Penambahbaikan Pengeluaran Echinacoside Dan Acteoside Dengan Penghapusan Dua Peringkat dalam Kultur Suspensi Sel Cistanche Deserticola

untuk maklumat lanjut:ali.ma@wecistanche.com

Wen-Hao Chen et al

Abstrak

Pada kepekatan yang sesuai, poliamina menggalakkan pertumbuhan kalus danechinacosidekandungan daripadaCistanche deserticolamanakala Ag plus meningkatkan kandunganechinacosidedanacteoside. Dalam 20-tempoh kultur hari, apabila putrescine (25 lM) dan Ag plus (10 lM) ditambah pada hari ke-8 dan hari ke-16, masing-masing,echinacosidepengeluaran(1.7 gl–1) danacteosidepengeluaran (0.4 gl–1) mencapai maksimum, iaitu 1.4-lipatan dan 1.5-lipatan daripada rawatan putrescine insingle tersebut, 1.6-lipatan dan 1.4-kali ganda daripada rawatan Ag plus tunggal, masing-masing. Putresin eksogen meningkatkan daya maju sel dan aktiviti enzim antioksidan dengan ketara sehingga meningkatkan biojisim akhir. Penambahan Ag tambah meningkatkan kandungan H2O2 dan aktiviti fenilalanineammonia-lyase dengan ketara yang membawa kepada lebih tinggiechinacosidedanacteosidekandungan.

Kata kunciActeoside,Cistanche deserticola, Echinacoside, Elicitor, Budaya penggantungan

Singkatan

APOX Ascorbate peroxidase

CAT Catalase

H2O2 Hidrogen peroksida

PAL Phenylalanine ammonia-lyase

PeGs Phenylethanoid glycosides

Spesies oksigen reaktif ROS

SOD Superoxide dismutase

Cistanche deserticola

Klik untuk produk ekstrak Cistanche UK dan Cistanche

pengenalan

Cistanche deserticolaYC Ma digunakan secara meluas dalam perubatan tradisional Cina. Phenylethanoid glycosides(PeGs) adalah juzuk bioaktif utama dalam tumbuhan ini.Antara PeGs,echinacosidedanacteosideadalah komponen utama untuk meningkatkan potensi seksual, mengawal fungsi imun, menghilangkan radikal bebas, dan sifat anti-penuaan (Song et al. 2003). Disebabkan oleh eksploitasi berlebihan, penanaman yang sukar, dan persekitaran yang merosot, liar Cistanche deserticolatumbuhan berada di ambang kepupusan. Kultur sel tumbuhan mungkin merupakan alternatif yang menarik untuk mendapatkan komponen bioaktif ini. Masalah utama yang dihadapi dalam kultur in vitroCistanche deserticolaadalah kandungan biojisim rendah dan rendahPeG. Banyak elisitor dilaporkan merangsang PeGsynthesis (Cheng et al. 2005, 2006; Lu dan Mei 2003; Ouyang et al. 2003a; Xu et al. 2005), tetapi malangnya, kebanyakan elisitor menurunkan biojisim sel.

Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, gabungan elisitor yang berbeza diterokai dalam budaya penggantungan sel tumbuhan. Disebabkan oleh tindakan pembezaan elisitor yang berbeza, gabungan elisitor yang berbeza mungkin mencapai kesan sinergik. Elisitor boleh dicantumkan pada masa yang sama, contohnya, dalam budaya penggantungan Taxus spp. (Yuan et al. 2002) dan ginseng (Bae et al. 2006). Sebaliknya, menambah elisitor berbeza pada peringkat pertumbuhan biojisim dan peringkat pengeluaran metabolit sekunder masing-masing memberikan pengeluaran biojisim dan takson maksimum dalam budaya ampaian Taxus baccata ( Khosroushahiet al. 2006). Walau bagaimanapun, beberapa laporan tersedia mengenai penggunaan gabungan elisitor dalam kultur sel Cistanche deserticola.

EhcinacosidedalamCistanche deserticola

Laporan terdahulu tentangCistanche deserticolamenumpukan pada peningkatan kandungan PeG, tetapi elisitor seperti poliamina untuk mempromosikan biojisim sebahagiannya diabaikan. Poli amina boleh menggalakkan biojisim kalus dengan meningkatkan pembiakan sel dan mengurangkan penuaan sel (Bais dan Ravishankar 2002). Telah dilaporkan baru-baru ini bahawa poliamina terlibat dalam interaksi dengan toleransi tekanan etilena dan biotik, manakala etilena dan spesies oksigen reaktif (ROS) daripada tegasan abiotik mengakibatkan penuaan dan kematian sel (Cona et al. 2006). Sebaliknya, tekanan oksidatif yang disebabkan oleh elisitor mengakibatkan pengumpulan ROS, termasuk hidrogen peroksida (H2O2) dan anion superoksida (O2–), yang dilaporkan menjadi pengantara dengan kematian sel terprogram dan sintesis metabolit sekunder sebagai molekul isyarat (Yuan et al. 2001). ; Xu dan Dong 2005). Sebagai contoh, H2O2 mendorong ekspresi gen ammonia-lyase fenilalanin (EC 4.3.1.5), enzim penting untuk tindak balas pertahanan dan metabolisme sekunder (Desikan et al. 1998), yang mengawal pengeluaran PeG dalam kultur selCistanche deserticola(Cheng et al. 2005; Ouyanget al. 2003a). Memandangkan tegasan oksidatif, beberapa ion logam, seperti Ni2 tambah, Co2 tambah, Ag tambah, menggalakkan sintesis metabolit sekunder dengan cekap dalam banyak tumbuhan (Zhao et al. 2005). Mungkin ia boleh meningkatkan aktiviti PAL dan pengeluaran PeG. Dalam kajian ini, poliamina dan ion logam, serta gabungan elisitor tersebut, digunakan untuk meningkatkan pertumbuhan kalus,echinacoside, danacteosidekandungan daripada Cistanche deserticola. Di samping itu, hubungan antara elisitor dan kandungan H2O2, serta kesannya terhadap aktiviti PAL dan enzim antioksidan juga disiasat.

Bahan dan kaedah

Bahan tumbuhan

Cistanche deserticolagarisan sel telah diinduksi daripada batang. Selepas pensterilan, batang dipotong kira-kira 1 cm3 dan dikultur pada medium B5 (Gamborg et al. 1968) yang mengandungi 5 lM asid naftalenasetat (NAA), 9 lM 6-benzyl adenine (6-BA), 4 lM 2,4-asid dichlorophenoxyacetic (2,4-D), dan 30 g sukrosa l–1. Selepas 30 hari, kalus kuning muda telah dikeluarkan dan disubkultur pada medium B5 dengan 5 lMNAA, 9 lM 6-BA dan 1 lM 2,4-D, dan kultur ampaian sel telah ditubuhkan mengikut kaedah daripadaOuyang et al. (2003b).

Budaya kalus

Kira-kira 1.5 g kalus segar (0.125 g DW) daripada 20-kultur ampaian sehariCistanche deserticolatelah disuntik ke dalam 250-ml kelalang Erlenmeyer yang mengandungi 50 ml medium B5. B5medium telah ditambah dengan 5 lM NAA, 9 lM 6-BA, 1 lM 2,4-D, dan 30 g sukrosa l–1 pada pH 5.6 sebelum diautoklaf. Semua eksperimen dilakukan dengan tiga ulangan pada 25 darjah dalam gelap pada penggoncang berputar (110 rev min–1) selama 20 hari.

ActedosiedalamCistanche deserticola

Rawatan elicitor

Dalam satu eksperimen elisitasi, larutan tersteril penapis putrescine (Put), spermine (Spm), spermidine (Spd), peraknitrat, dan kobalt klorida telah ditambah kepada medium pada kepekatan yang direka untuk menyiasat kesan pertumbuhan onkal dan kandungan PeG. Dengan jenis dan kepekatan elicitor yang optimum, kesan masa penyusuan telah disiasat. Kemudian, berdasarkan kepekatan optimum dan masa penyusuan, gabungan elisitor berbeza direka bentuk untuk meningkatkan pengeluaran PeG dalam eksperimen elisitasi dua peringkat. Budaya kalus tanpa elicitor bertindak sebagai kawalan. Untuk menyiasat mekanisme tindakan elicitor, kalus telah dikeluarkan pada masa yang direka bentuk selepas penambahan untuk analisis lanjut dalam eksperimen dua peringkat elicitation.

Ujian biokimia

Pada masa yang direka selepas penambahan elicitor, sel-sel ditapis dan dibasuh perlahan-lahan dengan air suling. Kemudian kebolehhidupan sel ditentukan dengan pewarnaan 2,3,5-triphenyl tetrazolium klorida mengikut kaedah Verleysenet al. (2004), Indeks daya maju ditakrifkan sebagai penyerapan yang diukur setiap gram tisu segar. Kandungan H2O2 sel segar ditentukan mengikut kaedah Velikova et al. (2000). Penentuan aktiviti fenilalanin ammonia-lyase (PAL) (EC 4.3.1.5) adalah berdasarkan kaedah Koukol dan Conn (1961). Kaedah yang digunakan untuk superoksida dismutase (SOD) (EC1.15.1.1), katalase (CAT) (EC 1.11.1.6), pengekstrakan askorbat peroksidase (APOX), dan penentuan adalah sama seperti yang digunakan oleh Jebara et al. (2005).

Pengukuran biojisim, echinacoside, dan acteoside

Untuk penentuan berat kering (DW), kalus ditapis dan dicuci dengan air suling, dan kemudian dikeringkan beku kepada berat malar untuk merekodkan berat kering.

Sel kering (20} mg) telah diekstrak dengan 10 ml 50 peratus (v/v)metanol pada suhu bilik dalam ultrasonik (40 kHz, 160 W) selama 15 minit. Selepas penapisan melalui penapis 0.22 lm, 20 ll sampel disuntik ke dalam sistem HPLC (Waters 2695) yang dilengkapi dengan lajur C18 (Diamonsil, 250 mm · 4.6 mm, saiz zarah 5 μm). Fasa gerak terdiri daripada metanol dan 0.05 peratus larutan asetat-air (v/v) dalam nisbah 35:65 (v/v). Kadar alir ialah 1.0 ml min^–1, suhu lajur ialah 30 darjah dan panjang gelombang pengesanan UV (Waters 2996) ialah 334 nm.

Keluk penentukuran bagiechinacosidedanacteosideberada dalam kelinearan yang baik dalam julat {{0}}.2–6.4 lg(r=0.9997) dan 0.16–4.6 lg (r {{1{{ 24}}}}.9995), masing-masing. Purata pemulihan echinacoside dan acteoside(n=5) ialah 98.7 peratus (RSD=1.5 peratus ) dan 98.2 peratus (RSD=1 .28 peratus ), masing-masing. Eksperimen ketepatan dan ketepatan menunjukkan keputusan yang baik, sisihan piawai relatif kurang daripada 2 peratus . Had kuantifikasi adalah 0.04 dan 0.06 lg untuk echinacoside dan acteoside, masing-masing. Piawaian Echinacoside dan acteoside telah dibeli daripada NICPBP (Institut Kebangsaan untuk Kawalan Produk Farmaseutikal dan Biologi, Beijing, China). Pengeluaran echinacoside/acteoside=kandungan echinacoside/acteoside (mg g–1 DW) x Biojisim (g DW l^–1).

Analisis statistik

Semua eksperimen dan penentuan diulang tiga kali dan semua nilai adalah cara bagi tiga kali ganda ± SE. Data telah diserahkan kepada analisis varians (ANOVA sehala, ujian Tukey) untuk mengesan perbezaan ketara oleh PROC ANOVA versi SAS 6.12.

Keputusan

Kesan poliamina pada pertumbuhan kalus,echinacoside, danacteosidekandungan.

Jadual 1 menunjukkan kesan poliamina terhadap pertumbuhan kalus,echinacoside, danacteosidekandungan daripadaCistanche deserticola. Put dan Spm menggalakkan pertumbuhan kalus dengan ketara dan kepekatan yang sesuai. Kira-kira 25 lM Put adalah paling cekap dan biojisim (11.2 g DW l–1) ialah 1.3-kali ganda kawalan. Pada masa yang sama poliamina dipertingkatkanechinacosidekandungan dengan ketara. Apabila 25 lM Put telah ditambah,echinacosidekandungan meningkat sebanyak 46 peratus berbanding dengan kawalan manakala tiada peningkatan ketara kandungan acteoside didapati.

Kesan Ag plus dan Co2 plus pada pertumbuhan kalus, echinacoside dan kandungan acteoside

Kesan ion logam terhadap pertumbuhan kalus,echinacoside, danacteosidekandungan digambarkan dalam Jadual 2. Kandungan Echinacoside dan acteoside telah dipromosikan dengan sangat baik oleh Ag plus manakala pertumbuhan kalus dihalang sedikit. Apabila 10 lM Ag tambah ditambah,echinacosidekandungan danacteosidekandungan meningkat masing-masing sebanyak 73 peratus dan 62 peratus berbanding dengan kawalan. Pada masa yang sama tidak terdapat perbezaan yang signifikan dalam biojisim antara rawatan Ag plus dan kawalan. Co2 plus hampir tidak menunjukkan kesan positif pada pertumbuhan kalus dan kandungan PeG.

Kesan masa makan pada pertumbuhan kalus, echinacoside, dan kandungan acteoside

Put (25 lM) dan Ag plus (10 lM) telah dipilih untuk eksperimen selanjutnya. Kesan masa penyusuan terhadap pertumbuhan kalus,echinacoside, danacteosidekandungan ditunjukkan dalam Jadual 3. Apabila Put (25 lM) ditambah pada hari ke-8, biojisim maksimum (11.8 g DW l–1) telah diperolehi. Dalam pada itu, pihakechinacosidekandungan dinaikkan kepada 107.2 mg g–1 DW manakalaacteosidekandungan adalah hampir sama dengan kawalan.

Penambahan Ag plus pada masa yang lebih awal membawa kepada kurang biojisim. Dengan menambahkan Ag tambah (10 lM) pada hari ke-16, kedua-duanyaechinacosidekandungan(127.9 mg g–1 DW) danacteosidekandungan (34.2 mg g–1 DW)mencapai maksimum, iaitu masing-masing 2.2-lipatan dan 1.4-lipatan dalam kawalan.

Kesan gabungan Put dan Ag plus pada pertumbuhan kalus, echinacoside, dan pengeluaran acteoside

Seperti yang ditunjukkan dalam keputusan elisitor tunggal, Tambah penambahan pada peringkat awal meningkatkan biojisim, dan penambahan Ag ditambah dalam kandungan echinakosida dan acteoside digalakkan peringkat akhir tanpa mengurangkan biojisim dengan ketara. Jadi protokol dua peringkat telah direka bentuk. Put (25 lM) dan Ag plus (10 lM) telah ditambah pada peringkat optimum masing-masing.

Rajah 1 menunjukkan kesan gabungan penambahan Putand Ag plus terhadap pertumbuhan kalus,echinacoside, danacteosidepengeluaran berbeza dengan kawalan. Apabila Put (25 lM) ditambah pada hari ke-8 dan Ag plus (10 lM) ditambah pada hari16, biojisim optimum (11.4 g DW l–1), kandungan echinacoside (152.4 mg g–1 DW), dan kandungan acteoside(36.1 mg g–1 DW) dicapai pada hari ke-20 (Rajah 1). Theechinacosidepengeluaran (1.7 gl–1) danacteosidepengeluaran (0.4 gl–1) berjumlah 3.3-kali ganda dan 2.1-kali ganda daripada mereka dalam kawalan, masing-masing, yang lebih tinggi daripada mereka dalam elisitasi tunggal (Jadual 3) . Berbanding dengan rawatan elicitor tunggal, yangechinacosidedanacteosidepengeluaran dengan menggabungkan elicitor ialah 1.4-lipatan dan 1.5-lipatan daripada rawatan Put tunggal, 1.6-lipatan dan 1.4-lipatan daripada rawatan Ag plus insingle tersebut , masing-masing. Pembiakan berpanjangan mengurangkan biojisim, pengeluaran echinacoside, dan pengeluaran acteoside (Rajah 1)

Rajah 1 Profil biojisim (A),echinacoside, danacteosidepengeluaran (B) dengan/tanpa menggabungkan elisitor dalam budaya penggantungan bagiCistanche deserticola. Bar menegak mewakili ralat piawai bagi tiga replikasi. Kalus, 0.125 g DW, telah diinokulasi ke dalam 250-ml kelalang Erlenmeyer yang mengandungi medium B5 50 ml. Put (25 lM) dan Ag plus (10 lM) telah ditambah pada hari ke-8 dan hari ke-16, masing-masing. Eksperimen dilakukan pada 25 darjah dalam gelap pada penggoncang berputar (110 rev min-1) selama 20 hari

Kesan Put dan Ag plus pada daya maju sel, kandungan H2O2, dan aktiviti enzim PAL dan antioksidan

Untuk memahami mekanisme tindakan elisitor terhadap pertumbuhan sel dan metabolisme sekunderCistanche deserticola, perubahan daya maju sel, kandungan H2O2, dan aktiviti enzim PAL dan antioksidan selepas penambahan Put dan Ag plus telah diperiksa dalam budaya elisitasi dua peringkat. ApabilaPut ditambahkan pada hari ke-8 (0 h dalam Rajah 2), kandungan H2O2 menurun dengan cepat, iaitu masing-masing hanya 48.9 peratus daripada kawalan pada jam ke-6, dan pulih ke tahap kawalan secara beransur-ansur selepas 24 jam (Rajah). 2A). Daya tahan sel meningkat sehingga 12 jam dan kemudian menurun secara berterusan, iaitu 26.9 peratus dan 16.7 peratus lebih tinggi daripada kawalan pada 24 jam dan 48 jam, masing-masing (Rajah 2B). Aktiviti SOD dan APOX meningkat dengan ketara selepas 6 jam, dan aktiviti SOD menurun kepada tahap kawalan yang sama selepas 24 jam manakala APOXaktiviti masih 1.3-kali ganda kawalan (Rajah 2C, D). Putaddition tidak menunjukkan pengaruh yang signifikan terhadap aktiviti CAT (Rajah 2E). Penurunan kandungan H2O2 dan pertumbuhan aktiviti enzim anti-oksidatif bermakna kurang kerosakan oksidatif dan mengekalkan lebih banyak sel berdaya maju daripada kawalan.

Rajah 2 Perubahan kandungan H2O2, daya maju sel, APOX, SOD, CAT, dan aktiviti PAL selepas Tambah pada hari ke-8 kultur insuspensiCistanche deserticola. Bar menegak mewakili ralat piawai bagi tiga ulangan

Pada masa yang sama, aktiviti PAL mencapai maksimum pada jam ke-12 dan kemudian menurun secara beransur-ansur ke tahap yang serupa dengan kawalan selepas 48 jam (Rajah 2F).

Sel-sel telah dikultur secara berterusan selepas penambahan Put, dan Ag plus telah ditambahkan pada medium pada hari ke-16 (0 h dalam Rajah 3). Kandungan H2O2 meningkat dengan cepat dan mengekalkan tahap yang lebih tinggi daripada kawalan sehingga 48 jam (Rajah 3A). Walau bagaimanapun, daya maju sel telah dihalang dengan ketara dan menjadi lebih kecil (Rajah 3B). Aktiviti APOX mengekalkan paras malar dan menurun selepas 24 jam (Rajah 3C). Aktiviti SOD dan CAT meningkat secara mendadak selepas 3 jam dan mencapai maksima masing-masing pada 12 jam dan 6 jam, iaitu 1.6-lipat dan 1.0-lipat lebih tinggi daripada kawalan, kemudian turun perlahan-lahan(Gamb. 3D , E). Aktiviti PAL meningkat kepada 2.1-kali ganda kawalan selepas 24 jam, iaitu masih 22.5 peratus lebih tinggi daripada kawalan selepas 48 jam (Rajah 3F).

Rajah 3 Perubahan kandungan H2O2, daya maju sel, APOX, SOD, CAT, dan aktiviti PAL selepas penambahan Ag pada hari ke-16 kultur insuspensiCistanche deserticoladengan Tambah Put onday 8. Bar menegak mewakili ralat piawai bagi tiga ulangan.

Perbincangan

Poliamina dan ion logam menunjukkan pengaruh yang berbeza pada pertumbuhan kalus dan penghasilan PeGCistanche deserticola. Pada kepekatan yang betul, poliamina terutamanya meningkatkan pertumbuhan kalus, manakala Ag plus menggalakkan pengeluaranechinacosidedanacteosidedengan ketara. Apabila kedua-dua Putand Ag plus pada kepekatan optimum ditambah pada masa yang berbeza, beberapa kesan sinergik berlaku.

Untuk pertumbuhan kalus, kesan promosi bergantung pada jenis poliamina, kepekatan, dan masa makan. 25 lMPut adalah paling berkesan untuk pertumbuhan kalus apabila ditambah pada hari 8. Elisitor menunjukkan kesan promosi yang optimum pada peringkat pertumbuhan awal. Walaupun Ag plus dan Co2 plus didapati meningkatkan metabolit sekunder dalam tumbuhan yang berbeza (Zhaoet al. 2005), hanya Ag plus menunjukkan kesan positif ke atas kandunganechinacosidedanacteoside. Kerana Ag plus boleh menghalang daya maju sel dan percambahan sel, penambahan Ag plus pada hari 16 meningkatkan pengeluaranechinacosidedanacteosidetanpa mengurangkan biojisim dengan ketara.

Apabila sel tumbuhan terdedah kepada rawatan elicitor, elicitor memulakan transduksi isyarat dari permukaan membran plasma dan pengeluaran ROS, mendorong tindak balas pertahanan tumbuhan, dan meningkatkan metabolisme sekunder tumbuhan dengan mengawal enzim utama yang memangkinkan biosintesis metabolit sekunder sasaran (Zhao et al. 2005). Tekanan datif oksi akibat rawatan elicitor mengakibatkan ROSakumulasi dan boleh dikurangkan oleh enzim antioksidan, termasuk SOD, APX, CAT dan POD. Apabila kerosakan oksidatif berada di luar fungsi enzim antioksidan, sel tumbuhan mungkin mati apabila daya maju sel berkurangan.

H2O2, sejenis ROS, dianggap sebagai pengantara dengan kematian sel yang diprogramkan dan mengawal sintesis metabolit sekunder dengan mendorong ekspresi banyak gen pertahanan dan gen biosintesis metabolit sekunder, seperti PAL. H2O2, sejenis ROS, dianggap sebagai pengantara dengan kematian sel yang diprogramkan dan mengawal sintesis metabolit sekunder dengan mendorong ekspresi banyak gen pertahanan dan gen biosintesis metabolit sekunder, seperti PAL.

Poliamina meningkatkan toleransi tegasan abiotik dengan memusnahkan ROS dengan cekap, melindungi asid nukleik dan membran (Alcazar et al. 2006), dan meningkatkan aktiviti antioksidan enzim (Tang dan Newton 2005). Menurut laporan Papadakis dan Roubelakis-Angelakis (2005), Put menunjukkan kesan penyekatan yang lebih baik terhadap pengumpulan ROS berbanding Spd dan Spm. Seperti yang ditunjukkan dalam keputusan kami, rawatan inPut biojisim terakhir adalah lebih banyak daripada rawatan Spd dan Spm. Eksogen Put mengurangkan kandungan H2O2, meningkatkan aktiviti enzim antioksidan, dan daya maju sel dengan cekap. Mungkin daya maju sel yang lebih tinggi menyumbang kepada lebih banyak percambahan dan biojisim yang lebih tinggi. Kemudian boleh dijelaskan mengapa penambahan Ag tambah pada masa yang lebih awal membawa kepada kurang biojisim untukAg ditambah pengumpulan H2O2 yang dipertingkatkan dan kebolehhidupan sel menurun dengan ketara. Aktiviti enzim antioksidan telah dipertingkatkan untuk mengurangkan tekanan oksidatif tanpa mempengaruhi daya maju sel. Penambahan Ag plus juga menggalakkan PALactivity serta pengeluaranechinacosidedanacteosidedengan ketara. Mekanisme ini mungkin konsisten dengan keputusan Desiken et al. (1998) dan Yuan et al. (2001). H2O2 mungkin memainkan peranan penting dalam percambahan sel dan pengeluaran PeG. Meletakkan peningkatan aktiviti PAL danechinacosidekandungan dalam satu darjah, mungkin dalam beberapa cara yang berbeza untuk Meletakkan kandungan H2O2 yang berkurangan.

Dalam tahun-tahun kebelakangan ini, kebanyakan laporan telah memfokuskan pada kesan elisitor tunggal pada pertumbuhan kalus dan kandungan PeGsCistanche deserticola. Walau bagaimanapun, banyak elisitor tidak meningkatkan pertumbuhan kalus pada kepekatan optimum, seperti achitosan, funal elicitor (Fusarium solani), metil jasmonate, dan asid salisilik (Cheng et al. 2006; Lu dan Mei2003; Xu et al. 2005). Campuran unsur nadir bumi meningkatkan pertumbuhan sel dan pengeluaran PeG, masing-masing 26 peratus dan 167 peratus lebih tinggi daripada kawalan (Ouyanget al. 2003b). Elicitation berulang dengan elicitor tunggal juga meningkatkan pengeluaran PeG dengan ketara (Cheng et al.2005, 2006). Ia adalah alternatif yang baik untuk mendapatkan biojisim optimum dan pengeluaran PeG dengan menambah elisitor yang berbeza pada peringkat yang berbeza. Apabila 25 lM Put dan 10 lM Ag ditambah masing-masing ditambahkan pada hari ke-8 dan hari ke-16,echinacosidepengeluaran (1.7 gl–1) dan pengeluaran acteoside (0.4 gl–1)mencapai maksimum, yang lebih tinggi daripada pengeluaran Put tunggal atau Ag plus serta laporan terdahulu.

Daripada: ' Penambahbaikanechinacosidedanacteosidepengeluaran melalui elisitasi dua peringkat dalam budaya penggantungan selCistanche deserticola' olehWen-Hao Chen et al

---World J Microbiol Biotechnol (2007) 23:1451–1458 / Springer Science serta Business Media BV 2007

Rujukan

Alcazar R, Marco F, Cuevas JC, Patron M, Ferrando A, Carrasco P, Tiburcio AF, Altabella T (2006) Penglibatan poliamina dalam tindak balas tumbuhan terhadap tekanan abiotik. Bioteknol Lett 28:1867–1876
Bae KH, Choi YE, Shin CG, Kim YY, Kim YS (2006) Produktiviti ginsenoside dipertingkatkan dengan gabungan ethephon dan metil jasmonate dalam kultur akar adventif ginseng (Panax ginseng CA Meyer). Bioteknol Lett 28:1163–1166
Bais HP, Ravishankar GA (2002) Peranan poliamina dalam ontogeni tumbuhan dan aplikasi bioteknologinya. Kultus Organ Tisu Sel Tumbuhan 69:1–34
Cheng XY, Guo B, Zhou HY, Ni W, Liu CZ (2005) Elisitasi berulang meningkatkan pengumpulan glikosida phenylethanoid dalam kultur ampaian selCistanche deserticola. Biochem Eng J 24:203–207
Cheng XY, Zhou HY, Cui X, Ni W, Liu CZ (2006) Penambahbaikan biosintesis glikosida phenylethanoid dalamCistanche deserticolakultur ampaian sel oleh elisitor kitosan. J Bioteknol 121:253–260
Cona A, Rea G, Angelini R, Federico R, Tavladoraki P (2006) Fungsi oksidase amina dalam pembangunan dan pertahanan tumbuhan. Loji Trend Sci 11:80–88
Desikan R, Reynolds A, Hancock JT, Neill SJ (1998) Harpin dan hidrogen peroksida kedua-duanya memulakan kematian sel yang diprogramkan tetapi mempunyai kesan berbeza pada ekspresi gen pertahanan dalam budaya ampaian Arabidopsis. Biokim J 330:115–120
Gamborg OL, Miller RA, Ojima K (1968) Keperluan nutrien kultur ampaian sel akar kacang soya. Eksp Sel Res 50:151–158Jebara S, Jebara M, Limam F, Aouani ME (2005) Perubahan dalam
askorbat peroksidase, katalase, guaiacol peroksidase, dan aktiviti superoksida dismutase dalam nodul kacang biasa (Phaseolus vulgaris) di bawah tekanan garam. J Tumbuhan Physiol 162:929–936
Khosroushahi AY, Valizadeh M, Ghasempour A, Khosrowshahli M, Naghdibadi H, Dadpour MR, Omid Y (2006) Peningkatan pengeluaran taxol dengan gabungan faktor-faktor pendorong dalam budaya sel penggantungan Taxus baccata. Sel Biol Int 30:262–269
Koukol J, Conn EE (1961) Metabolisme aromatik dan sifat fenilalanin deaminase Hordeum vulgare. J Biol Chem 236:2692–2698
Lu CT, Mei XG (2003) Penambahbaikan pengeluaran glikosida phenylethanoid oleh elisitor kulat dalam budaya penggantungan selCistanche deserticola. Bioteknol Lett 25:1437–1439
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Yuan XF, Wang YC (2003a) Pembentukan glikosida phenylethanoid olehCistanche deserticolakalus tumbuh pada media pepejal. Bioteknol Lett 25:223–225
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Yuan XF, Wang YC (2003b) Kesan unsur nadir bumi terhadap pertumbuhanCistanche deserticolasel dan penghasilan glikosida phenylethanoid. J Bioteknol 102:129–134
Papadakis AK, Roubelakis-Angelakis KA (2005) Poliamina menghalang penjanaan superoksida pengantara oksidase NADPH dan putrescine menghalang kematian sel terprogram yang disebabkan oleh hidrogen peroksida yang dihasilkan oleh poliamina oksidase. Planta 220:826–837
Song ZH, Lei L, Tu PF (2003) Kemajuan dalam penyelidikan aktiviti farmakologi dalam tumbuhanCistancheHoffing dan Link. Dadah Herba Tradit Dagu 34:16–18
Tang W, Newton RJ (2005) Poliamina mengurangkan kerosakan oksidatif yang disebabkan oleh garam dengan meningkatkan aktiviti enzim antioksidan dan mengurangkan peroksidasi lipid dalam pain Virginia. Peraturan Pertumbuhan Tumbuhan 46:31–43
Velikov V, Yordanov I, Edreva A (2000) Tekanan oksidatif dan beberapa sistem antioksidan dalam hujan asid yang dirawat oleh tumbuhan telah berperanan melindungi poliamina eksogen. Tumbuhan Sci 151:59–66
Verleysen H, Samyn G, Van Bockstaele E, Debergh P (2004) Penilaian teknik analisis untuk meramal daya maju selepas cryopreservation. Kultus Organ Tisu Sel Tumbuhan 77:11–21
Xu MJ, Dong JF (2005) O2– daripada letupan oksidatif yang disebabkan oleh elicitor adalah perlu untuk mencetuskan pengaktifan ammonia-lyase fenilalanin dan sintesis catharanthine dalam kultur sel Catharanthus roseus. Enzim Mikrob Technol 36:280–284
Xu LS, Xue XF, Fu CX, Jin ZP, Chen YQ, Zhao DX (2005) Kesan metil jasmonate dan asid salisilik pada sintesis glikosida phenylethanoid dalam kultur ampaianCistanche deserticola. Chin J Biotechnol 21:402–406
Yuan YJ, Li C, Hu ZD, Wu JC (2001) Laluan transduksi isyarat untuk letusan oksidatif dan pengeluaran takson dalam budaya ampaian Taxus Chinensis var. mairei disebabkan oleh oligosakarida daripada Fusarium oxysprum. Enzim Mikrob Technol 29:372–379
Yuan YJ, Wei ZJ, Miao ZQ, Wu JC (2002) Laluan bertindak elisitor pada laluan biosintesis Taxol dan kesan sinergistiknya. Biochem Eng J 10:77–83
Zhao J, Davis LC, Verpoorte R (2005) Transduksi isyarat elicitor yang membawa kepada pengeluaran metabolit sekunder tumbuhan. Bioteknol Adv 23:283–333