Bagaimana Cistanche Mencegah Penyakit Hati

Hubungi:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Abstrak

Untuk menyelidik pencirian awal, aktiviti antioksidan dan hepatoprotektif polisakarida daripadaCistanche deserticola (CDPs), tiga pecahan polisakarida, CDP-A, CDP-B, dan CDP-C, diperolehi melalui penapisan membran berturut-turut (mikrofiltrasi, ultraturasan dan nanofiltrasi). Berat molekul, komposisi monosakarida, ketulenan, dan spektrum IR bagi tiga pecahan telah dianalisis. Keputusan menunjukkan bahawa CDP-C mengandungi bahagian asid galakturonik (GalUA) yang lebih tinggi daripada CDP-B dan CDP-A. Aktiviti antioksidan juga dianalisis dan keputusan menunjukkan bahawa CDP-C mempunyai aktiviti yang paling tinggi. Oleh itu, aktiviti hepatoprotektif CDP-C dikaji lebih lanjut. Penyelidikan in vitro, CDP-C menggalakkan daya maju sel HepG2. Dalam penyelidikan vivo, CDP-C memperbaiki perubahan yang disebabkan oleh alkohol, termasuk indeks serologi (alanine transaminase, asid fosfatase, -glutamyl transpeptidase, dan trigliserida) dan penunjuk hepatik (superoxide dismutase, malondialdehid, glutathione S-transferase, dan trigliserida) dalam model haiwan. Steatosis mikrovesikular yang menonjol dan nekrosis ringan dalam histopatologi hepatik haiwan model juga dilemahkan oleh pentadbiran CDP-C. Penemuan ini menunjukkan bahawa CDP-C mempunyai aktiviti hepatoprotektif terhadap kecederaan hepatik kronik yang disebabkan oleh alkohol. Mekanisme asas mungkin CDP-C boleh mengurangkan kandungan MDA dan TG, dan memodulasi aktiviti enzim relatif. Hartanah ini mungkin dikaitkan dengan GalUA dalam CDP-C.

Kata kunci: Cistanche deserticola; Polisakarida; Pencirian awal; Antioksida; Aktiviti hepatoprotektif.

cistanchebienfaitsdeserticola

1. Pengenalan

Cistanche ialah holoparasit saka dan kebanyakannya diedarkan di kawasan padang pasir barat laut China [1, 2]. Batang spesies Cistanche (Orobanchaceae) pertama kali direkodkan dalam Materia Medica Cina Shen Nong. Cistanche telah lama digunakan sebagai ubat herba tradisional untuk rawatan kekurangan buah pinggang, mati pucuk, sembelit nyanyuk, sakit dan kelemahan pinggang dan lutut, dan kekurangan darah [3, 4]. Penyelidikan farmakologi mendedahkan bahawa Cistanche mempunyai aktiviti anti-radang [5, 6], aktiviti anti-osteoporosis [7, 8], kesan sedatif [9], aktiviti antikeletihan [10], kesan neuroprotektif [11]. Selain itu, polisakarida daripada Cistanche deserticola (CDPs) mempunyai kesan anti-hiperglisemik dan hipolipidemik [12], aktiviti imunologi [13], dan kesan percambahan pada limfosit [14].

Alkohol, minuman yang digunakan di seluruh dunia, dan bahan tambahan makanan menyebabkan hampir 2.5 juta kematian setiap tahun di dunia [15, 16]. Kematian ini terutamanya berkaitan dengan penyakit hati yang disebabkan oleh penyalahgunaan alkohol [17, 18]. Penyakit hepatik yang disebabkan oleh alkohol adalah perkembangan kronik berbilang langkah yang kompleks, biasanya berkembang daripada steatosis alkohol kepada hepatitis alkohol dan akhirnya kepada sirosis alkohol [19]. Oleh itu, mengenal pasti produk semula jadi yang aktif untuk pengguna alkohol untuk mencegah atau memperlahankan perkembangan kecederaan hati alkohol pada peringkat awal adalah strategi pengurusan yang bermanfaat.

Cistanche deserticola YC Ma dan Cistanche tubulosa (Schrenk) Wight ialah dua spesies perubatan yang direkodkan dalam Pharmacopoeia Cina [3]. Banyak kertas kerja telah menjelaskan aktiviti hepatoprotektif C. tubulosa [20-24] dan C. deserticola [25, 26]. Tetapi penyelidikan hepatoprotektif ini sentiasa bertujuan untuk kecederaan hati akut yang disebabkan oleh karbon tetraklorida (CCl4) atau D-galactosamine dan lipopolysaccharide, tetapi tidak mengambil berat tentang kecederaan hati kronik yang berkaitan dengan penyalahgunaan alkohol. Di samping itu, laporan ini tertumpu terutamanya pada mekanisme glikosida phenylethanoid (PhGs) dan bukannya CDP. Oleh itu, dalam kajian ini, pencirian awal CDP dan aktiviti antioksidannya (in vitro) telah disiasat. Selain itu, model kecederaan hati tikus ICR yang disebabkan oleh wain semangat putih telah ditubuhkan untuk mengkaji aktiviti hepatoprotektif CDP terhadap kecederaan hati kronik yang disebabkan oleh alkohol.

ekstrak herba cistanche dan tongkat ali

2. Bahan-bahan dan cara-cara

2.1. Bahan

Batang C. deserticola dikumpulkan dari Liga Alashan, Mongolia Dalam China,dan dikenal pasti oleh Prof. Xiaodong Wang (Bahagian Kejuruteraan Penapisan Bio, Institut Kejuruteraan Proses, Akademi Sains China, Beijing, PR China).

Dimetil sulfoksida (DMSO), 2, 2-azino-bis (3-etilbenzthiazolin-6-asid sulfonik) (ABTS), 3-(4, 5-dimetiltiazol{ {8}}yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT), dan 1, 1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH) telah dibeli daripada Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, Amerika Syarikat). Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) dan fetal bovine serum (FBS) telah dibeli daripada Invitrogen, Inc. Er Guo-tou white spirit dibeli daripada Beijing Red Star Co., LTD. Bicyclol telah dibeli dari Beijing Union Pharmaceutical Factory. Larutan akueus disediakan dengan air ultra-tulen daripada sistem penulenan air Milli-Q (Millipore, Bedford, MA, USA). Semua reagen lain adalah gred analitik.

2.2. Pengekstrakan CDP dan penapisan pecahan

CDP mentah telah disediakan mengikut kaedah kumpulan kami yang dilaporkan sebelum ini [27] dengan sedikit pengubahsuaian. Secara ringkasnya, serbuk (40 mesh) C. deserticola (50 kg) diekstrak secara ultrasonik (40 kHz dan 6 kW) dengan 1000 L larutan etanol berair (50 peratus , v/v) pada 60 ◦C selama 120 minit. Polisakarida diasingkan daripada ekstrak dengan resin makroporous (HPD 300). Larutan polisakarida tertumpu di bawah tekanan yang dikurangkan, dinyahprotein menggunakan kaedah Sevag [28], dan produk yang dikeringkan beku dipanggil CDP mentah.

Kemudian 50 g daripada CDP mentah telah dilarutkan dalam 2.5 L air ultratulen dan diasingkan berturut-turut dengan penapisan mikro, ultraturasan dan penapisan nano (potongan berat molekul nominal ialah 300 kDa, 10 kDa dan 200 Da. Membran berkesan keluasan ialah 0.625 m2). Larutan tertahan mikrofiltrasi telah diliofilkan dan dipanggil CDP-A. Larutan meresap mikroturasan ditapis dengan ultra-turasan, manakala larutan tertahan telah diliofilkan dan dinamakan CDP-B. Larutan ultra-turasan yang meresap telah ditapis dengan penapisan nano, larutan tertahan telah diliofilkan dan dinamakan sebagai CDP-C.

2.3. Pencirian awal CDP

Saiz molekul CDP dinilai mengikut kaedah yang dilaporkan sebelum inikumpulan kami [29]. Komposisi monosakarida dianalisis menggunakan kaedah yang diterangkan oleh P. Zhang et al [30]. Ketulenan ditentukan mengikut kaedah asid fenol-sulfurik [31]. Kandungan protein ditentukan menggunakan kaedah yang disebutkan oleh Bradford dan Maja Kozarski [32, 33]. Spektrum FT-IR CDP telah ditangkap dengan Spektrometer Inframerah Transformasi Fourier (FT/IR-660 Plus, JASCO) dalam julat 400~4000 sm-1.

2.4. Aktiviti antioksidan

Kesan penghapusan CDP pada hidroksil, anion superoksida, DPPH, dan radikal ABTS dinilai mengikut kaedah yang diterangkan oleh Sun [34], Wang [35], Yap [36], dan Fatiha [37], masing-masing.

disfungsi erektil cistancheuntukbuah pinggang

2.5. Aktiviti hepatoprotektif CDP-C in vitro

Berdasarkan keputusan ujian antioksidan, CDP-C telah dipilih untuk mengkaji aktiviti hepatoprotektif. Sel HepG2 (dibeli daripada China Center for Type Culture Collection, Beijing, China) telah dikultur dalam DMEM yang mengandungi FBS yang tidak diaktifkan haba (10 peratus ), streptomycin (0.1 ug/mL), penisilin (100 IU/mL), dan asid amino bukan penting. Sel-sel telah diinkubasi dalam suasana lembap sebanyak 5 peratus CO2 pada 37 darjah , dituai pada fasa pertumbuhan eksponen, disemai ke dalam 96-plat perigi (4×104 sel setiap telaga, 100 μL), dan diinkubasi selama 24 jam. Sel-sel kumpulan negatif telah dirawat dengan alkohol (kepekatan akhir ialah 3.5 peratus, v/v) manakala kumpulan naif dirawat dengan air. Sel-sel kumpulan positif telah dirawat dengan alkohol dan bicyclol (kepekatan akhir ialah 200ug/mL). Sel-sel daripada empat kumpulan ujian telah dirawat dengan alkohol dan CDP-C (kepekatan akhir CDP-C ialah 0.11, 0.3333, 1.00, dan 3.00 mg/mL). Semua sel telah dibiakkan selama 48 jam lagi.

Daya maju sel HepG2 ditentukan oleh kaedah ujian MTT yang disebut oleh J. Tong et al [38] dengan sedikit pengubahsuaian. Secara ringkasnya, MTT (5 mg/mL, 20 μL setiap perigi) telah ditambah ke dalam plat perigi 96-berbenih sel, dan sel-sel tersebut diinkubasi selama 4 jam. Penyelesaian telah dikeluarkan dan DMSO (150 μL/telaga) telah ditambah. Penyerapan setiap telaga diukur pada 492 nm menggunakan 96-pembaca plat telaga (Thermo Scientific, America). Daya tahan sel dikira menggunakan formula berikut:

Daya maju sel ( peratus )=(Sampel- Kosong) ×100/ (A naif- Kosong)

Di mana A sampel ialah penyerapan kumpulan eksperimen; Naif ialah penyerapan kumpulan kawalan tanpa sampel; Kosong ialah penyerapan medium kultur tanpa sebarang sampel dan sel berbiji.

2.6. Aktiviti hepatoprotektif CDP-C dalam vivo

2.6.1. Haiwan

Tikus ICR betina dewasa (22-25 g, yang dibeli daripada Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co. Ltd. Nombor lesen haiwan ialah 11400700128) telah digunakan. Haiwan ditempatkan di dalam bilik terkawal alam sekitar dengan suapan dan air ad libitum (kelembapan relatif ialah 40-60 peratus , 22-26 darjah ), pengudaraan udara ialah 12-18 kali/j dan keadaan penyinaran cahaya ialah kitaran terang/gelap 12 jam 150-300 lux. Tikus telah disesuaikan dengan keadaan bilik haiwan selama 7 hari sebelum eksperimen. Semua prosedur yang melibatkan haiwan sepanjang eksperimen dijalankan mengikut ketat dengan peraturan Penggunaan Haiwan Makmal seperti yang diterima pakai dan diisytiharkan oleh Institut Kesihatan Kebangsaan Amerika Syarikat.

2.6.2. Reka bentuk eksperimen

Tikus ICR dibahagikan secara rawak kepada enam kumpulan (kumpulan naif, kumpulan kawalan negatif, kumpulan kawalan positif, dan tiga kumpulan ujian) dengan 10 haiwan dalam setiap kumpulan. Kumpulan naif diberikan secara lisan dengan air suling. Kumpulan kawalan negatif diberikan secara lisan dengan alkohol (Er Guo-tou semangat putih, 56 peratus, 6 mL/kg). Kumpulan kawalan positif diberikan secara lisan dengan bicyclol (300 mg/kg) dan 5 jam kemudian dengan alkohol. Tiga kumpulan ujian diberikan secara lisan dengan CDP-C pada dos 200, 600, 1800 mg/kg, dan 5 jam kemudian dengan alkohol. Semua tikus diberikan selama 31 hari berturut-turut.

2.6.3. Penentuan indeks serologi

Kira-kira 4 jam selepas rawatan alkohol terakhir, darah dikumpulkan dari soket mata dan disentrifugasi pada 3000 g selama 15 minit. Selepas serum diasingkan, aktiviti enzim alanine transaminase (ALT), asid fosfatase (ACP), -glutamyl transpeptidase (-GTP), dan trigliserida (TG) ditentukan menggunakan kit diagnostik.
2.6.4. Penentuan penunjuk hepatik

Selepas pengumpulan darah, semua tikus telah dibunuh. Hati setiap tikus segera dipotong, dibasuh dengan garam fisiologi. Sekeping tisu hepatik dipisahkan dari lobus kiri. Kemudian tisu dicincang dan dihomogenkan dengan larutan kalium klorida berair (1.15 peratus , w/v) dalam penghomogen kaca (Potter Elvehjem Teflon) selama 60 saat untuk membuat homogenat hati (10 peratus w/v). Aktiviti enzim superoksida dismutase (SOD), malondialdehid (MDA), glutathione S-transferase (GST) serta kandungan trigliserida (TG) diukur menggunakan kit diagnostik.

2.6.5. Kajian histopatologi

Bahagian sisa hati telah ditetapkan dalam fiksatif Bouin selama 24 jam, selepas dehidrasi menggunakan larutan etanol berair (50-100 peratus , v/v), tisu hati dibersihkan dalam xilena dan dibenamkan dalam parafin. Bahagian hepatik (5 mm) telah diwarnai dengan alum hematoxylin dan eosin (HE). Imej bahagian hati dan perubahan histopatologi telah ditangkap oleh mikroskop cahaya (Nikon-DS-L1-5M).

2.7. Analisis statistik

Data dinyatakan sebagai min ± ralat piawai min (SEM) daripada tiga (analisis komposisi kimia dan ujian antioksidan), lima (daya maju sel), atau sepuluh (penyelidikan dalam vivo) eksperimen bebas. Kepentingan statistik perbezaan antara kumpulan telah dianalisis dengan analisis varians sehala (ANOVA) diikuti dengan ujian julat berbilang Student-Newman-Keuls menggunakan perisian SPSS 19.0. Dalam semua analisis, hlm<0.05,><0.01, or=""><0.001 indicated="" statistical="">

3. Keputusan dan perbincangan

3.1. Pencirian CDP

Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 1A, CDP-A mengandungi dua kumpulan, berat molekul ialah 4000 kDa dan 3946 kDa. Berat molekul CDP-B dan CDP-C ialah 2400 kDa dan 1300 kDa, Komposisi monosakarida ditunjukkan dalam Rajah 1B. CDP-A, CDP-B dan CDP-C mengandungi enam monosakarida penting dengan perkadaran yang berbeza, termasuk mannose (Man), rhamnose (Rha), asid galakturonik (GalUA), glukosa (Glc), galaktosa (Gal), dan arabinosa ( Ara). Selain enam monosakarida yang disebutkan di atas, xylose (Xyl) juga muncul dalam CDP-C. Di samping itu, CDP-C mengandungi bahagian GalUA yang lebih besar daripada dua pecahan lain.

Ketulenan dan kandungan protein CDP ditunjukkan dalam Jadual 1. Jadual 1 menunjukkan bahawa CDP-A mempunyai ketulenan tertinggi, iaitu 75.57 peratus, manakala ketulenan CDP-B dan CDP-C masing-masing ialah 74.72 peratus dan 68.92 peratus. Kandungan protein CDP-A, CDP-B dan CDP-C masing-masing ialah 1.27 peratus, 1.24 peratus dan 1.05 peratus.

Jadual 1.Ketulenan dan kandungan protein CDP. Data ialah min ± SEM bagi tiga ulangan.

Spektrum FT-IR karbohidrat digunakan untuk menentukan ciri strukturnya dan biasanya digunakan untuk analisis kualitatif kumpulan berfungsi organik, terutamanya untuk OH, CO dan C=O [39]. Spektrum FT-IR CDP ditunjukkan dalam Rajah 1C. Setiap spektrum menunjukkan puncak regangan yang kuat dan lebar sekitar 3293 cm−1 untuk getaran regangan OH serta puncak penyerapan lemah pada 2939 cm−1 untuk getaran regangan CH. Jalur serapan pada 1650 cm−1 disebabkan oleh getaran regangan asimetri C=O. Jalur serapan luas pada 1418cm−1 dikaitkan dengan getaran ubah bentuk ikatan CH. Setiap polisakarida tertentu mempunyai jalur khusus dalam 1000-1200 cm−1region, yang didominasi oleh getaran gelang bertindih dengan getaran regangan kumpulan sisi (C-OH) dan getaran jalur glikosidik (COC). Penyerapan pada 1036 cm−1 menunjukkan bentuk gula piranosa. Penyerapan pada hampir 829 cm−1 mencadangkan kaitan -glikosida dalam struktur molekul CDP. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 1 C, jalur serapan CDP-C pada 1650 cm−1 adalah lebih kuat daripada CDP-A dan CDP-B, yang bermaksud kandungan C=O dalam CDP-C adalah lebih daripada dalam CDP-A dan CDP-B. Keputusan ini konsisten dengan keputusan Rajah 1 A, yang mendedahkan perkadaran GalUA dalam CDP-C adalah lebih besar daripada dalam CDP-A dan CDP-B.

3.2. Aktiviti antioksidan CDP

3.2.1. Ujian radikal hidroksil

Antara spesies oksigen reaktif, radikal hidroksil adalah yang paling reaktif dan menyebabkan kerosakan teruk kepada biomolekul bersebelahan [40]. Untuk radikal hidroksil, terdapat dua jenis mekanisme antioksidan: satu memusnahkan radikal hidroksil yang telah dihasilkan, dan satu lagi menekan penjanaan radikal hidroksil. Untuk yang terakhir, radikal hidroksil dihasilkan oleh tindak balas kompleks Fe (II) dengan hidrogen peroksida. Aktiviti antioksidan CDP boleh mengikat ion logam, yang tidak bertindak balas dengan H2O2 dan menghasilkan radikal hidroksil tetapi kelat dengan CDP dan membentuk kompleks logam. Kompleks logam tidak boleh bertindak balas selanjutnya dengan H2O2 untuk memberikan radikal hidroksil [41-43]. Oleh itu, CDP menunjukkan kesan penghapusan radikal hidroksil.

Rajah 2 A menunjukkan kapasiti penghapusan CDP pada radikal hidroksil dalam cara yang bergantung kepada kepekatan. Kadar penghapusan CDP-A, CDP-B dan CDP-C masing-masing ialah 29.56 peratus , 33.44 peratus dan 38.22 peratus. CDP-C mempamerkan aktiviti penghapusan radikal hidroksil yang lebih tinggi. Memandangkan CDP-C mengandungi bahagian GalUA yang lebih tinggi daripada CDP-A dan CDP-B, antioksidan CDP mungkin berkaitan bukan sahaja dengan sifat pengikat ion logam, tetapi juga dengan kandungan GalUA, Ara dan Gal [{{15 }}].

3.2.2. Ujian radikal anion superoksida

Radikal anion superoksida adalah spesies toksik yang dihasilkan oleh pelbagai tindak balas biologi dan fotokimia dan dengan itu mendorong kerosakan tisu [47]. Walaupun anion superoksida adalah oksidan yang agak lemah, ia memainkan peranan penting dalam pembentukan spesies oksidatif reaktif lain yang lebih kuat, seperti oksigen singlet dan radikal hidroksil [48]. Rajah 2 B menunjukkan hubungan antara kepekatan dan kapasiti penghapusan CDP pada radikal anion superoksida. Apabila kepekatan meningkat, CDP-C mempamerkan kapasiti scavenging yang lebih tinggi daripada CDP-B dan CDP-A.

3.2.3. Ujian radikal DPPH

DPPH, salah satu daripada sebatian berpusat nitrogen yang stabil yang mempunyai radikal bebas proton dengan penyerapan ciri pada 517nm, berkurangan dengan ketara apabila terdedah kepada pemusnah radikal proton, oleh itu, ia digunakan secara meluas untuk menganggarkan aktiviti penghapusan radikal bebas antioksidan. Adalah diterima baik bahawa radikal bebas DPPH yang dihilangkan oleh antioksidan adalah disebabkan oleh kebolehan menderma hidrogen mereka. Antioksidan memindahkan sama ada elektron atau atom hidrogen kepada radikal DPPH dan membentuk DPPH-H, yang merupakan pembentukan bukan radikal [49].

Jumlah kesan scavenging DPPH bagi semua sampel telah diuji dan keputusannya ditunjukkan dalam Rajah 2 C. Kebolehan mengais CDP pada radikal DPPH memaparkan cara yang bergantung kepada kepekatan. Apabila kepekatan meningkat daripada 1.0 kepada 5.0 mg/mL, kebolehan mengais CDP-C meningkat daripada 52.5 peratus kepada 58.7 peratus , lebih tinggi daripada CDP-B (daripada 34.2 peratus kepada 56.8 peratus ) dan CDP-A (daripada 12.5 peratus kepada 52.8 peratus ). Kesan pemusnahan DPPH CDP-C mungkin dikaitkan dengan kumpulan karbonil dalam GalUA.

3.2.4. Ujian radikal ABTS

Ujian radikal ABTS sering digunakan untuk mengukur jumlah kuasa antioksidan antioksidan kuat sampel ujian [50]. Kesan penghapusan ABTS bagi semua sampel ditunjukkan dalam Rajah 2 D. Kebolehan membuang CDP pada radikal ABTS menunjukkan cara yang bergantung kepada dos. IC50 CDP-A, CDP-B dan CDP-C masing-masing adalah kira-kira 4.0 mg/mL, 2.5 mg/mL dan 1.2 mg/mL. Keputusan menunjukkan bahawa CDP mempunyai aktiviti penghapusan ABTS.

Secara ringkasnya, aktiviti antioksidan CDP-C adalah lebih tinggi daripada CDP-A dan CDP-B. Ia melaporkan bahawa beberapa aktiviti farmakologi polisakarida berkaitan dengan GalUA[51]. Dalam eksperimen ini, bahagian GalUA dalam CDP-C adalah lebih besar daripada dalam CDP-A dan CDP-B, CDP-C dipilih untuk menyiasat kesan hepatoprotektif terhadap penyakit hati kronik yang disebabkan oleh alkohol.

3.3. Kesan CDP-C pada daya maju sel HepG2

Mengukur daya maju sel adalah cara biasa untuk menilai keberkesanan ubat semulajadi [52]. Berdasarkan keputusan bahawa CDP-C mempunyai aktiviti antioksidan tertinggi, kesan CDP-C terhadap daya maju sel HepG2 telah dinilai. Keputusan ditunjukkan dalam Rajah 3. Pengurangan daya maju sel HepG2 akibat rawatan alkohol dengan ketara. Tetapi CDP-C boleh meningkatkan kadar kelangsungan hidup jika dibandingkan dengan kumpulan negatif. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 3, daya maju sel tidak menunjukkan cara yang bergantung kepada kepekatan yang tepat dengan CDP-C. Sebaliknya, apabila kepekatan CDP-C mencapai 3.00 mg/mL, daya maju sel HepG2 menurun secara mendadak. Sebab penurunan daya maju sel mungkin kerana kepekatan CDP-C yang rendah membantu kemandirian sel HepG2. Walau bagaimanapun, apabila kepekatan polisakarida dalam medium kultur cukup tinggi untuk mengubah persekitaran mikro sel, daya maju sel HepG2 telah dihalang.

3.4. Kesan farmakologi CDP-C

3.4.1. Kesan CDP-C pada indeks serologi

Penyalahgunaan alkohol dikaitkan dengan hampir 4 peratus daripada semua kadar kematian, yang telah menjadi masalah sosial yang serius di dunia. Dalam tubuh manusia, alkohol dimetabolismekan dalam hati selepas ia diserap melalui mukosa gastrik dan usus kecil [53-55]. Penyakit hati alkohol biasanya berlaku selepas bertahun-tahun penyalahgunaan alkohol [56]. Biasanya keadaan patologi seperti hati berlemak, hepatitis, fibrosis, dan sirosis [57], atau penyakit kanser seperti karsinoma hepatoselular dan kanser kolon [58], diperhatikan dalam gangguan hati berkaitan alkohol. Oleh itu, alkohol adalah hepatoksik biasa dan digunakan secara meluas sebagai inducer kecederaan hati dalam penyelidikan saintifik [59]. Memandangkan penyakit hati yang disebabkan oleh alkohol sering disebabkan oleh minuman beralkohol dan bahan tambahan makanan dan bukannya etanol perindustrian, oleh itu semangat putih Er Guo-tou telah digunakan untuk mewujudkan model kecederaan hati dalam tikus ICR dalam kajian ini. Bicyclol ialah agen biasa yang digunakan untuk merawat kecederaan hati kronik, jadi ia digunakan untuk menetapkan model kawalan positif.

Sel hepatik mengandungi kepekatan ALT yang lebih tinggi dalam sitoplasma dan mitokondria. Kerana pelbagai kerosakan sel hepatik, kebocoran sitosol akan menyebabkan peningkatan ALT dalam serum. Oleh itu, promosi ALT adalah penunjuk kebocoran selular dan gangguan fungsi hati [60]. Jadi paras ALT serum biasanya ditetapkan sebagai penunjuk untuk menilai kesihatan hati [61]. Atas sebab yang sama, -GTP, ACP, dan TG juga digunakan sebagai penunjuk untuk menilai keadaan kesihatan hati [62].

Dalam kajian ini, aktiviti hepatoprotektif CDP-C dinilai dengan penentuan tahap ALT, ACP, -GTP, dan TG. Keputusan ditunjukkan dalam Rajah 4 A, B, C, dan D. Empat penunjuk serum secara drastik digalakkan oleh rawatan alkohol dalam kumpulan negatif. Tetapi CDP-C boleh melemahkan perubahan ini yang disebabkan oleh pentadbiran alkohol. Walau bagaimanapun, tidak semua indeks serologi menunjukkan cara yang bergantung kepada dos dengan CDP-C. Dalam Rajah 4 A dan B, CDP-C pada kepekatan rendah mempunyai kesan yang ketara ke atas pemulihan ALT dan ACP, tetapi kesan CDP-C pada kepekatan tertinggi adalah tidak ketara. Malah, banyak produk semulajadi memberi manfaat kepada kesihatan pada dos yang rendah, tetapi berbahaya untuk kesihatan pada dos yang tinggi [60]. Sebabnya mungkin pengambilan polisakarida yang berlebihan akan menjejaskan metabolisme normal organisma, jadimemberi kesan buruk kepada kesihatan badan. Walau bagaimanapun, mekanisme terperinci perlu dikaji lebih lanjut.

3.4.2. Kesan CDP-C pada penunjuk hepatik

Organisma yang tertakluk kepada tekanan oksidatif biasanya mengembangkan mekanisme pertahanan antioksidan, dan SOD ialah sistem antioksidan berasaskan enzim biasa [63]. SOD memangkinkan pemisahan anion superoksida kepada O2 dan H2O2 [64]. GST, protein larut yang terletak di dalam sitosol, juga memainkan peranan penting dalam detoksifikasi hati. Atas sebab yang dinyatakan di atas, SOD dan GST menjadi penunjuk dalam hepatotoksisiti akibat alkohol. MDA dan TG dalam hati juga digunakan sebagai penunjuk hepatotoksisiti [65].

Dalam kajian ini, kesan CDP-C pada fungsi hati ditunjukkan dalam Rajah 5. Gambar A, B, C, dan D masing-masing mempamerkan kesan CDP-C pada SOD, MDA, GST dan TG. Keempat-empat gambar ini menunjukkan bahawa tikus yang dirawat dengan alkohol mengurangkan tahap SOD dan GST dengan ketara, dan meningkatkan tahap MDA dan TG, tetapi CDP-C jelas boleh melemahkan perubahan ini. Sama seperti fenomena yang digambarkan dalam bahagian 3.4.1, penunjuk hepatik juga tidak bergantung kepada dos dengan CDP-C. Sebab untuk ini mungkin serupa dengan mekanisme yang digambarkan dalam bahagian 3.4.1. Kajian terdahulu melaporkan bahawa kesan polisakarida pada SOD dan katalase mungkin dikaitkan dengan induksi ekspresi gen SOD dan katalase [66]. Walau bagaimanapun, kajian lanjut masih diperlukan untuk menjelaskan mekanisme hepatoprotektif CDP-C dan hubungan antara struktur dan fungsinya.

3.5. Kesan histopatologi CDP-C pada tikus yang disebabkan oleh alkohol

Berdasarkan pemerhatian histopatologi pada bahagian hati, kumpulan naif mempamerkan seni bina selular normal dengan sel hepatik yang berbeza dan tiada keabnormalan histologi (Rajah 6 A). Sebagai perbandingan, pentadbiran alkohol menyebabkan kerosakan hati yang serius pada tikus kumpulan negatif. Bahagian hati menunjukkan pemendapan lemak hepatosit, nekrosis dan pembengkakan hepatosit, pembentukan vakuol dalam sel, dan sempadan selular juga hilang (Rajah 6 B). Bahagian hati tikus yang diberi bicyclol (Rajah 6 C), dengan dos CDP-C yang berbeza-beza (Rajah 6 DF) menunjukkan dengan jelas pemulihan herotan yang muncul dalam kumpulan kawalan negatif. Keputusan ini mengesahkan bahawa alkohol yang disebabkan oleh herotan tertentu dalam hepatosit kumpulan kawalan negatif. Walau bagaimanapun, CDP-C memulihkan perubahan ini.

Ia diterima dengan baik bahawa kesan hepatoprotektif polisakarida dikaitkan dengan aktiviti antioksidan mereka [67, 68]. Kandungan asid uronik yang tinggi telah terbukti bermanfaat untuk kesan antioksidan polisakarida [44, 45]. Polisakarida yang kaya dengan Gal dan Ara juga telah disahkan mempunyai kesan antioksidan yang lebih tinggi [46]. Walau bagaimanapun, sukar bagi polisakarida molekul besar untuk memasuki sel epitelium usus secara langsung. Untuk CDP-C (dengan berat molekul 1300kDa), tidak mudah untuk memasuki badan secara langsung dan memainkan peranan hepatoprotektif. Laporan yang diterbitkan mendedahkan bahawa berat molekul polisakarida telah menurun selepas pencernaan gastrik dan usus [69]. Oleh itu, kami mengandaikan bahawa CDP-C mungkin terdegradasi kepada polisakarida dengan berat molekul yang rendah dan diserap oleh sel epitelium usus. Mengurangkan hujung polisakarida boleh ditingkatkan disebabkan oleh pemecahan ikatan glikosidik [69, 70]. Menurut komposisi monosakarida CDP-C, polisakarida terdegradasi dengan berat molekul rendah harus mengandungi GalUA, Ara, dan Gal. Oleh itu polisakarida berat molekul rendah ini, yang mempunyai hujung pengurangan dan mengandungi GalUA, Ara, dan Gal, boleh memainkan peranan perlindungan hati dalam badan. Walau bagaimanapun, mekanisme terperinci perlu dikaji lebih lanjut.

4. Kesimpulan

Menurut analisis komposisi monosakarida dan spektrum FT-IR, ketiga-tiga pecahan CDP mengandungi Man, Rha, GalUA, Glc, Gal, dan Ara. CDP-C mengandungi sebahagian besar GalUA. CDP-C mempunyai aktiviti antioksidan tertinggi. Keputusan kedua-dua penyelidikan in vitro dan Vivo menggambarkan bahawa CDP-C mempunyai aktiviti hepatoprotektif terhadap kecederaan hepatik kronik yang disebabkan oleh alkohol. Mekanisme asas adalah berkaitan dengan memodulasi aktiviti enzim relatif, mengurangkan MDA dan TG dalam hati. Aktiviti fisiologi CDP-C mungkin dikaitkan dengan GalUA. Penemuan ini memberikan pandangan baharu tentang sasaran farmakologi C. deserticola dalam pencegahan penyakit hati alkohol.

herba cistanchemelindungihatidanmeningkatkan imuniti.

Untuk maklumat lanjut, sila klik di sini.