Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides Menginduksi Apoptosis dalam H22 Sel Karsinoma Hepatoselular Melalui Kedua-dua Laluan Isyarat Ekstrinsik Dan Intrinsik

Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com

Pengfei Yuan, Jinyu Li, Adila Aipire , Yi Yang , Lijie Xia , Xinhui Wang , Yijie Li dan Jinyao Li

Abstrak

latar belakang:Cistanche tubulosa(Schenk) R. Wight ialah ubat tradisional Cina yang memparasit akar tumbuhan Tamarix dan telah digunakan untuk merawat mati pucuk lelaki, kemandulan, lemah badan, dan sebagai tonik. Walau bagaimanapun, kesan antitumornya terhadap karsinoma hepatoselular masih sukar difahami. Di sini, kami menyiasat kesan antitumor bagiC. tubulosa phenylethanoid glycosides(CTPG) pada sel karsinoma hepatoselular H22 baik secara in vitro dan in vivo serta mekanismenya. Kaedah: Morfologi, daya maju, apoptosis, kitaran sel, dan potensi membran mitokondria (Δψm) sel H22 dianalisis dengan mikroskop terbalik, ujian MTT, dan sitometri aliran, masing-masing. Ekspresi dan pengaktifan protein dalam laluan apoptosis dikesan oleh Western blot. Kesan antitumor in vivo dinilai dalam model tetikus tumor yang ditubuhkan menggunakan tikus Kunming jantan. Keputusan: Rawatan CTPG telah menyekat pertumbuhan sel H22 dengan ketara dalam cara yang bergantung kepada dos dan masa, yang dikaitkan dengan peningkatan apoptosis dan penangkapan kitaran sel pada fasa G0/G1 dan G2/M. Selain itu, pemeluwapan kromosom diperhatikan dalam sel H22 yang dirawat CTPG. Rawatan CTPG meningkatkan nisbah Bax/ Bcl{10}} dengan ketara, mengurangkan Δψm dan mempertingkatkan pembebasan cytochrome c. Tahap caspase terbelah-8 dan caspase-9 dalam kedua-dua laluan isyarat ekstrinsik dan intrinsik telah meningkat dengan ketara sehingga caspase diaktifkan secara berurutan-7 dan -3 untuk membelah PARP. Akhirnya, CTPG (Cistanchetubulosaglikosida fenilethanoid) menghalang pertumbuhan sel H22 pada tikus dan meningkatkan kadar survival tikus tumor. Kesimpulan: Keputusan ini mencadangkan bahawa CTPG menindas pertumbuhan sel H22 melalui kedua-dua laluan apoptosis ekstrinsik dan intrinsik.

Latar belakang

Kanser hati menduduki tempat keenam untuk kejadian kanser dan keempat untuk kematian akibat kanser di seluruh dunia. Selain itu, ia menduduki tempat keempat untuk kejadian kanser dan pertama untuk kematian kanser di negara yang mempunyai indeks sosiodemografi yang rendah [1]. Di China, kanser hati adalah punca ketiga kematian berkaitan kanser pada tahun 2015 [2]. Lebih daripada 90 peratus daripada kanser hati primer adalah karsinoma hepatoselular (HCC) di dunia [3]. Pada masa ini, reseksi hepatik adalah pilihan utama untuk terapi HCC. Walau bagaimanapun, kurang daripada 30 peratus pesakit dengan HCC memenuhi kriteria reseksi hepatik kuratif, dan kadar kelangsungan hidup keseluruhan 5-tahun masih serendah 35-50 peratus disebabkan oleh kadar berulang yang tinggi [4, 5 ]. Ketersediaan pilihan rawatan untuk pesakit dengan HCC pertengahan hingga lanjutan adalah sangat terhad. Sorafenib, ubat sasaran molekul, telah diluluskan oleh FDA sebagai rawatan barisan pertama untuk HCC lanjutan. Walau bagaimanapun, sorafenib hanya memanjangkan kira-kira 3 bulan kelangsungan hidup dan kadar tindak balas adalah kurang daripada 4 peratus [6, 7]. Adalah penting untuk membangunkan ubat atau strategi baharu terhadap HCC. Perubatan tradisional Cina (TCM) sahaja atau digabungkan dengan strategi lain telah digunakan untuk merawat HCC dan menunjukkan faedah klinikal termasuk masa kelangsungan hidup yang berpanjangan, kualiti hidup yang lebih baik, mengurangkan tindak balas buruk, dan sebagainya [8, 9].Cistanche, sejenis TCM, mempunyai pelbagai fungsi biologi, sepertianti-pengoksidaan, anti-keradangan, anti-penuaan,dan perlindungan saraf [10, 11]. Phenylethanoid glycosides telah dianggap sebagai komponen aktif utamaCistanche, yang mempunyai pelbagai aktiviti termasuk anti-pengoksidaan, anti-keradangan, hepatoprotection, dan neuroprotection [12-15]. Kumpulan kami telah melaporkannyaGlikosida fenilethanoid cistanche tubulosa(CTPG) boleh mendorong apoptosis dalam sel melanoma B16-F10 dan menghalang pertumbuhan tumor pada tikus [16]. Dalam kajian ini, kami mengukur kesan antitumor CTPG pada sel HCC H22 kedua-dua in vitro dan in vivo dan menyiasat mekanismenya. Kami mendapati bahawa CTPG mendorong apoptosis dalam sel H22 melalui kedua-dua laluan isyarat ekstrinsik dan intrinsik dan menindas pertumbuhan tumor H22 pada tikus.

Kaedah

Talian sel

Sel karsinoma hepatoselular H22 tikus diperolehi dari Makmal Utama Xinjiang Sumber Biologi dan Kejuruteraan Genetik, Universiti Xinjiang (Urumqi, Xinjiang, China) dan dikultur dalam medium RPMI 1640 (Gibco) ditambah dengan 100 U/ml penisilin dan 100 ug/ml streptomycin, dan 10 peratus serum lembu janin yang tidak diaktifkan haba (Gibco) pada 37 darjah dalam suasana lembap sebanyak 5 peratus CO2.

Ujian MTT

CTPG telah dibeli daripada Hetian Dichen Biotech Co., Ltd. (Hetian, Xinjiang, China) dan sebatian utama CTPG telah layak dan dikira oleh kromatografi cecair berprestasi tinggi [16]. Daya maju sel telah dinilai oleh 3- (4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) (Sigma, St. Louis, MO , AS) ujian. Sel H22 telah diinokulasi ke dalam 96-plat perigi pada ketumpatan 2 × 104 sel dalam 100 medium ul setiap perigi dan dikultur pada 37 darjah . Selepas 24 jam, sel telah dirawat dengan kepekatan CTPG yang berbeza (0, 100, 200, 300 dan 400 ug/ml) atau 0.3 peratus DMSO (sama dengan 400 ug/ml CTPG) selama 24, 48 dan 72 jam, masing-masing. . Selepas sentrifugasi pada 1000 rpm selama 7 minit, supernatan dibuang dan 100 ul larutan MTT (5 mg/ml dalam PBS) telah ditambah kepada setiap telaga. Plat diinkubasi pada 37 darjah selama 4 jam dan 100 ul DMSO telah ditambah untuk melarutkan hablur formazan yang terbentuk. Nilai OD490 telah dikesan oleh 96- pembaca plat mikro telaga (Bio-Rad Laboratories, CA, USA). Daya maju sel telah dikira mengikut formula: Daya maju sel ( peratus )=(ODtreated/ODutreated) × 100 peratus .

Pengesanan apoptosis

Sel H22 dirawat dengan kepekatan CTPG yang berbeza (0, 100, 200, 300, dan 400 ug/ml) atau 0.3 peratus DMSO selama 24 jam, dan kemudian diwarnai dengan Annexin V FITC/ Kit Pengesanan Apoptosis Propidium iodide (PI) (YEASEN, China) mengikut arahan pengilang. Sampel dianalisis oleh sitometri aliran (BD FACSCalibur, Amerika Syarikat).

Pengesanan potensi membran mitokondria

Sel H22 dirawat dengan kepekatan CTPG (0, 200 dan 400 ug/ml) yang berbeza selama 24 jam, dan kemudian diwarnakan dengan pewarna JC-1 yang telap membran (Beyotime, China) selama 20 min pada 37 darjah. Selepas mencuci dua kali dengan penimbal JC-1, sampel digantung semula dengan 300 ul penimbal JC-1 dan dianalisis menggunakan sitometri aliran (BD FACSCalibur, Amerika Syarikat).

Analisis kitaran sel

Sel H22 telah diinokulasi dalam hidangan kultur 60 mm dan dirawat dengan kepekatan CTPG yang berbeza (0, 100, 200, 300 dan 400 ug/ml) atau 0.3 peratus DMSO untuk 24 jam Semua sel dikumpulkan dan dibasuh dua kali dengan PBS. Sel telah ditetapkan dalam 70 peratus etanol ais sejuk pada -20 darjah selama 2 jam dan dibasuh dua kali dengan PBS, kemudian digantung semula dalam penampan pewarnaan 300 ul Propidium iodide / RNase (BD Biosciences). Selepas 10 minit pada suhu bilik, sampel dikumpulkan oleh sitometri aliran (BD FACSCalibur, Amerika Syarikat) dan pengedaran kitaran sel dianalisis dengan perisian ModFit LT 3.0.

Hoechst 33,258 pewarnaan

Perubahan morfologi nukleus sel H22 telah dianalisis dengan pewarna pengikat DNA telap membran Hoechst 33,258 pewarnaan. Sel H22 telah disemai dalam 6-plat perigi pada kepekatan 1 × 105 sel/perigi dalam medium 2 ml. Selepas 60 peratus ~ 70 peratus pertemuan, sel telah dirawat dengan CTPG (0, 100, 200, 300 dan 400 ug/ml) selama 24 jam. Sel-sel telah dikumpulkan dan diperbaiki dengan 4 peratus Paraformaldehyde ais sejuk pada 4 darjah selama 10 minit. Selepas mencuci dengan PBS, sel telah diwarnai dengan Hoechst 33, 258 (Beyotime, China) pada 4 darjah selama 10 minit. Sampel diperhatikan oleh mikroskop pendarfluor terbalik (Nikon Eclipse Ti-E, Jepun).

penghapusan Barat

Anti-caspase-3, anti-cleaved caspase-3, Anti-Bcl-2 dan anti-Bax telah dibeli daripada Beyotime Biotech Co., Ltd. (Shanghai, China). Anti-caspase-7, anti-cleaved-caspase-7, anti-caspase-8, anti-cleaved-caspase-8, anti-caspase-9, anti -cleaved-caspase-9, anti-PARP, PARP anti-cleaved, IgG-HRP anti-tikus dan IgG-HRP anti-arnab telah dibeli daripada Teknologi Isyarat Sel. Anti- -aktin telah dibeli daripada Beijing ComWin Biotech Co., Ltd. (Beijing, China).

Sel H22 telah dirawat dengan kepekatan CTPG yang berbeza (0, 100, 200, 300 dan 400 ug/ml) atau 0.3 peratus DMSO selama 24 jam. Sel-sel telah dikumpulkan dan dilisiskan dengan Penyelesaian Lysis Sel RIPA (Beijing ComWin Biotech Co., Ltd) selama 30 minit di atas ais. Sampel dipusingkan ke bawah (12,000 g selama 15 minit pada 4 darjah ) untuk mengumpul supernatan dan kepekatan protein diukur menggunakan kit BCA (Thermo Fisher Scientific, USA). Jumlah protein yang sama dalam setiap sampel telah diasingkan oleh 12 peratus SDS-PAGE dan dipindahkan ke membran PVDF (Biosharp, China). Selepas menyekat dengan penimbal TBST mengandungi 5 peratus susu tanpa lemak, membran diinkubasi dengan antibodi primer yang sepadan dan antibodi sekunder yang terkonjugasi kepada peroksidase lobak pedas (HRP). Selepas mencuci dengan TBST, protein sasaran dikesan oleh kit ujian ECL (Beyotime, China).

Pernyataan haiwan dan etika

Tikus Kunming jantan berusia 6-8 minggu telah dibeli dari Pusat Makmal Haiwan, Universiti Perubatan Xinjiang (Urumqi, Xinjiang, China). Tikus disimpan dalam kemudahan haiwan berkitar ringan yang dikawal suhu standard di Universiti Xinjiang. Semua kajian haiwan telah dijalankan mengikut garis panduan Jawatankuasa Penjagaan dan Penggunaan Haiwan Universiti Xinjiang. Protokol itu telah diluluskan oleh Jawatankuasa Etika Eksperimen Haiwan Makmal Utama Xinjiang Sumber Biologi dan Kejuruteraan Genetik (BRGE-AE001), Universiti Xinjiang.

Kajian tikus tumor

Untuk induksi model tetikus tumor, tikus Kunming jantan disuntik secara subkutan dengan 1 × 106 sel H22 dalam 100 ul PBS ke dalam rusuk kanan. Selepas 3 hari, tikus dibahagikan secara rawak kepada 3 kumpulan (7 tikus/ kumpulan). Kumpulan Kawalan disuntik dengan 0.1 ml DMSO secara subkutan di sekitar tumor. Kumpulan CTPG-200 dan CTPG- 400 disuntik secara subkutan dengan 200 atau 400 mg/kg CTPG dalam 0.1 ml DMSO di sekeliling tumor. Tikus dirawat setiap 2 hari sehingga 21 hari. Saiz tumor diukur menggunakan angkup sehingga 25 hari dan jumlah tumor dikira mengikut formula: isipadu tumor (mm3 )=(panjang×lebar2 )/2. Selepas 25 hari, kemandirian tikus tumor dipantau setiap hari sehingga akhir kajian ini.

Analisis statistik

Kepentingan statistik dikira dengan analisis varians sehala antara kumpulan rawatan dan kawalan. Semua data dinyatakan sebagai min ± sisihan piawai (SD). p < 0.05="" dianggap="" signifikan="" secara="">

Keputusan

CTPG mengurangkan daya maju sel H22 secara in vitro

Untuk meneroka kesan antitumor CTPG pada HCC, sel H22 telah dirawat dengan kepekatan CTPG yang berbeza (0, 100, 200, 300 dan 400 ug/ml) secara in vitro. Selepas 24 jam, morfologi sel H22 diperhatikan menggunakan mikroskop terbalik. Kami mendapati bahawa morfologi sel H22 telah berubah secara dramatik oleh rawatan CTPG. Dengan peningkatan kepekatan CTPG, sel menjadi kecil dan bulat dan bilangan sel juga sangat berkurangan (Rajah 1a). Ujian MTT digunakan untuk menganalisis daya maju sel H22 selepas rawatan CTPG selama 24, 48, dan 72 jam, masing-masing. CTPG mengurangkan daya maju sel H22 dengan ketara dalam cara yang bergantung kepada dos dan bergantung pada masa (Rajah 1b). CTPG pada 300 ug/ml tiba pada kadar perencatan terbaik (Rajah 1c). Nilai IC50 CTPG untuk sel H22 ialah 236 ug/ml pada 24 jam dan 169.8 ug/ml pada 48 jam.

Apoptosis yang disebabkan oleh CTPG dalam sel H22

Untuk menyiasat sama ada daya maju menurun sel H22 dimediasi oleh induksi apoptosis, sel H22 dirawat dengan kepekatan CTPG yang berbeza (0, 100, 200, 300, dan 400 ug/ml) selama 24 jam dan diwarnakan dengan PI dan Annexin V. Keputusan sitometri aliran menunjukkan bahawa CTPG secara signifikan mendorong apoptosis sel H22 (termasuk apoptosis awal dan lewat) dalam cara yang bergantung kepada dos (Rajah 2a). Walaupun dos CTPG yang tinggi juga meningkatkan nekrosis sel H22 dengan ketara, nekrosis memainkan peranan kecil dalam perencatan pertumbuhan sel H22 kerana bahagiannya yang lebih rendah (8.3 peratus) berbanding dengan apoptosis (52.6 peratus). Selanjutnya, jumlah protein sel H22 telah diasingkan selepas rawatan CTPG dan ekspresi limfoma sel B anti-apoptosis 2 (Bcl-2) dan pro-apoptosis BCL-2-protein X (Bax) berkaitan telah dikesan oleh Penghapusan Barat. Data pengimbasan skala kelabu menunjukkan bahawa tahap ekspresi Bax dan Bcl-2 masing-masing meningkat dan menurun. Nisbah Bax/Bcl-2 telah meningkat dengan ketara (Rajah 2b). Keputusan ini menunjukkan bahawa CTPG mendorong apoptosis dalam sel H22.

CTPG mendorong pemeluwapan kromosom dan penangkapan kitaran sel dalam sel H22

Telah dilaporkan bahawa kerosakan DNA dan penangkapan kitaran sel yang disebabkan oleh ubat boleh menghalang pertumbuhan sel tumor dan menyebabkan apoptosis dalam sel tumor [17, 18]. Untuk mengesan morfologi nukleus dalam sel H22 selepas rawatan CTPG selama 24 jam, sel H22 telah diwarnai oleh Hoechst 33,342 dan diperhatikan menggunakan mikroskop pendarfluor terbalik. Sel yang dirawat CTPG menunjukkan peningkatan yang bergantung kepada dos bagi kromatin nukleus pekat terang, manakala sel yang tidak dirawat menunjukkan nukleus berwarna homogen (Rajah 3a). Pengagihan kitaran sel dalam sel H22 dianalisis selanjutnya dengan pewarnaan PI selepas rawatan CTPG selama 24 jam. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 3b, rawatan CTPG meningkatkan dengan ketara perkadaran sel G0/G1- dan fasa G2/M dan dengan ketara mengurangkan bahagian sel fasa S, menunjukkan bahawa CTPG mendorong G 0/G1 dan G2/M penahanan fasa dalam sel H22. Dos CTPG yang tinggi juga meningkatkan perkadaran sel sub G1 dengan ketara.

CTPG mengurangkan potensi membran mitokondria dan meningkatkan pembebasan cytochrome c

Laluan yang bergantung kepada mitokondria memainkan peranan penting dalam induksi apoptosis [19, 20]. Perubahan potensi membran mitokondria (Δψm) boleh dipantau oleh pewarnaan JC-1 disebabkan oleh agregat JC-1 (pendarfluor merah) boleh hancur menjadi monomer (pendarfluor hijau) dengan pengurangan Δψm [21]. Selepas rawatan CTPG selama 24 jam, sel H22 diwarnakan oleh pewarna JC- 1. Data sitometri aliran menunjukkan bahawa pendarfluor merah dalam saluran FL-2 dan pendarfluor hijau dalam saluran FL-1 telah berkurangan dan meningkat dengan ketara selepas rawatan CTPG. Perkadaran sel tambah PE− FITC telah meningkat dengan ketara (Rajah 4a), menunjukkan bahawa CTPG mengurangkan Δψm dalam sel H22. Ini konsisten dengan nisbah Bax/Bcl{13}} yang meningkat. Akibatnya, kami mendapati pembebasan cytochrome c meningkat dengan ketara apabila rawatan CTPG (Rajah 4b). Keputusan ini menunjukkan bahawa CTPG mungkin sebahagiannya mendorong apoptosis dalam sel H22 melalui laluan (intrinsik) yang bergantung kepada mitokondria.

CTPG mengaktifkan laluan caspase dan menghalang pembaikan DNA

Seterusnya, pengaktifan caspase yang disebabkan oleh CTPG melalui kedua-dua laluan isyarat ekstrinsik dan intrinsik telah dianalisis. Selepas rawatan CTPG selama 24 jam, jumlah protein telah diasingkan daripada sel H22 dan tahap pro-dan cleaved-caspases dikesan oleh Western blot. Berbanding dengan kawalan DMSO yang tidak dirawat atau kawalan DMSO, rawatan CTPG mengawal selia bukan sahaja tahap caspase terbelah-8 (laluan ekstrinsik) tetapi juga tahap caspase terbelah-9 (laluan intrinsik) (Gamb. 5). Secara berurutan, caspase yang diaktifkan-8 dan -9 membelah pro-caspase hiliran-3 dan -7 yang diperhatikan dalam Rajah 5. Caspase yang diaktifkan-3 membelah DNA pembaikan enzim polimerase (ADP-ribose) polimerase (PARP) untuk menghalang pembaikan DNA dan mengumpul kerosakan DNA seperti yang diperhatikan dalam Rajah 3a.

Keputusan ini menunjukkan bahawa CTPG mendorong apoptosis dalam sel H22 melalui kedua-dua laluan isyarat ekstrinsik dan intrinsik.

CTPG menyekat pertumbuhan H22 HCC dalam vivo dan meningkatkan kadar survival tikus tumor

Akhirnya, kesan antitumor CTPG pada HCC telah dinilai dalam model tikus tumor, yang ditubuhkan oleh suntikan subkutaneus sel H22. Selepas 3 hari suntikan sel H22, tikus tumor telah dirawat dengan CTPG 8 kali. Berat badan tikus dan saiz tumor dipantau pada titik masa yang ditunjukkan. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 6a, berat badan tikus dalam setiap kumpulan tidak mempunyai perbezaan yang ketara, menunjukkan bahawa dos CTPG terpilih tidak mempunyai kesan sampingan yang jelas. Menariknya, pertumbuhan tumor pada tikus yang dirawat dengan kedua-dua 200 mg/kg dan 400 mg/kg CTPG telah dihalang dengan ketara (Rajah 6b). Selain itu, dua dos rawatan CTPG telah meningkatkan kemandirian tikus tumor (3/7, 3/7) berbanding dengan kumpulan kawalan (0/7) pada akhir eksperimen (Rajah 6b). Kami juga mendapati bahawa CTPG meningkatkan dengan ketara percambahan splenosit yang diasingkan daripada tikus Kunming jantan dalam cara yang bergantung kepada dos (Rajah 6c), menunjukkan bahawa CTPG mempunyai kesan imunostimulasi.

Perbincangan

TCM telah digunakan untuk merawat pelbagai penyakit termasuk kanser sejak sekian lama. Telah dilaporkan bahawa TCM boleh mendorong apoptosis dalam pelbagai jenis sel tumor melalui laluan isyarat ekstrinsik (pengantara reseptor kematian) dan intrinsik (bergantung kepada mitokondria) untuk memberikan kesan antitumor [22-25]. Kedua-dua laluan boleh mengaktifkan caspase-8 dan -9, masing-masing [24, 26]. Di sini, kami mendapati bahawa CTPG menekan pertumbuhan sel H22 dengan ketara melalui induksi apoptosis dan penangkapan kitaran sel. Tahap caspase terbelah-8 dan -9 dikawal dengan ketara oleh rawatan CTPG, menunjukkan bahawa kedua-dua laluan isyarat ekstrinsik dan intrinsik terlibat dalam induksi apoptosis. Kajian terdahulu kami menunjukkan bahawa CTPG mendorong apoptosis dalam sel melanoma B16-F10 oleh laluan bergantung kepada mitokondria yang meningkatkan tahap caspase terbelah-9 tetapi bukan caspase-8 [16]. CTPG mungkin mengaktifkan laluan isyarat yang berbeza dalam pelbagai jenis sel tumor.

Integriti membran mitokondria dikawal ketat oleh ahli keluarga protein BCL-2 termasuk Bax dan Bcl-2 [27, 28]. Nisbah Bax kepada Bcl-2 memainkan peranan penting dalam laluan apoptosis yang bergantung kepada mitokondria [29]. Dalam sel H22 yang dirawat oleh CTPG, nisbah Bax/Bcl-2 dikawal dengan ketara, yang mungkin menyebabkan pengurangan Δψm dan pembebasan cytochrome c diperhatikan dalam kajian ini. Akibatnya, pro-caspase{11}} telah dibelah dan diaktifkan. Akhir sekali, pemula caspase aktif-8 dan -9 mengaktifkan pelaksana caspase-3 untuk membelah PARP untuk mengelakkan pembaikan DNA. Diambil bersama, keputusan ini mencadangkan bahawa CTPG mendorong apoptosis dalam sel H22 melalui kedua-dua laluan isyarat ekstrinsik dan intrinsik.

Dalam model tikus tumor, CTPG menekan pertumbuhan H22 HCC dengan ketara dan meningkatkan kelangsungan hidup tikus tumor. Menariknya, CTPG bergantung kepada dos mempromosikan percambahan splenosit dari tikus Kunming, yang konsisten dengan kajian terdahulu kami [16].

Keputusan ini mencadangkan bahawa CTPG mungkin menyekat pertumbuhan H22 HCC pada tikus melalui kedua-dua kesan antitumor langsung dan peningkatan imun tidak langsung.

Kesimpulan

CTPG menyekat pertumbuhan sel H22 kedua-dua in vitro dan in vivo dan mendorong apoptosis dalam sel H22 melalui kedua-dua laluan isyarat ekstrinsik dan intrinsik. Data ini menunjukkan bahawa CTPG mungkin calon yang berpotensi untuk rawatan HCC.