Pemindahan Buah Pinggang

Hubungi:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

PENGENALAN

Buah pinggangPemindahanadalah pilihan terbaik untuk rawatan peringkat akhir penyakit buah pinggang kronik. Pada masa ini, penolakan pengantaraan antibodi (AMR), yang dicirikan oleh kehadiran antibodi khusus penderma (DSA) yang diarahkan kepada antigen leukosit manusia (HLA), telah muncul sebagai penyebab utama kerosakan kronik pada cantuman buah pinggang, yang sebahagian besarnya mengehadkan kelangsungan hidup jangka panjang rasuah. (1, 2). Walau bagaimanapun, skim sedia ada telah gagal mencapai keputusan yang menjanjikan dalam klinikalrawatan AMR (1, 3, 4). Oleh itu, terdapat keperluan mendesak untuk mengenal pasti biomarker yang berpotensi dan faktor risiko untuk AMR selepas pemindahan buah pinggang, yang penting untuk rawatan dan hasil pesakit.

Mengumpul bukti menunjukkan bahawa di bawah keadaan keradangan, sel B boleh membezakan ke dalam plasmablasts yang merembeskan antibodi dan sel B pengawalseliaan (Bregs), yang merupakan subset sel B khas yang merembeskan sitokin imunosupresif, terutamanya interleukin (IL)-10. (1, 5–7). Oleh itu, plasmablasts menghasilkan alloantibodies, menghasilkan AMR, manakala Bregs mempamerkan fungsi imunoregulasi dan membantu mendorong homeostasis imun. Oleh itu, Bregs telah dilaporkan berkait rapat dengan rintangan terhadap AMR selepas pemindahan buah pinggang (1, 8, 9).

Walaupun penanda permukaan yang berbeza dari subset Breg belum dikenal pasti pada manusia (1), kajian sebelumnya telah melaporkan empat subpopulasi biasa Bregs: memori Bregs (mBregs) ditakrifkan dengan CD19+CD24+CD27+ (10), Peralihan Bregs (tBregs) ditakrifkan dengan CD19+CD24+CD38+ (10, 11), memori yang menghasilkan IL-10 Bregs (IL-10+ mBregs) ditakrifkan dengan CD19+CD24+CD27+IL-10+ (12), dan IL-10-penghasilanBregs peralihan (IL-10+ tBregs) ditakrifkan dengan CD19+CD24+ CD38+IL-10+ (13). Laguna-Goya et al. melaporkan bahawa pengurangan tBregs dan IL-10+ tBregs dikaitkan secara positif dengan penolakan akut selepas pemindahan buah pinggang (14). Walau bagaimanapun, Zhou et al. melaporkan bahawa mBregs, bukannya tBregs, menurun dengan ketara dalam lima pesakit dengan penolakan akut pada pemindahan selepas hati (10). Tambahan pula, Shabir et al. melaporkan bahawa tBregs tidak dikaitkan dengan penolakan allograft buah pinggang pada tiga pesakit AMR (15). Memandangkan keputusan yang tidak konsisten ini, terdapat keperluan untuk menjelaskan lebih lanjut subpopulasi Breg mana yang memainkan peranan penting dalam pesakit AMR selepas pemindahan buah pinggang.

Dalam kajian ini, perkadaran empat subpopulasi Bregs beredar dibandingkan di kalangan kumpulan yang sihat, stabil (ST), dan AMR. Kemudian, biodistribution sel B, IL-10, dan chemokines dalam cantuman buah pinggang pesakit yang sihat, ST, dan AMR ditentukan. Tambahan pula, dinamik empat subpopulasi Bregs yang beredar pada pesakit ST selama 90 hari selepas pembedahan disiasat. Keputusan semasa ini, bersama-sama yang dilaporkan oleh kajian sebelumnya (1), menunjukkan bahawa peredaran IL-10+ mBregs dan IL-10+ tBregs adalah subpopulasi Breg terkemuka yang menyumbang kepada rintangan AMR.

Serbuk Cistanche tubulosaMenghalangpenyakit buah pinggang, klik di sini untuk mendapatkan sampel

Kata kunci:Breg fentyping, pemindahan buah pinggang, penolakan antibody-mediated, homeostasis, dinamik

BAHAN DAN KAEDAH

Pesakit dan Kumpulan

Semua pesakit memberikan persetujuan yang ditandatangani sebelum kajian. Kajian ini telah diluluskan oleh Jawatankuasa Etika Hospital Gabungan Pertama Universiti Zhengzhou (2018-KY-72). Nombor pendaftaran percubaan klinikal adalah ChiCTR1900022501.

Pesakit ini dibahagikan kepada tiga kumpulan: (1) kumpulan kawalan sihat (sihat, n = 9): penderma buah pinggang yang sihat dalam lingkungan 18-55 tahun (bebas daripada penyakit), yang terdiri daripada adik-beradik dan pasangan penerima; (2) penerima dengan kumpulan fungsi rasuah yang stabil (ST, n = 25): pesakit dalam tempoh 18-55 tahun, yang fungsi buah pinggangnya stabil (bebas daripada jangkitan atau penolakan sebelum dan selepas pemindahan buah pinggang) semasa tempoh susulan (≥6 bulan); (3) penerima dengan kumpulan AMR (AMR, n = 18): pesakit dalam lingkungan 18-55 tahun, yang didiagnosis dengan AMR. Cantuman buah pinggang penerima dengan ST dan AMR diperolehi daripadapenderma buah pinggang yang sihats. Diagnosis pembezaan antara kumpulan ST dan AMR disahkan oleh dua ahli patologi buah pinggang, menurut konsensus Banff 2017 (3, 16).

Darah Periferal, Tisu Buah Pinggang, dan Sampel Sel

Sampel darah periferi dari kumpulan yang sihat dikumpulkan pada pra-operasi, dan pada 1, 7, dan 14 hari selepas operasi. Sampel yang diperolehi daripada kumpulan ST dikumpulkan pada pra-operasi, dan pada 1, 7, 14, 30, dan 90 hari selepas operasi. Sampel yang diperolehi daripada kumpulan AMR dikumpulkan apabila penolakan berlaku (sebelum terapi anti-penolakan untuk AMR). Sel mononuklear darah periferi (PBMC) diasingkan dari

5 ml darah oleh Ficoll-Paque gradient centrifugation dan dipelihara dengan 10% dimethyl sulfoxide (Solarbio Inc., Beijing, China) dalam nitrogen cecair.

Spesimen biopsi buah pinggang jarum teras yang diperoleh daripada kumpulan yang sihat telah dikumpulkan sebelum pembedahan untuk biopsi buah pinggang penderma masa sifar. Spesimen biopsi buah pinggang jarum teras yang diperolehi daripada kumpulan ST dikumpulkan pada 90 hari selepas operasi selepas fungsi buah pinggang mereka stabil kerana biopsi protokol. Memandangkan kerosakan tusukan kedua fungsi buah pinggang, semua pesakit AMR menolak biopsi buah pinggang jarum teras selepas terapi anti-penolakan untuk AMR. Oleh itu, spesimen biopsi buah pinggang jarum teras dari kumpulan AMR hanya dikumpulkan apabila penolakan berlaku (sebelum terapi anti-penolakan untuk AMR). Seramai tiga penderma yang sihat, sembilan pesakit ST, dan sembilan pesakit AMR memberikan persetujuan yang ditandatangani sebelum biopsi buah pinggang jarum teras. Baki enam penderma yang sihat, 16 pesakit ST, dan sembilan pesakit AMR menolak biopsi buah pinggang jarum teras kerana takut pendarahan besar berkaitan dengan biopsi. Sel tunggal diasingkan dari spesimen biopsi buah pinggang jarum teras tiga penderma yang sihat, tiga pesakit ST, dan tiga pesakit AMR, dengan menggabungkan penceraian mekanikal dengan kemerosotan enzim matriks ekstraselular, yang mengekalkan integriti struktur tisu (Multi Tissue Dissociation Kit 1; Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Jerman). Sel-sel buah pinggang dipelihara dengan 10% dimethyl sulfoxide (Solarbio Inc., Beijing, China) dalam nitrogen cecair, dan baki spesimen biopsi buah pinggang jarum teras tertanam dalam parafin pada 4°C.

Cytometry Aliran

Sel-sel yang disimpan dalam nitrogen cecair dengan cepat dicairkan dalam mandi air yang ditetapkan pada 37 ° C selama 3 minit. Sebanyak 2-3 × 106 PBC telah diinkubasi dengan Roswell Park Memorial Institute 1640 koktel rangsangan sel pencairan (500×), yang terdiri daripada PMA (Phorbol 12-Myristate 13-Acetate), kalsium ionophore (Ionomycin), dan perencat pengangkutan protein Brefeldin A dan Monensin, (eBioscience, San Diego, CA), pada 37°C dengan 5% CO2 untuk 5 h. Sel-sel mati dikecualikan oleh pewarnaan dengan 7-Aminoactinomycin D (Thermo Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, Amerika Syarikat), dan penanda permukaan Bregs telah diwarnakan dengan antibodi berlabel fluorochrome (Brilliant Violet 421™ anti-human CD19, phycoerythrin (PE)/Cy7 anti-human CD24, Alexa FluorR647 anti-human CD27, Alexa FluorR488

CD38 anti-manusia, dan Brilliant Violet 510™ anti-human CD45; kawalan isotip yang sesuai: Brilliant Violet 421™ Mouse

IgG1 k Kawalan Isotype, Kawalan IgG2a k Isotype Tetikus PE/Cy7, Alexa FluorR647 Mouse IgG1 k Isotype Control, Alexa FluorR488 Mouse IgG1 k Kawalan Isotype, dan Violet Cemerlang

Kawalan Isotip IgG1 Tetikus 510™ k Tetikus; Biolegend, San Diego, CA,

Amerika Syarikat) selama 30 minit pada 4 ° C, dengan perlindungan dari cahaya. Untuk pewarnaan intraselular, sel-sel telah diwarnakan dengan antibodi yang menyasarkan sitokin intraselular Bregs (PE anti-human IL-10; kawalan isotip yang sesuai: PE Rat IgG1 k Isotype Control; Biolegend, San Diego, CA, Amerika Syarikat) selama 30 minit pada suhu bilik, dengan perlindungan daripada cahaya. Sel-sel berlabel dianalisis menggunakan instrumen BD Biosciences Canto II (BD Biosciences, Amerika Syarikat). Sebanyak 100,000 acara telah diperolehi di pintu limfosit. Analisis data dilakukan menggunakan perisian FlowJo (Tree Star, San Carlos, CA, Amerika Syarikat).

Immunohistochemistry

Pewarnaan Immunohistokimia CD19, IL-10, dan C-X-C motif chemokine 13 (CXCL13) dalam tisu buah pinggang telah dilakukan, masing-masing. Secara ringkas, bahagian 4 mm yang diperolehi daripada sampel tisu buah pinggang formalin-fifixed, paraffifin-embedded telah diinkubasi dengan anti-CD19 1:500 yang dicairkan, 1:1000 dicairkan antiCXCL13 (arnab anti-manusia; Abcam, Cambridge, UK), dan 1:500 dicairkan anti-IL-10 (arnab anti-manusia; Absin, Shanghai, China) antibodi utama semalaman pada 4°C, diikuti oleh Horseradish Peroxidase-conjugated 1:20,000 antirabbit kambing cair antirabbit antibodi sekunder (Abcam, Cambridge, UK) selama 1 h pada suhu bilik dan kemudian 3,3′-diaminobenzidine selama 10 minit lagi. Imej Immunohistokimia diperolehi dengan Aperio ScanScope AT Turbo (Aperio, Vista, CA). Bilangan positiviti CD19, IL-10, dan CXCL13 dijaringkan seperti berikut: 0 positif, skor = sifar; 1–5 positivities, skor = satu; 6–10 positivities, skor = dua; 11–20 positivities, skor = tiga; >20 positivities, skor = empat

Analisis Statistik

Dalam kajian kawalan kes bersarang, analisis lengkung ciri operasi penerima (ROC) dilakukan oleh MedCalc v18.11.3. Baki analisis statistik dilakukan menggunakan IBM SPSS 21.0. Data pengukuran yang biasanya diedarkan dengan homogenitas varians dinyatakan sebagai min ± sisihan piawai (x ± s) dan dianalisis oleh ujian t-sampel bebas (perbandingan antara kumpulan) atau analisis sehala varians (perbandingan antara kumpulan). Data pengukuran yang tidak mempunyai taburan normal atau homogenitas varians dinyatakan dalam median dengan julat interquartile (IQR) dan dianalisis oleh ujian Mann-Whitney U (perbandingan antara kumpulan) atau ujian Kruskal-Wallis (perbandingan antara kumpulan). Data kiraan dianalisis oleh ujian c2, ujian c2 yang diperbetulkan, atau ujian tepat Fisher, seperti yang diperlukan. Analisis langkah-langkah berulang sehala varians

digunakan pada pelbagai titik masa. Nilai P<0.05 were="" considered="" statistically="">

KEPUTUSAN

Ciri-ciri asas pesakit

Sebanyak sembilan penderma sihat, 25 pesakit ST, dan 18 pesakit AMR dimasukkan dalam kajian ini. Seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 1, jantina penerima, umur, indeks jisim badan (BMI), nefropati awal, ketidakcocokan HLA, CNIs, masa panas-iskemia, dan masa sejuk-iskemia tidak berbeza antara kumpulan, atau antara kumpulan (P > 0.05, untuk semua). Walau bagaimanapun, kejadian kedua-dua antikelas I dan anti-kelas II DSA-positif dalam kumpulan AMR adalah lebih tinggi, jika dibandingkan dengan mereka dalam kumpulan ST (P< 0.001="" for="" anti-class="" i="" dsa,="" p="">< 0.001;="" p="0.001" for="" anticlass="" ii="" dsa).="" furthermore,="" compared="" with="" st="" patients,="" amr="" patients="" had="" signifificantly="" higher="" scores="" in="" tubulitis="" (t),="" interstitial="" inflflammation="" (i),="" and="" peritubular="" capillaritis="" (ptc)="" (p="0.012" for="" t;="" p="">< 0.001="" for="" i="" and="" ptc),="" according="" to="" the="" banff="" classifification="" (normal,="" score="0;" mild,="" score="1;" moderate,="" score="2;" severe,="" score="3)" (3,="" 16)="" (supplemental="" tables="" 1="" and="">

cistanche echinacosideBagi Diabetes