Perbezaan Komposisi Dan Keberkesanan Ubat Produk Mentah Dan Produk Diproses wap Wain Daripada Cistanches Herba

Abstrak:

ObjektifUntuk membandingkan perubahan dalam komposisi kimia dan keberkesanan ubat Roucongrong (Cistanches Herba) sebelum dan selepas pemprosesan, untuk menjelaskan prinsip rebusan dengan wain.

Kaedah LC-MS digunakan untuk mengenal pasti jenis komposisi kimia sebelum dan selepas ramuan Cistanches Herba, digabungkan dengan analisis statistik multivariate untuk mencari perbezaan komponen sebelum dan selepas rebusan dengan wain. Perbezaan keberkesanan telah dibuktikan oleh model tikus kekurangan kortisonekid yang terhidrogenasi.

KeputusanSebanyak 45 komponen kimia telah dikenalpasti daripadaSampel Cistanches Herba; Sebatian yang menyumbang kepada perbezaan antaraCistanches Herba dan Cistanches Herba rebus wainadalahEchinacoside, verbascoside, isoacteosidedan tubuloside B; Jumlah ekstrak phenylethanoid glycosides daripada Cistanches Herba mempunyai kesan yang lebih baik terhadap penambahbaikan model tikus dengan kekurangan buah pinggang berbanding Cistanches Herba rebus wain. Kesimpulan Komposisi Cistanche diubah selepas direbus dengan wain, dan kesan ke atas kekurangan buah pinggang telah dipertingkatkan. Bahan-bahan transformasi daripada Cistanches Herbato rebus wain Cistanches Herba mungkin bahan aktif yang menguatkan buah pinggang dan menyokong yang.

Kata kunci: Cistanches Herba; Cistanches Herba rebus wain;kekurangan buah pinggang yang;echinacoside;verbascoside; isoacteoside; tubuloside B

HERBA CISTANCHE BERKUALITI TINGGI UNTUK DIJUAL

Perkhidmatan Sokongan Wecistanche

E-mel:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Ia dikenali sebagai "ginseng" dan diedarkan terutamanya di Mongolia Dalam, Ningxia (Azuqi), Gansu (Changma), Xinjiang dan kawasan lain [1]. Cistanche bersifat hangat, rasa manis dan masin, dan memasuki meridian buah pinggang dan usus besar. Ia mempunyai kesan menyuburkan hati dan buah pinggang, memberi manfaat kepada pati dan darah, dan melembapkan usus dan melegakan sembelit. Ia boleh digunakan untuk kekurangan buah pinggang yang, mati pucuk dan kemandulan, sakit pinggang dan lutut, kelemahan otot dan tulang, usus kering dan sembelit [2]. Penyelidikan moden menunjukkan bahawa batang berisi dengan daun bersisik Cistanche terutamanya mengandungi pelbagai komponen kimia seperti glikosida phenylethanol, terpenes eter siklopentane dan glikosidanya, lignan, gula, dll. [3], dan mempunyai pelbagai kesan farmakologi sepertianti penuaan,antioksidan,anti demensia,anti-keletihan, dan melembapkan usus dan melegakan sembelit [4].

Selepas direbus dengan wain, kesan menguatkan buah pinggang dan meningkatkan yang daripada Cistanche dipertingkatkan. Prinsip pemprosesan belum dijelaskan dengan jelas. Fan Yanan et al. [5-7] mengkaji kesan Cistanche pada pembuangan air besar tikus, fungsi imun, neurotransmiter enterik dan ekspresi gen yang berkaitan sebelum dan selepas pemprosesan. Da et al. menggunakan pengaruh phenylethanol glycosides sebelum dan selepas pemprosesan untuk menerangkan prinsip pemprosesannya; Zhang Chao et al. [8] menggunakan perubahan dalam kandungan phenylethanol glycosides sebelum dan selepas pemprosesan untuk menerangkan prinsip pemprosesan; Zhang Shuyun et al. [9] menggunakan perubahan dalam kandungan betaine sebelum dan selepas pemprosesan untuk menerangkan kesan pemprosesan pada Cistanche. Kesusasteraan sedia ada mengenai pemprosesan Cistanche terutamanya memberi tumpuan kepada farmakologi, dan penyelidikan mengenai komponen juga memberi tumpuan kepada perubahan dalam kandungan komponen tertentu, tanpa kajian sistematik tentang perbezaan komponen. Eksperimen ini menggunakan teknologi spektrometri jisim kromatografi cecair (LC-MS) yang digabungkan dengan analisis statistik multivariate untuk mengenal pasti komponen kimia dalam Cistanche, untuk mencari penanda perbezaan antara Cistanche mentah dan produk rebusan wain, dan untuk mengkaji perbezaan dalam keberkesanan Cistanche mentah dan produk rebusan wain melalui model tikus kekurangan buah pinggang yang disebabkan oleh hidrokortison, untuk menjelaskan asas bahanCistanche dalam menguatkan buah pinggang dan menggalakkan yangdan prinsip pemprosesan Cistanche rebus wain.

HERBA CISTANCHE BERKUALITI TINGGI UNTUK DIJUAL

1 Bahan

1.1 Instrumen

Ultimate 3000 UPLC-LTQ Orbitrap XL perangkap ion tandem medan elektrostatik spektrometer jisim resolusi tinggi (Thermo Fisher Scientific, Amerika Syarikat), stesen kerja Theraio Xcaliber; Baki elektronik BT125D 1/100000 (Sistem Instrumen Sartorius, Jerman); Pembersih ultrasonik CNC KQ500DE (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); Penyebar berkelajuan tinggi XHF-D (Guangzhou Hu Ruiming Instrument Co., Ltd.); Pembaca plat mikro Multiskan FC (Thermo Scientific); HC-3518 emparan berkelajuan tinggi (Anhui Zhongke Zhongjia Scientific Instrument Co., Ltd.); BW-YLS-1B perakam aktiviti sukarela tikus pelbagai fungsi (Shanghai Ruanlong Technology Development Co., Ltd.).

1.2 Dadah

Metanol gred spektrometri jisim (Fisher); asid formik gred spektrometri jisim (pecahan jisim 99%, Sigma Aldrich); air (air suling Watsons); Pil Jinkui Shenqi (Beijing Tongrentang Technology Development Co., Ltd. Kilang Farmaseutikal, nombor kelompok 1701653); garam natrium suksinat hidrokortison (Tianjin Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd., nombor kelompok 011705067); kit superoxide dismutase (SOD) (nombor kelompok 20170115) dan kit malondialdehid (MDA) (nombor kelompok 20170117) telah dibeli daripada Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd.; testosteron (T) dan estradiol (E2) ditentukan di Pusat Pemeriksaan Kualiti Qingdao Kechuang, dan kreatinin (CREA) dan nitrogen urea darah (BUN) ditentukan di Pusat Analisis dan Ujian Universiti Perubatan Mongolia Dalam.

1.3 Haiwan

100 ekor tikus SD jantan, seberat 180-200 g, telah dibeli dari Ladang Haiwan Eksperimen Xinglong di Daerah Haidian, Beijing, nombor lesen: SCXK (Beijing) 2016-0003. Percubaan haiwan ini telah diluluskan oleh Jawatankuasa Etika Universiti Perubatan Cina Beijing, nombor etika: BUCM-4-2022091301-3095.

1.4 Sampel

Enam kelompok Cistanche deserticola telah dikenal pasti sebagai tulen oleh Profesor Li Xiangri dari Sekolah Perubatan Cina, Universiti Perubatan Cina Beijing, dan diperoleh daripada batang berdaging kering dengan daun sisik Cistanche deserticola YC Ma, tumbuhan daripada keluarga Orobanchaceae. Maklumat terperinci mengenai sampel ditunjukkan dalam Jadual 1.

Jadual 1 Lembaran maklumat sampel Cistanches Herba

2 Kaedah

2.1 Penyediaan sampel

2.1.1 Penyediaan produk mentah Ambil Cistanche deserticola bersih, lembutkan, potong menjadi kepingan tebal, dan keringkan.

2.1.2 Penyediaan produk rebusan wain

Ambil 100 g hirisan Cistanche deserticola, tambah 30 mL wain beras, gaul rata, dan rebus sehingga wain diserap. Rebus dalam air selama 12 jam, keluarkan dan biarkan sejuk sedikit, dan keringkan. Lihat Rajah 1 untuk sampel Cistanche deserticola mentah dan Cistanche deserticola rebus wain.

2.2 Kajian tentang perbezaan komponen Cistanche deserticola sebelum dan selepas direbus dalam wain

2.2.1 Penyediaan penyelesaian

Ambil kira-kira {{0}}.2 g serbuk sampel kering (melepasi 65-ayak mesh), timbang dengan tepat, masukkan ke dalam kelalang isipadu coklat 50 mL, tambah 25 mL metanol 50% larutan akueus, tutup rapat, timbang jisim, rendam selama 30 minit, rawat secara ultrasonik selama 40 minit (kuasa 250 W, frekuensi 35 kHz), sejukkan, timbang semula, tambah larutan akueus metanol 50% untuk menggantikan jisim yang hilang, goncang baik, biarkan berdiri, tapis supernatan melalui membran penapis mikroporous 0.22 μm, dan letakkan turasan dalam botol fasa cecair coklat untuk mendapatkan larutan.

HERBA CISTANCHE BERKUALITI TINGGI UNTUK DIJUAL

2.2.2 Keadaan kromatografi

Air ACQUITY UPLCTM BEH C18 lajur kromatografi (100 mm×2.1 mm, 1.7 μm), suhu lajur 35 darjah ; suhu ruang sampel 10 darjah , isipadu suntikan sampel 3 μL, metanol (A)-0.1% larutan akueus asid formik (B) sebagai fasa mudah alih, elusi kecerunan: 0-4 min, 10%{ {13}}% metanol; 4-18 min, 26%-40% metanol; 18-24 min, 40%-100% metanol; 24-28 min, 100% metanol. Kadar aliran isipadu ialah 0.3 mL/min, dan panjang gelombang pengesanan ialah 330 nm.

2.2.3 Keadaan spektrometri jisim

Sumber pengionan elektrospray (ESI) digunakan, pengimbasan mod ion negatif, suhu kapilari ialah 350 darjah, kadar aliran isipadu gas sarung ialah 30 arb, kadar aliran isipadu gas tambahan ialah 10 arb, voltan semburan ialah 3

KV, voltan kapilari ialah −35 V, voltan kanta tiub ialah −110 V, julat imbasan ialah m/z 100-1 000, sistem pengumpulan data ialah Xcalibur 2.1.

2.2.4 Analisis komponen utama (PCA)

Selepas memperoleh matriks dua dimensi pasangan data masa pengekalan jisim yang tepat, panel instrumen akan memaparkan semua maklumat masa pengekalan tepat yang diimport secara automatik, dan kaedah PCA modul statistik lanjutan akan digunakan untuk analisis.

2.2.5 Analisis diskriminasi kuasa dua terkecil separa ortogon (OPLS-DA) LCMS menggabungkan pengasingan tinggi kromatografi cecair dengan sensitiviti spektrometri jisim yang tinggi. Data yang dikumpul adalah agak besar, dan analisis statistik multivariate diperlukan untuk memproses data. OPLS-DA membahagikan data kepada dua kumpulan dan menggunakan model statistik yang diselia untuk mendapatkan sejumlah besar spektrum ortogonal, yang jelas menunjukkan perbezaan antara kedua-dua kumpulan sampel. Dalam format S-Plot angka tambahan, setiap titik mewakili pasangan data masa pengekalan jisim yang tepat, paksi X mewakili pembolehubah, semakin jauh titik data dari titik sifar, semakin besar sumbangan titik kepada perbezaan sampel ; paksi-Y mewakili korelasi antara sampel dalam kumpulan sampel yang sama, semakin jauh jisim yang tepat dan pasangan data masa pengekalan adalah dari titik sifar, semakin kuat korelasi itu. Oleh itu, pasangan data masa pengekalan jisim yang tepat pada kedua-dua hujung lengkung berbentuk S mewakili ion ciri yang paling boleh dipercayai daripada setiap kumpulan sampel.

HERBA CISTANCHE BERKUALITI TINGGI UNTUK DIJUAL

2.2.6 Analisis struktur spektrometri jisim

Selepas mendapat ion ciri, komposisi unsur dan pemadanan sebatian dilakukan dengan mengira jisim molekul relatif yang tepat dan menggabungkan pangkalan data sedia ada dan literatur yang berkaitan untuk mengenal pasti komponen pembezaan.

2.3 Kajian tentang perbezaan keberkesanan sebelum dan selepas rebusan dengan wain

2.3.1 Penyediaan ekstrak Cistanche deserticola

Cistanche deserticola (nombor kelompok 160901) dan serbuk Cistanche deserticola rebus wain yang sepadan telah diekstrak mengikut syarat di bawah "2.2.1", ditapis selepas rawatan ultrasonik, diulang dua kali, turasan digabungkan, pekat dengan penyulingan vakum, dan beku- dikeringkan.

2.3.2 Pengelompokan eksperimen haiwan dan pentadbiran dadah

Rajah 1 Cistanches Herba A dan rebus wain Cistanches Herba B

(1) Pengelompokan: Tikus diberi akses percuma kepada air dan diet. Selepas 1 minggu penyusuan adaptif, mereka dibahagikan secara rawak kepada 5 kumpulan (Jadual 2), dengan 10 ekor tikus dalam setiap kumpulan, iaitu kumpulan normal, kumpulan model, kumpulan Cistanche deserticola mentah (PR), kumpulan Cistanche deserticola (PW) rebus wain. , dan kawalan positif kumpulan Pil Jinkui Shenqi (JK). (2) Pemodelan: Kecuali untuk kumpulan biasa, empat kumpulan lain semuanya disuntik dengan suntikan hidrokortison sodium succinate im, dengan dos 20 mg/kg, selama 14 hari berturut-turut. Kumpulan normal disuntik dengan dos garam biasa yang sama. Keadaan umum tikus dalam setiap kumpulan diperhatikan untuk menentukan sama ada mereka menunjukkan simptom seperti takut sejuk, lebih suka kepada kehangatan, anggota badan yang sejuk, air kencing yang jernih dan panjang, punggung meringkuk dan melengkung, rambut kusam dan berantakan, dan kemurungan mental. Pada masa yang sama, berat badan, bilangan aktiviti spontan, pengambilan makanan, pengambilan air, pengeluaran air kencing dan penunjuk lain tikus dalam setiap kumpulan diukur.

(3) Pentadbiran: Dos tikus dikira berdasarkan dos klinikal Pil Jinkui Shenqi dan Cistanche deserticola. Dos setiap kumpulan Cistanche deserticola ialah 1.80 g/kg dari segi jumlah ubat mentah. Dos khusus ditunjukkan dalam Jadual 2. Setiap ekstrak Cistanche deserticola dan Pil Jinkui Shenqi telah disediakan ke dalam larutan kepekatan tertentu dengan air ternyahion. Penyelesaian itu diberikan secara intragastrik setiap hari dengan isipadu intragastrik sebanyak 10 mL/kg selama 30 hari berturut-turut. Kumpulan normal dan kumpulan model ditadbir secara intragastrik dengan jumlah air ternyahion yang sama setiap hari. Berat badan diukur setiap minggu, dan isipadu intragastrik diselaraskan mengikut berat badan tikus. Selepas pentadbiran, tikus dipuasakan selama 12 jam. Selepas anestesia pentobarbital, darah dikumpulkan dari aorta abdomen untuk pengesanan indeks serum. Buah pinggang, buah zakar, epididimis, vesikel mani dan prostat telah dikeluarkan untuk pengesanan indeks yang berkaitan.