Kesan Polisakarida Cistanche Pada Tingkah Laku Biologi Sel Kanser Paru-paru A549
Sep 23, 2022
Abstrak: Objektif Untuk menyiasat kesan daripadaPolisakarida cistanchemengenai tingkah laku biologi sel kanser paru-paru A549. Kaedah Sel-sel kanser paru-paru A549 dibahagikan kepada kumpulan kawalan,Polisakarida cistanche100, 200, 400 ng/mL kumpulan, kumpulan si-NC, kumpulan si-LINC01410,Polisakarida cistanche400 ng/mL ditambah pcDNA,Polisakarida cistanche400 ng/mL ditambah kumpulan pcDNA- LINC01410. Kadar percambahan sel A549 dikesan melalui kaedah MTT, keupayaan pengklonan sel A549 dikesan melalui ujian pembentukan koloni, dan 549 sel dikesan oleh sitometri aliran
Kadar apoptosis sel, kaedah Transwell digunakan untuk mengesan keupayaan migrasi dan pencerobohan sel A549, dan kaedah RT-qPCR digunakan untuk mengesan ekspresi LINC01410 mRNA dalam sel A549.
Keputusan:Polisakarida cistancheboleh menghalang percambahan sel A549, pembentukan koloni, penghijrahan, dan keupayaan pencerobohan, ekspresi mRNA LINC01410 (P<0.05), and="" promote="" cell="" apoptosis="" in="" a="" dose-dependent="" manner.="" after="" inhibiting="" the="" expression="" of="" linc01410,="" the="" growth,="" migration="" and="" invasion="" abilities="" of="" a549="" cells="" were="" inhibited=""><0.05). overexpression="" of="" linc01410="" could="" reverse="" the="" effects="" of="">Polisakarida cistanchemengenai percambahan, apoptosis, penghijrahan dan pencerobohan sel A549. Kesimpulan:Polisakarida cistancheboleh menghalang aktiviti, pembentukan klon, penghijrahan, dan keupayaan pencerobohan sel-sel kanser paru-paru dan menggalakkan apoptosis sel dengan mengurangkan ekspresi LINC01410.
Kata kunci:Polisakarida cistanche; sel kanser paru-paru A549; LINC01410; percambahan; apoptosis
Klik Di Sini untuk Mendapatkan Sampel Percuma Cistanche untuk
Kanser paru-paru adalah tumor malignan dengan morbiditi dan kadar kematian pertama di negara saya. Kaedah rawatan kanser paru-paru termasuk imunisasi, pembedahan dan kemoterapi [1].
Kajian telah menunjukkan bahawa perubatan tradisional Cina dan komponennya mempunyai kelebihan besar dalam rawatan kanser paru-paru dan boleh meningkatkan keberkesanan kanser paru-paru [2-3].Cistancheialah bahan perubatan yang berharga di negara saya, dan komponen utamanya termasuk phenethyl alcohol total glikosida, polisakarida, iridoid, alkaloid dan lignan. Kajian mendapati jumlah ituphenylethyl glucosides daripada Cistanchebolehmengurangkan kerosakan hati pada tikus pembawa tumor H22 dan menghalang pertumbuhan tumor[4]. Ergosteroside, bahan aktif Cistanche, boleh menghalang pertumbuhan tumor dan percambahan sel kanser kolorektal dalam model xenograft tikus bogel, dan mendorong apoptosis [5].
Polisakarida cistancheboleh menghalang kanser paru-paru Lewis dan sel sarkoma S180 dengan meningkatkan aktiviti sel pembunuh semulajadi dan interleukin 2 (IL-2).
Walau bagaimanapun, potensi fungsi, proses biogenesis dan mekanisme asasPolisakarida cistanchedalam kanser paru-paru masih tidak jelas. Kajian telah menunjukkan bahawa lncRNA sering dinyahkawalseliakan dalam kanser paru-paru dan memainkan peranan penting dalam kejadian, perkembangan dan rawatan kanser paru-paru [7]. LINC01410 sangat dinyatakan dalam kanser endometrium dan menjejaskan prognosis pesakit kanser endometrium [8]; LINC01410 overexpression menggalakkan angiogenesis dan metastasis kanser gastrik dengan menghalang miR-532-5p [9]; Sel-sel kanser tiroid papillary membiak, berhijrah dan menyerang [10-11], manakala peranan LINC01410 dalam kanser paru-paru tidak jelas. Tujuan eksperimen ini adalah untuk mengkaji kesan daripadaPolisakarida cistanchedan LINC01410 pada fenotip malignan sel-sel kanser paru-paru, dan sama ada LINC01410 terlibat dalam pengawalseliaanPolisakarida cistanchemengenai tingkah laku biologi malignan sel-sel kanser paru-paru, untuk menyediakan asas untuk penyelidikan lanjut mengenaiPolisakarida cistanche.
Polisakarida cistanche
Bahan polisakarida Cistanche pada Kajian Merawat Kanser
Sel-sel kanser paru-paru A549 telah dibeli daripada American Type Culture Collection (ATCC).Polisakarida cistanche(ketulenan Lebih daripada atau sama dengan 98 peratus , nombor produk D3281) telah dibeli daripadaWecistanche Bio-Tech Biotechnology Co., Ltd. Serum lembu janin dibeli daripada Guangzhou Shuoheng Biotechnology Co., Ltd.;
Medium RPMI-1640 telah dibeli daripada Hangzhou Qiannuo Biotechnology Co., Ltd.; Kit MTT telah dibeli daripada Shanghai Meixuan Biotechnology Co., Ltd.; Ruang Transwell dan Matrigel telah dibeli daripada Beijing Unicon Biotechnology Co., Ltd.; Kit apoptosis telah dibeli daripada PromoCell, Syarikat Jerman; Kit SYBRremix ExTaqTM telah dibeli daripada Shanghai Shanran Biotechnology Co., Ltd.
2 kaedah polisakarida Cistanche pada Kajian Merawat Kanser
2.1 Kultur dan pengelompokan sel
Sel A549 telah dikultur dalam medium RPMI-1640 yang mengandungi 10 peratus serum lembu janin dalam inkubator 37 darjah , 5 peratus CO2. Sel-sel dalam fasa pertumbuhan logaritma dirawat denganPolisakarida cistanchepada kepekatan jisim 100, 200, dan 400 ng/mL, masing-masing, dan direkodkan sebagaiPolisakarida cistancheKumpulan 100, 200, dan 400 ng/mL; sel A549 yang tidak dirawat dengan polisakarida Cistanche adalah kumpulan kawalan. Sel A549 telah ditransfeksi dengan si-NC atau si-LINC0141, masing-masing, ditandakan sebagai kumpulan si-NC, kumpulan si-LINC01410; si-NC dan si-LINC01410 telah dipindahkan ke dalam sel A549 dan dirawat dengan 400 ng/mLPolisakarida cistanche, dilambangkan sebagaiPolisakarida Cistanche400 ng/mL ditambah kumpulan pcDNA,Polisakarida cistanche400 ng/mL ditambah kumpulan pcDNA-LINC01410.
2.2 Pengesanan kaedah MTT
Kadar percambahan sel A549 Sel A549 telah dirawat denganPolisakarida cistanchepada kepekatan jisim 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, dan 400 ng/mL, masing-masing. Kumpulkan sel A549 dalam setiap kumpulan dan letakkannya dalam 96-plat perigi, tambah 20 μL MTT pada setiap telaga, teruskan kultur dalam inkubator selama 4 jam, buang supernatan, tambah 150 μL DMSO pada setiap telaga , dan mengesan cahaya setiap kumpulan sel pada panjang gelombang 490 nm. Nilai ketumpatan (OD) digunakan untuk mengira kadar percambahan sel.
Penanaman Cistanche
2.3 Ujian pembentukan koloni
A549 cell cloning ability Collect A549 cells in each group, adjust the density to 1 × 105 /mL, and inoculate 100 μL per well in a 6-well plate, incubate in an incubator until visible cell clones appear, wash 2 times with PBS, 4 % paraformaldehyde was fixed for 20 min, stained with 1% crystal violet solution for 15 min, observed under a light microscope, and the number of colonies (>50 sel) telah direkodkan.
2.4 Pengesanan sitometri aliran
Kadar apoptosis sel A549 Sel A549 dalam setiap kumpulan dikumpul dan digantung semula dalam 100 μL penimbal salin buffer fosfat (1 × 106 / mL), dan 1 mL penggantungan sel, 10 μL Annexin V-FITC dan 5 μLPI telah ditambah ke dalam tabung uji. , terlindung daripada cahaya. Selepas inkubasi selama 30 minit, sel-sel dikumpulkan dan dianalisis oleh sitometri aliran.
apoptosis.
2.5 Pengesanan melalui kaedah Transwell
Keupayaan penghijrahan dan pencerobohan sel A549 Penggantungan sel A549 (2×104/200 μL, medium bebas serum) bagi setiap kumpulan disebarkan sama rata di ruang atas ruang Transwell, dan 500 μL RPMI{{ 7}} medium yang mengandungi 10 peratus FBS telah ditambahkan ke ruang bawah. Sel-sel di ruang atas telah dikeluarkan, dan sel-sel di ruang bawah telah ditetapkan dengan 4 peratus paraformaldehid dan diwarnai dengan 0.1 peratus kristal violet. Sel-sel telah diperhatikan di bawah mikroskop cahaya, dan 5 bidang pandangan dipilih secara rawak untuk dikira. Dalam eksperimen pencerobohan sel, Matrigel telah disalut terlebih dahulu pada ruang atas ruang Transwell, dan langkah-langkah selebihnya adalah sama seperti dalam percubaan migrasi.
2.6 Pengesanan RT-qPCR
Ekspresi LINC01410 mRNA dalam sel A549 Jumlah RNA telah diekstrak daripada sel menggunakan reagen TRIzol dan cDNA telah disintesis mengikut arahan kit transkripsi terbalik. Sistem tindak balas ialah 2 μL produk transkripsi terbalik, 10 μL Campuran Hijau SYBR, 0.5 μL primer hadapan dan belakang, dan 7 μL air steril. Keadaan tindak balas adalah 95 darjah selama 30 saat, 60 darjah selama 30 saat, dan 72 darjah selama 30 saat, untuk sejumlah 40 kitaran; ungkapan relatif LINC01410mRNA dikira dengan kaedah 2-ΔΔCT dengan GAPDH sebagai rujukan dalaman. Urutan primer ialah LINC01410 ke hadapan 5'-TGACAAGAATGGCCCAAGC-3', terbalik 5'-ACTGTGCACCTGTTACACCA-3'; rujukan dalaman GAPDH ke hadapan 5'-TGTTGCCATCAATCACCCCTT-3', undur 5'-CTCCACGACGTACTC AGCG-3'.
2.7 Analisis statistik
Perisian SPSS 20.0 digunakan untuk pemprosesan, data pengukuran dinyatakan sebagai (x±s), ujian t sampel bebas digunakan untuk perbandingan antara dua kumpulan, analisis varians sehala digunakan untuk perbandingan antara berbilang kumpulan, dan ujian LSD-t digunakan untuk perbandingan berpasangan antara kumpulan. P<0.05 indicated="" that="" the="" difference="" was="" statistically="">
Serbuk Ekstrak Cistanche
3 keputusan polisakarida Cistanche pada Kajian Merawat Kanser
3.1 Kesan daripadaPolisakarida cistancheterhadap percambahan dan apoptosis sel A549 Berbanding dengan kumpulan kawalan, kadar percambahan sel A549 dalam setiap kumpulan dosPolisakarida cistanchemeningkat (P<0.05), ic50="" was="" 319.8="" ng/ml,="" see="" table="" 1="" .="" compared="" with="" the="" control="" group,="" the="" proliferation="" rate="" of="" a549="" cells="" in="" the="" polysaccharide="" 100,="" 200,="" and="" 400="" ng/ml="" groups="" of="" cistanche="" decreased="" (="" p="" <="" 0.="" 05="" )="" ,="" the="" number="" of="" clones="" was="" decreased="" (="" p="" <="" 0.="" 05)="" ,="" and="" the="" apoptosis="" rate="" was="" increased="" (="" p="" <="" 0="" ).="" .05)="" ,="" in="" a="" dose-dependent="">
3.2 Kesan daripadaPolisakarida cistancheterhadap keupayaan penghijrahan dan pencerobohan sel A549 Berbanding dengan kumpulan kawalan, bilangan sel A549 dalam setiap kumpulan dosPolisakarida cistancheberkurangan (P<0.05) in="" a="" dose-dependent="" manner,="" as="" shown="" in="" figure="" 2,="" table="">
3.3 Kesan daripadaPolisakarida cistanchepada ekspresi LINC01410 mRNA dalam sel A549 Berbanding dengan kumpulan kawalan, ekspresi LINC01410 mRNA dalam sel A549 dalam setiap kumpulan dosPolisakarida cistanchetelah dikurangkan (P＜0.05) dalam cara yang bergantung kepada dos.
