerja R. flavipes dan alogrooming [23], yang menunjukkan bahawa individu yang menunjukkan penggera dalam kajian ini meminta lebih banyak dandanan daripada rakan sarang. LOM jarang dilaporkan dalam penyelidikan yang menyiasat jangkitan Metarhizium dalam anai-anai dan telah didiskaunkan sebagai memainkan peranan dalam memberi isyarat pendedahan patogen [30]. Walau bagaimanapun, ia mungkin terlepas kerana ia tidak berlaku pada individu terpencil, tidak banyak ditimbulkan oleh strain dan spesies Metarhizium tertentu, mengambil masa kira-kira 3 minit selepas cabaran sebelum ia meningkat, dan reda selepas kira-kira 30 minit [22,23]. Keputusan kami mencadangkan bahawa LOM menyampaikan amaran kecemasan selepas terdedah kepada dos konidia yang tinggi, yang dikesan semasa alogrooming. Walau bagaimanapun, LOM tidak diperlukan untuk tindak balas tingkah laku proaktif kerana tempoh alogrooming meningkat selepas pendedahan dos rendah apabila LOM diabaikan.
5. Kesimpulan
LOM nampaknya merupakan sebahagian daripada tindak balas kecemasan terhadap pencemaran kutikula berat yang menggunakan komunikasi rangkaian untuk mempercepat penyingkiran dan pemusnahan kebanyakan konidia sebelum mereka mempunyai peluang untuk melekat dan bercambah dengan kukuh, yang mengambil masa kira-kira 12 jam [31]. Tindakan kecemasan ini berkemungkinan besar sangat mahal. Imuniti sosial yang dipertingkatkan dalam R. flavipes sebagai tindak balas kepada M. robertsii mungkin merupakan pertukaran adaptif yang R. virginicus tidak perlu lakukan pada tahap yang sama kerana ia mempunyai mekanisme imun semula jadi yang lebih berkesan. Apabila berhadapan dengan tahap pendedahan patogen yang rendah yang mesti dihadapi oleh pekerja mencari makan secara rutin, alogrooming juga nampaknya mengimbangi mekanisme imun semula jadi yang lemah.
Rujukan
1. Cremer, S.; Tarik, CD; Fuerst, MA Kekebalan sosial: Kemunculan dan evolusi perlindungan penyakit peringkat koloni. Annu. Rev. Entomol. 2018, 63, 105–123. [CrossRef] [PubMed] 2. Cremer, S.; Armitage, SA; Schmid-Hempel, P. Kekebalan sosial. Curr. biol. 2007, 17, R693–R702. [CrossRef] [PubMed]
3. Evans, JD; Aronstein, K.; Chen, YP; Hetru, C.; Imler, JL; Jiang, H.; Kanost, M.; Thompson, GJ; Zou, Z.; Hultmark, D. Laluan imun dan mekanisme pertahanan dalam lebah madu Apis mellifera. Serangga Mol. biol. 2006, 15, 645–656. [CrossRef] [PubMed]
4. Harpur, BA; Zayed, A. Evolusi dipercepatkan protein imuniti semula jadi dalam serangga sosial: Evolusi penyesuaian atau kekangan santai? Mol. biol. Evol. 2013, 30, 1665–1674. [CrossRef] [PubMed]
5. Beliau, S.; Sieksmeyer, T.; Che, Y.; Mora, MAE; Stiblik, P.; Banasiak, R.; Harrison, MC; Šobotník, J.; Wang, Z.; Johnston, PR; et al. Bukti untuk mengurangkan kepelbagaian dan aktiviti gen imun semasa evolusi anai-anai. Proc. R. Soc. Ser. B 2021, 288, 20203168. [CrossRef]
6. Bulmer, MS; Stefano, AM Anai-anai eusosialiti dan tekanan terpilih yang berbeza pada imuniti sosial dan semula jadi. perangai. Ecol. Sociobiol. 2022, 76, 1–12. [CrossRef]
7. Yanagawa, A.; Shimizu, S. Ketahanan anai-anai, Coptotermes formosanus Shiraki kepada Metarhizium anisopliae kerana dandanan. BioControl 2007, 52, 75–85. [CrossRef]
8. Rosengaus, RB; Traniello, JF; Bulmer, MS Ekologi, tingkah laku dan evolusi rintangan penyakit dalam anai-anai. Dalam Biologi Anai-anai: Sintesis Moden; Bignell, DE, Roisin, Y., Lo, N., Eds.; Springer: London, UK, 2011; ms 165–192.
9. Zhukovskaya, M.; Yanagawa, A.; Forschler, BT Tingkah laku dandanan sebagai mekanisme pertahanan penyakit serangga. Serangga 2013, 4, 609–630. [CrossRef]
10. Milner, RJ Pemilihan dan pencirian strain Metarhizium anisopliae untuk mengawal serangga tanah di Australia. Dalam Kawalan Biologi Belalang dan Belalang; Lomer, CJ, Sebelum, C., Eds.; CAB Antarabangsa: Wallingford, UK, 1991; ms 200–207.
11. Traniello, JF; Leuthold, RH Tingkah laku dan ekologi mencari makanan dalam anai-anai. Dalam Anai-anai: Evolusi, Sosialiti, Simbiosis, Ekologi; Abe, T., Bignell, DE, Higashi, M., Higashi, T., Abe, Y., Eds.; Springer: Dordrecht, Belanda, 2000; ms 141–168.
12. Vargo, E.; Husseneder, C. Biologi anai-anai bawah tanah: Pandangan daripada kajian molekul Reticulitermes dan Coptotermes. Annu. Rev. Entomol. 2009, 54, 379–403. [CrossRef]
13. Abe, T. Evolusi jenis hidupan dalam anai-anai. Dalam Evolusi dan Penyesuaian Bersama dalam Komuniti Biotik; Kowana, S., Connell, JH, Hidaka, T., Eds.; Universiti Tokyo Press: Tokyo, Jepun, 1987; ms 128–148.
14. Shellman-Reeve, JS Spektrum eusosialiti dalam anai-anai. Dalam Evolusi Tingkah Laku Sosial dalam Serangga dan Arachnid; Choe, JC, Crespi, BJ, Eds.; Cambridge University Press: Cambridge, UK, 1997; ms 52–93.
15. Griffiths, HM; Eggleton, P.; Hemming-Schroeder, N.; Swinfield, T.; Woon, JS; Allison, SD; Coomes, DA; Ashton, LA; Parr, CL Fluks karbon dan dinamik hutan: Peningkatan penguraian kayu mati dalam celah kanopi pokok-pokok hutan hujan tropika. Glob. Chang. biol. 2001, 27, 1601–1613. [CrossRef]
16. Guo, C.; Tuo, B.; Ci, H.; Yan, ER; Cornelissen, JH Maklum balas dinamik antara ciri fungsi pokok, populasi anai-anai dan perolehan kayu mati. J. Ecol. 2021, 109, 578–1590. [CrossRef]
17. Zanne, AE; Flores-Moreno, H.; Powell, JR; Cornwell, WK; Dalling, JW; Austin, AT; Classen, AT; Eggleton, P.; Okada, KI; Parr, CL; et al. Kepekaan anai-anai terhadap suhu menjejaskan kadar pereputan kayu global. Sains 2022, 377, 1440–1444. [CrossRef] [PubMed]
18. Liu, L.; Wang, W.; Liu, Y.; Matahari, P.; Lei, C.; Huang, Q. Pengaruh tingkah laku allogrooming pada imuniti semula jadi individu dalam anai-anai bawah tanah Reticulitermes chinensis (Isoptera: Rhinotermitidae). J. Sains Serangga. 2019, 19, 6. [CrossRef] [PubMed]
19. Polizzi, JM; Forschler, BT Intra-dan agonisme interspesifik dalam Reticulitermes flavipes (Kollar) dan R. virginicus (Bank) dan kesan arena dan saiz kumpulan dalam ujian makmal. Insectes Sociaux 1998, 45, 43–49. [CrossRef]
20. Hamilton, C.; Lay, F.; Bulmer, MS Rembesan prophylactic anai-anai bawah tanah dan pertahanan antikulat luaran. J. Fisiol Serangga. 2011, 57, 1259–1266. [CrossRef]
21. Rosengaus, RB; Jordan, C.; Lefebvre, ML; Traniello, JFA Tingkah laku penggera Patogen dalam anai-anai: Satu bentuk komunikasi baharu dalam serangga sosial. Sci. Nat. 1999, 86, 544–548. [CrossRef]
22. Myles, TG Penggera, pengagregatan dan pertahanan oleh Reticulitermes flavipes sebagai tindak balas kepada pemencil Metarhizium anisopliae yang wujud secara semula jadi. Sosiobiologi 2002, 40, 243–256.
23. Bulmer, MS; Franco, BA; Fields, EG Penggera sosial anai-anai bawah tanah dan tindak balas kebersihan terhadap patogen kulat. Serangga 2019, 10, 240. [CrossRef]
24. Denier, D.; Bulmer, MS Variasi dalam kerentanan anai-anai bawah tanah kepada jangkitan maut oleh pengasingan tanah Metarhizium tempatan. Insectes Sociaux 2015, 62, 219–226. [CrossRef]
25. Bischoff, JF; Rehner, SA; Humber, RA Filogeni multilocus dari keturunan Metarhizium anisopliae. Mycologia 2018, 101, 512–530. [CrossRef]
26. Rosengaus, RB; Schultheis, KF; Yalonetskaya, A.; Bulmer, MS; DuComb, WS; Benson, RW; Thottam, JP; Godoy-Carter, V. Symbiont -1, 3-glukanase dalam serangga sosial: Mutualisme melangkaui pemakanan. Depan. mikrobiol. 2014, 5, 607. [CrossRef] [PubMed]
27. Hamilton, C.; Bulmer, MS Pertahanan antikulat molekul dalam anai-anai bawah tanah: Gangguan RNA mendedahkan secara in vivo peranan terminal dan GNBP terhadap patogen yang ditemui secara semula jadi. Dev. Komp. Immunol. 2012, 36, 372–377. [CrossRef] [PubMed]
28. Bulmer, MS; Lay, F.; Hamilton, C. Evolusi penyesuaian dalam peptida antikulat anai-anai bawah tanah. Serangga Mol. biol. 2010, 19, 669–674. [CrossRef] [PubMed]
29. Bulmer, MS; Crozier, RH Duplikasi dan mempelbagaikan pemilihan antara peptida antikulat anai-anai. Mol. biol. Evol. 2004, 21, 2256–2264. [CrossRef]
30. Moran, MN; Aguero, CM; Eyer, PA; Vargo, EL Strategi menyelamat dalam anai-anai: Pekerja yang terdedah kepada patogen kulat disepadukan semula ke dalam koloni. Depan. Ecol. Evol. 2022, 10, 840223. [CrossRef]
31. Davis, HE; Meconcelli, S.; Radek, R.; McMahon, DP Anai-anai membentuk tindak balas tingkah laku kolektif mereka berdasarkan peringkat jangkitan. Sci. Rep. 2018, 8, 14433. [CrossRef]
