Perencatan Pembiakan Sel Buah Pinggang Kucing Crandell-Rees Oleh Senescence yang disebabkan sinar-X
Mar 29, 2022
Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com
Manabu KOIKE1,2)*, Yasutomo YUTOKU1)dan Aki KOIKE1)
ABSTRAK.Rintangan radio dan radiotoksisiti telah dilaporkan selepas rawatan kanser pada kucing. Mengoptimumkan dos sinaran untuk mendorong kesan sitotoksik kepada sel kanser sahaja dan bukan sel normal adalah kritikal dalam mencapai terapi sinaran yang berkesan; walau bagaimanapun, mekanisme rintangan sinaran, radiotoksisiti, dan tindak balas kerosakan DNA (DDR) dalam sel kucing masih belum dijelaskan. Pemecahan rantai ganda DNA (DSB) adalah jenis yang paling toksikDNAkerosakan yang disebabkan oleh sinar-X dan rasuk ion berat yang digunakan dalam merawat kanser. Kucing Crandell-Reesbuah pinggang(CRFK) sel ialah salah satu sel kucing yang paling banyak digunakan dalam penyelidikan sains hayat. Di sini, kami melaporkannyaDSB-penuaan yang dicetuskan disebabkan oleh sinar-X adalah penting dalam menghalang pembiakanCRFKsel. Kami menunjukkan melalui ujian percambahan sel bahawa sinar-X pada dos 2 Gy dan 10 Gy adalah toksik kepadaCRFKsel yang menyinari sel CRFK menghalang percambahannya. Dalam sel CRFK yang disinari X, peningkatan yang bergantung kepada dos dalam penuaan yang dicetuskan oleh DSB telah dikesan mengikut perubahan morfologi dan menggunakan ujian pewarnaan galactosidase yang berkaitan dengan penuaan. Selain itu, data kami menunjukkan bahawa dalamCRFKsel, laluan DDR utama, yang melibatkan fosforilasiH2AXpada Ser139, biasanya diaktifkan oleh kinase ATM. Penemuan kami berguna dalam memahami penuaan selular yang disebabkan oleh sinar-X dan dalam menjelaskan kesan biologi radiasi, contohnya, ketoksikan, dalam sel kucing. Tambahan pula, penemuan kami mencadangkan bahawa garisan sel CRFK adalah matriks yang sangat baik untuk menjelaskan rintangan radio dan radiotoksisiti dalam sel kucing.
KATA KUNCI:kucing, haiwan peneman, putus rantai ganda DNA, sinaran, penuaan
Ekstrak Cistanche deserticola: meningkatkan sistem imun
Haiwan peneman memainkan peranan yang semakin penting dalam masyarakat manusia. Disebabkan oleh lanjutan jangka hayat haiwan pendamping, bilangan anjing dan kucing tua telah meningkat, dan banyak anjing dan kucing baru didiagnosis dengan kanser setiap tahun [26, 27]. Terapi radiasi, yang merupakan salah satu daripada tiga rawatan utama untuk kanser, telah semakin digunakan di hospital veterinar sebagai alternatif untuk merawat kanser pada anjing dan kucing [24, 26]. Untuk mencapai terapi sinaran yang paling berkesan, adalah penting untuk mengimbangi ketoksikan antara sel normal dan kanser. Sementara itu, walaupun radioresistance diperhatikan dalam kucing dan tumor kucing berikutan radioterapi kanser, mekanisme rintangan tersebut masih belum dijelaskan [24].
Banyak kajian tentang kesan sinaran pada sel yang berasal daripada manusia dan tikus telah dijalankan [6, 10, 23, 28]. DNA genomik adalah sasaran biologi utama terapi yang menggunakan sinaran seperti sinar-X dan rasuk ion berat. Double-strand break (DSB) ialah jenis kerosakan DNA akibat sinaran yang paling kritikal. Pelbagai laluan tindak balas kerosakan DNA (DDR), termasuk penderiaan kerosakan DNA, isyarat DDR dan pembaikan DNA, diaktifkan apabila DSB berlaku. Akibatnya, sel pulih daripada kecederaan sinaran, dan DNA yang terjejas dibaiki dengan tepat dan cekap [8, 25]. Dalam sel anjing dan kucing, DSB boleh dibaiki terutamanya oleh mekanisme pembaikan sambungan hujung bukan homolog (NHEJ), yang mendorong pengikatan hujung DSB heterodimer Ku, yang terdiri daripada Ku70 dan Ku80 [14–17]; namun, kajian lanjut diperlukan untuk menjelaskan perkara ini. Di samping itu, pada peringkat pembaikan awal, kinase, seperti DNA-PK dan kinase ATM, diaktifkan, dan ini memfosforilasi Ser139 histon H2AX berhampiran tapak DSB [5, 6]. Berkemungkinan DSB mengaktifkan mekanisme kematian sel yang diprogramkan, termasuk apoptosis dan penuaan, apabila sel tidak dapat diperbaiki [9, 32]. Mekanisme molekul pelbagai DDR, seperti pembaikan DNA, dalam sel kucing, telah kurang dikaji.
Kucing Crandell-Rees yang diabadikanbuah pinggang(CRFK) talian sel ialah salah satu talian sel kucing yang paling banyak digunakan. Talian sel CRFK mula ditubuhkan pada tahun 1964 daripadabuah pinggangkorteks 12-anak kucing betina berumur seminggu [3]. Crandell et al. [3] menerangkan bahawa talian sel CRFK berguna dalam penyelidikan virus kucing dan perubatan diagnostik dan telah menjadi minat khusus dalam penyelidikan kanser. Pada masa ini, talian sel CRFK amat diperlukan dalam penyelidikan sains hayat, termasuk penyelidikan kanser dan virus. Oleh itu, adalah penting untuk memahami radiosensitiviti sel CRFK, yang pelbagai laluan molekul telah dianalisis, untuk mendapatkan maklumat penyelidikan utama untuk menjelaskan mekanisme molekul kesan biologi radiasi dalam kucing. Walau bagaimanapun, pada masa ini tiada laporan mengenai kesan dan mekanisme sinaran terhadap percambahan sel CRFK.
Dalam kajian ini, kami menyiasat kesan biologi sinar-X pada percambahan sel CRFK. Penemuan kami menunjukkan bahawa sinar-X dengan ketara menindas percambahan sel CRFK. Di samping itu, keputusan kami mencadangkan bahawa penindasan percambahan adalah disebabkan oleh peningkatan penuaan selular yang dicetuskan oleh DSB. Tambahan pula, kami mengesahkan dalam sel CRFK bahawa laluan DDR utama diaktifkan secara normal oleh kinase ATM.
ekstrak cistanche tubolosa: merawat penyakit buah pinggang
BAHAN DAN KAEDAH
Kultur sel, bahan kimia, dan sinar-X
Sel CRFK (HSSRB, Osaka, Jepun) telah dikultur dalam medium Eagle diubah suai Dulbecco ditambah dengan 10 peratus serum lembu janin seperti yang diterangkan sebelum ini [17]. Sel melekat telah disinari dengan sinar-X pada 1, 2 atau 10 Gy dan pada kadar dos 0.71–0.77 Gy/min (200 kV/20 mA dengan penapis 0.5-mm Al dan 0.5-mm Cu) menggunakan Pantak HF320S (Shimadzu, Kyoto, Jepun) pada suhu bilik, seperti yang diterangkan dalam kajian terdahulu [17]. KU-55933, perencat kinase ATM, telah dibeli daripada Wako Pure Chemical (Osaka, Jepun). KU-55933 telah dicairkan dalam DMSO (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) dan dicairkan dalam medium kultur sejurus sebelum digunakan.
Penentuan nombor sel yang berdaya maju
Ujian pengecualian biru trypan digunakan untuk menentukan bilangan sel yang berdaya maju. Sel telah disemai pada ketumpatan 2.2 × 104 sel setiap hidangan dalam 60-mm hidangan. Keesokan harinya, sel-sel telah disinari dengan sinar-X dan diinkubasi selama 5 hari selepas penyinaran. Selepas itu, sel-sel telah dibasuh dengan garam penampan fosfat (PBS), digantung dalam larutan Trypsin-EDTA (T3924, Sigma-Aldrich), dikumpulkan, disentrifugasi, diwarnakan dengan 0.4 w/v peratus Penyelesaian Biru Trypan ( Wako Pure Chemical) atau 0.4 peratus Trypan Blue (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) dan dikira menggunakan TC10™ Automated Cell Counter (Bio-Rad). Semua penyinaran dilakukan dalam tiga kali ganda.
Immunoblotting
Jumlah pengekstrakan protein dan analisis western blot telah dilakukan mengikut kaedah yang telah diterangkan sebelumnya [11, 17] dengan pengubahsuaian berikut. Jumlah protein telah dielektroforesis pada Extra PAGE One Precast Gel 5–20 peratus (Nacalai Tesque, Kyoto, Jepun) atau Super Sep ACE Gel 5–20 peratus (Wako Pure Chemical). Produk pecahan telah dipindahkan secara elektroforesis ke membran Hybond-P (GE Healthcare Bio-Sciences Corp., Piscataway, NJ, USA). Kemudian, membran telah disekat dalam Blocking One (Nacalai Tesque) selama 60 minit pada suhu bilik dan diinkubasi dengan antibodi monoklonal anti-H2AX tikus (JBW301) (Upstate Biotechnology Inc., Charlottesville, VA, USA) atau antibodi monoklonal mouse -actin ( Sigma-Aldrich). Selepas mencuci, membran tersebut diinkubasi dengan IgG HRP-Linked Whole Ab anti-tikus (dari biri-biri) (NA931) (GE Healthcare Bio-Sciences Corp.) selama 60 minit pada suhu bilik. Immunoblotting dilakukan menggunakan Select Western Blotting Detection System (GE Healthcare Bio-Sciences Corp.). Jalur protein divisualisasikan menggunakan sistem ChemiDoc XRS (Bio-Rad).
Imunositokimia
Imunostaining dilakukan seperti yang diterangkan sebelum ini [12, 17] dengan pengubahsuaian berikut. Secara ringkasnya, sel yang dikultur telah ditetapkan dalam 4 peratus paraformaldehid selama 30 min, diperbolehkan dengan 0.5 peratus Triton X-100 dalam PBS selama 5 minit, disekat menggunakan larutan penyekat dan diinkubasi dengan antibodi monoklonal anti- H2AX tetikus (JBW301) (Upstate Biotechnology Inc.) selama 60 minit pada suhu bilik. Selepas mencuci sel dengan PBS, pengesanan dilakukan menggunakan antibodi sekunder terkonjugasi Alexa Fluor 568-(Molecular Probes, Eugene, OR, USA) atau antibodi sekunder terkonjugasi isothiocyanate fluorescein (Cappel Laboratories, Durham, NC, USA ). Kemudian, nukleus diwarnakan dengan pewarna pendarfluor 0.025 µg/ml 4,6-diamino-2-phenylindole (DAPI) (Boehringer Mannheim, Mannheim, Jerman). Imej sel diperoleh menggunakan Olympus Fluorescence Microscope BX51 (Olympus, Tokyo, Jepun) yang dilengkapi dengan kamera digital (Olympus DP50, Olympus).
Ujian pewarnaan galactosidase (SA- -}gal) berkaitan senescence
Untuk ujian ini, sel (5 × 103) disalut dalam plat 35-mm dan diwarnakan menggunakan Kit Pewarnaan Senescence -Galactosidase (Cell Signaling Technology Inc., Danvers, MA, USA) 5 hari selepas penyinaran mengikut arahan pengilang dengan pengubahsuaian berikut. Nukleus telah diwarnakan dengan 0.025 µg/ml pewarna pendarfluor DAPI. Imej sel bernoda selepas 18 jam diperoleh menggunakan Mikroskop Olympus CKX41 yang dilengkapi dengan kamera digital (Olympus DP12, Olympus) atau menggunakan Olympus Fluorescence Microscope BX51 yang dilengkapi dengan kamera digital (Olympus DP50). Peratusan sel bernoda positif ditentukan dengan menganalisis tiga medan rawak sekurang-kurangnya 100 sel setiap satu menggunakan perisian Image J. Saiz nuklear sel ditentukan dengan menganalisis tiga medan rawak 10 sel setiap satu menggunakan perisian Image J. Semua penyinaran dilakukan dalam tiga kali ganda.
Ujian apoptosis Annexin V/propidium iodide (PI).
Sel (2.2 × 104) disalut dalam plat 60-mm dan disinari dengan sinar-X pada hari berikutnya. Lima hari selepas penyinaran, sel-sel telah dituai dan diwarnakan dengan Annexin V Alexa Fluor 488-PI-solution (Tali™ Apoptosis Kit, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) mengikut arahan pengilang. Pencairan 200-kali ganda bagi larutan pewarnaan PI telah digunakan untuk pewarnaan. Di samping itu, sel apoptosis berlabel Annexin V telah dikesan menggunakan Cytometer (Invitrogen) berasaskan Imej Tali. Semua penyinaran dilakukan dalam tiga kali ganda.
Analisis statistik
Keputusan statistik dibentangkan sebagai min ± sisihan piawai (n{{0}}). Analisis statistik tidak termasuk saiz nuklear dilakukan menggunakan ANOVA dan ujian perbandingan berganda Ryan (ANOVA4 di WEB, https://www.hju.ac.jp/~kiriki/anova4/). Saiz nuklear dinilai oleh ujian-t Pelajar. Nilai P kurang daripada 0.05 dianggap signifikan secara statistik.
cistanche desertliving
KEPUTUSAN
Perencatan percambahan sel CRFK oleh sinar-X
Untuk menyiasat kesan sinar-X pada percambahan sel CRFK, penyinaran dilakukan pada 2 dan 10 Gy. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 1, percambahan sel telah dihalang dengan ketara dalam cara yang bergantung kepada dos (P<0.05). these="" findings="" indicate="" that="" the="" proliferation="" was="" inhibited="" by="" x-rays="" at="" both="">
Induksi DSB dalam sel CRFK oleh sinar-X
Fosforilasi H2AX pada Ser139 adalah salah satu daripada DDR selular utama dan awal kepada DSB [8, 20, 28]. H2AX ialah biomarker standard emas untuk DSB [8, 20, 28]. Sebelum ini, menggunakan western blotting, kami menentukan perubahan dalam ekspresi H2AX dalam sel CRFK antara 1 jam hingga 24 jam selepas penyinaran dengan sinar-X pada dos tunggal 10 Gy [17]. Akibatnya, tahap ekspresi H2AX adalah yang tertinggi selepas 1 jam [17]. Untuk memeriksa sama ada fosforilasi H2AX diinduksi dalam bergantung kepada dos dalam jumlah ekstrak daripada sel CRFK 1 jam selepas penyinaran, analisis western blot dilakukan dengan antibodi anti-H2AX. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 2A, analisis western blot menunjukkan bahawa ungkapan H2AX meningkat bergantung pada dos sinar-X. Seterusnya, kami mengkaji sama ada fokus H2AX dikesan dalam sel yang disinari dengan ujian imunostaining menggunakan antibodi anti-H2AX. Keputusan kami menunjukkan bahawa fokus H2AX telah terbentuk dalam nukleus sel CRFK pada 1 jam selepas penyinaran (Rajah 2B).
ATMkinase bergantung-fosforilasi H2AXat Ser139 dalam sel CRFK sinaran
Salah satu peranan penting kinase ATGM atau DNA-PK dalam DDR yang dicetuskan oleh sinar-X ialah memfosforilasi H2AX yang mengelilingi tapak DSB dalam pelbagai sel manusia dan tikus [18, 29]; walau bagaimanapun, peranan sedemikian belum lagi disiasat dalam sel kucing, termasuk sel CRFK. Untuk mengesahkan sama ada kinase ATM bertanggungjawab terhadap fosforilasi H2AX yang disebabkan sinar-X pada Ser139 dalam sel CRFK, sel-sel tersebut telah diinkubasi dalam medium yang mengandungi perencat kinase ATM KU-55933 (10 µM) atau pelarut (DMSO) selama 1 jam sebelum penyinaran (10 Gy). Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 3, pembentukan fokus H2AX telah dihalang dalam sel yang disinari dengan kehadiran KU- 55933. Keputusan ini menunjukkan bahawa ATM adalah kinase utama untuk fosforilasi H2AX pada Ser139 yang disebabkan oleh penyinaran dalam sel CRFK.
Induksi penuaan dalam sel CRFK oleh sinar-X
Untuk menyiasat sama ada perencatan percambahan sel CRFK sebagai tindak balas kepada penyinaran berkaitan dengan penuaan dan apoptosis, sel-sel telah disinari dengan sinar-X pada 2 dan 10 Gy. Pertama, 5 hari selepas penyinaran, sel dianalisis menggunakan pewarnaan SA- -gal, ujian standard emas untuk penuaan. Kami memerhatikan morfologi khusus senescence seperti bentuk selular yang besar dan rata (Rajah 4A) dan nukleus yang tidak normal, termasuk nukleus yang diperbesarkan atau multinukleus (Rajah 4B), dalam sel yang disinari. Selain itu, dalam sel CRFK yang disinari, sel SA{10}}gal-positif meningkat dengan ketara dalam cara yang bergantung kepada dos (Rajah 4A–C). Kami juga menganalisis secara kuantitatif pembesaran dalam saiz nukleus sel, yang merupakan penanda lain untuk sel senescent. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 4D, saiz nukleus sel adalah lebih besar dengan ketara dalam sel CRFK yang disinari (P<0.05). altogether,="" these="" findings="" indicate="" that="" x-rays="" highly="" induce="" senescence="" in="" crfk="" cells.="" next,="" to="" examine="" whether="" x-rays="" induced="" apoptosis="" in="" the="" irradiated="" crfk="" cells,="" apoptosis="" was="" quantified="" using="" tali™="" image-based="" cytometer.="" dual="" staining="" with="" fluorescent="" annexin="" v="" and="" pi="" was="" performed="" to="" detect="" apoptotic="" cells.="" cells="" stained="" positive="" for="" annexin="" v="" are="" considered="" apoptotic="" cells.="" as="" shown="" in="" fig.="" 5,="" the="" proportion="" of="" apoptotic="" cells="" was="" significantly="" higher="" in="" the="" 10-gy="" group="" than="" in="" the="" non-irradiated="" group="" and="" the="" 2-gy="" group="" but="" was="" lower="" (approximately="" 6%)="" in="" the="" 10-gy="" group.="" in="" addition,="" no="" significant="" increase="" in="" apoptosis="" was="" observed="" in="" the="" 2-gy="" group="" compared="" with="" the="" non-irradiated="">
manfaat kesihatan cistanche: anti-kanser
PERBINCANGAN
Memahami kesan biologi radiasi pada sel kucing adalah penting dalam menjelaskan radiotoksisiti dan membangunkan protokol terapeutik baru untuk rawatan kanser. Dalam kajian ini, kami mendapati bahawa percambahan kucingbuah pinggangCRFK talian sel telah ditindas dengan ketara oleh sinar-X pada dos 2 dan 10 Gy. Penemuan ini mendedahkan bahawa sinar-X adalah toksik kepada pertumbuhan sel CRFK di bawah keadaan yang digunakan dalam kajian ini. Selain itu, sel senescent meningkat dengan ketara dalam sel CRFK yang disinari. Sementara itu, penemuan kami didedahkan dalam sel CRFK, kinase ATM mendorong fosforilasi H2AX pada Ser139, yang merupakan salah satu DDR utama kepada DSB yang dihasilkan oleh sinar-X. DSB yang disebabkan oleh radiasi dilaporkan boleh menyebabkan penuaan dan apoptosis dalam sel manusia dan tikus [4, 22]. Penemuan kami mencadangkan bahawa mekanisme penuaan yang diaktifkan oleh DSB menyumbang untuk menyekat percambahan sel CRFK oleh sinar-X.
Mekanisme yang mendasari perbezaan radiosensitiviti di kalangan manusia, anjing, dan kucing dan mekanisme pembaikan sel kucing masih belum dijelaskan. Seperti yang dinyatakan di atas, data kami menunjukkan bahawa DDR bergantung kepada kinase ATM diaktifkan oleh sinar-X dalam sel CRFK. Di samping itu, kajian ini dan kajian terdahulu menunjukkan bahawa DSB yang disebabkan sinar-X dalam sel CRFK boleh dikesan oleh analisis blot barat dan imunositokimia menggunakan antibodi anti-H2AX yang tersedia secara komersil [17]. Penemuan ini mencadangkan bahawa sel CRFK berguna dalam menjelaskan mekanisme molekul DDR dalam sel kucing. Moor [24] menerangkan bahawa terapi sinaran untuk kucing adalah berbeza daripada terapi untuk anjing dari segi tindak balas tumor dan ketoksikan tisu normal. Fujii et al. [7] menunjukkan bahawa fibroblas dalam kucing lebih tahan radio berbanding manusia dalam analisis pembentukan koloni dan fokus H2AX yang disebabkan oleh sinaran boleh diperbaiki dengan lebih cepat dan lebih berkesan dalam fibroblas kucing. Di samping itu, mereka mencadangkan kemungkinan kerosakan DNA dan kromosom yang disebabkan oleh sinar-X lebih berkesan diperbaiki dalam limfosit kucing berbanding limfosit manusia atau anjing. Penemuan ini mencadangkan bahawa perbezaan rintangan radio di kalangan manusia, anjing, dan kucing mungkin berkaitan dengan perbezaan kebolehbaikan DNA. Baru-baru ini, kami menunjukkan menggunakan sel CRFK bahawa protein pembaikan teras NHEJ, iaitu kucing Ku70, Ku80 dan XLF, terkumpul di tapak DSB yang disebabkan oleh 405-nm mikrolaser [17]. Kami juga telah mendedahkan bahawa pengambilan XLF kucing, XLF manusia, atau anjing XLF adalah bergantung kepada kehadiran Ku [13, 14, 17]; penemuan ini sangat menyokong bahawa peraturan spatiotemporal faktor NHEJ teras, termasuk Ku70, Ku80, dan XLF, adalah penting dalam peraturan pembaikan NHE [10, 19]. Secara kolektif, sel CRFK mungkin berguna dalam mendedahkan mekanisme molekul yang mendasari bukan sahaja perbezaan rintangan radio di kalangan kucing, anjing dan sel manusia tetapi juga DDR, termasuk pembaikan NHEJ yang bergantung kepada Ku yang dipelihara di dalamnya.
Peralihan epithelial-mesenchymal (EMT) ialah mekanisme penting untuk transformasi malignan, cth, mengubah rintangan sel kanser kepada radiasi dan ubat antikanser. Baru-baru ini, sel CRFK telah dilaporkan mempunyai ciri-ciri fibroblas, terutamanya mengenai morfologi, biokimia, dan biologi molekul, walaupun sel CRFK telah ditubuhkan sebagai garisan sel epitelium [21]. Selain itu, van Beusekom et al. [31] melaporkan bahawa TGF- 1 mengubah morfologi sel CRFK daripada fenotip epitelium kepada fenotip fibroblastik dan ia secara ketara mendorong ekspresi beberapa gen penanda EMT dalam sel CRFK, menunjukkan bahawa sel CRFK boleh menjalani EMT. Dalam kajian ini, penuaan kelihatan lebih penting daripada apoptosis untuk penindasan pertumbuhan dalam sel CRFK yang disinari. Secara keseluruhannya, garisan sel CRFK mungkin merupakan modaliti yang sangat baik untuk bukan sahaja menjelaskan perkaitan antara atau antara penuaan akibat sinar-X, rintangan radio dan/atau radiotoksisiti dalam kucing.buah pinggangsel epitelium tetapi juga untuk menjelaskan kesan EMT terhadap sinaran dan kemoterapi.
Terapi pro-senescence ialah strategi anti-kanser yang baru atas dasar mendorong penuaan sel kanser. Untuk menggunakan strategi ini untuk rawatan kucing, adalah perlu untuk menjelaskan mekanisme molekul induksi penuaan dalam sel kucing. Sebaliknya, Li et al. [22] telah menerangkan bahawa agen senolitik, kelas molekul kecil yang secara selektif boleh membunuh sel-sel senescent, mempunyai potensi besar untuk mengurangkan dengan ketara kesan sampingan yang disebabkan oleh radioterapi sambil secara munasabah mengelakkan karsinogenesis. Baru-baru ini, telah ditunjukkan bahawa agen senolitik ABT-737 menghapuskan sel senescent akibat sinaran mengion daripada paru-paru tikus yang disinari [35]. Seperti yang dinyatakan di atas, data kami menunjukkan bahawa sel senescent meningkat dengan ketara dalam sel CRFK yang disinari. Penemuan kami dan kajian lanjut menggunakan sel CRFK mungkin tersedia untuk penyelidikan asas untuk pembangunan bukan sahaja terapi prosenescence kucing tetapi juga agen senolitik untuk mengurangkan kesan sampingan yang disebabkan oleh radioterapi.
CRFKialah salah satu barisan sel mamalia yang paling penting dan digunakan secara meluas dalam eksperimen termasuk yang mengenai virus, seperti coronavirus sindrom pernafasan akut teruk (SARS-CoV) atau SARS-CoV-2; Pembaikan DNA dan penyelidikan kanser dalam kucing;kronikbuah pinggang penyakit; dan pengeluaran vaksin [1, 2, 17, 30, 33, 34]. Sel CRFK boleh dijangkiti pelbagai virus, termasuk oncovirus [1–3, 34]. Berdasarkan ini, kami membuat spekulasi bahawa garisan sel CRFK mungkin sesuai untuk penyelidikan asas tentang perubahan dalam radiosensitiviti yang disebabkan oleh jangkitan virus dan kesan radioterapi pada tumor yang disebabkan oleh jangkitan virus.CRFKsel boleh digunakan untuk menjelaskan mekanisme yang mendasari ketahanan radio dan radiotoksisiti dalam sel epitelium buah pinggang kucing dan kesan jangkitan virus pada radiosensitiviti. Secara kesimpulannya, sel CRFK mungkin merupakan saluran sel yang sangat baik untuk menjalankan penyelidikan tentang radiotoksisiti dalam kucing dan penyelidikan asas untuk membangunkan kaedah rawatan kanser baharu.
manfaat kesihatan cistanche tubolosa
KONFLIK KEPENTINGAN.Penulis mengisytiharkan tiada konflik kepentingan.
PENGHARGAAN.Kerja ini dijalankan dengan sokongan Institut Sains dan Teknologi Kuantum dan Radiologi Kebangsaan, dan Jabatan Biologi Kawal Selia, Fakulti Sains, Universiti Saitama.
RUJUKAN
1. Altamura, G., Power, K., Martano, M., Degli Uberti, B., Galiero, G., De Luca, G., Maiolino, P. dan Borzacchiello, G. 2018. Felis catus
jenis papillomavirus-2 E6 mengikat kepada E6AP, menggalakkan pengikatan E6AP/p53 dan meningkatkan degradasi proteasomal p53. Sci. Rep. 8: 17529.
2. Chu, H., Chan, JF, Yuen, TT, Shuai, H., Yuan, S., Wang, Y., Hu, B., Yip, CC, Tsang, JO, Huang, X., Chai, Y., Yang, D., Hou, Y., Chik, KK,
Zhang, X., Fung, AY, Tsoi, HW, Cai, JP, Chan, WM, Ip, JD, Chu, AW, Zhou, J., Lung, DC, Kok, KH, To, KK, Tsang, OT, Chan, KH dan Yuen, KY 2020. Perbandingan tropisme, kinetik replikasi dan pemprofilan kerosakan sel bagi SARS-CoV-2 dan SARS-CoV dengan implikasi untuk manifestasi klinikal, kebolehtransmisian dan kajian makmal COVID-19 : kajian pemerhatian. Mikrob Lancet 1: e14–e23.
3. Crandell, RA, Fabricant, CG dan Nelson-Rees, WA 1973. Pembangunan, pencirian, dan kerentanan virus bagi garisan sel renal (CRFK) kucing (Felis catus). In Vitro 9: 176–185.
4. d'Adda di Fagagna, F. 2008. Hidup dalam rehat: penuaan selular sebagai tindak balas kerosakan DNA. Nat. Rev. Kanser 8: 512–522.
5. Durocher, D. dan Jackson, SP 2001. DNA-PK, ATM, dan ATR sebagai penderia kerosakan DNA: variasi pada tema? Curr. Pendapat. Biol Sel. 13: 225–231.
6. Firsanov, DV, Solovjeva, LV dan Svetlova, MP 2011. Fosforilasi H2AX di tapak pecahan dua helai DNA dalam sel dan tisu mamalia yang ditanam. Clin. Epigenetik 2: 283–297.
7. Fujii, Y., Yurkon, CR, Maeda, J., Genet, SC, Kubota, N., Fujimori, A., Mori, T., Maruo, K. dan Kato, TA 2013. Kajian perbandingan radioresistance antara sel kucing dan sel manusia. Sinaran. Res. 180: 70–77.
8. Huang, RX, dan Zhou, PK 2020. Laluan isyarat tindak balas kerosakan DNA dan sasaran untuk pemekaan radioterapi dalam kanser. Transduksi Isyarat. Sasaran. Di sana. 5: 60.
9. Jackson, SP 2002. Mengesan dan membaiki patah rantai dua DNA. Karsinogenesis 23: 687–696.
10. Koike, M. 2002. Dimerisasi, translokasi, dan penyetempatan protein Ku70 dan Ku80. J. Radiat. Res. (Tokyo) 43: 223–236.
11. Koike, M. dan Koike, A. 2008. Pengumpulan protein Ku80 pada pecahan dua helai DNA dalam sel hidup. Exp. Sel Re. 314: 1061–1070.
12. Koike, M., Shiomi, T. dan Koike, A. 2001. Dimerisasi dan penyetempatan nuklear protein Ku. J. Biol. Kimia. 276: 11167–11173.
13. Koike, M., Yutoku, Y. dan Koike, A. 2011. PengumpulanKu70 pada pecahan dua helai DNA dalam sel epitelium hidup. Exp. Sel Re. 317: 2429–2437.
14. Koike, M., Yutoku, Y. dan Koike, A. 2017. Pengklonan, penyetempatan, dan pembentukan fokus di tapak kerosakan DNA anjing XLF. J. Doktor haiwan. Med. Sci. 79: 22–28.
15. Koike, M., Yutoku, Y. dan Koike, A. 2017. Pengklonan, penyetempatan, dan pembentukan fokus di tapak kerosakan DNA anjing Ku70. J. Doktor haiwan. Med. Sci. 79: 554–561.
16. Koike, M., Yutoku, Y. dan Koike, A. 2017. Pengklonan taring Ku80 dan penyetempatan dan pengumpulannya di tapak kerosakan DNA. FEBS Open Bio 7: 1854–1863.
17. Koike, M., Yutoku, Y. dan Koike, A. 2019. Feline XLF terkumpul di tapak kerosakan DNA dengan cara yang bergantung kepada Ku. FEBS Open Bio 9: 1052–1062.
18. Koike, M., Sugasawa, J., Yasuda, M. dan Koike, A. 2008. Fosforilasi H2AX yang bergantung kepada DNA-PK khusus tisu dan penyingkiran gamma-H2AX selepas penyinaran-X dalam vivo. Biokim. Biophys. Res. Commun. 376: 52–55. [Medline] [CrossRef]
19. Koike, M., Awaji, T., Kataoka, M., Tsujimoto, G., Kartasova, T., Koike, A. dan Shiomi, T. 1999. Penyetempatan subselular pembezaan komponen kinase protein yang bergantung kepada DNA Ku dan DNA-PKc semasa mitosis. J. Sel Sci. 112: 4031–4039. [Medline]
20. Kopp, B., Khoury, L. dan Audebert, M. 2019. Pengesahan biomarker H2AX untuk penilaian genotoksisiti: semakan. Gerbang. Toksik. 93: 2103–2114. [Medline] [CrossRef]
