Reaktif silang, IgG Semulajadi yang Mengenali L. Major Menggalakkan Internalisasi Parasit Oleh Sel Dendritik Dan Menggalakkan Imuniti Perlindungan

Abstrak

Mesej utama

• Menggunakan tikus yang diubah suai secara genetik yang berbeza, kami mendapati bahawa antibodi ini boleh menjadi IgG, bukan sahaja IgM.

Kata kunci

Leishmania major · Sel dendritik · Sel B ·IgG semulajadi

pengenalan

Jangkitan dengan Leishmania spp. mewakili beban utama di negara endemik. Manifestasi penyakit berkisar daripada leishmaniasis kulit terhad sendiri kepada penyakit merebak, berulang, mukokutan dan visceral. Leishmaniasis visceral yang tidak dirawat adalah ancaman teruk kepada kehidupan hos. Vaksin belum wujud lagi. Penyembuhan dan sepanjang hayatimunititerhadap patogen intraselular penting ini bergantung pada pembangunan sel Th1/Tc1 yang menghasilkan IFN, manakala kegigihan parasit dan perkembangan penyakit dikaitkan dengan penguasaan sel Th2, sel T pengawalseliaan dan/atau tindak balas Th17. Pembebasan IFN membawa kepada pengeluaran NO yang menghapuskan parasit.Imuniti pelindungdisebabkan oleh sel dendritik (DC) yang dijangkiti. Selepas inokulasi Leishmania major ke dalam kulit oleh lalat pasir, bentuk hidupan parasit promastigot ditelan oleh makrofaj pemastautin kulit (MΦ) dan neutrofil. Dalam MΦ, parasit berubah menjadi bentuk hidup amastigot tidak berbendera dan mereplikasi. Kemudian, amastigot yang dilepaskan diambil oleh sel perumah lain, seperti DC. DC yang dijangkiti memproses antigen parasit, dan berhijrah ke nodus limfa yang mengalir dan sel T utama. Pengeluaran IL-12, serta sitokin lain daripada DC yang dijangkiti, mengarahkan pendidikan Th1/Tc1 bagi sel T khusus parasit.

Manakala MΦ menggunakan reseptor pelengkap (CR)3 untuk pengambilan parasit, di DC, Fc RI/III bertanggungjawab untukparasitinternalisasi. Menariknya, pada awalnya, CR3-pengambilan parasit yang berkaitan membawa kepada pembungkaman MΦ yang dijangkiti, manakala dalam jangkitan yang telah ditetapkan, Fc Rmediated pengambilan amastigotes oleh MΦ mendorong pengeluaran IL-10 anti-radang yang menggalakkan pembangunan Th2/Treg dan kegigihan parasit. Pengambilan parasit Fc R-mediated dalam DC, sebaliknya, mendorong pengaktifan sel, penyebuan sel T CD4, dan juga pembentangan silang antigen. Oleh itu, pengambilan parasit pengantara antibodi oleh DC adalah penting untuk pembangunan perlindungan terhadap parasit. Oleh itu, penghasilan IgG anti-Leishmania adalah prasyarat untuk penyebuan (silang) sel Th1/Tc1 khusus Leishmania yang cekap. Selaras, dengan ketiadaan sel B, perkembangan penyakit lebih teruk dengan jumlah lesi yang lebih besar, beban parasit yang lebih tinggi, penyebuan sel T yang tertunda, dan pengeluaran IFNΓ yang berkurangan. Sebelum ini, kami menunjukkan bahawa IgG khusus Leishmania hadir dalam sera pada masa pengumpulan DC dalam lesi.

Ia masih menjadi persoalan terbuka bagaimana tindak balas sel B awal terhadap parasit itu sendiri berkembang tanpa kehadiran penyebuan sel B oleh DC yang dijangkiti. Antibodi semulajadi yang dikenali sebagai Leishmania spp. boleh memudahkan awalinternalisasi parasitoleh DC. Di samping itu, kerana membran parasit mengandungi fosfatidilserin yang serupa dengan badan apoptosis,reaktif silangantibodi mungkin memainkan peranan. Dalam kajian ini, kami menilai sama ada antibodi anti-fosfolipid dijana, contohnya, semasa kematian sel yang berlebihan atau IgG semulajadi yang mengiktiraf Leishmania yang terdapat dalam haiwan bukan imun menyumbang kepada pengambilan parasit DC untuk menggalakkan penyebuan sel B dan sel T. Kami mendapati bahawa antibodi anti-fosfolipid daripada murine atau serum manusia serta "IgG semulajadi" dalam serum tikus normal (NMS) mengikat parasit Leishmania, yang mencukupi untuk menggalakkanparasitinternalisasioleh DC dan menggalakkan hasil penyakit yang lebih baik dalam vivo.

Bahan dan kaedah

Haiwan

Tikus C57BL/6 enam hingga lapan minggu telah dibeli daripada Janvier. Tikus µMT yang kekurangan sel B telah disediakan dengan murah hati oleh Hansjörg Schild, Institut Imunologi, Pusat Perubatan Universiti Mainz. Tikus IgGi dan IgMi (kedua-duanya pada latar belakang C57BL/6) telah diterangkan sebelum ini. Semua haiwan ditempatkan di bawah keadaan bebas patogen (SPF) khusus di Pusat Penyelidikan Haiwan Translasi (TARC) Universiti Johannes Gutenberg, Mainz. Semua eksperimen telah dijalankan dengan lesen yang diluluskan daripada Jawatankuasa Penjagaan dan Penggunaan Haiwan Wilayah Rheinland-Pfalz.

Menurut kajian herba, telah menunjukkan bahawa cistanche adalah sejenis kulat yang telah digunakan dalam perubatan tradisional Cina selama berabad-abad. Ia diperbuat daripada batang kering dan tangkai kulat, yang tumbuh di kawasan tropika dan subtropika Asia. Ia biasa digunakan untukmeningkatkan imuniti, melegakan keletihan, dan merawat selsema dan jangkitan lain.

Penyelidikan telah menunjukkan bahawacistancheboleh meningkatkan pengeluaran antibodi, yang boleh membantu badan melawan penceroboh asing seperti virus dan bakteria. Ia didapati meningkatkan bilangan dan aktiviti sel T, sejenis sel darah putih yang bertanggungjawab untuk membantu badan mengenali dan melawan penceroboh berbahaya.

Di samping itu, kajian telah menunjukkan bahawa cistanche boleh mengurangkan keterukan selesema, selesema, dan jangkitan virus lain. Ia didapati mengurangkan jumlah masa yang diperlukan untuk tubuh pulih daripada jangkitan virus atau bakteria. cistanche juga boleh mengurangkan tempoh demam yang disebabkan oleh virus tertentu, serta mengurangkan risiko mendapat jangkitan sekunder.

Tambahan pula,cistanchediketahui mempunyai ciri anti-radang, yang boleh mengurangkan keradangan yang berkaitan dengan penyakit tertentu. Kajian juga menunjukkan bahawa dendrobium boleh membantu meningkatkan keberkesanan antibiotik tertentu.

Klik pada Cistanche Organik Dijual Berdekatan Saya

Untuk maklumat lanjut sila hubungi kami di:david.deng@wecistanche.com

Secara keseluruhan, penyelidikan mencadangkan bahawa cistanche boleh menjadi rawatan yang berguna untukbertambah baikimunitidan melawan pelbagai jangkitan. Ia boleh membantu meningkatkan pertahanan semula jadi badan, mengurangkan keterukan dan tempoh penyakit, malah mungkin mengurangkan risiko mendapat jangkitan sekunder.

Parasit dan jangkitan 

Amastigotes atau promastigot metasiklik L. major klon VI (MHOM/IL/Friedlin) telah disediakan seperti yang diterangkan sebelum ini. Amastigotes telah diasingkan daripada telinga yang dijangkiti BALB/c atau tikus µMT kekurangan sel B seperti yang diterangkan sebelum ini. Parasit terpencil telah diopsonisasi dengan 5 peratus NMS, IMS, atau anti-PL selama 10 minit pada 37 darjah dan dibasuh sebelum jangkitan in vitro atau in vivo.

Sera, pengayaan IgG, dan ujian pengikatan parasit

Serum tikus biasa (NMS) dihasilkan daripada tikus C57BL/6 yang naif, manakala serum imun (IS) diambil daripada tikus sembuh yang dijangkiti 2 × 10E5 metacyclic promastigot L. major untuk Lebih besar daripada atau sama. hingga 6 minggu. Sera antibodi antifosfolipid (PL) dihasilkan oleh imunisasi berulang dengan thymocytes apoptosis. Sebelum serum dituai, kejayaan imunisasi telah disahkan dengan menilai pengikatan IgG tertentu kepada sel apoptosis melalui sitometri aliran atau dalam ELISA khusus -glikoprotein. Kumpulan tikus C57BL/6 telah diimunisasi dengan 2-glikoprotein (2G) rekombinan dengan kehadiran adjuvant (FA) Freud; serum yang mengandungi anti- 2G telah dituai selepas 4 minggu. IgG Anti-Leishmania Lebih daripada atau sama dengan 5–6-minggu tikus BALB/c yang dijangkiti besar L., IgG khusus PL- atau b2G, telah disediakan daripada sera terkumpul menggunakan lajur protein G (Pierce Chemical Co.) mengikut protokol pengeluar. Sera disimpan pada-20 darjah sebelum penulenan IgG. IgG yang telah dimurnikan disimpan pada 4 darjah (0.8 mg/mL) dalam PBS sebelum digunakan.

Serum manusia normal (NHS) adalah daripada subjek kawalan sihat dan serum yang mengandungi antibodi anti-Leishmania diperoleh daripada pesakit leishmaniasis kulit (LM) dari Marocco. Serum daripada pesakit dengan sindrom antiphospholipid (PL) juga digunakan.

Parasit (promastigot atau amastigotes) telah diwarnakan untuk Ig yang berkaitan permukaan menggunakan antibodi sekunder khusus isotype yang reaktif dengan Ig tetikus: anti-IgM (Serotec), anti-IgG1 (A85-1), dan anti-IgG2a/b ( R2-40, semuanya daripada BD Biosciences). Selepas pewarnaan, parasit dibasuh dengan PBS / 2 peratus BSA, diperbaiki, dan dianalisis oleh sitometri aliran.

Rangsangan in vitro

DC yang diperolehi sumsum tulang telah dijana dalam media RPMI/5 peratus FCS ditambah dengan IL-4 (10 µg/mL) dan GM-CSF (10 µg/mL) selama 6 hari seperti yang diterangkan sebelum ini. Sel telah dituai pada hari ke-6 sebagai DC yang tidak matang. 2× 105 DC telah dikultur bersama dengan amastigotes opsonized daripada tikus BALB/c atau μMT yang dijangkiti atau dikultur dengan promastigot metacyclic opsonized (MOI 1:5) selama 18 jam. Selepas itu, sel dituai dan cytospins dihasilkan seperti yang diterangkan sebelum ini. Sel-sel bernoda DifQuick telah dianalisis untuk kehadiran parasit intrasel dan ekstraselular. Sekurang-kurangnya 200 sel telah dikira setiap sampel.

Jangkitan in vivo

Isipadu lesi diukur setiap minggu dalam tiga dimensi dan dilaporkan sebagai ellipsoid [(a/2×b/2×c/2)×4/3×π]. Parasit yang terdapat dalam tisu lesi telah dikira menggunakan ujian pencairan mengehadkan seperti yang diterangkan sebelum ini.

Untuk pengukuran pengeluaran sitokin khusus antigen, penyaliran sel LN tikus C57BL/6 yang dijangkiti telah dipulihkan dan penggantungan sel tunggal disediakan. Satu juta sel LN/200 μL RPMI 1640 (Biochrome) lengkap telah ditambahkan pada 96-plat telaga dengan kehadiran 25 ug/mL SLA. Supernatan dituai 48 jam selepas rangsangan dan diuji menggunakan ELISA khusus untuk IFNΓ (Sistem R&D), serta IL-4 dan IL-10 (BD).

DC manusia myeloid dijangkiti parasit opsonized

Myeloid human CD1c plus DC (hDC) telah diasingkan daripada darah periferi mengikut arahan pengeluar menggunakan sistem pengasingan sel magnetik dan kit pengasingan DC manusia BDCA-1 (Miltenyi, Jerman). 1.5 × 107 sel disalut dalam 2.5 mL RPMI 1640/2 peratus plasma autologous. Untuk memperkayakan ketulenan, sel telah dibasuh dengan PBS hangat dan akhirnya dikultur dengan X-VIVO 15/plasma (1 peratus ) ditambah dengan IL manusia rekombinan-4 (150 U/mL) dan GM-CSF (400 U/mL) . HDC yang tidak matang dituai pada hari ke-6. 2 × 105 hDC dikultur bersama dengan amastigot opsonized daripada tikus μMT yang dijangkiti atau dikultur dengan promastigot metacyclic opsonized (MOI 1:5) selama 18 jam. Selepas itu, sel dituai dan cytospins dihasilkan seperti yang diterangkan sebelum ini. Sel-sel bernoda DifQuick telah dianalisis untuk kehadiran parasit intrasel dan ekstraselular. Sekurang-kurangnya 200 sel telah dikira setiap sampel.

Analisis statistik

Analisis statistik dilakukan menggunakan perisian StatView dan ujian-t Student tidak berpasangan.

Keputusan

Serum yang mengandungi antibodi antiphospholipid mengikat kepada L. major

Memandangkan parasit boleh memasuki sel perumah melalui proses yang dipanggil "mimikri apoptosis" dan kerana L. bentuk hidupan utama mengekspresikan fosfolipid pada permukaannya, kami menghasilkan serum yang mengandungi antibodi antifosfolipid (PL) menggunakan protokol yang telah ditetapkan. Untuk tujuan ini, kumpulan tikus C57BL/6 telah dijangkiti L. major, apabila diimunisasi dengan thymocytes apoptosis dengan kehadiran adjuvant (FA) Freud. Memandangkan 2-glikoprotein ( 2G) ialah antigen utama dalam sindrom antiphospholipid (APS), kami juga mengimunkan tikus dengan 2G dengan kehadiran FA untuk mendapatkan serum yang mengandungi antibodi anti- 2G. Sebagai kawalan, serum tikus biasa (NMS) daripada tikus C57BL/6 yang tidak dijangkiti dan serum imun (IS) daripada tikus yang dijangkiti L. major telah digunakan.

Untuk menguji sama ada sera tikus yang berbeza daripada tikus naif atau yang diimunisasi mengandungi antibodi yang mengikat kepada L. major, kami mula-mula menilai antibodi yang mengikat antigen parasit oleh ELISA, menggunakan L. major promastigot freeze-thaw lysate (antigen Leishmania larut, SLA) sebagai substrat (Gamb. 1A, lajur hitam). Sebagai standard, kami menggunakan IgG yang diasingkan daripada sera tikus yang dijangkiti L. major. Menariknya, IS serta serum PL mengandungi tahap antibodi yang setanding yang mengikat kepada Leishmania lysate, iaitu 3-4 kali ganda lebih tinggi berbanding dengan pengikatan yang diperhatikan dengan NMS atau sera daripada tikus yang diimunisasi dengan adjuvant sahaja. Selain itu, serum yang mengandungi antibodi 2G juga terikat kepada SLA. Menggunakan ELISA khusus untuk 2G (lajur putih), kami mengenal pasti tahap tinggi 2G-IgG dalam serum, manakala tahap 2G IgG dalam semua sera lain berada di bawah had pengesanan.

Rajah. 1 Detection of L. major cross-reactive antibodies in serum of mice containing antiphospholipid antibodies. Serum was obtained from groups of C57BL/6 mice that were left untreated (normal mouse serum, NMS) or which were infected for>6 minggu dengan 2× 105 L. major (serum imun, IS). Kumpulan lain telah berulang kali diimunisasi dengan thymocytes apoptosis (anti-phospholipid Ab, a-PL) atau 2-glikoprotein (a- 2}G) rekombinan dengan kehadiran adjuvant Freuds (FA) yang tidak lengkap, FA digunakan sebagai kawalan. Serum telah diuji untuk kereaktifan dalam ELISA menggunakan L. major lysate sebagai substrat atau 2-glikoprotein. ELISA telah dibangunkan menggunakan IgG anti-murine. Data dinyatakan sebagai min (±SEM, n Lebih besar daripada atau sama dengan 1). B Metasiklik promastigot L. major diperoleh daripada kultur fasa pegun (n{{10}}). C Amastigotes telah disediakan daripada lesi tikus µMT yang kekurangan sel B (n=3). Persediaan Parasit B dan C telah diopsonisasi dengan sera yang berbeza (5 peratus , 10 min, 37 darjah ). Pengikatan antibodi dinilai oleh FACS dengan antibodi sekunder anti-tikus. Pengikatan Ig dikira tentang tahap asas parasit tidak teropson (*p Kurang daripada atau sama dengan 0.05,**p Kurang daripada atau sama dengan 0.005, dan ***p Kurang daripada atau sama dengan 0.002)

Seterusnya, kami mengeramkan promastigot metasiklik peringkat berjangkit L. major dengan kepekatan IgG berbeza yang diperkaya daripada sera IS, PL atau 2G. Kami memerhatikan pengikatan bergantung dos IgG terbitan IS dan 2G dengan maksimum pada 100 ng/mL (Rajah 1B). Pengikatan IgG terbitan PL kepada promastigot L. major tidak dikesan.

Di samping itu, kami mengeram L. amastigotes utama yang diasingkan daripada lesi tikus µMT kekurangan sel B dengan sera yang berbeza selama 10 minit. Parasit kemudiannya dibasuh secara meluas, dan selepas itu, antibodi terikat permukaan dikesan oleh sitometri aliran selepas pelabelan dengan PE-conjugated anti-IgG1, antiIgG2a/b, atau anti-IgM (Rajah 1C). Seperti yang dijangkakan, IS mengandungi IgM, IgG1 dan IgG2a/b khusus Leishmania. Kami juga mengesahkan kerja terdahulu, kerana kami mengesan IgM khusus Leishmania dalam kumpulan apa yang dipanggil "Ab semula jadi". Menariknya, kami juga mendapati IgG dan IgM dalam serum PL begitu kuatbertindak balas silangdengan permukaan L. amastigot major. Antibodi IgG yang anti- 2G tidak mengikat Leishmania, tetapi serum 2G mengandungi IgMtindak balas silangdengan permukaan amastigot.

Antibodi reaktif silang memediasi internalisasi parasit oleh DC

Kami seterusnya berhasrat untuk menilai sama ada antibodi IgG berbeza yang mampu mengikat pada permukaan L. amastigotes utama aktif secara fungsi. Oleh itu, kami menghasilkan DC menggunakan kultur sel sumsum tulang (BM) yang ditambah dengan GMCSF dan IL-4. BM-DC dituai sebagai sel tidak matang pada hari ke-6 dan disalut pada 2 × 105 sel / mL. Amastigotes parasit yang diperoleh daripada tapak kaki yang dijangkiti tikus BALB/c atau B sel-kekurangan sel B telah diopsonisasi dengan sera yang berbeza (5 vol peratus ), dibasuh secara meluas, dan kemudian ditambah kepada DC dalam nisbah parasit/sel 5:1. Selepas 18 jam, sel dituai, dibasuh, dan sitospin.

Parasitinternalisasitelah ditentukan pada slaid DifQuickstained pada 100 × (Rajah 2). Seperti yang diterangkan, pengambilan parasit yang diasingkan daripada tikus μMT telah terjejas dengan ketara. Pra-inkubasi dengan NMS sedikit meningkatkan pengambilan parasit, manakala inkubasi dengan IS membawa kepada "normalisasi" kadar jangkitan DC ke tahap yang diperhatikan dengan amastigotes yang berasal dari BALB/c. Daripada makluman, opsonisasi parasit dengan PL juga telah meningkatkan kadar jangkitan DC dengan ketara dan jelas sebanyak ~ 100 peratus . Selaras dengan tahap opsonisasi IgG yang lebih rendah bagi amastigotes dengan serum yang mengandungi b2G (bandingkan Rajah 1C), ini juga meningkatkan kadar jangkitan DC, tetapi pada tahap yang lebih rendah.

Rajah 2Opsonisasi L. major dengan antibodi reaktif silang membawa kepada peningkatan pengambilan parasit oleh DC. C57BL/6 BMDC yang tidak matang(2× 105) telah dikultur bersama dengan amastigotes daripada tikus µMT yang kekurangan sel B (1:3). Sebelum inkubasi bersama, amastigot telah diopsonisasi dengan serum tikus normal (NMS), serum imun (IS), serum yang mengandungi antibodi anti-fosfolipid yang diperoleh melalui imunisasi berulang dengan thymocytes apoptosis (aPL) atau serum yang mengandungi anti{11}} glikoprotein antibodi (2G). Selepas 18j, kadar jangkitan ditentukan pada cytospin melalui mikroskop cahaya (n=3, *p Kurang daripada atau sama dengan 0.05,**p Kurang daripada atau sama dengan 0.005, dan ***p Kurang daripada atau sama dengan 0.002 berbanding dengan kawalan tidak beropson)

Antibodi anti-fosfolipid reaktif silang meningkatkan hasil penyakit dalam leishmaniasis kulit

Dalam eksperimen seterusnya, kami ingin menilai sama ada opsonisasi parasit denganreaktif silangantibodi mengubah hasil penyakit dalam vivo. Untuk tujuan ini, promastigot metacyclic yang diasingkan dan diperkaya daripada kultur parasit telah diopsonisasi dengan sera yang berbeza seperti yang diterangkan di atas. Parasit yang diopsonisasi dengan NMS berfungsi sebagai kawalan negatif. Selepas membasuh parasit secara meluas, kumpulan lima tikus C57BL/6 telah dijangkiti secara intradermal dengan 103 L. major. Perkembangan lesi dipantau selama ~ 4 bulan. Selaras dengan penemuan terdahulu, parasit yang diopsonisasi dengan IS menyebabkan lesi telinga yang lebih kecil sejajar dengan peningkatan kekerapan kulit yang dijangkiti DC pada titik masa awal (Rajah 3). Yang menghairankan, parasit yang diopsonisasi dengan PL atau 2G juga menggalakkan hasil penyakit yang sama baiknya seperti yang ditentukan oleh 50 peratus mengurangkan volum lesi antara minggu 5 dan 8 selepas jangkitan.

Antibodi anti-fosfolipid reaktif silang meningkatkan hasil penyakit dalam leishmaniasis kulit

Dalam eksperimen seterusnya, kami ingin menilai sama ada opsonisasi parasit denganreaktif silangantibodi mengubah hasil penyakit dalam vivo. Untuk tujuan ini, promastigot metacyclic yang diasingkan dan diperkaya daripada kultur parasit telah diopsonisasi dengan sera yang berbeza seperti yang diterangkan di atas. Parasit yang diopsonisasi dengan NMS berfungsi sebagai kawalan negatif. Selepas membasuh parasit secara meluas, kumpulan lima tikus C57BL/6 telah dijangkiti secara intradermal dengan 103 L. major. Perkembangan lesi dipantau selama ~ 4 bulan. Selaras dengan penemuan terdahulu, parasit yang diopsonisasi dengan IS menyebabkan lesi telinga yang lebih kecil sejajar dengan peningkatan kekerapan kulit yang dijangkiti DC pada titik masa awal (Rajah 3). Yang menghairankan, parasit yang diopsonisasi dengan PL atau 2G juga menggalakkan hasil penyakit yang sama baiknya seperti yang ditentukan oleh 50 peratus mengurangkan volum lesi antara minggu 5 dan 8 selepas jangkitan.

Seterusnya, kami menggunakan µMT amastigotes yang diinkubasi dengan 100 µg IgG yang diperkaya daripada NMS, IS atau PL (Rajah 4). Sekali lagi, kami memerhatikan bahawa kedua-dua IgG daripada IS atau PL mengakibatkan penyakit yang lebih ringan dengan lesi yang lebih kecil, berbanding dengan parasit yang tidak diopsonisasi (Rajah 4A). Selaras, beban parasit tisu lesi seperti yang ditentukan pada minggu ke-6 selepas jangkitan mendedahkan (dengan ketara) beban parasit yang lebih kecil dalam jangkitan yang dimulakan dengan kehadiran antibodi pengikat parasit (Rajah 4B). Rangsangan semula khusus antigen untuk mengeringkan sel nodus limfa dengan SLA mendedahkan tahap IFN yang tidak berubah, manakala tahap IL-4 dan IL-10 yang lebih rendah ditemui pada tikus yang dijangkiti parasit IgG-opsonized (Rajah 4C) . Ini adalah selaras dengan penurunan saiz lesi kerana kerja terdahulu menunjukkan bahawa penghapusan parasit dalam tikus bergantung pada pengaktifan MΦ yang dijangkiti oleh IFN lesi, yang dilawan oleh IL-4 dan — sangat penting — IL-10 . Oleh itu, kesan IL-10 pada MΦ yang dijangkiti membawa kepada kegigihan parasit. Oleh itu, nisbah antara IFN pada satu tangan dan sitokin yang berkaitan dengan Th2/Treg seperti IL-4 dan IL-10 nampaknya paling relevan untuk hasil penyakit.

Menariknya, bagaimanapun, dalam tetapan ini, volum lesi yang lebih kecil juga diperhatikan, apabila IgG daripada NMS digunakan untuk opsonisasi yang menunjukkan kehadiranreaktif silangantibodi semulajadi dalam serum tikus naif juga.

Kedua-dua antibodi Leishmania-spesifik dan reaktif silang boleh menggantikan kekurangan genetik IgG

Untuk menganalisis dengan lebih baik sumbangan spesifik subtipe imunoglobulin dalam tindak balas kepada Leishmania, kami menggunakan tikus IgMi dan IgG1i yang telah kami hasilkan sebelum ini. Tikus IgMi ialah tikus di mana semua sel B mengekspresikan IgM, tetapi tidak boleh menukar kelas atau merembeskan antibodi. Dalam tikus IgG1i, semua sel B berkembang menggunakan IgG1 sebagai reseptor sel B mereka, tetapi sel-sel ini juga tidak boleh menukar kelas tetapi dapat merembeskan antibodi IgG1. Kami menjangkiti tikus IgMi dan IgG1i pada latar belakang genetik C57BL/6 dengan 103 L. major. Kami mendapati bahawa kehadiran IgG1 dalam sera adalah mencukupi untuk tikus untuk melancarkan tindak balas penuh kepada parasit, sama dengan haiwan jenis liar (Rajah 5A). Sebaliknya, ketiadaan antibodi yang dirembeskan seperti yang dilihat pada tikus IgMi adalah mencukupi untuk melambatkan pemulihan tikus (Rajah 5A).

Seterusnya, kami membentuk semula tikus IgMi atau kawalan jenis liar dengan NMS atau IS dan kemudian menjangkitinya dengan L. promastigot major. Seperti yang dijangkakan, dalam kedua-dua strain tetikus, penyusunan semula IS menyebabkan lesi yang lebih kecil dalam vivo yang mengesahkan bahawa pengambilan parasit dipercepatkan IgG oleh DC menggalakkan anti-Leishmania yang lebih baik.imuniti(Gamb. 5B). Akhirnya, kami menilai hasil penyakit selepas penggunaan parasit opsonized. Sebelum jangkitan pada tikus IgMi, parasit telah diopsonisasi dengan IgG yang diperkaya daripada serum NMS, IS atau PL (Rajah 5C). Selaras dengan eksperimen yang ditunjukkan dalam Rajah 5B, parasit IS-opsonized memudahkan pertahanan parasit dipertingkatkan. Sekali lagi, antibodi antifosfolipid dapat menggantikan IgG khusus Leishmania daripada IS kerana kedua-dua antibodi IgG terikat kepada L. promastigot utama sebelum jangkitan menggalakkan hasil penyakit tikus IgMi yang lebih baik. Parasit IS- dan PL-opsonized menyebabkan volum lesi yang jauh lebih kecil dan penyembuhan lebih awal berbanding dengan parasit tidak beropson.

Yang penting, pentadbiran NMS kepada tikus IgMi "menormalkan" fenotip mereka kepada hasil penyakit yang diperhatikan dalam tikus C57BL/6 (Rajah 5B). Penemuan ini adalah selaras dengan data kami yang ditunjukkan di atas menunjukkan bahawa NMS juga mengandungi areaktif silangisotype IgG antibodi yang mampu mengikat parasit dengan akibat berfungsi seterusnya secara in vitro dan in vivo. Pengesahan lanjut datang daripada tikus IgMi yang dijangkiti parasit bersalut NMS, yang juga mampu mengawal jangkitan dengan lebih baik (Rajah 5C).

Rajah. 4Parasit opsonisasi antibodi mendorong imuniti yang cekap dalam µMT yang kekurangan sel B. Parasit telah diopsonisasi dengan serum tikus normal (NMS), serum imun (IS), serum yang mengandungi antibodi antifosfolipid (a-PL), atau — tikus C57BL/6 sahaja — serum yang mengandungi antibodi anti- 2 glikoprotein (2G) dalam kehadiran pembantu Freud (FA). Kumpulan tikus yang Lebih besar daripada atau sama dengan 5 µMT telah dijangkiti dengan 103 promastigot metacyclic opsonized L. major. Perkembangan lesi dinilai setiap minggu. B Pada minggu ke-6, beban parasit lesi tikus µMT yang dijangkiti ditentukan dengan mengehadkan ujian pencairan. Nombor parasit individu ditunjukkan; bar express bermakna. C Profil sitokin penyaliran sel µMT LN ditentukan oleh rangsangan semula dengan antigen Leishmania (SLA) larut. IFNΓ, IL{{10}} dan IL-10 keluaran ke dalam 48-h supernatan dinilai oleh ELISA (min±SEM, n{13}} tikus/kumpulan daripada bebas 3 percubaan, *p Kurang daripada atau sama dengan 0.05, **p Kurang daripada atau sama dengan 0.005 dan ***p Kurang daripada atau sama dengan 0.002 berbanding dengan tikus yang dijangkiti parasit yang tidak diopsoni)

Serum manusia mengandungi antibodi reaktif silang parasit yang aktif berfungsi

Untuk menguji kaitan penemuan kami untuk manusia, promastigot atau amastigot yang diasingkan daripada tikus µMT kekurangan sel B telah diopsonisasi dengan serum manusia biasa (NHS), serum daripada pesakit yang dijangkiti L. major (LM), atau serum daripada pesakit APS (APS). ). IgG terikat permukaan pada parasit ditentukan menggunakan sitometri aliran. Menariknya, serum LM terikat lemah pada permukaan promastigot, tetapi kuat pada amastigotes. Menariknya, serum APS mengandungi tahap IgG yang samareaktif silangdengan permukaan parasit (Rajah 6A).

IgG seterusnya diperkaya daripada sera LM menggunakan lajur protein A (Rajah 6B). Ini dan kepekatan imunoglobulin intravena (IVIG) yang berbeza yang digunakan untuk rawatan pelbagai gangguan (imun) pesakit seterusnya digunakan untuk opsonisasi parasit sebelum sitometri aliran. Leishmania IgG terikat dengan ketara kepada promastigot dan amastigotes L. major. Menariknya, IVIG yang tersedia secara komersial mengandungi IgG itubertindak balas silangkedua-duanya dengan promastigot dan juga persediaan parasit amastigot.

Akhirnya, CD1c ditambah DC manusia myeloid primer daripada kot buffy telah diinkubasi dengan μMT amastigotes L. major diinkubasi dengan serum LM atau serum daripada pesakit APS atau IVIG (MOI 3; Rajah 7). Mengesahkan data murine kami menggunakan sel manusia, kami memerhatikan bahawa kehadiran IgG (reaktif silangatau khusus Leishmania) pada permukaan Leishmania adalah mencukupi untuk menggalakkan peningkatanparasitinternalisasioleh DC. Serum APS meningkatkan peratusan DC yang dijangkiti hampir 100 peratus , manakala serum LM dan IVIG meningkatkan pengambilan parasit sebanyak 30 peratus berbanding parasit yang tidak diopsonisasi. Menariknya, serum NMS juga mengandungi penggalak IgG reaktif parasitparasitinternalisasi.

Rajah. 5 Tikus C57BL/6, IgMi dan IgGi dibentuk semula dengan sera yang berbeza atau dijangkiti dengan IgG opsonized L. major yang disucikan yang berbeza mempamerkan hasil penyakit yang lebih baik. Sekumpulan tikus yang lebih besar daripada atau sama dengan 5 C57BL/6, C57BL/6 IgMi atau IgGi telah dijangkiti dengan inokula fisiologi L. major dos rendah (103 promastigot metacyclic). B Seminggu sebelum jangkitan, tikus C57BL/6 dan B6 IgMi telah dibentuk semula ip dua kali dengan 100 µL sama ada serum tikus normal (NMS) atau serum imun (IS). C Sebelum jangkitan pada tikus IgMi, parasit telah diopsonisasi dengan IgG yang diperkaya daripada sera dengan mengikat pada lajur protein A [serum tikus normal (NMS), serum imun (IS), atau serum yang mengandungi antibodi anti-fosfolipid (a-PL)]. Perkembangan Lesi A–C dinilai setiap minggu (min±SEM, n=10 tikus/kumpulan daripada 2 eksperimen bebas, *p Kurang daripada atau sama dengan 0.05, **p Kurang daripada atau sama dengan 0.005 dan *** p Kurang daripada atau sama dengan 0.002 berbanding dengan C57BL/6 [A], C57BL/6 atau IgMi [B], atau tiada [C])

Rajah. 6Antibodi antifosfolipid dalam sera manusia bertindak balas silang dengan molekul permukaan utama L.. Promastigot metasiklik daripada kultur fasa pegun atau amastigot lesi L. major yang diasingkan daripada tikus µMT telah diopson dengan pelbagai jenis sera manusia (5 peratus ) atau IgG yang telah disucikan. Sera manusia normal (NHS) diperoleh daripada subjek kawalan sihat. Sera daripada pesakit dengan leishmaniasis kulit yang terbukti (LM, diperoleh di Marocco, n=4) dan daripada pesakit dengan sindrom antiphospholipid (PL, n=3) turut digunakan. B IgG diperkaya daripada sera LM menggunakan lajur protein A (n=3). Kepekatan imunoglobulin intravena yang berbeza (IVIG, n=2) telah digunakan (µg/mL). Parasit A ​​dan B dianalisis untuk pengikatan permukaan jumlah Ig manusia menggunakan sitometri aliran. Pengikatan Ig telah dikira berhubung dengan tahap asas parasit yang tidak diopsonkan (min±SEM, *p Kurang daripada atau sama dengan 0.05, **p Kurang daripada atau sama dengan {{10 }}.005, dan ***p Kurang daripada atau sama dengan 0.002)

Perbincangan

Penyembuhan daripada leishmaniasis kulit memerlukan penyebuan sel T yang cekap dan pelepasan IFN, yang kedua-duanya bergantung pada DC yang dijangkiti untuk membentangkan antigen kepada sel T naif. Tidak seperti CR3-fagositosis bergantung oleh MΦ, kami telah menunjukkannyaparasitinternalisasioleh DC berlaku melalui Fc RI dan Fc RIII, yang boleh menggantikan satu sama lain. Oleh itu, tikus kekurangan Fc -, Fc RI/ Fc RIII dan tikus µMT kekurangan sel B (semua pada latar belakang C57BL/6) mengalami lesi yang lebih besar dan kelewatan penyembuhan, jika dibandingkan dengan tikus jenis liar, disebabkan oleh gangguan DC- penyebuan sel T bergantung. Kajian semasa kami mengesahkan pemerhatian terdahulu ini, tetapi sebagai tambahan, data kami menggunakan tikus IgMi dan IgGi juga mencadangkan bahawa antibodi yang dirembeskan, dan bukan kehadiran sel B semata-mata, adalah penting untuk meningkatkan tindak balas yang berkesan terhadap parasit. Oleh itu, sama dengan tikus kekurangan sel B, tikus IgMi dengan sel B yang tidak mampu menghasilkan IgG menunjukkan saiz lesi yang lebih besar berbanding dengan tikus IgGi atau tikus jenis liar.

Oleh kerana kedua-dua amastigot NMS dan IS-opsonized telah diambil sehingga tahap yang sama dan promastigot NMS-opsonized tidak difagositosis oleh DC (dengan pengikatan IgM yang cekap ke permukaannya), kami sebelum ini membuat kesimpulan bahawa IgM tidak diperlukan untuk pengambilan parasit. Dalam kajian ini, kami dapat mengesahkan penemuan ini dengan menggunakan sera tikus biasa pada tikus yang sama ada kekurangan sel B sama sekali atau hanya merembeskan antibodi. Selanjutnya, kami dapat menunjukkan bahawa IgG1-yang mengandungi sera dapat meningkatkan kemasukan amastigot ke DC manusia dan tetikus.

Ia masih tidak dapat diselesaikan bagaimana tindak balas sel B awal berkembang tanpa kehadiran DC yang dijangkiti. Satu kemungkinan adalah bahawa dalam kumpulan IgG "semula jadi",reaktif silangantibodi mungkin dapat mengenali parasit dan berfungsi sebagai pengganti antibodi khusus Leishmania yang berkembang kemudiannya (meningkat antara minggu ke-4 dan minggu ke-6 selepas jangkitan). Selain antibodi khusus antigen, antibodi semula jadi yang dipanggil dihasilkan oleh sel B-1 dalam kedua-dua tikus dan manusia selepas dilahirkan. Sesetengahnya mempunyai keupayaan untuk mengenali antigen diri; untuk masa yang lama, dipercayai mereka tidak mempunyai kekhususan untuk antigen asing. Kemudian, data memberikan bukti untuk IgM semulajadi yang mengiktiraf pelbagai antigen mikrob dan menyumbang kepada penghapusan patogen. Walau bagaimanapun, baru-baru ini, beberapa kajian mendedahkan bahawa IgG semulajadi memainkan peranan dalambawaan imunitijuga. Ia ditunjukkan untuk berinteraksi dengan lektin yang berkaitan dengan patogen (cth, MBL), dan membentuk kompleks imun untuk membersihkan patogen. IgG semula jadi terikat patogen juga dijangka berinteraksi dengan PRR lain, seperti C1q, untuk mengaktifkan laluan pelengkap klasik. Telah ditunjukkan bahawa IgG semulajadi secara khusus bekerjasama dengan lektin yang berkaitan dengan patogen untuk menimbulkan tindakan antimikrob yang berkesan terhadap jangkitan Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus aureus oportunistik.

Semasa kematian sel apoptosis, pendedahan fosfatidilserin (PS) pada badan apoptosis diperhatikan. Pengecaman hos PS pada permukaan sel yang mati atau mati melalui antibodi adalah langkah penting dalam pembersihannya. Dalam proses yang dipanggil "peniruan apoptosis," parasit Leishmania diketahui turut mendedahkan PS pada permukaannya sendiri yang berfungsi sebagai isyarat "makan-saya" untuk sel fagositik, sama seperti yang dilihat oleh sel apoptosis. Tambahan pula, beberapa promastigot peringkat berjangkit mati (tanpa penglibatan caspases) dan mendedahkan PS sendiri. Bentuk hidup amastigot intraselular obligat, bagaimanapun, semuanya mendedahkan PS pada permukaannya membolehkan mereka memasuki sel perumah dengan cekap. Kami kini menilai sama ada antibodi PL yang disebabkan secara buatan mampu mengenali parasit Leishmania dan sama ada ini berfungsi secara aktif untuk memudahkan kemasukan parasit ke dalam sel hos yang berkaitan. Kami memerhatikan bahawa antibodi anti-fosfolipid murine dan manusia mengikat bentuk kehidupan Leishmania. Menggunakan pendekatan yang berbeza, kami mengenal pastireaktif silangantibodi dalam serum PL yang kelihatan lebih disukai mengikat fosfolipid permukaan L. major. Menariknya, walaupun parasit promastigot juga mengekspresikan fosfolipid ini seperti yang ditunjukkan menggunakan antigen parasit larut daripada bentuk hidupan parasit ini dalam ELISA, fosfolipid permukaan kelihatan lebih kuat terdedah pada amastigot. Di samping itu, kami menunjukkan bahawa opsonisasi IgG ini mencukupi untuk menggalakkan pengambilan parasit oleh DC. Yang penting, dalam vivo, parasit PL-opsonized mendorong hasil penyakit yang lebih baik dengan jumlah lesi yang lebih kecil dan resolusi lesi yang lebih awal. Oleh itu, selaras dengan pemerhatian terdahulu daripada kumpulan kami, disebabkan oleh jangkitan DC yang dipertingkatkan dengan kehadiran(reaktif silang)IgG pada parasit, induksi keutamaan sel Th1 / Tc1 telah diinduksi dikaitkan dengan penurunan bilangan sel Th2 dan Treg, dan dengan itu hasil penyakit yang lebih baik.

Rajah 7DC myeloid primer daripada darah manusia lebih suka menginternalisasi parasit denganreaktif silangIgG antifosfolipid terikat pada permukaannya. CD1a plus myeloid manusia DC telah diasingkan daripada lapisan buffy menggunakan manik MACS dan disalut pada 2× 105 sel/mL. Amastigot yang diasingkan daripada tikus µMT diinkubasi dengan 5 peratus serum atau 10 µg/mL IVIG sebelum bersamaan dengan DC (1:3). Selepas 18j, kadar jangkitan ditentukan pada cytospin melalui mikroskop cahaya (n=3, *p Kurang daripada atau sama dengan 0.05 dan ***p Kurang daripada atau sama dengan 0.002 berbanding dengan kawalan tidak beropson)

Menariknya, kami mendapati bahawa parasit opsonized dengan NMS menggalakkan hasil penyakit yang lebih baik berbanding parasit unopsonized menunjukkan kehadiran IgG semulajadi dalam NMS yang dapat mengenali Leishmania. Ini paling baik dilihat dalam IgMi (tanpa sel B yang mampu menghasilkan sebarang IgG) yang digantikan dengan NMS. Di sini, saiz lesi tikus IgMi yang jelas lebih besar telah dikurangkan kepada tikus C57BL/6 jenis liar (Rajah 5). Walau bagaimanapun, kehadiran semula jadi, Leishmaniareaktif silangIgG juga diperhatikan dalam tikus jenis liar yang dijangkiti parasit NMS-opsonized berbanding parasit unopsonized. Kekhususan IgG semulajadi ini dalam murine dan serum manusia tidak jelas sehingga kini. Adalah menarik untuk membuat spekulasi bahawa ini juga adalah antibodi yang mengiktiraf PS pada permukaan parasit kerana mereka lebih suka mengikat amastigot dengan pendedahan PS yang diketahui lebih tinggi berbanding dengan promastigot juga.

Kami mendapati bahawa serum subjek kawalan manusia yang sihat (dari kawasan di mana leishmaniasis hanya dilaporkan sebagai penyakit perjalanan dan tiada sejarah bekas jangkitan) juga mengandungi IgG yang mampu mengikat L. amastigotes utama dan menggalakkan pengambilan parasit yang dipertingkatkan oleh DC. Adalah penting untuk ambil perhatian bahawa IVIG yang digunakan untuk kajian kami disediakan di Jerman (bukan endemik untuk leishmaniasis). Menariknya, IgG manusia yang diperkaya daripada IVIG daripada individu Leishmania-negatif dengan itu mengandungi IgG yang mampu mengikat kedua-dua promastigot dan (mungkin disebabkan pendedahan PS yang lebih tinggi) L. amastigotes utama. Selaras, serum pesakit APS dengan tahap antibodi antifosfolipid yang tinggi mengandungi IgG yang lebih disukai terikat kepada amastigot, lebih rendah daripada promastigot. Kedua-dua IgG daripada sera APS dan juga IgG daripada IVIG menggalakkan pengambilan parasit yang dipertingkatkan oleh DC manusia primer ke tahap yang setanding (atau lebih baik dalam kes sera APS yang mengandungi PL) kepada IgG yang diperolehi serum imun daripada pesakit leishmaniasis.

Ringkasnya, data kami menunjukkan bahawa tetikus biasa serta sera manusia, walaupun diambil daripada individu yang tidak pernah terdedah kepada Leishmania, mengandungi antibodi IgG yang mampu mengikat parasit ini, memudahkan penelanannya oleh DC, dan meningkatkan tindak balas imun pelindung tuan rumah. Walaupun antigen Leishmania yang dikenal pasti tidak jelas sepenuhnya, beberapa kereaktifan mungkin diarahkan terhadap fosfolipid yang lebih banyak pada amastigot, berbanding dengan permukaan promastigot. Penemuan kami mungkin membuka jalan untuk mereka bentuk terapi yang lebih baik untuk parasit ini dan juga boleh berfungsi sebagai langkah berjaga-jaga lini pertama untuk individu yang pergi ke kawasan yang dijangkiti Leishmania.

Ucapan terima kasih

Penulis mengucapkan terima kasih yang tulus kepada Mark C. Udey dan Philipp von Landenberg untuk perbincangan yang membantu dan untuk menyediakan sampel pesakit.

Sumbangan pengarang 

FD, SLK, dan ST melakukan eksperimen yang diterangkan dalam manuskrip ini. ST, AW dan EvS memperoleh pembiayaan untuk projek dan menyelia kerja. AW dan EvS menulis manuskrip.

Pembiayaan

Pembiayaan Open Access didayakan dan dianjurkan oleh Projekt DEAL. Kajian itu disokong oleh dana daripada DFG (SFB 490 kepada EvS dan AW dan SFB 1292 kepada EvS, AW, dan ST) dan Pusat Perubatan Molekul (CMMC) Cologne kepada EvS.

Ketersediaan data dan bahan 

Tidak berkaitan.

Pengisytiharan

Kelulusan etika dan persetujuan untuk mengambil bahagian

Semua eksperimen dengan tikus dilakukan mengikut panduan negeri Rhineland Pfalz.

Persetujuan untuk penerbitan

Semua pengarang bersetuju untuk diterbitkan.

Kepentingan yang bersaing

Pengarang mengisytiharkan tiada kepentingan bersaing.

Akses Terbuka Artikel ini dilesenkan di bawah Atribusi Creative Commons 4.0 Lesen Antarabangsa, yang membenarkan penggunaan, perkongsian, penyesuaian, pengedaran dan pengeluaran semula dalam sebarang medium atau format, selagi anda memberikan kredit yang sewajarnya kepada pengarang asal (s) dan sumber, berikan pautan ke lesen Creative Commons, dan nyatakan jika perubahan telah dibuat. Imej atau bahan pihak ketiga lain dalam artikel ini disertakan dalam lesen Creative Commons artikel itu melainkan dinyatakan sebaliknya dalam garis kredit kepada bahan tersebut. Jika bahan tidak disertakan dalam lesen Creative Commons artikel dan penggunaan yang anda maksudkan tidak dibenarkan oleh peraturan berkanun atau melebihi penggunaan yang dibenarkan, anda perlu mendapatkan kebenaran terus daripada pemegang hak cipta.

Rujukan

1.Burza S, Croft SL, Boelaert M (2018) Leishmaniasis Lancet 392:951–970.

2. von Stebut E, Tenzer S (2018) Leishmaniasis kulit: fungsi berbeza sel dendritik dan makrofaj dalam interaksi sistem imun perumah dengan Leishmania major. Int J Med Microbiol 308:206–214.

3. Sacks D, Noben-Trauth N (2002) Imunologi kerentanan dan rintangan kepada Leishmania utama dalam tikus. Nat Rev Immunol 2:845–858.

4. de Freitas ESR, von Stebut E (2021) Membongkar peranan pusat pemeriksaan imun dalam leishmaniasis. Immunol Depan 12:620144.

5. Schonlau F, Scharfetter-Kochanek K, Grabbe S, Pietz B, Sorg C, Sunderkotter C (2000) Dalam kekurangan leishmaniasis eksperimen CD18 mengakibatkan penyebaran parasit yang dikaitkan dengan fungsi makrofaj yang diubah dan tindak balas sel Th1 yang tidak lengkap.Eur J Immunol 30: 2729–2740.

6. Woelbing F, Kostka SL, Moelle K, Belkaid Y, Sunderkoetter C, Verbeek S, Waisman A, Nigg AP, Knop J, Udey MC, et al (2006) Pengambilan Leishmania major oleh sel dendritik dimediasi oleh reseptor Fcgamma dan memudahkan pemerolehan imuniti pelindung. J Exp Med 203:177–188

7. Nagele EP, Han M, Acharya NK, DeMarshall C, Kosciuk MC, Nagele RG (2013) Autoantibodi IgG semulajadi banyak dan terdapat di mana-mana dalam sera manusia dan bilangannya dipengaruhi oleh jantina umur, dan penyakit. PLoS ONE 8:e60726.

8. Lutz HU, Binder CJ, Kaveri S (2009) Autoantibodi semulajadi dalam homeostasis dan penyakit. Trend Immunol 30:43–51.

9. Wanderley JL, Barcinski MA (2010) Apoptosis dan mimikri apoptosis: sambungan Leishmania. Sel Mol Life Sci 67:1653–1659.

10. Waisman A, Croxford AL, Demircik F (2008) Alat baru untuk mengkaji peranan sel B dalam jangkitan sitomegalovirus. Med Microbiol Immunol 197:145–149

11. Von Stebut E, Ehrchen JM, Belkaid Y, Kostka SL, Molle K, Knop J, Sunderkotter C, Udey MC (2003) Interleukin 1alpha menggalakkan pembezaan Th1 dan menghalang perkembangan penyakit dalam tikus BALB/c yang mudah terdedah kepada Leishmania. J Exp Med 198:191–199

12. Levine JS, Subang R, Nasr SH, Fournier S, Lajoie G, Wither J, Rauch J (2006) Imunisasi dengan protein pengikat sel apoptosis mengimbas semula nefritis dan kemunculan autoantibodi berurutan bagi sistemik lupus erythematosus. J Immunol 177:6504–6516.

13. Wanderley JLM, DaMatta RA, Barcinski MA (2020) Mimikri apoptosis sebagai strategi untuk penubuhan jangkitan parasit: fosfatidilserin yang berasal dari parasit dan hos sebagai molekul utama. Isyarat Komuniti Sel 18:10.

14.McDonnell T, Wincup C, Buchholz I, Pericleous C, Giles I, Ripoll V, Cohen H, Delcea M, Rahman A (2020) Peranan beta-2-glikoprotein I dalam kesihatan dan struktur yang mengaitkan penyakit dengan fungsi : lebih daripada APS. Darah Wahyu 39:100610.

15. Dominguez M, Torano A (1999) Immune adherence-mediated opsonophagocytosis: mekanisme jangkitan Leishmania. J Exp Med 189:25–35.

16. Belkaid Y, Hofmann KF, Mendez S, Kamhawi S, Udey MC, Wynn TA, Sacks DL (2001) Peranan interleukin (IL)-10 dalam kegigihan Leishmania major dalam kulit selepas penyembuhan dan potensi terapeutik antibodi reseptor anti-IL-10 untuk penawar steril. J Exp Med 194:1497–1506.

17. Waisman A, Kraus M, Seagal J, Ghosh S, Melamed D, Song J, Sasaki Y, Classen S, Lutz C, Brombacher F et al (2007) IgG1 B isyarat reseptor sel dihalang oleh CD22 dan menggalakkan pembangunan Sel B yang kemandiriannya kurang bergantung kepada Ig{alpha}/{beta}. J Exp Med 204:747–758

18. Panda S, Ding JL (2015) Antibodi semulajadi merapatkan imuniti semula jadi dan adaptif. J Immunol 194:13–20.

19. Puga I, Cerutti A (2013) Perlindungan oleh IgG semulajadi: perkongsian manis dengan lektin larut berjaya! EMBO J 32:2897–2899.

20. Duncan AR, Winter G (1988) Tapak pengikat untuk C1q pada IgG. Alam 332:738–740.

21. Panda S, Zhang J, Tan NS, Ho B, Ding JL (2013) Antibodi IgG semulajadi memberikan perlindungan semula jadi terhadap bakteria kolon-opsonized. EMBO J 32:2905–2919.

22. El-Hani C, Borges V, Wanderley JL, Barcinski M (2012) Apoptosis dan mimikri apoptosis dalam Leishmania: perspektif evolusi. Sel Hadapan Jangkitan Mikrobiol 2:96.

Untuk maklumat lanjut sila hubungi kami di:david.deng@wecistanche.com tel:0013632399501