Kesan Ekstrak Akueus Herba Cistanches Terhadap Kehilangan Tulang dalam Tikus Ovariectomized

Hubungi: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com

Haidong Liang 1,*, Fang Yu 2, Zhihong Tong 1 dan Zaiguo Huang 3

1 Hands and feet microsurgery, Dalian Municipal Central Hospital, Dalian 116033, China; E-Mail: tongzhih37@sina.cn

2 School of Medicine, Dalian University, Dalian 116033, China; E-Mail: yufangk7@sina.cn

3 Orthopedics Department, Dalian Municipal Central Hospital, Dalian 116033, China; E-Mail: huangzg41@sina.com

Abstrak:Untuk menilai keupayaan ubat tradisional Cina ekstrak Cistanches Herba (CHE) untuk mencegah kehilangan tulang pada tikus ovariectomized (OVX), ekstrak Cistanches Herba (CHE) diberikan secara intragastrik kepada tikus. Tikus betina telah dibius dengan natrium pentobarbital (40 mg kg−1, ip), dan ovari mereka dikeluarkan secara dua hala. Tikus dalam kumpulan yang dikendalikan palsu telah dibius, laparotomi, dan dijahit tanpa mengeluarkan ovari mereka. Selepas 1 minggu pemulihan daripada pembedahan, tikus OVX dibahagikan secara rawak kepada tiga kumpulan dan dirawat secara lisan dengan H2O (kumpulan OVX) atau CHE (100 atau 200 mg kg−1 setiap hari) selama 3 bulan. Kumpulan kendalian palsu (n=8) telah dirawat secara lisan dengan H2O. Selepas 3 bulan, jumlah ketumpatan mineral tulang badan (BMD), kandungan mineral tulang (BMC), indeks biomekanik tulang, paras mineral darah, dan aktiviti enzim antioksidan darah telah diperiksa dalam tikus yang dirawat secara palsu, ovariectomized dan ekstrak Cistanches Herba. Keputusan menunjukkan bahawa rawatan ekstrak Cistanches Herba secara signifikan meningkatkan ketumpatan mineral tulang (BMD) bergantung kepada dos, kandungan mineral tulang (BMC), beban maksimum, anjakan pada beban maksimum, tegasan pada beban maksimum, beban pada rehat automatik, anjakan pada pecah automatik. , dan tekanan semasa rehat auto, dan aktiviti enzim antioksidan darah, menurunkan paras Ca, Zn dan Cu darah berbanding kumpulan OVX. Eksperimen ini menunjukkan bahawa pemberian ekstrak Cistanches Herba kepada tikus yang telah diovariektomi membalikkan kehilangan tulang dan mencegah osteoporosis.

Kata kunci:ovariektomi; tikus; tulang; antioksidan; Cistanches Herba

Cistanches Herba

1. Pengenalan

Osteoporosis adalah penyakit penuaan yang berkaitan dengan kehilangan tulang yang sering berlaku tanpa gejala sehingga kemerosotan mikroarkitektur menjadi begitu ketara sehingga patah tulang berlaku selalu pada titik di mana pengurangan jisim tulang adalah di bawah apa yang diperlukan untuk integriti tulang. Osteoporosis sangat penting dalam penjagaan kesihatan. Walaupun dikurangkan dalam jisim, tulang adalah normal berkenaan dengan mineralisasi tetapi secara histologi, terdapat penurunan dalam ketebalan korteks dan bilangan dan saiz trabekula tulang cancellous kasar [1-3].

Banyak kajian mengenai penyakit ini telah dijalankan dalam beberapa tahun kebelakangan ini. Data terkumpul telah menunjukkan bahawa kehilangan estrogen semasa menopaus adalah penyumbang utama kepada patogenesis penyakit kerana hormon ini adalah pengawal selia negatif utama aktiviti osteoklas [4-6], dan osteoklas adalah sel utama yang bertanggungjawab untuk pembentukan semula tulang dalam osteoporosis. [7].

Osteoporosis selepas menopaus adalah penyakit tulang metabolik yang paling kerap, ia dicirikan oleh kehilangan pesat tisu tulang bermineral, gangguan seni bina trabekular tulang, dan perubahan dalam sifat kristal deposit mineral, yang mengakibatkan kegagalan struktur (patah) tapak yang kaya dengan tulang cancellous, seperti vertebra, pinggul dan lengan bawah distal [8–11]. Kekurangan estrogen dianggap sebagai penentu utama kehilangan tulang pada wanita menopause. Tikus dan anjing ovariectomized telah digunakan secara meluas dalam model osteoporosis. Pada tahun 1996, kesan ibandronate pada anjing ovariectomized [12] telah dilaporkan.

Cistanches Herba (CH), tumbuhan holoparasit Cistanche deserticola YC Ma, diklasifikasikan sebagai agen tonifying dalam perubatan tradisional oriental dan biasanya digunakan untuk merawat kealpaan, kehilangan pendengaran, ketidaksuburan dan sembelit kronik. CH mempunyai pelbagai aktiviti farmakologi, termasuk kesan antinociceptive, anti-radang, dan peningkatan imun [13,14]. Kajian terdahulu telah melaporkan bahawa Cistanches Herba boleh membimbing sel stem mesenchymal tulang (BMSC) untuk membezakan kepada osteoblas, yang menjanjikan prospek yang baik untuk rawatan osteoporosis dan perpecahan patah tulang [15]. Chen et al. [16] melaporkan bahawa polisakarida Cistanches Herba boleh menggalakkan peralihan kitaran sel sumsum tulang dan pemulihan fungsi hematopoietik dalam tikus anemia tertekan sumsum tulang, mempercepatkan hematogenesis dalam ketegangan rubrum dan ketegangan makronukleus.

Dalam kajian ini, ketumpatan mineral tulang (BMD), kandungan mineral tulang (BMC), indeks biomekanik tulang, paras mineral darah, dan aktiviti enzim antioksidan darah telah diperiksa dalam tikus yang dikendalikan secara palsu, ovariectomized dan Cistanches Herba untuk mengkaji kesan rawatan. dengan ekstrak Cistanches Herba pada kualiti tulang.

Perubatan tradisional Cina Ekstrak Herba Cistanches (CHE)

2. Bahan-bahan dan cara-cara

2.1. Penyediaan Ekstrak Berair Herba Cistanches

Cistanches Herba dikumpulkan dari padang pasir di liga alxa Wilayah Autonomi Nei Monggol (Mongolia Dalam) pada tahun 2010.

Tangkai kering Cistanches Herba diekstrak dengan air suling pada suhu 100 darjah selama 2 jam. Larutan diempar pada 4000 r/min selama 10 minit. Sisa dikeluarkan melalui penapisan dan turasan gabungan disejat dengan pemanasan untuk mendapatkan kepekatan yang dikehendaki (2.1 g ekstrak setara tumbuhan kering/mL). Hasil perahan ialah 13.7 peratus (b/b). Ekstrak akueus disimpan pada suhu 2–8 darjah .

2.2. Haiwan

Tiga puluh dua ekor tikus Wistar betina berumur 3 bulan, dengan berat antara 240 dan 270 g pada permulaan eksperimen digunakan untuk kajian ini. Mereka dikekalkan di bawah keadaan makmal standard dengan kitaran cahaya dan gelap 12 jam, dengan akses percuma kepada makanan tikus makmal standard dan air paip.

2.3. Eksperimen Haiwan.

Tikus betina telah dibius dengan natrium pentobarbital (40 mg kg−1, ip), dan ovari mereka dikeluarkan secara dua hala. Tikus dalam kumpulan yang dikendalikan palsu telah dibius, laparotomi, dan dijahit tanpa mengeluarkan ovari mereka. Selepas 1 minggu pemulihan daripada pembedahan, tikus OVX dibahagikan secara rawak kepada tiga kumpulan (n=8 dalam setiap kumpulan) dan dirawat secara intragastrik dengan H2O (kumpulan OVX), ekstrak Cistanches Herba (CHE) (100 atau 200 mg kg. −1 sehari) selama 3 bulan. Kumpulan kendalian palsu (n=8) telah dirawat secara lisan dengan H2O.

Pada hari terakhir kajian, haiwan ditimbang dan dikorbankan, dan sampel darah dikumpulkan serentak. Femur telah dibedah dan dibuang tisu lembut untuk pengukuran ujian biomekanikal.

Semua eksperimen telah dijalankan mengikut protokol penyelidikan yang ditubuhkan oleh jawatankuasa penjagaan haiwan China.

2.4. Densitometri Tulang

Kandungan mineral tulang femoral (BMC) dan ketumpatan mineral tulang (BMD) ditentukan menggunakan QDR Hologic{{0}}W DXA. Instrumen telah disesuaikan untuk mod resolusi ultratinggi dengan jarak baris 0.0254 cm, resolusi 0.0127 cm dan kolimator diameter 0.9 cm. Tulang itu dimasukkan ke dalam cawan petri. Untuk mensimulasikan ketumpatan tisu lembut yang mengelilingi tulang, air paip dituangkan di sekeliling tulang untuk mencapai kedalaman 1 cm. Keputusan diberikan untuk BMC dan untuk kawasan yang diukur. BMD kawasan ini dikira sebagai BMC dibahagikan dengan luas. Sebagai tambahan kepada keputusan untuk jumlah femur, bahagian distal dan pertengahan tulang paha dianalisis sebagai subkawasan [17].

2.5. Ujian Biomekanikal Tulang

Tulang femur dikekalkan pada 4 darjah sehingga penentuan kekuatan patah menggunakan 5-kN Lekapan Lentur, dikonfigurasikan untuk ujian lenturan tiga mata dan dipasang pada Model Mesin Pengujian Universal Instron 4502 yang dilengkapi dengan 10- sel beban kN (Instron, Canton, MA, USA), seperti yang diterangkan sebelum ini [18]. Kelajuan kepala silang ialah 50 mm/min, dan kadar pensampelan data ialah 10 sampel/s. Beban maksimum, tegasan pada beban maksimum, beban semasa kegagalan dan tegasan semasa kegagalan ditentukan dalam tulang paha menggunakan perisian Siri IX, v 8.08.00 (Instron).

2.6. Analisis Biokimia

Tahap Ca, Zn dan Cu darah diukur dengan spektrofotometri penyerapan atom.

Berdasarkan kaedah King dan Armstrong [19], aktiviti alkali fosfatase (ALP) telah diuji menggunakan disodium fenil fosfat sebagai substrat. Warna yang dibangunkan dibaca pada 510 nm dalam spektrofotometer UV-vis selepas 10 minit. Aktiviti ALP dinyatakan sebagai IU/L.

Kepekatan malondialchehyche (MDA) darah ditentukan menggunakan kaedah yang diterangkan oleh Jain et al. [20], berdasarkan kereaktifan TBA. Secara ringkasnya, 0.2 mL pelet eritrosit atau supernatan yang diperoleh daripada tisu, 0.8 mL penimbal fosfat (pH 7.4), 0.025 mL BHT dan { {19}}.5 mL 30 peratus TCA telah ditambah ke dalam tiub dan dicampur. Selepas 2 jam pengeraman pada -20 darjah, campuran telah disentrifugasi (4000× g) selama 15 minit. Selepas ini, 1 mL supernatan diambil dan ditambah kepada setiap tiub, dan kemudian 0.075 mL 0.1 M EDTA dan

0.25 mL 1 peratus TBA telah ditambah. Tiub dengan penutup skru berlapik Teflon ini diinkubasi pada 90 darjah dalam tab mandi air selama 15 minit dan disejukkan ke suhu bilik. Ketumpatan optik diukur pada 532 untuk kepekatan MDA darah.

Aktiviti glutation peroxidase (GSH-Px) ditentukan mengikut kaedah Lawrence dan Burk [21]. Campuran ujian terdiri daripada 2.0 mL penimbal fosfat 75 mM (pH 7.0), 50 μL daripada 60 mM glutation, {{15} }.1 mL 30 unit/mL glutation reductase, 0.1 mL 15 mM EDTA, 0.1 mL 3 mM NADPH dan jumlah supernatan tisu yang sesuai kepada isipadu akhir 3.0 mL . Tindak balas dimulakan dengan penambahan 0.1 mL 7.5 mM H2O2. Kadar perubahan penyerapan semasa penukaran NADPH kepada NADP plus direkodkan secara spektrofotometri pada 340 nm selama 3 minit. Aktiviti GSH-Px untuk tisu dinyatakan sebagai μmol NADPH teroksida kepada NADP ditambah min-1 mg-1 protein.

Aktiviti superoksida dismutase (SOD) ditentukan dalam darah mengikut kaedah Sun et al. [22]. Prinsip kaedah adalah berdasarkan perencatan pengurangan nitroblue tetrazolium (NBT) dengan menggunakan sistem xanthine-xanthine oxidase sebagai penjana superoksida. Aktiviti ini dinilai dalam supernatan 10000 g metanol/kloroform (5/3, v/v) ekstrak homogenat tisu (10 peratus). Satu unit SOD ditakrifkan sebagai jumlah enzim yang menyebabkan 50 peratus perencatan dalam kadar pengurangan NBT.

Aktiviti katalase (CAT) diukur menggunakan kaedah Abei [23]. Serum telah ditambah pada kuvet yang mengandungi 2.89 mL penimbal fosfat 50 mmol/L (pH 7.0). Tindak balas telah dimulakan dengan menambah 0.1 mL 30 mmol/L H2O2 yang baru disediakan untuk menghasilkan isipadu akhir 3.0 mL pada 25 darjah . Kadar penguraian H2O2 diukur pada 240 nm selama 5 minit pada spektrofotometer. Satu unit (U) CAT ditakrifkan sebagai jumlah enzim yang diperlukan untuk mengurai 1 nmol H2O2 seminit, pada 25 darjah dan pH 7.8.

2.7. Analisis statistik

Keputusan eksperimen dinyatakan sebagai Purata ± SD untuk lapan haiwan dalam setiap kumpulan. Parameter biokimia telah dianalisis secara statistik menggunakan analisis sehala varians ANOVA, diikuti dengan ujian perbandingan berganda Dunnett (DMCT). P-nilai bagi<0.05 was="" considered="" statistically="">

3. Keputusan

Dua haiwan telah tamat tempoh semasa kajian dijalankan. Oleh itu, nombor untuk kumpulan pada kesimpulan kajian ialah: 8 dalam kawalan palsu; 7 dalam kumpulan OVX; 7 dalam kumpulan rawatan CHE (100 mg kg−1 setiap hari), dan 8 dalam kumpulan rawatan CHE (200 mg kg−1 setiap hari). Dua hari selepas pembedahan, pengambilan makanan dan air tikus adalah lebih rendah sedikit berbanding sebelum pembedahan. Tiada haiwan yang mengalami jangkitan dan anabiosis. Tiada kesan buruk yang jelas secara klinikal diperhatikan pada tikus.

Sebelum pembedahan, tiada perbezaan ketara (p > {{0}}.01) dalam berat badan tikus antara kumpulan. Berat badan kumpulan OVX adalah ketara (p < 0.01)="" lebih="" rendah="" daripada="" kumpulan="" palsu="" (jadual="" 1).="" pemberian="" ekstrak="" cistanches="" herba="" pada="" dos="" 100="" dan="" 200="" mg/kg="" setiap="" hari="" dengan="" ketara="" (p="">< 0.05)="" meningkatkan="" berat="" badan="" tikus="" dalam="" kumpulan="" yang="" dirawat="" che="" (100="" dan="" 200="" mg/kg="" setiap="" hari).="" data="" yang="" diperoleh="" daripada="" haiwan="" menunjukkan="" terdapat="" perbezaan="" yang="" signifikan="" secara="" statistik="" antara="" bmd="" dan="" bmc="" kumpulan="" ovx="" dan="" kawalan="" palsu="" (p="">< 0.01).="" seperti="" yang="" dijangkakan,="" pentadbiran="" ekstrak="" cistanches="" herba="" pada="" dos="" 200="" mg/kg="" membawa="" kepada="" peningkatan="" ketara="" dalam="" bmd="" dan="" bmc="" kumpulan="" yang="" dirawat="" che="" (p=""><0.05; p=""><>

4. Perbincangan

Osteoporosis adalah salah satu gangguan paling biasa yang berkaitan dengan kekurangan estrogen dan penuaan. Menopaus mengakibatkan pusing ganti tulang yang tinggi, ketidakseimbangan antara pembentukan tulang dan penyerapan tulang, dan kehilangan tulang bersih. Kehilangan tulang yang disebabkan oleh kekurangan estrogen adalah terutamanya disebabkan oleh peningkatan dalam penyerapan tulang osteoklastik dalam kedua-dua manusia dan haiwan eksperimen [24].

Walaupun osteoporosis menjejaskan kedua-dua lelaki dan wanita yang lebih tua, wanita selepas menopaus telah menjadi tumpuan utama osteoporosis [25,26]. Kekurangan hormon wanita yang dramatik adalah faktor yang paling penting kepada osteoporosis wanita selepas menopaus. Model tikus OVX paling kerap digunakan dalam penyelidikan mengenai osteoporosis selepas menopaus [27,28], di mana ovariektomi mengakibatkan lebihan penyerapan tulang ke atas pembentukan tulang pada mulanya dan menyebabkan kehilangan tulang. Operasi OVX menyebabkan peningkatan berat badan yang ketara yang boleh menjadi tiang panduan untuk menilai kejayaan operasi [29]. Pada akhir kajian ini, berat badan kumpulan OVX telah berkurangan dengan ketara berbanding kumpulan palsu, dan rawatan dengan ekstrak Cistanches Herba menghalang sepenuhnya penurunan ini. Kami mengandaikan bahawa OVX menyebabkan ketidakselesaan fisiologi yang teruk yang menjejaskan pengambilan makanan tikus. Selepas itu, berat badan kumpulan OVX telah berkurangan dengan ketara.

Ketumpatan mineral tulang telah digambarkan sebagai ukuran pengganti kekuatan tulang [30]; walau bagaimanapun, ciri-ciri seni bina mikro adalah penanda yang baru muncul untuk penilaian kesan sebenar rawatan terhadap kualiti tulang trabekular. Walaupun jisim tulang rendah adalah faktor risiko utama untuk patah tulang [31], pemeliharaan seni bina tulang trabekular menyumbang dengan ketara kepada kekuatan tulang dan boleh mengurangkan risiko patah tulang melebihi BMD dan BMC, seperti yang ditunjukkan oleh beberapa kajian yang telah melaporkan korelasi rapat antara struktur mikro. sifat dan kekuatan biomekanik tulang [32,33]. Dalam kerja ini, BMD dan BMC didapati berbeza dengan ketara antara kumpulan palsu dan ovariectomized. Rawatan dengan ekstrak Cistanches Herba meningkatkan BMD dan BMC dengan ketara dalam tikus OVX. Di samping itu, pemberian ekstrak Cistanches Herba masih meningkatkan beban maksimum yang bergantung kepada dos secara ketara, anjakan pada beban maksimum, tegasan pada beban maksimum, beban pada patah automatik, anjakan pada patah automatik dan tekanan pada patah automatik dalam kumpulan yang dirawat CHE. berbanding kumpulan OVX. Keputusan ini menunjukkan bahawa tulang femur daripada tikus yang diberi ekstrak Cistanches Herba mempunyai beban yang lebih tinggi semasa kegagalan dan dengan itu boleh lebih tahan terhadap patah tekanan. Di samping itu, tikus dalam kumpulan OVX mempunyai paras Ca, Zn, dan Cu darah yang lebih tinggi daripada kumpulan palsu. Pentadbiran ekstrak Cistanches Herba telah mengurangkan tahap Ca, Zn, dan Cu dalam darah tikus OVX.

Tanggapan bahawa status oksidatif adalah penting dalam osteoporosis adalah konsisten dengan persatuan epidemiologi yang kuat antara osteoporosis dan aterosklerosis, penyakit di mana tekanan oksidan memainkan peranan utama. Selain itu, baru-baru ini diperhatikan bahawa terdapat perkaitan dalam wanita antara tekanan oksidan (diukur dengan biomarker tekanan oksidatif, 8-iso-PGF2- ) [34], tahap antioksidan [35], dan kepadatan mineral tulang. Kajian klinikal yang telah mengkaji hubungan antara diet dan / atau askorbat tambahan dan jisim tulang pada manusia juga mencadangkan persatuan dengan peningkatan jisim tulang [36].

Oleh kerana MDA mempunyai kereaktifan yang tinggi terhadap kumpulan amino, ia menghalang sintesis asid nukleik dan protein dan juga menyahaktifkan enzim [37,38]. Oleh itu, penurunan enzim antioksidan tulang paha yang diperhatikan selepas OVX mungkin disebabkan oleh peningkatan peroksidasi lipid. Enzim antioksidan terlibat dalam sistem pertahanan terhadap tisu pengantara radikal bebas atau kerosakan sel. Mereka memetabolismekan sama ada radikal bebas atau perantaraan oksigen reaktif kepada produk bukan radikal. Enzim ini termasuk keluarga enzim yang bergantung kepada glutation [39]. Dalam kajian ini, kami melaporkan penurunan ketara dalam tahap enzim antioksidan iaitu. SOD, GSH-Px, CAT dalam darah tikus ovariectomized. Penemuan ini menunjukkan bahawa kekurangan dalam hormon ovari berkorelasi dengan kegagalan untuk memerangi tekanan oksidatif. Pentadbiran ekstrak Cistanches Herba secara ketara meningkatkan aktiviti SOD, GSH-Px dan CAT darah yang bergantung kepada dos dalam tikus OVX. Keputusan ini nampaknya menunjukkan kesan perlindungan yang lebih baik daripada ekstrak Cistanches Herba terhadap tekanan oksidatif yang disebabkan semasa OVX.

Secara ringkasnya, ekstrak Cistanches Herba berkesan dalam mencegah kehilangan tulang yang disebabkan oleh kekurangan hormon ovari seperti yang dilihat daripada BMD femur, nilai BMC, dan paras Ca, Zn, dan Cu dalam darah. Oleh kerana osteoporosis dikaitkan dengan tekanan oksidatif, kajian seumpama ini membuktikan kepentingan nilai terapeutik antioksidan. Kami mengandaikan bahawa ekstrak Cistanches Herba meningkatkan kualiti tulang mungkin sebahagiannya melalui meningkatkan aktiviti enzim antioksidan tikus OVX dan mengurangkan unsur mineral tulang.

Ekstrak Herba Cistanches: mencegah kehilangan tulang

Rujukan

1. Canalis, E.; Giustina, A.; Bilezikian, JP Mekanisme terapi anabolik untuk osteoporosis. N. Inggeris. J. Med. 2007, 357, 905–916.

2. Heaney, RP; Recker, RR; Saville, PD Perubahan menopaus dalam pembentukan semula tulang. J. Makmal. Clin. Med. 1978, 92, 964–970.

3. McNamara, LM; Ederveen, AGH; Lyons, CG; Harga, C.; Schaffer, MB; Weinans, H.; Prendergast, PJ Kekuatan tisu trabekular tulang cancellous daripada tikus normal, ovariektomi dan dirawat dadah sepanjang tempoh penuaan. Bone 2006, 39, 392–400.

4. Terapi penggantian hormon Compston, JE. Clin. Rheumatol. 1997, 11, 583–596.

5. Meiner, SE Osteoporosis landskap yang semakin berkembang: Pilihan rawatan hari ini. Adv. Amalan Jururawat.1999, 7, 26–31.

6. Aubin, JE; Bonnelye, E. Osteoprotegerin, dan ligannya: Paradigma baru untuk pengawalan osteoklastogenesis dan penyerapan tulang. Osteoporos. Int. 2000, 11, 905–913.

7. Roodman, GD Kemajuan dalam biologi tulang: Osteoklas. Endokr. Wahyu 1996, 17, 308–332.

8. Berangan, CH, III. Terapi ubat: Calcitonin, bifosfonat, dan steroid anabolik. Dalam Osteoporosis: Etiologi, Diagnosis, dan Pengurusan; Riggs, BL, Melton, LJ, III, Eds.; Lippincott-Raven: Philadelphia, PA, Amerika Syarikat, 1995.

9. Quan, Q.-M.; Wu, W.; Li, Y.-X.; Cai, Q.-R. Variasi kandungan icariin dan flavonoid spesies Barrenwort. J. Med. Tumbuhan Re. 2010, 4, 1176–1181.

10. Du, XG; Kuali, HZ; Zhang, CY; Zhang, HY; Liu, HM; Chen, ZY; Zeng, XY Ekstrak Zingiber officinale memodulasi imunosupresi akibat sinar-g pada tikus. J. Med. Tumbuhan Re. 2010, 4, 1647–1655.

11. Paschalis, EP; Betts, F.; DiCarlo, E.; Mendelsohn, R.; Boskey, analisis mikroskopik AL FTIR biopsi puncak iliac manusia daripada tulang osteoporotik yang tidak dirawat. Calcif. Int Tisu 1997, 61, 487–492.

12. Motoie, H.; Kanoh, H.; Ogata, S.; Kawamuki, K.; Shikama, H.; Fujikura, T. Pencegahan kehilangan tulang oleh bifosfonat YM175 dalam anjing ovariectomized dengan sekatan kalsium diet. Jpn. J. Pharmacol. 1996, 71, 239–246.

13. Lin, LW; Hsieh, MT; Tsai, FH; Wang, WH; Wu, CR Aktiviti anti-nociceptive dan anti-radang yang disebabkan oleh Cistanche deserticola dalam tikus. J. Ethnopharmacol. 2002, 83, 177–182.

14. Wu, XM; Gao, XM; Tsim, KW; Tu, PF Arabinogalactan yang diasingkan daripada batang Cistanche deserticola mendorong pembiakan limfosit berbudaya. Int. J. Biol. Makromol. 2005, 37, 278–282.

15. Zeng, JC; Peminat, YG; Liu, JR; Zeng YR; Yi, CZ; Liang Y. Kajian eksperimen tentang pembezaan arah sel stem mesenchymal tulang (BMSC) kepada osteoblas dipandu oleh cistanche deserticola yang mengandungi serum. Zhongguo Gu Shang 2010, 23, 606–608.

16. Chen, Z.-W.; Zhu, B.-D.; Xu H.-Y. Kajian eksperimen polisakarida cistanche desertliving pada haematogenesis terkawal dalam tikus anemia tertekan sumsum tulang. Dagu. Gerbang. Tradit. Dagu. Med. 2007, 25, 1473–1474.

17. Prakasam, G.; Ye, JK; Chen, M.-M.; Castro-Magana, M.; Liang, CT; Aloia, JF Kesan hormon pertumbuhan dan testosteron pada pembentukan tulang kortikal dan ketumpatan tulang dalam tikus yang telah diovariektomikan. Bone 1999, 24, 491–497.

18. McClung, JP; Stahl, CH; Marchitelli, LJ; Morales-Martinez, N.; Makin, KM; Muda, AJ; Scrimgeour, AG Kesan phytase pemakanan pada penambahan berat badan, komposisi badan dan biomekanik tulang dalam tikus yang sedang membesar yang diberi diet rendah zink. J. Nutr. Biokim. 2006, 170, 190–196.

19. Raja, EJ; Armstrong, AR Kaedah mudah untuk menentukan aktiviti Serum dan hempedu fosfatase. boleh. Med. Prof. J. 1934, 31, 376–381.

20. Jain, SK; McVie, R.; Duet, J.; Herbst, peroksidasi lipid membran Erythrocyte JJ dan hemoglobin glikosilasi dalam diabetes. Diabetes 1989, 38, 1539–1543.

21. Lawrence, RA; Burk, RF Glutathione peroksidase aktiviti dalam hati tikus kekurangan selenium. Biokim. Biophys. Res. Commun. 1976, 71, 952–958.

22. Sun, Y.; Oberley, LW; Ying, L. Kaedah mudah untuk ujian klinikal superoksida dismutase. Clin. Kimia. 1988, 34, 497–500.

23. Abei, H. Catalase in vitro. Kaedah Enzim. 1988, 10, 121–126.

24. Mozaffari, Z.; Azarnia, M.; Abdolhamid Angaji, S. Penilaian kesan toksik ekstrak akueus daun Trigonella foenum-graecum terhadap perkembangan tisu tulang panjang dalam janin tikus. J. Med. Tumbuhan Re. 2010, 4, 1148–1155.

25. Buencamino, MCA; Sikon, AL; Jain, A.; Thacker, HL Kajian pemerhatian mengenai pematuhan garis panduan rawatan osteopenia. J. Kesihatan Wanita 2009, 18, 873–881.

26. Schmitt, MN; Schmitt, J.; Dören, M. Peranan aktiviti fizikal dalam pencegahan osteoporosis pada wanita menopaus-kemas kini. Maturitas 2009, 63, 34–38.

27. Lelovas, PP; Xanthos, TT; Thoma, SE; Lirik, GP; Dontasi, IA Tikus makmal sebagai model haiwan untuk penyelidikan osteoporosis. Komp. Med. 2008, 58, 424–430.

28. Ncango, DM; Pohl, CH; van Wyk, PWJ; Kock, JLF Ubat anti-radang bukan steroid (NSAIDs) menghalang pertumbuhan patogen yis. Afr. J. Mikrobiol. Res. 2011, 5, 1123–1125.

29. Fazliana, M.; Nazaimoon, WMW; Gu, HF; Ostenson, ekstrak CG Labisia pumila mengawal berat badan dan adipokin dalam tikus yang diovariektomi. Maturitas 2009, 62, 91–97.

30. Bourrin, S.; Ammann, P.; Bonjour, JP; Rizzoli, R. Pemulihan ketumpatan dan kekuatan mineral tulang tibia proksimal, tetapi bukan seni bina tulang batal, selepas terapi modulator reseptor reseptor estrogen jangka panjang bifosfonat atau terpilih dalam tikus tua. Bone 2002, 30, 195–200.

31. Borah, B.; Dufresne, TE; Chmielewski, PA; Kasar, GJ; Prenger, MC; Phipps, RJ Risedronate mengekalkan seni bina trabekular dan meningkatkan kekuatan tulang dalam vertebra babi kecil yang diovariektomi seperti yang diukur oleh tomografi mikrokomputer tiga dimensi. J. Penambang Tulang. Res. 2002, 17, 1139–1147.

32. Müller, R.; Hannan, M.; Smith, SY; Bauss, F. Ibandronate berselang-seli mengekalkan kualiti tulang dan kekuatan tulang pada tulang belakang lumbar selepas 16 bulan rawatan dalam monyet cynomolgus yang diovariectomized. J. Penambang Tulang. Res. 2004, 19, 1787–1796.

33. Lorong, NE; Kumer, JL; Majumdar, S.; Khan, M.; Lotz, J.; Stevens, RE; Klein, R.; Phelps, KV Kesan estrogen terkonjugasi sintetik, a (Cenestin) pada struktur tulang trabekular dan kekuatan dalam model tikus ovariectomized. Osteoporosis Int. 2002, 13, 816–823.

34. Basu, S.; Michaelsson, K.; Olofsson, H.; Johansson, S.; Melhus, H. Persatuan antara tekanan oksidatif dan ketumpatan mineral tulang. Biokim. Biophys. Res. Commun. 2001, 288, 275–279.

35. Maggio, D.; Barbani, M.; Pierandrei, M.; Cristina Polidori, M.; Catani, M.; Mecocci, P.; Senin, U.; Pacifici, R.; Cherubini, A. Penurunan ketara dalam antioksidan plasma dalam wanita osteoporotik berumur: Keputusan kajian keratan rentas. J. Clin. Endokrinol. Metab. 2003, 88, 1523–1527.

36. Morton, DJ; Barrett-Connor, EL; Schneider, penggunaan suplemen Vitamin C DL dan ketumpatan mineral tulang pada wanita menopause. J. Penambang Tulang. Res. 2001, 16, 135–140.

37. Burung, RP; Draper, HH Kesan malonaldehid dan asetaldehid pada sel mamalia kultur: Morfologi pertumbuhan, dan sintesis makromolekul. J. Alam Sekitar. Kesihatan 1980, 6, 811–823.

38. Abdelhalim, MAK Potensi pengaruh tekanan oksidatif yang disebabkan oleh diet kolesterol tinggi terhadap komposisi dan sifat sel darah merah dalam arnab. Afr. J. Mikrobiol. Res. 2010, 4, 836–843.

39. Chaudiere, J.; Ferrari-Illiou, R. Antioksidan intraselular daripada mekanisme kimia kepada biokimia. Kimia Makanan. Toksik. 1999, 37, 949–962.