Pendedahan Ekzos Diesel Mengubah Ungkapan Rangkaian yang Terlibat dalam Neurodegenerasi dalam Otak Zebrafish Bahagian 3
Mar 04, 2024
Keputusan perbandingan proteomik mendedahkan penyeliaan (lebih perwakilan) ACTG2 (aktin, gamma 2), CAT (katalase), GSR (glutathione-disulfidereductase), GST (glutathione S-transferase), HMOX1 (heme oxygenase 1), dan PRDX1 (peroxiredoxin 1), serta downregulation ubiquitin-conjugatingenzyme ubcM2, RAP1A (RAP1A, ahli keluarga RASoncogene), UBE2E3 (ubiquitin-conjugatingenzyme E2 E3), dan ACTA1 (actin, alpha 1).
Proteomik ialah teknologi saintifik berskala besar yang mengkaji jenis, struktur, kuantiti, dan fungsi protein dalam organisma. Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, semakin banyak kajian telah menunjukkan bahawa proteomik berkait rapat dengan ingatan.
Penyelidik telah mendapati bahawa protein dalam otak boleh menjejaskan isyarat antara neuron, dengan itu menjejaskan aktiviti kognitif seperti pembelajaran dan ingatan. Sebagai contoh, kebanyakan molekul protein yang diperlukan untuk pengekodan memori dan proses penyimpanan disintesis pada sinaps. Molekul protein ini bukan sahaja terlibat secara langsung dalam pengaliran dan transduksi isyarat saraf, tetapi juga boleh menjejaskan sambungan sinaptik dan kestabilan mereka antara neuron, seterusnya menjejaskan penjanaan dan penyatuan ingatan.
Penyelidikan juga mendapati bahawa protein tertentu memainkan peranan penting dalam proses ingatan. Sebagai contoh, kinase protein CaMKII dalam neuron mengawal kekuatan dan kestabilan sambungan sinaptik dan memainkan peranan penting dalam pembelajaran dan ingatan. Satu lagi protein penting ialah BDNF, yang boleh menggalakkan pertumbuhan neuron, pengukuhan sinaptik, dan kemandirian neuron, dengan itu meningkatkan penyatuan dan penyelenggaraan ingatan.
Di samping itu, beberapa kajian mendapati bahawa kesihatan fizikal dan diet juga mempunyai kesan yang ketara terhadap proteomik dan ingatan. Tidur yang mencukupi, senaman yang sesuai, dan diet rendah lemak, tinggi protein boleh menggalakkan sintesis dan pembaikan protein, yang bermanfaat untuk meningkatkan daya ingatan dan kebolehan kognitif.
Secara ringkasnya, proteomik dan ingatan berkait rapat. Para saintis yang mempelajari sains hayat semakin menemui cara memodulasi proteom untuk meningkatkan daya ingatan dan mencegah rawatan untuk gangguan kognitif seperti penyakit Alzheimer. Oleh itu, kita harus memberi perhatian kepada hasil penyelidikan saintifik dan mengekalkan tabiat makan, hidup, dan senaman yang baik untuk mengekalkan otak yang sihat, kuat dan mempunyai ingatan yang lebih baik. Ia boleh dilihat bahawa kita perlu meningkatkan ingatan, dan Cistanche deserticola boleh meningkatkan memori dengan ketara, kerana Cistanche deserticola juga boleh mengawal keseimbangan neurotransmitter, seperti meningkatkan tahap asetilkolin dan faktor pertumbuhan. Bahan-bahan ini sangat penting untuk ingatan dan pembelajaran. Selain itu, Cistanche deserticola juga boleh meningkatkan aliran darah dan menggalakkan penghantaran oksigen, yang dapat memastikan otak menerima nutrien dan tenaga yang mencukupi, seterusnya meningkatkan daya hidup dan daya tahan otak.
Klik tahu 10 cara untuk meningkatkan ingatan
Antaranya, penurunan regulasi ubcM2, perencat Nrf2, boleh menyebabkan aktiviti laluan ini lebih tinggi. Oleh kerana komponen sitoskeleton yang berbeza (ACTG2 danACTA1) berkelakuan secara berbeza dan memandangkan kekurangan ekspresi pembezaan yang ketara dalam Nrf2 atau Keap1, dapat disimpulkan bahawa pendedahan kepada DEPemay mendorong penyusunan semula sitoskeleton (memihak kepada translokasi Nrf2 ke nukleus) dan pengaktifan Laluan Nrf2 secara tidak langsung melalui rangsangan tekanan oksidatif (Rajah 4).
Penemuan ini disokong dengan baik oleh analisis transkriptom kami, yang menunjukkan pengawalseliaan PRDX, GSR, dan GST (gen hiliran). Walau bagaimanapun, analisis transkripme memperincikan lagi bahawa c-Fos dan FRA1 (dua perencat Nrf2 nuklear) dikurangkan dengan ketara dan oleh itu membenarkan aktiviti Nrf2 yang lebih tinggi semasa rawatan DEPe.
Pematangan fagosom
Kematangan fagosom memudahkan pemerdagangan zarah dalaman ke arah satu siri struktur subselular terikat membran yang semakin berasid, mengakibatkan degradasi zarah. Selepas menutup atau memotong dari membran permukaan, fagosom bercantum dengan endosom awal, endosom lewat, dan lisosom disertai dengan perubahan pengasidan yang ketara dalam komposisinya, menukarkannya kepada persekitaran oksidatif dan degradasi.
Pergerakan fagosom berlaku berdasarkan pengikatan protein sitoskeletal (mikrotubulus), yang membawa kepada percantuman endosom dan lisosom secara berurutan secara dinamik (Gotthardt et al. 2002). Semasa pematangan, GTPase Rab5 memacu gabungan endosom awal melalui interaksi dengan beberapa molekul, termasuk antigen endosom awal 1 (EEA1), kompleks VPSS34, dan SNAREprotein.
Selain itu, pengasidan berlaku serentak melalui vATPase (pam proton vakuolar) yang memindahkan H+ merentasi membran dan seterusnya mengasidkan lumen (Desjardins et al. 1994).
Walaupun tiada penglibatan ketara laluan ini ditemui pada tahap transkriptom, analisis proteomik kami menunjukkan penurunan peraturan ATP6V1A (ATPase H+ mengangkut V1 subunit A), ATP6V1E1, ATP1B2B, ATP1B3A, ATP6V1F, DYNLRB1(dynein light chain roadblock-jenis 1). TUBA1C(tubulin alpha 1c), TUBB2A, TUBB4A dan VAMP2(protein membran berkaitan vesikel 2) yang mencadangkan bahawa rawatan dengan DEPe boleh membawa kepada aktiviti pematangan fagosom yang lebih rendah atau pH lisosom yang diubah (Rajah 4). Ini selaras dengan laporan terbaru kami bahawa pendedahan DEPe mengakibatkan fux neuronalautophagic yang lebih rendah dan mencadangkan mekanisme yang mendasari ketoksikan neuron pencemaran udara (Barnhill et al.2020).
Pemprosesan amiloid
Plak amiloid adalah ciri lesi otak neuropatologi dalam AD dan PD dengan demensia. Struktur ini terdiri daripada peptida A-beta, yang merupakan pusat kepada patofisiologi AD (SadighEteghad et al. 2015).
Beta amiloid diproses oleh kompleks gamma-secretase (Presenilin1/2) dan beta-secretase (BACE1) daripada protein transmembraneprotein-Amyloid (APP) Jenis 1. Adalah diketahui bahawa kemasukan Ca2+yang tidak normal membawa kepada pengaktifan Calpain yang menyimpang, yang memainkan peranan dalam fosforilasi protein berkaitan mikrotubule Tauvia laluan CDK5.
Tambahan pula, tekanan oksidatif yang dikaitkan dengan pengumpulan A-beta menyumbang kepada pengaktifan beberapa kinase, termasuk kinase MAP, menghasilkan fosforilasi tau. Hiperfosforilasi patologi tau mempunyai peranan penting dalam ketidakstabilan mikrotubul (Sadigh-Eteghad et al. 2015). ). Perubahan ini amat relevan dengan patogenesis AD dan PD dan boleh menjadi faktor penyumbang bagaimana pencemaran udara meningkatkan risiko.
Analisis ekspresi kami mencadangkan kesan ketidakstabilan DEPe pada pengawal selia pemprosesan amiloid kerana tiga pengawal selia termasuk CAPNS1 (subunit kecil calpain 1), MARK1 (kawalan afiniti mikrotubulus kinase 1), dan PRKAR1B (subunit kawal selia jenis I bergantung kepada protein kinasecAMP) telah dikurangkan pada tahap protein (Rajah 4).
Disfungsi mitokondria
Sebagai pengguna utama oksigen dalam sel, mitokondria mengandungi banyak pembawa redoks untuk memindahkan elektron kepada oksigen, yang mengakibatkan pembentukan spesies oksigen reaktif (ROS).
Organel ini mengandungi sistem pertahanan antioksidan untuk menyahtoksikROS dan mengelakkan kerosakan oksidatif kepada komponen selular lain. Pendedahan DEPe membawa kepada perubahan dalam ekspresi protein utama yang mungkin mengakibatkan disfungsi mitokondria. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 4, terdapat penurunan yang ketara dalam paras protein ATP sintase (ATP5F1D, ATP5mea), Cytochrome c oxidase(COX7A2), NADH dehydrogenase (NDUFA10,NDUFS8), 2-oxoglutarate dehydrogenase (OGDH), dan subunit kompleks Cytochrome b-c1 2 (UQCRC2) yang memainkan peranan penting dalam pengangkutan elektron.
Ini boleh mengubah pengeluaran ATP dan juga secara langsung mengakibatkan peningkatan pengeluaran dan ketoksikan ROS. Disfungsi mitokondria telah dicadangkan untuk menyumbang kepada patogenesis AD dan PD dan, seperti dengan beberapa laluan yang disebutkan di atas, pencemaran udara boleh mengubah risiko dengan mengganggu fungsi organel kritikal ini.
Isyarat bimbingan akson
Pembentukan sambungan neuron memerlukan pelanjutan akson yang berhijrah ke arah sasaran sinaptik mereka. Di bahagian hadapan akson, kon pertumbuhan akson mengandungi reseptor dengan keupayaan untuk merasakan isyarat panduan yang menarik dan menjijikkan yang diperlukan untuk navigasi akson.
Selain BMP, Shh dan Wnt (yang baru-baru ini terlibat dalam bimbingan akson), terdapat sekurang-kurangnya empat kumpulan utama petunjuk panduan: (i) Reseptor Netrin dan DCC/UNC-5; (ii) Plexin, semaphorin, dan reseptor neuropilin; (iii) Reseptor celah dan Robo; dan(iv) Reseptor Ephrins dan Eph. Protein ini mungkin sama ada dirembes dan dikaitkan dengan matriks ekstraselular (Slits, Netrins, dan beberapa Semaphorin) atau berlabuh pada permukaan sel (Ephrins and someother Semaphorins) (Stoeckli 2018).Rawatan dengan DEPe memberi kesan kepada beberapa aspek bimbingan akson.
Pada tahap protein, beberapa faktor penting dan pengawal selia telah diubah semasa rawatan. Representasi berlebihan PLXNB2(plexin B2) dan kurang representasi beberapa protein termasuk ARHGEF11 (Rho guanine nucleotideexchange factor 11), CHMP1A (charged multivesicular body protein 1A), COPS5 (COP9 signalosomesubunit 5), GNAT1 (G protein subunit alpha GNAT21), (G protein subunit alpha transducin 2), GNB5 (G protein subunit beta 5), MYL1(myosin light chain 1), MYL2 (myosin light chain2), NCK1 (adaptor protein 1), PLXNA1 (plexin A1), PRKAR1B (protein kinase Subunit kawal selia typeI bergantung kepada cAMP), RAC3 (Rac family smallGTPase 3), RAP1A (ahli RAS onkogenefamily), SHANK2 (SH3 dan berbilang ankyrin repeatdomains 2), TUBA1C (tubulin alpha 1c), TUBB2A (tubulin beta 2A kelas IIa ), dan TUBB4A (tubulinbeta 4A kelas Iva) mencadangkan kemerosotan ketara bimbingan akson dalam embrio yang sedang berkembang (Jadual Tambahan 5).
Menariknya, laluan bimbingan akson tidak terjejas dengan ketara pada tahap transkriptom, yang menunjukkan bahawa penglibatan laluan ini mungkin hasil hiliran yang mana beberapa protein effector/pengatur telah didegradasi.
Perubahan dalam laluan bimbingan akson yang diterangkan di sini mungkin mencerminkan laluan neurotoksik yang berkaitan dengan AD dan PD atau hanya mencerminkan gangguan perkembangan saraf dalam pembangunan embrio. Analisis profil ekspresi dalam orang dewasa yang terdedah DEPe akan membantu menyelesaikan soalan ini.
Laluan lain
Analisis proteomik dan transkriptom kami juga menunjukkan penglibatan beberapa laluan dan laluan metabolik termasuk degradasi melatonin, irama sirkadian, isyarat simpang sel Sertoli sel-Sertoli, isyarat simpang adheren epitelium, metabolisme hormon tiroid II (melalui konjugasi dan/atau degradasi), isyarat RhoA, inosine -5'-fosfat biosintesis II, laluan isyarat GP6, isyarat RhoGDI, laluan pengaktifan protrombin ekstrinsik dan sistem pembekuan. Kebanyakan perubahan ini boleh mencerminkan perubahan akibat gangguan pembangunan.
Sebagai contoh, kedua-dua analisis proteomik dan transkriptik mendedahkan bahawa laluan fototransduksi mempunyai perubahan terbesar yang tidak diungkapkan semasa rawatan DEPe. Seperti yang ditunjukkan dalam Jadual Tambahan 5, beberapa gen, termasuk Opsin, GRK, S-arrestin, Transducin-, Transducin-, PDC, dan GUCA mempunyai tahap transkripsi yang dilemahkan akibat pendedahan kepada DEPe. Disebabkan kekurangan bukti induksi mana-mana elemen dalam laluan ini, rawatan DEPe nampaknya menjejaskan perkembangan sistem visual. Ini konsisten dengan pemerhatian kami bahawa mata tidak pernah berkembang sepenuhnya dan kecil selepas rawatan.
Penilaian fungsional
Dalam laporan ini, pengawalseliaan ketara cytochrome P450 (Cyp1A) adalah kesan pendedahan DEPe yang paling ketara. Cyp1A memetabolismekan banyak sebatian endogen dan eksogen dan peningkatan ekspresi dalam otak mungkin melindungi, atau menyumbang kepada ketoksikan. Untuk lebih memahami peranan Cyp1A dalam ketoksikan DEPe, kami menggunakan CRISPR/Cas9 untuk menjana model knockdown Cyp1A. Memandangkan prosedur penyuntingan gen dalam ikan zebra berkemungkinan merupakan proses separa yang menghasilkan embrio mozek, kami menggunakan istilah "knockdown" (KD) dan bukannya "knockout." Menggunakan panduan-RNA khusus jujukan, kami menukar tapak CCA PAM pertama kepada kodonin TGA (berhenti) ekson pertama Cyp1A. Panduan bukan sasaran-RNA secara alternatif digunakan sebagai kawalan perebutan (SC).
Jumlah RNA kemudiannya diasingkan daripada kepala sehingga 20 embrio KD dan SC (5 pdf), dan kecekapan knockdown telah disahkan oleh analisis qPCR. Sama seperti yang diperhatikan dalam RNA-Seqstudy throughput tinggi, eksperimen ini menunjukkan induksi tajam(30.59-lipatan daripada garis dasar) Cyp1A semasa DEPetreatment dalam embrio SC, manakala embrio KD mengalami peningkatan dalam ekspresi ( Rajah 5a).
Kemandirian enam kumpulan embrio semasa 7-kursus siang hari (n Lebih daripada atau sama dengan 40) ditunjukkan dalam Rajah 5b. Secara ringkas, pada 7pdf, purata kelangsungan hidup ialah 89.1%, 74.4%, 79.4%, 68.5%, 48.8%, dan 7.6% untuk WT/DMSO, WT/DEPe, SC/DMSO, SC/DEPe, KD/DMSO, dan KD/DEPe, masing-masing. Oleh itu, KD Cyp1A mengakibatkan kemandirian yang berkurangan tetapi secara mendadak berkurangan dalam ikan yang dirawat DEPe berbanding dengan kawalan.
Tambahan pula, KD juga mengakibatkan kadar kecacatan morfologi yang jauh lebih tinggi (Rajah 5c). Oleh itu, induksi ungkapan Cyp1A oleh DEPe nampaknya merupakan mekanisme pampasan pelindung. Had ketara penemuan kami ialah kami mengukur Cyp1Ainduksi ekspresi dalam otak ikan zebra tetapi KDexperiments mengurangkan ekspresi dalam keseluruhan embrio.
Kepentingan dan implikasi untuk penyakit neurodegeneratif
Pencemaran udara diketahui memberi kesan negatif kepada kualiti hidup dan memainkan peranan penting dalam perkembangan penyakit manusia dan haiwan. Dengan menggunakan analisis ekspresi throughput yang tinggi, kami menunjukkan bahawa rawatan DEPe telah mengubah beberapa proses biologi dan laluan isyarat dalam kepala kepala embrio ikan zebra. Perubahan dalam pembentukan fagosom, pemprosesan amiloid, dan fungsi mitokondria amat berkaitan dengan neurodegenerasi.
Yang menghairankan, keputusan kami tidak menunjukkan sebarang penglibatan jelas keradangan, yang telah dihipotesiskan memainkan peranan penting dalam ketoksikan pencemaran udara. Ini berkemungkinan kerana kami mengukur ungkapan hanya pada kepala 5-ikan zebra berumur sehari dan bukan keseluruhan badan. Kajian ini bertujuan untuk menentukan bagaimana otak dipengaruhi oleh pendedahan kepada DEPe.
Otak memang mengandungi mikroglia, yang berkemungkinan diaktifkan oleh DEPe, tetapi ia membentuk sebahagian kecil sel dalam otak sehingga sebarang perubahan mungkin tidak dapat dikesan. Selain itu, mikroglia tidak hadir dan berfungsi di dalam otak larva yang sedang berkembang sehingga 3-5 pdf. Oleh sebab itu, pendedahan awal mungkin bukan yang paling relevan untuk mengkaji tindak balas keradangan. Induksi metabolisme xenobiotik juga berkemungkinan relevan sebagai tindak balas pampasan atau perlindungan terhadap pencemaran udara.
Model Cyp1AKD kami mengesahkan peranan perlindungan laluan ini dan mewakili contoh terbaik bagaimana kajian ekspresi boleh memberikan petunjuk penting untuk menentukan mekanisme bahan toksik seperti pencemaran udara. Tidak diketahui sama ada polimorfisme dalam gen Cyp1A mengubah risiko AD atau PD pada manusia yang terdedah kepada pencemaran udara, tetapi keputusan ini mencadangkan interaksi gen-alam sekitar yang berpotensi dan patut disiasat lanjut.
Satu persoalan penting untuk ditangani ialah kaitan pendedahan DEPe kepada pencemaran udara. DEPe ialah campuran yang paling biasa digunakan dalam penyelidikan pencemaran udara untuk kultur sel dan model lain yang tidak sesuai dengan ruang penyedutan. Ekstrak diklorometana DEPmengandungi bahagian hidrofobik seperti PAH yang berkemungkinan besar memasuki aliran darah dan bioakumulasi di otak. Satu kajian baru-baru ini menentukan kepekatan beberapa PAH dalam otak bedah siasat manusia dan mendapati ia mengandungi kepekatan PAH yang hampir sama dengan yang digunakan dalam kajian yang dibentangkan di sini (Pastor-Beldaet al. 2019). Oleh itu, pendedahan kepada otak ikan zebra adalah sangat relevan, kerana ia mengandungi PAH dan bahagian lain yang telah diperhatikan untuk bioakumulasi dalam otak manusia.
Penghargaan Kami berterima kasih kepada agensi berikut yang membiayai kerja ini: Yayasan Levine (JMB), geran daripada Institut Sains Kesihatan Persekitaran Kebangsaan, NIEHST32ES015457 (LMB, SK), dan The Parkinson's Alliance(JMB).
Sumbangan pengarang Konsep dan reka bentuk kajian (MSJ, LMB, JMB); Pemerolehan data (MSJ, HM, LMB, SL):Analisis dan tafsiran data (MSJ, LMB, JMB); Merangka artikel atau menyemaknya secara kritis untuk kandungan intelektual yang penting (MSJ, HM, LMB, JMB).
Pembiayaan Kajian ini disokong oleh The Levine Foundation (JMB), geran daripada Institut Sains Kesihatan Persekitaran Kebangsaan, NIEHS T32ES015457 (LMB, SK), dan The Parkinson's Alliance (JMB).
Ketersediaan Data Semua data tersedia dalam fail tambahan kami.
Pengisytiharan
Kelulusan etika Semua eksperimen haiwan telah diluluskan oleh Jawatankuasa Penyelidikan Haiwan UCLA.
Persetujuan untuk penerbitan Semua pengarang meluluskan penyerahan ini untuk diterbitkan.
Kepentingan bersaing Pengarang mengisytiharkan tiada kepentingan bersaing.
Akses Terbuka Artikel ini dilesenkan di bawah Atribusi Creative Commons 4.0 Lesen Antarabangsa, yang membenarkan penggunaan, perkongsian, penyesuaian, pengedaran dan pengeluaran semula dalam sebarang medium atau format, asalkan anda memberikan kredit yang sewajarnya kepada pengarang asal. dan sumbernya, berikan pautan kepada lesen Creative Commons, dan nyatakan jika perubahan telah dibuat.
Imej-imej atau bahan pihak ketiga lain dalam artikel ini disertakan dalam lesen Creative Commons artikel melainkan dinyatakan sebaliknya dalam garis kredit kepada bahan tersebut. Jika bahan tidak disertakan dalam pemegang lesen Creative Commons dan penggunaan yang anda maksudkan tidak dibenarkan oleh peraturan berkanun atau melebihi penggunaan yang dibenarkan, anda perlu mendapatkan kebenaran terus daripada pemegang hak cipta. Untuk melihat salinan lesen ini.
Rujukan
Ahmadinejad F, Møller, SG Hashemzadeh-Chaleshtori M, BidkhoriG, Jami MS. Mekanisme molekul di sebalik pemusnah radikal bebas berfungsi melawan tekanan oksidatif Antioksidan 2017;6https://doi.org/10.3390/antiox6030051
Barnhill LM, Khuansuwan S, Juarez D, Murata H, AraujoJA, Bronstein JM. 2020. Pendedahan ekstrak ekzos diesel mendorong ketoksikan neuron dengan mengganggu autophagy. Toxicol Sci; https://doi.org/10.1093/toxsci/kfaa055. Tersedia:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/32298450 [Diakses1 Mei 2020].
Bostancıklıoğlu M. Kemas kini tentang interaksi antara penyakit Alzheimer, autophagy dan keradangan. Gene.2019;705:157–66. https://doi.org/10.1016/j.gene.2019.04.040.
Calderón-Garcidueñas L, Maronpot RR, Torres-Jardon R,Henríquez-Roldán C, Schoonhoven R, Acuña-Ayala H,et al. Kerosakan DNA dalam tisu hidung dan otak anjing yang terdedah kepada bahan pencemar udara dikaitkan dengan bukti keradangan otak kronik dan kemerosotan saraf. Toksik Pathol. 2003;31:524–38. https://doi.org/10.1080/01926230390226645.
Calderón-Garcidueñas L, Mora-Tiscareño A, Ontiveros E,Gómez-Garza G, Barragán-Mejía G, Broadway J, et al.Pencemaran udara, defisit kognitif dan keabnormalan otak: kajian perintis dengan kanak-kanak dan anjing. Brain Cogn.2008a;68:117–27. https://doi.org/10.1016/j.bandc.2008.04.008.
Calderón-Garcidueñas L, Reed W, Maronpot RR, HenríquezRoldán C, Delgado-Chavez R, Calderón-Garcidueñas A,et al. Keradangan otak dan patologi seperti Alzheimer pada individu yang terdedah kepada pencemaran udara yang teruk. Toxicol Pathol. 2004;32:650–8. https://doi.org/10.1080/01926230490520232.
Calderón-Garcidueñas L, Solt AC, Henríquez-Roldán C, TorresJardón R, Nuse B, Herritt L, et al. Pendedahan pencemaran udara jangka panjang dikaitkan dengan keradangan saraf, tindak balas imun yang berubah-ubah, gangguan pada penghalang darah-otak, pemendapan zarah ultrahalus, dan pengumpulan amiloid -42 dan -sinuklein pada kanak-kanak dan dewasa muda. Toxicol Pathol. 2008b;36:289–310. https://doi.org/10.1177/0192623307313011.
Calderón-Garcidueñas L, Villarreal-Calderon R, ValenciaSalazar G, Henríquez-Roldán C, Gutiérrez-Castrellón P,Coria-Jiménez R, et al. Keradangan sistemik, disfungsi endothelial dan pengaktifan pada kanak-kanak yang sihat secara klinikal terdedah kepada bahan pencemar udara. Inhal Toxicol. 2008c;20:499–506. https://doi.org/10.1080/08958370701864797.
For more information:1950477648nn@gmail.com
