Pengaruh Cytotoxic T Lymphocyte Antigen 4 Varian Genetik Pada Penolakan Akut dalam Pemindahan Buah Pinggang Pesakit: Perspektif Perubatan Ketepatan

edmund.chen@wecistanche.com

pengenalanRawatan yang paling berkesan dan biasa untuk peringkat akhirpenyakit buah pinggangialahpemindahan buah pinggang. Kemandirian dan kualiti hidup pesakit akan dipertingkatkan dengan pemindahan. Di sebalik semua usaha di kawasan pemindahan, kadarbuah pinggangpenolakan alograf (AR) masih tinggi dan mencabar [1]. Penolakan allograf ialah tindak balas imun yang dimediasi oleh sel T dan laluan CTLA-4 adalah penting untuk mengecilkan sistem imun dalam tetapan pengaktifan sel T untuk mencegah autoimun. Protein berkaitan limfosit T sitotoksik 4 (CTLA4) ialah pengawal selia negatif penting dan perencat sel T yang mengantara tindak balas imun. Ia akan dianggap sebagai komponen penting sistem imun yang mendorong toleransi imun [2]. Pemindahan stratifikasi risiko berdasarkan pengubah suai genetik yang mendasari dan farmakoterapi ketepatan atau pendekatan farmakogenomik boleh membantu meningkatkan hasil pemindahan [3-5]. Pembangunan kaedah pemprofilan genomik dan molekul lain dalam pemindahan membentangkan potensi yang tiada tandingan untuk menggunakan strategi perubatan ketepatan untuk meningkatkan hasil pesakit [6]. Gen tindak balas imun penerima juga mungkin mempunyai kesan ke atas hasil selepas pemindahan [7] kerana beberapa kajian telah menunjukkan bahawa varian CTLA4 dikaitkan dengan banyak penyakit autoimun [8-11]. Gen CTLA4 terletak pada kromosom 2q33 dan terdiri daripada empat ekson [12]. Protein CTLA4, ahli superfamili imunoglobulin, menyampaikan isyarat negatif untuk mengawal selia percambahan sel T dengan mengikat molekul B7 pada sel pembentang antigen [13]. Oleh itu, ia mungkin gen calon yang sesuai untuk mengkaji penolakan allograf. Sehubungan itu, kami mengkaji dua lagi varian biasa, rs231775 (tambah 49A/G) dan rs5742909 (-318C/T), CTLA4 yang mungkin mempengaruhi ekspresi permukaan sel molekul CTLA-4. Varian genetik rs231775 terletak dalam peptida isyarat molekul dan mempengaruhi ekspresi isoform penuh pada membran sel T [14]. Corak ekspresi protein CTLA4 didapati diubah oleh genotip polimorfisme nukleotida tunggal (SNP) rs5742909 C/T, yang terletak di promoter CTLA4 [15]. Kajian ini bertujuan untuk memahami pengaruh kedua-dua SNP biasa CTLA4 ini pada kadar AR selepas itupemindahan buah pinggangdengan sekurang-kurangnya empat tahun susulan.

Kata kunci:Pemindahan buah pinggang; Penolakan allograf; gen CTLA4; Perubatan ketepatan; penyakit buah pinggang

CISTANCHE AKAN MEMPERBAIKI PENYAKIT BUAH PINGGANG/PINGGANG

KaedahPesakit.Seratus enam puluh sembilanpemindahan buah pinggangpenerima yang menjalani pemindahan dari 2010 hingga 2014 di hospital Labbaf Nejad Tehran, Iran telah dimasukkan ke dalam kajian ini selepas mengambil kebenaran termaklum dalam bentuk bertulis. Mereka terdiri daripada 52 wanita dan 117 lelaki, lebih daripada 18 tahun, dan disusuli untuk tempoh sekurang-kurangnya empat tahun selepas menerima allograf. Pesakit adalah kumpulan darah ABO yang serasi dengan maksimum 3/6 ketidakpadanan. Maklumat klinikal pesakit berkenaan pemindahan, umur, jantina, berat badan, terapi imunosupresif, siklosporin atau kepekatan darah tacrolimus, sumber rasuah, episod penolakan, dan masa untuk penolakan pertama diperolehi daripada rekod klinikal untuk pesakit dalam hospital atau pesakit yang melawat. klinik pesakit luar. Pesakit dikelaskan kepada dua kumpulan allogeneicbuah pinggangpenerima rasuah mengikut episod AR: 39 pesakit dengan episod penolakan akut dan 130 tanpa tanda-tanda pengalaman penolakan akut. AR ditakrifkan oleh klinikalfungsi buah pinggangkegagalan seperti yang diperhatikan oleh lebih daripada 30 peratus peningkatan kepekatan kreatinin serum yang pulih selepas rawatan imunosupresan tanpa mengira keadaan patologi lain, seperti jangkitan dan halangan saluran kencing.

GenotaipDNA berat molekul tinggi telah diasingkan daripada 5 ml darah periferi yang dikumpul ke dalam tiub yang mengandungi EDTA dengan kaedah salting-out klasik [16] dan disimpan pada -20 darjah untuk analisis lanjut. Analisis genotaip bagi varian CTLA4 rs5742909 (-318C/ T) dan rs231775 (tambah 49A/G) telah diiktiraf oleh kaedah polimorfisme panjang serpihan tindak balas rantai polimerase (PCR-RFLP). Serpihan amplifikasi PCR yang mengandungi 276 pasangan asas (bp) untuk -318C/T dan 399 bp untuk ditambah varian gen CTLA4 49A/G telah dilakukan dalam tindak balas akhir 50 ul yang mengandungi 40 ng DNA genomik, 1 mM MgCl2, 20 pmol primer pemajuan (5'-TTCGACGTAACA GCTAAACC-3′) dan primer terbalik (5′- CAAATGAAA CCCAGGTAGGAG-3′) untuk CTLA4 tambah 49A/G dan 20 pmol primer pemajuan (5'- TGGACTGGATGGTTAAGGATG-3′) dan 20 pmol primer terbalik (5'-AGAAGGCACTTGAAT AGAAAGC-3′) untuk CTLA4 -318C/T. Produk PCR telah dicerna dengan enzim sekatan Santa dan MseI untuk CTLA4 campur 49A/G dan CTLA4 -318C/T masing-masing dan dipisahkan oleh 2 peratus elektroforesis gel agarose.

CISTANCHE AKAN MEMPERBAIKI DIALISIS BUAH PINGGANG/PINGGUL

Analisis statistikKekerapan faktor risiko yang berbeza serta genotip varian antara pesakit dengan dan tanpa penolakan dibandingkan dengan menggunakan chi-square dan ujian tepat Fisher. Ujian-t pelajar bebas dan ujian Mann-Whitney U digunakan untuk membandingkan min (sisihan piawai (SD)) faktor berterusan antara dua kumpulan. Perkaitan antara varian dan kerentanan terhadap penolakan dianggarkan menggunakan model regresi logistik. Pengacau yang berpotensi dikawal telah diselaraskan untuk umur, jantina, dan beberapa faktor biokimia dalam serum. Nilai P kurang daripada 0.05 dianggap penting.

KeputusanKami merekrut 169 pesakit dengan kronikpenyakit buah pinggangsedang menjalanipemindahan buah pinggang. Ciri klinikal dan demografi pesakit yang termasuk dalam kajian kami disenaraikan dalam Jadual 1. Purata umur (SD) mereka ialah 43.90 (13.08) dan 30.18 adalah perempuan. Di antara peserta ini, 39 (23.08 peratus) mempunyai sejarah penolakan pemindahan. Pesakit yang mempunyai sejarah penolakan allograf telah menerima pemindahan mereka daripada saudara-mara mereka lebih sedikit daripada pesakit yang allografnya tidak ditolak (97.37 peratus berbanding 96.39 peratus ), tetapi perbezaannya adalah tidak ketara secara statistik (P=0.6 ). Pesakit ini juga mempunyai sejarah hiperleptinemia yang jauh lebih tinggi (92.31 peratus berbanding 0, P<0.0001). moreover,="" the="" history="" of="" hyperlipidemia="">

hipertensi dalam kalangan pesakit dengan hasil allograft adalah lebih daripada mereka yang tidak (masing-masing 17.95 peratus berbanding 10 peratus dan 51.28 peratus berbanding 43.08). Walau bagaimanapun, perbezaannya tidak ketara secara statistik (P=0.1 dan P=0.2, masing-masing). Sebaliknya, prevalens diabetes mellitus dalam kalangan pesakit yang tidak mempunyai hasil penolakan adalah lebih banyak daripada pesakit yang allografnya telah ditolak (masing-masing 16.15 peratus berbanding 10.26 peratus), tetapi masih, ia tidak signifikan (P=0 .3). Purata kalium serum adalah jauh lebih rendah dalam kalangan pesakit dengan penolakan berbanding mereka yang tidak ditolak (4.20 lwn. 4.38, P=0.03). Tiada perbezaan ketara diperhatikan antara pesakit dengan dan tanpa penolakan allograf dalam kes umur min (43.46 tahun lwn. 44.43 tahun, P=0.8), berat (70.23 kg lwn. 70.99 kg, P{{33} }.7), hemoglobin (13.68 mg/dl lwn. 13.09 mg/dl, P=0.2), hematokrit (39.88 lwn. 40.24, P=0.7) natrium serum (140.39 mg/ dl lwn. 140.44 mg/dl, P=09) dan serum darah urea nitrogen (BUN) (35.18 mg/dl lwn 30.74 mg/dl, P=0.1).

CISTANCHE AKAN MEMPERBAIKI SAKIT BUAH PINGGANG/PINGGANG

Taburan genotip varian genetik CTLA4Kekerapan genotip AG bagi varian CTLA4 ditambah 49A/G adalah sama pada kedua-dua pesakit dengan dan tanpa sejarah penolakan (38.46 peratus). Tiada satu pun daripada kumpulan tersebut mempunyai genotip homozigot. Nisbah kemungkinan kasar antara genotip AG dan kerentanan kepada penolakan ialah satu (P=1). Itu tidak diubah selepas pelarasan untuk umur, jantina, kreatinin serum dan kalium serum dan juga tidak signifikan (ATAU=1.06, P=0.9). Oleh itu, varian ini tidak mempunyai kaitan dengan penolakan allograf. Untuk varian CTLA4 -318C/T, frekuensi CT dan TT dalam kalangan pesakit yang pemindahannya telah ditolak adalah lebih rendah daripada pesakit dengan hasil normal. Walaupun itu tidak signifikan secara statistik (12.82 peratus lwn. 18.46 peratus dan 0 lwn. 1.54 peratus , P=0.7). Nisbah kemungkinan antara genotip CT dan penolakan ialah 0.64, tetapi, pelarasan untuk pengacau yang berpotensi di atas, menukar persatuan kepada 1.78. Ini bermakna genotip CT, meningkatkan kemungkinan penolakan sebanyak 78 peratus berbanding genotip CC, walaupun perkaitan ini tidak signifikan secara statistik (ATAU=1.78, P=0.2). Berbanding dengan genotip CC sebagai rujukan, genotip TT menyebabkan peningkatan 29 peratus dalam kemungkinan penolakan. Walau bagaimanapun, perkaitan ini tidak penting (ATAU=1.29, P=1). Oleh itu, CT mahupun TT tidak mempunyai kesan positif terhadap kerentanan terhadap penolakan allograf dan tidak boleh dianggap sebagai faktor risiko untuk hasil yang buruk selepas pemindahan (Jadual 2).

Kekerapan alel varian CTLA4Kekerapan alel G adalah sama di kalangan pesakit dengan dan tanpa penolakan allograf (19 peratus). Nisbah kemungkinan antara alel dan penolakan ini adalah neutral. Oleh itu, tiada perkaitan yang ketara diperhatikan antara alel G dan kerentanan kepada penolakan (ATAU=1, P=1). Kekerapan alel T dalam kalangan pesakit yang pemindahannya ditolak adalah lebih rendah daripada pesakit tanpa penolakan, walau bagaimanapun, itu tidak signifikan secara statistik (7 peratus berbanding 11 peratus , P=0.3). Walaupun alel T menunjukkan pengurangan 43 peratus dalam risiko penolakan, ujian statistik menunjukkan bahawa perkaitan itu tidak signifikan (ATAU=0.57, P=0.2) (Jadual 3). Oleh itu, alel ini bukan faktor pelindung untuk penolakan allograf.

Kepekaan varian CTLA4 ditambah 49A/G dalam meramalkan hasil allograft yang tidak normal adalah sangat rendah (38 peratus). Ia menunjukkan bahawa varian ini boleh mengesan hanya 38 peratus pesakit yang terdedah kepada penolakan. Varian ini juga mempunyai kekhususan sebanyak 61 peratus. Ini bermakna varian ini boleh mengesan 61 peratus pesakit pemindahan dengan hasil normal. Angka yang sepadan untuk varian CTLA4 -318C/T ialah 13 peratus dan 80 peratus (Rajah 1, 2, 3 dan 4). Seperti yang digambarkan dalam Jadual 4, walaupun sensitiviti varian ini dalam meramalkan penolakan adalah sangat rendah, ia mempunyai ketepatan yang agak tinggi dalam diagnosis hasil alograf normal disebabkan oleh positif palsu yang rendah. Anggaran di atas menunjukkan bahawa CTLA4 campur 49A/G dan CTLA4 -318C/T tidak sesuai untuk pemeriksaan pesakit yang terdedah kepada penolakan.

Perbincangan Beberapa kajian telah menunjukkan bahawa variasi genetik dalam molekul immunoregulatory dikaitkan dengan hasil pemindahan organ pepejal [17, 18]. Varian CTLA4, reseptor kostimulasi yang mengawal pengaktifan sel T, telah diperhatikan dikaitkan dengan hasilpemindahan buah pinggangdalam beberapa kajian [11, 19–22]. Beberapa SNP dan pelbagai hasil klinikal bagipemindahan buah pinggangtelah terlibat. Hasil buruk yang paling lazim bagipemindahan buah pinggangialah AR. Hubungan tidak konsisten penolakan akut dan keputusan allograft buah pinggang diperhatikan dalam kumpulan etnik yang berbeza [11, 14, 22, 23]. Keputusan kajian ini menunjukkan bahawa tiada satu pun daripada variasi genetik CTLA4 telah dikaitkan dengan kecenderungan untukpemindahan buah pinggangpenolakan akut.

Dalam kajian terdahulu mengenai populasi Caucasian dan Amerika, genotip CTLA4 rs231775 A/A didapati melindungi pesakit daripada mengalami penolakan akut. Di samping itu, min kemandirian rasuah bagi penerimabuah pinggangdan pemindahan hati dengan genotip GG rs231775A/G menurun dengan ketara jika dibandingkan dengan genotip AA dan A/G [19, 24]. Dalam kajian ini, genotip GG rs231775 SNP tidak diperhatikan di kalangan pesakit dengan dan tanpa episod AR. Keputusan ini tidak konsisten dengan penemuan sebelumnya yang melaporkan alel rs231775 G boleh mengurangkan kesan negatif CTLA4 pada tindak balas imun pengantara sel T [25]. Krichen et al. (2009) melaporkan penurunan kekerapan alel rs231775 CTLA4 A di kalangan pesakit dengan kehilangan allograft akut, berbanding pesakit episod bukan AR [26]. Keputusan ini berbeza dengan pemerhatian kami. Kami tidak menemui sebarang kaitan antara AR dan alel ini, menunjukkan bahawa SNP gen CTLA4 ini tidak dikaitkan dengan AR dalam sampel Iran. Gendzekhadze et al. pada tahun 2006 mendapati perkaitan yang signifikan secara statistik antara kehadiran genotip CTLA-4 ditambah 49 AA dan perlindungan daripada penolakan akut dalam pesakit pemindahan yang menerimabuah pinggangdaripada penderma berkaitan hidup dan juga mereka telah menemui perkaitan antara genotip GG dan peristiwa penolakan akut [22]. Tiada persatuan sedemikian ditemui dalam kumpulan pesakit pemindahan yang kami kaji. Tinjauan pada tahun 2010, melaporkan hasil serupa yang tidak menunjukkan sebarang perkaitan antara tambah 49A/G SNP dan penolakan akut. Walau bagaimanapun, mereka

mendapati perkaitan antara varian tambah 49A/G dan fungsi cantuman tertunda [20]. Wiśniewski et al. pada tahun 2006 melaporkan bahawa -318C/T SNP dalam gen CTLA-4, melindungi daripada penolakan akutbuah pinggangcantuman. Kekerapan genotip TT varian ini adalah tiga kali kurang di kalangan pesakit dengan AR berbanding dengan kumpulan bukan AR [11]. Dalam laporan dari China, keputusan yang tidak konsisten dengan keputusan kajian ini mengenai kekerapan alel T di kalangan pesakit AR telah diperhatikan [14]. Pada tahun 2006, Gorge et al. juga memerhatikan peningkatan kekerapan alel T -318C/T CTLA4 di kalangan pesakit tanpa penolakan akut. Oleh itu, kesan -318varian C/T mungkin tidak sama dalam kumpulan etnik yang berbeza [19]. Juga, maklumat latar belakang etnik pesakit tidak tersedia. Ia perlu dinilai untuk kajian persatuan genetik masa hadapan. Walaupun keputusan sekarang tidak dapat memperkenalkan varian genetik yang dikaji sebagai biomarker disebabkan oleh batasan kajian, nampaknya kita mungkin boleh mencapai hasil yang lebih realistik dengan meningkatkan saiz sampel.

KesimpulanPenemuan kami mendedahkan bahawa varian genetik rs231775 (tambah 49A/G) dan rs5742909 (-318C/T) CTLA4 tidak dikaitkan dengan penolakan akut dalam populasi Iran yang menjalanipemindahan buah pinggang. Jadi varian ini tidak boleh dianggap sebagai faktor risiko penolakan allograf akut dalam bahasa Iranpemindahan buah pinggangpenerima. Walau bagaimanapun, adalah perlu untuk mengesahkan keputusan kami dalam kajian kohort yang besar dengan pemantauan pesakit yang lebih tepat dan juga mempertimbangkan gen yang berbeza. Tetapi sebenarnya, perubatan ketepatan, yang menggabungkan maklumat genetik yang diketahui ke dalam amalan klinikal untuk memperibadikan penjagaanpemindahan buah pinggangpenerima, adalah permintaan yang munasabah yang berada di kaki langit, memandangkan kos ujian genetik yang rendah dan penambahbaikan dalam diagnostik molekul.