Kecederaan Buah Pinggang Akibat Kehamilan Praeklampsia Pulih Selepas Bersalin dalam Model Tikus Transgenik

Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com

Sarah M. Kedziora 1,2,3,4,5, Kristin Kräker 1,2,3,4,5 , Lajos Markó1,2,3,4,5, Julia Binder 6, Meryam Sugulle 7,8, Martin Gauster 9 , Dominik N. Müller 1,2,3,4,5, Ralf Dechend 1,2,3,4,5,10, Nadine Haase 1,2,3,4,5,† dan

Florian Herse 1,2,3,4,*

1 Pusat Penyelidikan Eksperimen dan Klinikal (ECRC), Kerjasama Bersama Charité—UniversitätsmedizinBerlin dan Pusat Perubatan Molekul Max Delbruck, 13125 Berlin, Jerman;sarah.kedziora@mdc-berlin.de (SMK); kristin.kraeker@charite.de (KK); lajos.marko@charite.de (LM);dominik.mueller@mdc-berlin.de (DNM); ralf.dechend@charite.de (RD); nadine.haase@mdc-berlin.de (NH)

2 Pusat Perubatan Molekul Max Delbruck (MDC) dalam Persatuan Helmholtz, 13125 Berlin, Jerman

3 Charité-Universitätsmedizin Berlin, Ahli Korporat Freie Universität Berlin dan Humboldt-Universitätzu Berlin, 10117 Berlin, Jerman

4 Institut Kesihatan Berlin di Charité–Universitätsmedizin Berlin, 10117 Berlin, Jerman

5 DZHK (Pusat Penyelidikan Kardiovaskular Jerman), Tapak Rakan Kongsi Berlin, 13353 Berlin, Jerman

6 Jabatan Obstetrik dan Ginekologi, Universiti Perubatan Vienna, 1090 Vienna, Austria

7 Institut Perubatan Klinikal, Fakulti Perubatan, Universiti Oslo, 0318 Oslo, Norway

8 Bahagian Obstetrik dan Ginekologi, Hospital Universiti Oslo, 0450 Oslo, Norway

9 Bahagian Biologi Sel, Histologi dan Embriologi, Pusat Penyelidikan Gottfried Schatz, Universiti Perubatan Graz, 8036 Graz, Austria;

10 Helios Klinikum, 13125 Berlin, Jerman

† Pengarang-pengarang ini memberikan sumbangan yang sama kepada manuskrip.

Abstrak:

Preeclampsia (PE) is characterized by the onset of hypertension (≥140/90 mmHg) and the presence of proteinuria (>300 mg/L/24 jam air kencing) atau disfungsi organ ibu yang lain. Semasa PE manusia, kecederaan buah pinggang telah diperhatikan. Sesetengah kajian mencadangkan bahawa wanita dengan diagnosis PE mempunyai peningkatan risiko untuk mengembangkan penyakit buah pinggang di kemudian hari. Walau bagaimanapun, dalam kajian manusia, PE sebagai punca tunggal perkembangan ini tidak boleh disiasat. Di sini, kami berhasrat untuk menyiasat kesan PE terhadap kerosakan buah pinggang selepas bersalin dalam model tikus PE transgenik yang mantap. Tikus betina yang mengandungi gen manusia-angiotensinogen menghasilkan fenotip praeklampsia selepas mengawan dengan tikus jantan yang mengandungi gen manusia-renin tetapi normotensif sebelum dan selepas kehamilan. Semasa kehamilan, tikus mengalami perubahan tubular dan glomerular ringan yang dinilai oleh analisis histologi, peningkatan ekspresi gen penanda kerosakan buah pinggang sepertibuah pinggangkecederaanpenanda 1 dan faktor pertumbuhan tisu penghubung, dan albuminuria berbanding tikus jenis liar (WT) betina. Walau bagaimanapun, empat minggu selepas bersalin, kebanyakan patologi buah pinggang berkaitan PE tidak hadir, termasuk albuminuria dan ekspresi biomarker yang tinggi. Hanya pembesaran ringan gumpalan glomerular dapat dikesan. Secara keseluruhan, fungsi glomerular dan tiub terjejas semasa kehamilan dalam tikus PE transgenik. Walau bagaimanapun, hampir semua patologi ini diperhatikan semasa PE pulih selepas bersalin.

Kata kunci: preeklampsia;buah pinggangkecederaan; selepas bersalin; model tikus transgenik

Cistanche menghalang kecederaan buah pinggang

Chengdu Wecistanche boleh menyediakan produk cistanche

1. Pengenalan

Preeclampsia (PE) affects about 5–8% of all pregnancies worldwide, with a high maternal mortality rate due to complications such as eclampsia, HELLP-syndrome, or edema [1–3]. According to the International Society for the Study of Hypertension in Pregnancy, PE is characterized by the development of gestational hypertension (resting systolic blood pressure (BP) ≥ 140 and/or diastolic ≥ 90 mmHg) at or after 20 weeks of gestation in previously normotensive women [1]. Since proteinuria is present in only 75% of all cases [4], the American College of Obstetrics and Gynecology adapted guidelines for PE established in 2019 stated that "either proteinuria (>300 mg/L setiap 24-h air kencing) atau disfungsi organ ibu yang lain" sepatutnya ada [1,5]. Patologi yang mendasari PE masih belum difahami sepenuhnya tetapi asal plasenta yang menampilkan disfungsi imunologi dan perubahan vaskular memainkan peranan penting. peranan penting dengan akibat risiko kardiovaskular dan metabolik jangka panjang yang besar kepada ibu dan anak [6-9]. Pelbagai kajian melaporkan bahawa PE bukan sahaja dikaitkan dengan akutbuah pinggangkecederaan tetapi boleh membawa kepada penyakit buah pinggang yang besar dan kegagalan selepas bersalin serta di kemudian hari [10-12]. Kecederaan buah pinggang semasa PE manusia pertama kali diterangkan oleh Spargo et al. sebagai endothelin glomerular, bermakna glomeruli yang diperbesarkan dengan pemusnahan lumen kapilari [13], dikaitkan dengan hipertrofi sel endothelial atau mesangial [14]. Kehadiran sklerosis glomerular, oklusi kapilari akibat penebalan dinding kapilari glomerular, penyusupan makrofaj, dan pengurangan ketumpatan fenestrae endothelial telah diterangkan dalam wanita praeklampsia [15-18]. Perubahan struktur ini serta vasokonstriksi dan pengurangan jumlah plasma menyumbang kepada kapasiti penapisan buah pinggang yang berkurangan [15,19]. Kecederaan buah pinggang struktur yang ada semasa kehamilan praeklamptik nampaknya boleh diterbalikkan [19], manakala kesan fungsional hadir selepas bersalin dan persatuan PE dan risiko untuk perkembangan penyakit buah pinggang peringkat akhir (ESRD) di kemudian hari telah dilaporkan [ 20,21]. Terdapat bukti bahawa hipertensi kronik yang tidak dapat dikesan sebelum berlakunya kehamilan praeklampsia menyumbang kepada peningkatan risiko penyakit buah pinggang selepas bersalin pada manusia [12,20,21].

Kecederaan buah pinggang semasa kehamilan PE telah dicirikan dalam banyak model haiwan. Mekanisme yang terlibat dalam perubahan glomerular termasuk ketidakseimbangan angiogenik [9,22-24]. Dalam model tikus tekanan perfusi rahim yang dikurangkan (RUPP) untuk PE, kerosakan buah pinggang boleh dipulihkan dengan rawatan faktor pertumbuhan endothelial vaskular (VEGF) [25,26]. Selanjutnya, mekanisme penting dalam kecederaan buah pinggang praeklamptik nampaknya meningkatkan tekanan oksidatif dan keradangan, yang membawa kepada peningkatan pengeluaran spesies oksigen reaktif (ROS) dan pengaktifan pelengkap [27-30]. Walaupun mekanisme ini menyebabkan perubahan buah pinggang yang teruk semasa kehamilan, terdapat kekurangan pengetahuan sama ada kerosakan buah pinggang hadir selepas bersalin dalam model haiwan PE. Terdapat hanya beberapa kajian haiwan yang memfokuskan kepada kerosakan buah pinggang selepas bersalin. Dalam model RUPP, tekanan darah arteri purata dan albuminuria telah dipulihkan lapan minggu selepas bersalin. Tiada kerosakan glomerular atau tiub hadir tetapi kadar penapisan glomerular telah dikurangkan [31].

Objektif kajian ini adalah untuk menilai kesan postpartum PE terhadapbuah pinggangdalam model tikus transgenik renin-angiotensinogen manusia. Dalam model ini tikus betina transgenik untuk angiotensinogen manusia mempunyai tekanan darah normal sebelum dan selepas kehamilan. Mereka mengalami hipertensi semasa sepertiga terakhir kehamilan hanya selepas mengawan dengan tikus jantan yang menjadi tuan rumah gen renin manusia, seperti yang diterangkan sebelum [32,33]. Empangan membangunkan fenotip praeklampsia semasa kehamilan [34], termasuk pembentukan semula jantung selepas bersalin [35]. Kami membuat hipotesis bahawa kecederaan buah pinggang jangka panjang, yang diterangkan untuk PE pada manusia dan model tikus, dimediasi oleh tekanan darah tinggi (krisis hipertensi) semasa kehamilan praeklampsia dan memulihkan selepas bersalin.

Faedah ekstrak cistanche: merawat penyakit buah pinggang

2. Keputusan

2.1. Fenotip Praeklampsia dalam Model Tikus Transgenik

Tikus betina transgenik hamil menunjukkan gejala PE (Rajah 1A), manakala tikus WT tidak mengalami gejala ini. BP semasa kehamilan praeklampsia meningkat dari hari ke-12 hingga ke-14, berikutan dataran tinggi, dan menurun kepada nilai normotensif dalam masa dua hari selepas kehamilan. Tekanan darah kekal normotensif sehingga akhir kajian dan empat minggu selepas bersalin (Rajah 1B). Tikus WT diukur pada satu hari (d0, 9, 15, 19, 28, 35, 42, 49) untuk membolehkan perbandingan. Purata tekanan darah arteri ialah pada 105.3 ± 4.6 mmHg dalam tikus WT semasa kehamilan dan pada 148.4 ± 20.7 mmHg dalam tikus hamil praeklampsia. Ia meningkat dengan ketara dalam kehamilan praeklampsia (jenis liar, WTd19 vs. PEd19; p <0.0001) dan="" postpartum="" normal="" (ped19="" vs.="" ped49,="" p=""><0.0001; rajah="" 1c).="" tikus="" pe="" menunjukkan="" albumin="" kencing="" yang="" jauh="" lebih="" tinggi="" berbanding="" kreatinin="" kencing="" semasa="" kehamilan="" berbanding="" wt="" (wtd21="" lwn.="" ped21,="" p="0.0024)," dan="" perkumuhan="" albumin="" dipulihkan="" selepas="" bersalin="" dalam="" tikus="" pe="" (ped21="" lwn.="" ped49,="" p="" {{35="" }}.0004;="" rajah="" 1d).="" walaupun="" albumin="" kencing="" lebih="" tinggi="" pada="" tikus="" wt="" selepas="" bersalin="" berbanding="" tikus="" pe,="" tidak="" terdapat="" perbezaan="" yang="" ketara="" (wtd49="" vs.="" ped49,="" p="0.4917)." terdapat="" kesan="" keseluruhan="" pe="" pada="" tahap="" albumin="" pada="" titik="" masa="" yang="" berbeza="" (2w-anova:="" f(1;29)="16.15;" p="">

Seperti yang ditunjukkan dalam salah satu kajian terdahulu kami, tikus praeklampsia menunjukkan penurunan berat badan plasenta dan janin berbanding tikus kawalan [35], di mana berat badan ibu berkurangan pada akhir kehamilan. Minbuah pinggangberat antara tikus transgenik dan WT adalah serupa semasa (WTd{{0}}.8 g ± 0.{{10}}6; PEd21=0.7 g ± 0.07) dan selepas kehamilan (WTd50=0.9 g ± 0.05; PEd50=1.0 g ± 0.06) (Rajah S1A).buah pinggangberat yang dinormalkan kepada berat badan ibu menunjukkan nilai yang lebih tinggi secara ketara dalam kumpulan PE berbanding dengan WT (WTd21 lwn. PEd21 p=0.002; WTd50 lwn. PEd50 p=0.001; Rajah S1B) Kesan ini ialah terutamanya didorong oleh penurunan berat badan ibu kumpulan PE, yang disebabkan terutamanya oleh penurunan bilangan dan berat anak anjing dan plasenta dalam kumpulan PE [35].

2.2. Ubah Ungkapan Gen Penanda Kecederaan Buah Pinggang

Gen khusus untuk kecederaan tubular, angiogenesis, fibrosis, keradangan tisu, atau tekanan oksidatif telah dipilih dalam cara berasaskan hipotesis dan dianalisis semasa dan selepas kehamilan PE dan WT. Kebanyakan perubahan ketara dalam ekspresi gen buah pinggang dikesan semasa kehamilan praeklampsia (Rajah 2A). Ungkapan penanda kecederaan tiub tertentu,buah pinggangmolekul kecederaan 1 (Kim-1, Rajah 2B), dan lipocalin 2 yang berkaitan dengan gelatinase neutrofil (Ngal, Rajah 2C) adalah 2 dengan ketara.5-kali ganda meningkat semasa kehamilan tikus praeklampsia. Nephrin (Nphs-1), yang merupakan sebahagian daripada diafragma celah podocyte, dinyatakan serupa dalam tikus PE dan WT semasa kehamilan, menunjukkan tiada kerosakan pada membran celah. Kebanyakan gen yang dikaitkan dengan angiogenesis dan vasokonstriksi adalah sama dinyatakan semasa kehamilan praeklampsia dalambuah pinggang. Baik endothelin-1 (Et-1), faktor pertumbuhan endothelial vaskular (VEGF-a), mahupun reseptornya (Flt-1, Flk-1, garam-1 ) menunjukkan ekspresi gen yang berubah dengan ketara semasa kehamilan. Untuk mengenal pasti perubahan fibrotik dalambuah pinggangtisu, gen penanda seperti jenis kolagen 1 dan 4 (Kol-1, Kol4 -1), faktor pertumbuhan tisu penghubung (GF), dan faktor pertumbuhan mengubah-beta 1 (Tgf -1) telah diukur. Kol-1 dan Ctgf telah diubah dengan ketara semasa kehamilan praeklampsia (Rajah 2A, D). Gen penanda khusus CD68 (kluster pembezaan 68 molekul) dan Mcp{11}} (monocyte chemoattractant protein 1) digunakan untuk mencirikan proses keradangan. Ekspresi CD68 meningkat dengan ketara semasa kehamilan praeklampsia berbanding WT. Penanda untuk tekanan oksidatif buah pinggang termasuk komponen NADPH oksidase 2 (Ncf-1, Ncf-4, Cyb-a, Cyb-b) dan NADPH oxidase 4 khusus buah pinggang (Nox-4 ). Ungkapan ncf-4 meningkat sedikit tetapi ketara semasa PE (Rajah 2E).

Apabila memberi tumpuan kepada ekspresi gen selepas kehamilan praeklampsia, hanya beberapa perbezaan ketara yang terdapat (Rajah 2A). Penanda keradangan CD68 meningkat dengan ketara selepas kehamilan praeklampsia berbanding WT selepas bersalin. Gen yang dikaitkan dengan kecederaan nefron, angiogenesis dan vasoconstriction, dan fibrosis juga dinyatakan dalam tikus PE dan WT selepas kehamilan. Penanda tegasan oksidatif Ncf-4 terus menunjukkan ekspresi yang lebih tinggi sedikit dalam tikus PE berbanding WT selepas bersalin (Rajah 2E). Selain itu, ungkapan Nox-4 telah meningkat dengan ketara dalam tikus PE selepas bersalin (Rajah 2F). Nilai ekspresi gen dan p ditunjukkan dalam Jadual S2.

faedah serbuk ekstrak cistanche: anti-keradangan

2.3. Kerosakan Renal Struktur Ringan

Pembesaran glomeruli dan peningkatan penebalan dinding kapilari, ciri endothelin glomerular, seiring dengan albuminuria dalam kehamilan praeklampstik manusia dan tikus [13,17,27]. Pertama, kami menilai kerosakan glomerular semasa kehamilan tikus praeklampsia dan menentukan ciri glomeruli seperti saiz dan ketumpatan. Saiz glomerular tidak berubah semasa kehamilan PE dalam analisis histologi (Rajah 3A). Melalui pencirian kawasan kapilari glomerular, penebalan dinding kapilari dan sklerosis glomerular dapat dikesan. Tikus PE mempunyai peratusan kawasan positif asid berkala–Schiff (PAS)- yang lebih tinggi (WTd21 lwn. PEd21, p=0.0293; Rajah 3B). Sistem tiub buah pinggang adalah penting untuk berfungsi secara fisiologibuah pinggang. Penilaian kerosakan tiub dalam tikus preeklampstik dilakukan dengan menganalisis skor kecederaan tiub, keradangan, dan fibrosis perivaskular. Sistem tiub tidak banyak diubah semasa kehamilan PE, namun terdapat kecenderungan kecederaan tiub ringan semasa kehamilan ini. Pelebaran tiub buah pinggang dan penipisan sempadan berus diperhatikan (Rajah 3C). Keradangan dikira dengan kiraan makrofaj dalam medula buah pinggang. Perbandingan itu tidak menunjukkan perbezaan ketara semasa kehamilan, walaupun tikus PE menunjukkan bilangan sel positif CD68- yang lebih tinggi, namun tidak ketara, antara 10 dan 50 setiap medan pandangan (Rajah 3D). Kawasan fibrotik relatif dikira untuk mengukur fibrosis perivaskular, walaupun kapal dalam tikus PE dan WT kelihatan sama semasa kehamilan (Rajah 3E).

Di samping itu, pencirian kerosakan glomerular dan tiub telah dilakukan dalambuah pinggangselepas kehamilan tikus PE dan WT. Kawasan jumbai glomerular meningkat dalam kedua-dua kumpulan selepas bersalin; walau bagaimanapun, berbanding dengan WT, glomeruli telah diperbesarkan dengan ketara (WTd50 vs. PEd50, p=0.0406; Rajah 3A). Kawasan tuft glomerular tidak diubah selepas bersalin dalam tikus PE berbanding tikus WT (Rajah 3B). Kecenderungan untuk kerosakan tiub buah pinggang hadir dalambuah pinggangdaripada tikus PE selepas kehamilan, walaupun tidak jauh berbeza (Rajah 3C). Sama seperti pemerhatian semasa mengandung, thebuah pinggangtikus PE selepas bersalin memaparkan lebih banyak CD68 ditambah sel setiap medan pandangan, tetapi perbandingannya tidak ketara (Rajah 3D). Tidak terdapat perbezaan yang signifikan selepas bersalin dalam fibrosis perivaskular antara tikus PE dan WT (Rajah 3E)

2.4. Fungsi Renal Sedikit Berubah dalam Kehamilan PE

Parameter air kencing diukur untuk mencirikanbuah pinggangpenapisan dan perkumuhan. Apabila kecederaan buah pinggang, penyerapan semula boleh dipengaruhi. Dalam perbandingan mengikut kumpulan, kreatinin kencing berkurangan dengan ketara semasa dan selepas kehamilan praeklampsia berbanding WT dan dalam kumpulan PE pada d19 berbanding d49 (setiap perbandingan dengan p < 0.0001;="" rajah="">

Begitu juga, natrium adalah jauh lebih rendah dalam PE d19 berbanding PE d49 (p=0.0263; Rajah 4C). Daripada elektrolit yang diukur, hanya kepekatan kalium dan klorida terjejas dengan ketara semasa kehamilan praeklampsia (K tambah p=0.0063; Cl− p=0.0034; Rajah 4D,E). Di samping itu, kalium adalah jauh lebih rendah dalam WT d19 berbanding WT d49 (K tambah p=0.0042; Rajah 4D). Secara ketara, tikus PE mempunyai perkumuhan air kencing yang lebih tinggi berbanding WT hamil atau selepas bersalin.

3. Perbincangan

Kami menyiasat kesan PE padabuah pinggangdalam model tikus transgenik dan menganalisis sama ada perubahan buah pinggang dimanifestasikan selepas bersalin. Semasa PE, ekspresi gen buah pinggang telah diubah. Perubahan glomerular ringan dengan peningkatan ketumpatan glomerular dan perubahan tiub hadir. Peningkatan perkumuhan albumin dapat dikesan. Ekspresi yang diubah wujud dalam gen penanda yang dikaitkan dengan kecederaan nefron (Kim-1, Ngal), fibrosis (Col-1, Ctgf), keradangan (CD68) dan tekanan oksidatif (Ncf-4) . Ekspresi biomarker kecederaan tiub Kim-1 [36] telah dinaikkan semasa PE dan kembali normal selepas kehamilan, menunjukkanbuah pinggangkerosakan hanya semasa PE. Hanya 2.5-pertambahan ringan ekspresi Ngal telah dikesan, yang mana yang lain melaporkan peningkatan 1000-kali ganda yang pantas apabila kecederaan tiub [37]. Kami memerhatikan perubahan ringan dalam ekspresi gen penanda tekanan oksidatif (Ncf-4, Nox-4) dalam buah pinggang semasa PE. Pemerhatian ini seiring dengan kajian yang menggariskan peningkatan ROS dan fungsi mitokondria terjejas dalam kehamilan dalambuah pinggangdaripada model PE lain [28,30]. Telah ditunjukkan bahawa autoantibodi agonis (AT1-AA), yang berlaku dalam plasma wanita praeklampsia, dikaitkan dengan pengeluaran ROS dalam tisu yang berbeza termasukbuah pinggang[28,38]. Dalam model tikus kami untuk PE, kebanyakan perubahan buah pinggang pulih selepas bersalin. Hanya gen penanda tekanan oksidatif (Ncf-4, Nox-4), pembesaran glomerular ringan dan penurunan perkumuhan kreatinin berterusan selepas PE. Berat badan ibu berkurangan semasa PE disebabkan oleh berat plasenta dan janin yang lebih rendah tetapi tidak berbeza selepas bersalin seperti yang ditunjukkan sebelum [34,35]. Oleh itu, kami menganggap bahawa perubahan dalam perkumuhan kreatinin tidak disebabkan oleh perbezaan jisim otot tetapi lebih-lebih lagi daripada fungsi buah pinggang terjejas.

Kami membuat hipotesis bahawa kehamilan praeklamptik sahaja tidak mencukupi untuk menjejaskan kerosakan buah pinggang dan mempengaruhi kerosakan kardiovaskular selanjutnya, seperti yang diperhatikan pada manusia. Kebanyakan kajian model haiwan PE lain menunjukkan perubahan buah pinggang semasa kehamilan, seperti pembesaran glomerular, fibrosis, glomerulosklerosis, dan proteinuria [39-42]. Walau bagaimanapun, hanya segelintir yang memberi tumpuan kepada kesan pasca kehamilan PE padabuah pinggang. Dalam model RUPP, BP dan albuminuria berulang lapan minggu selepas penghantaran, dan tiada kerosakan glomerular atau tiub dapat dikesan [31]. Dalam tikus sensitif garam Dahl, kecederaan glomerular dan tiub terdapat pada tikus betina lapan minggu selepas bersalin, dikesan sebagai peningkatan tahap protein nefrin dan KIM-1 dalam air kencing [43]. Bersama-sama dengan penemuan kami, keputusan ini menyokong bukti bahawa tekanan darah tinggi yang berterusan boleh menjadi punca kerosakan buah pinggang yang diperhatikan pada manusia selepas kehamilan praeklampsia. Di samping itu, pergantungan tekanan daripadabuah pinggangkerosakan telah ditonjolkan oleh Mori et al. Mereka menggunakan model hipertensi yang disebabkan oleh angiotensin II, di mana buah pinggang dilindungi daripada kebanyakan kecederaan buah pinggang (fibrosis, kerosakan tiub) apabila tekanan arteri buah pinggang yang tinggi dikawal oleh kawalan servo kronik [44]. Penemuan ini menyokong pemahaman kami bahawa kecederaan buah pinggang yang berkaitan dengan kehamilan dalam PE bergantung pada keterbalikan hipertensi yang berkaitan dengan kehamilan dalam PE.

Hipotesis awal kami didorong oleh pemerhatian pada wanita dengan sejarah PE, yang menunjukkan risiko yang lebih tinggi untuk perkembangan ESRD atau CKD di kemudian hari [12,45]. Majoriti wanita tidak mempunyaibuah pinggangujian fungsi sebelum PE [45]. Keputusan kami menunjukkan bukti bahawa PE sahaja mungkin tidak mencukupi untuk menyebabkan penyakit buah pinggang. Dai et al. menyatakan bahawa wanita dengan hipertensi sedia ada sebelum ini yang ditindih oleh PE mempunyai risiko tertinggi untuk mengembangkan ESRD berbanding mereka yang mempunyai hipertensi yang sedia ada atau PE [20]. Kattah et al. menunjukkan bahawa wanita yang mempunyai sejarah PE mempunyai risiko empat kali lebih tinggi untuk mengembangkan ESRD dan 20 peratus daripada mereka menunjukkan penurunanbuah pinggangberfungsi sebelum kehamilan [21]. Kajian-kajian ini menggariskan potensi peranan hipertensi yang sebelum ini tidak dapat dikesan mengakibatkan PE bertindih menyumbang kepada penyakit buah pinggang. Selain itu, kami mencadangkan bahawa perkembangan penyakit buah pinggang berikutan kehamilan praeklampsia adalah disebabkan oleh pelbagai penyakit yang menjejaskan fungsi buah pinggang. Menurut hipotesis berbilang hit, dua atau lebih peristiwa akan menyumbang kepada perkembangan penyakit buah pinggang dan PE mungkin hanya satu penyumbang.

Kajian kami memaparkan batasan mengenai prosedur eksperimen kerana kami memasukkan titik dua kali, pada akhir kehamilan dan selepas bersalin. Organ telah dituai dan dianalisis dari kedua-dua titik masa, masing-masing, tetapi pengukuran BP membujur hanya boleh dilakukan untuk mereka yang dikorbankan selepas bersalin. Kedua-dua kumpulan membentangkan nilai BP yang setanding semasa kehamilan. Di samping itu, BP longitudinal hanya diukur sekali-sekala dalam WT untuk memenuhi prinsip 3R dalam eksperimen haiwan. Kajian terdahulu kumpulan kami menunjukkan bahawa tikus WT tidak mengalami hipertensi semasa kehamilan [34].

Kesimpulannya, model tikus transgenik untuk PE menunjukkan kerosakan buah pinggang ringan semasa kehamilan yang kebanyakannya menyelesaikan selepas bersalin. Kecederaan buah pinggang kecil dengan peningkatan biomarker tekanan oksidatif dan perubahan penapisan glomerular hadir semasa kehamilan tikus praeklampsia. Keputusan ini menunjukkan sedikit kerosakan padabuah pinggangselepas kehamilan praeklampsia dan oleh itu tidak dapat sepenuhnya mengecualikan PE sebagai faktor risiko penyakit buah pinggang selepas bersalin. Kami mengesyaki bahawa kejadian tambahan yang menjejaskan fungsi buah pinggang akan diperlukan untuk kerosakan buah pinggang dan kegagalan berikutnya.

cistanche tubolosa testosterone: Cistanche boleh merawat penyakit buah pinggang dan meningkatkan fungsi seksual

4. Bahan dan Kaedah

4.1. Kajian Haiwan

Tikus SD betina transgenik untuk gen angiotensinogen manusia (Tg(hAgt)L1623) telah dikawinkan dengan tikus SD lelaki transgenik untuk gen renin manusia (Tg(hRen)L10J) seperti yang diterangkan sebelum ini [32,35]. Tikus betina dikawal setiap hari untuk palam faraj, yang dianggap sebagai hari pertama kehamilan (d1). Tikus betina transgenik hamil yang terhasil daripada persilangan haiwan transgenik menghasilkan fenotip preeklampstik (PE) tipikal dengan hipertensi dan albuminuria dan digunakan untuk prosedur eksperimen [32]. Betina dan jantan jenis liar SD (WT) dipalang dan dijadikan sebagai kawalan. Semua tikus disimpan dalam keadaan piawai dengan suhu terkawal 22 ± 2 ◦C, kelembapan 55 ± 15 peratus , dan kitaran gelap-cerah 12:12 jam. Haiwan itu mempunyai makanan (Hidu V1324-300) dan air secara ad libitum sepanjang percubaan. Tikus dikorbankan pada dua titik akhir yang berbeza, penghujung kehamilan (hari ke-21, n=9WT; 8PE) dan kehamilan empat minggu selepas bersalin (hari ke-50, n=9WT; 11PE) dengan memenggal kepala di bawah isofluran dalam anestesia, titik masa yang terakhir sepadan dengan lebih kurang. dua tahun pada manusia [46]. Organ dan darah dikumpul dan disimpan pada suhu -80 ◦C sehingga digunakan selanjutnya. Kapsul buah pinggang, pad lemak, dan kelenjar adrenal telah tertanggal daripadabuah pinggang, yang dipotong secara melintang separuh untuk analisis selanjutnya. Kajian itu telah diluluskan oleh pihak berkuasa tempatan (Pejabat Kesihatan dan Hal Ehwal Sosial Negeri, Berlin).

4.2. Pengukuran Tekanan Darah

Peranti telemetri DSI (HD-T11) telah ditanam di bawah anestesia penyedutan dengan isoflurane (komposit udara isoflurane 2-2.5 peratus) 14 hari sebelum mengawan seperti yang diterangkan sebelum ini [34]. Oleh itu, tekanan darah (BP) boleh diukur sebelum, semasa, dan kehamilan selepas bersalin dalam 5-selang minit secara tetap. Haiwan adalah satu rumah semasa rakaman BP.

4.3. Pengukuran Air Kencing

Air kencing 24-jam dikumpul semasa kehamilan pada hari ke-19 dan selepas kehamilan pada hari ke-49 seperti yang diterangkan sebelum ini [47]. Sampel air kencing dianalisis dengan penganalisis kimia klinikal AU480 (Beckman Coulter) mengikut arahan pengilang. Untuk pengukuran kepekatan albumin, ELISA yang kompetitif secara langsung (CellTrend, Luckenwalde, Jerman) telah dilakukan. Jumlah klorida, kalium, dan natrium dikesan menggunakan elektrod selektif ion. Kreatinin ditukar secara enzimatik dan dikira secara kolorimetrik (No. OSR61204, Beckman Coulter, Krefeld, Jerman). Semua parameter air kencing telah dinormalisasi kepada sama ada diuresis atau kepekatan kreatinin.

4.4. Analisis Ekspresi Gen

Analisis ekspresi gen dilakukan seperti yang diterangkan sebelum ini [48]. Secara ringkas, bekubuah pinggangtisu dihomogenkan dengan Qiazol Lysis Reagent (Qiagen) dan manik seramik Precellys (Peqlab Biotechnology, Erlangen, Jerman). Jumlah RNA telah diasingkan menggunakan Kit Mini RNeasy (Qiagen, Hilden, Jerman) mengikut protokol pengeluar. Kit Transkripsi Songsang cDNA Berkapasiti Tinggi (Applied Biosystems, Waltham, USA) mRNA menjadi DNA pelengkap (cDNA). Untuk mengukur ekspresi gen relatif, tindak balas rantai polimerase kuantitatif-transkripsi terbalik (RT-qPCR) dilakukan menggunakan Sistem PCR Masa Nyata QuantStudio 3 (Biosistem Gunaan) dengan sama ada Campuran Master PCR Universal TaqManFast atau Campuran Master Hijau SYBR Pantas ( kedua-dua Thermo FisherScientific, Waltham, MA, USA). Primer dan probe direka bentuk menggunakan Primer Express3.0 dan disintesis oleh BioTez, Jerman (jujukan primer: Jadual S1). Primer dicairkan kepada kepekatan akhir 10 mM, kuar kepada 5 mM. Ekspresi mRNA sasaran telah dianalisis secara kuantitif dengan kaedah lengkung standard. Semua nilai ekspresi telah dinormalisasikan kepada gen pengemasan 18S. Gen telah dipilih dalam cara berasaskan hipotesis sebelum analisis.

4.5. Imunohistokimia

buah pinggangkepingan telah ditetapkan dalam 4 peratus formalin (24 jam), dehidrasi, dan tertanam dalam parafin. Thebuah pinggangtelah dipotong secara melintang menjadi kepingan setebal 2- dan 4-µm dengan mikrotom berputar elektronik (Thermo Fisher).buah pinggangkepingan telah diwarnakan dan diimbas secara serentak menggunakan MIDI Panoramik Pengimbas Slaid dengan pelan objektif-kromat 20×/0.8× (Zeiss) untuk menjamin kebolehbandingan seperti yang diterangkan sebelum ini [35]. Pewarnaan Himalaya–eosin (HE) dilakukan mengikut protokol pengeluar (T865, Carl Roth, Karlsruhe, Jerman). Lilitan kawasan jumbai glomerular-kapilari dalam tiga medan pandangan kortikal setiap buah pinggang (n=5) diukur untuk mengenal pasti endothelin glomerular. Analisis separa kuantitatif kerosakan tiub dilakukan menggunakan skor kecederaan yang diterangkan sebelum ini [49]. Lima belas imej medullar (pembesaran 200 ×) telah dijaringkan secara buta mengenai peratusan pelebaran tiub, degenerasi, nekrosis, pembentukan tuangan, dan kehilangan sempadan berus. Pewarnaan asid-Schiff (PAS) berkala digunakan untuk mengesan komponen kaya karbohidrat (glikogen) dalam glomeruli. Slaid telah diinkubasi dalam 0.5 peratus asid berkala (Sigma Aldrich, 5 min., Steinheim, Jerman ), dibilas dan reagen Schiff (Merck, Darmstadt, Jerman ) telah digunakan (10-min kegelapan). Slaid telah diwarnai balas dengan Himalaya (Carl Roth, 5 min). Kawasan positif PAS bagi 8–10 kawasan glomerular setiap buah pinggang (n=5) diukur menggunakan pemalam ambang warna ImageJ [50]. Pewarnaan Masson- Goldner trichrome (MGT) digunakan untuk mengukur fibrosis perivaskular. Slaid buah pinggang (2 µm) telah diwarnakan mengikut protokol pengeluar (3459, Carl Roth). Perimeter tisu penghubung, vesel, dan lumen tiga arteri berbingkai baik bagi setiap buah pinggang diukur. Kawasan fibrotik dikira berhubung dengan jumlah kawasan kapal. Makrofaj dalam tisu buah pinggang telah diwarnai dengan antibodi CD68 anti tikus tikus (klon ED1; No. MCD341R, Bio-Rad, con. 1:100) [51,52]. Antibodi anti-tikus-IgG keldai konjugasi Cy{35}} sekunder (No. 715-165-151, Jackson ImmunoResearch) telah digunakan (con. 1:300) dan nukleus telah diwarnakan dengan medium pelekap Vectashield dengan DAPI (40, 6-diamide-2-phenyl-Lindal; No. H-1200; Vector Laboratories, Burlingame, USA). CD68-sel positif dikira secara manual dalam sepuluh medan pandangan (pembesaran 200×) setiap buah pinggang (n=5) apabila nukleus dikolokalisasikan kepada isyarat Cy3. Analisis histologi dilakukan dengan cara buta menggunakan pemapar kes perisian (3D Hitech Ltd., Budapest, Hungary) dan Image J (Institut Kesihatan Kebangsaan, Bethesda, MD, Amerika Syarikat).

4.6. Perangkaan

Analisis statistik dilakukan menggunakan perisian GraphPad Prism 6 dan 7. Nilai ditunjukkan sebagai min ± sisihan piawai (SD). Keputusan dipaparkan sebagai n=8–11setiap kumpulan rawatan dan titik masa. Outlier dikenal pasti dengan kaedah ROUT menggunakan kadar penemuan palsu maksimum sebanyak 1 peratus, nilai yang diuji untuk taburan Gaussian, dan perbandingan kumpulan dilakukan dengan ANOVA dua hala biasa (analisis varians) dengan ujian perbandingan berbilang Sidak. Nilai-f ditunjukkan dengan darjah kebebasan masing-masing. nilai-p ditunjukkan sebagai * Kurang daripada atau sama dengan 0.{{10}}5, ** Kurang daripada atau sama dengan 0.01, *** Kurang daripada atau sama dengan 0.001, **** Kurang daripada atau sama dengan 0.0001.

desertliving cistanche: meningkatkan fungsi buah pinggang