Cistanche Glycosides Melemahkan Fibrosis Prostatik dalam Hiperplasia Prostat Benign Dengan Mengawal MiRNA‑483‑3p

 

ABSTRAK

Objektif:Untuk menyiasat kesan amelioratif glikosida cistanche pada fibrosis prostat dalam hiperplasia prostat jinak (BPH) dan mekanisme yang melibatkan pengawalan mikroRNA (miRNA) -483-3p.

Kaedah:Tikus jantan secara rawak diberikan kepada lima kumpulan: kawalan normal, kawalan model BPH, finasteride, glikosida cistanche, dan glikosida cistanche + antagonis miRNA-483-3p. Model BPH telah ditubuhkan oleh orchiectomy dua hala diikuti dengan suntikan subkutaneus harian testosteron propionat. Selepas 30 hari, pemendapan kolagen prostat dinilai oleh trichrome Masson dan pewarnaan Sirius Red, dan kandungan hidroksiprolin (Hyp) diukur. Tahap mRNA prostat bagi mengubah faktor pertumbuhan‑1 (TGF‑1), kinase protein teraktif mitogen 2 (MK2), dan kinase kinase kinase protein teraktif mitogen 6 (MKK6), serta tahap miRNA‑483‑3p, ditentukan oleh PCR masa nyata kuantitatif (qPCR). Tahap protein prostat TGF‑1, MK2, MK2 terfosforilasi (p-MK2), MKK6, dan MKK6 terfosforilasi (p-MKK6) dinilai oleh Western blotting. Pengikatan langsung miRNA‑483‑3p kepada MK2 telah diperiksa menggunakan ujian wartawan luciferase.

Keputusan:Berbanding dengan kumpulan kawalan biasa, kumpulan kawalan model BPH menunjukkan pemendapan kolagen prostat yang meningkat dengan ketara; tahap mRNA tinggi TGF‑ 1, MK2, dan MKK6; dan tahap protein TGF‑1, p‑MK2, dan p‑MKK6 yang lebih tinggi (semua P <0.01), manakala tahap miRNA‑483‑3p menurun dengan ketara (P <0.01). Berbanding dengan kumpulan kawalan model BPH, glikosida cistanche mengimbangi miRNA‑483‑3p, mengurangkan tahap mRNA TGF‑ 1, MK2 dan MKK6, menurunkan tahap protein TGF‑ 1, p‑MK2, dan p‑MKK6, dan mengurangkan deposisi kolagen prostat. Terutamanya, pentadbiran bersama antagomir miRNA‑483‑3p dengan glikosida cistanche telah menurunkan miRNA‑483‑3p dengan ketara, peningkatan pemendapan kolagen, dan peningkatan tahap mRNA TGF‑ 1, MK2, dan MKK6 serta paras protein TGF‑1, pKM‑, dan pM‑6. glikosida sahaja (semua P <0.01). Ujian luciferase menunjukkan bahawa miRNA‑483‑3p secara langsung menyasarkan MK2.

Kesimpulan: Glikosida cistanche melemahkan fibrosis prostat dalam BPH dengan mengawal selia miRNA‑483‑3p dan menghalang isyarat MK2.

Kata kunci: Glikosida cistanche; miRNA‑483‑3p; prostat;fibrosis; hiperplasia prostat jinak

 

 

 

Cistanche Deserticola Berkualiti Terbaik

Lebih pengetahuan tentang herba untuk Rawatan BPH

 

Perkhidmatan Sokongan Wecistanche-Pengeksport cistanche terbesar di China:
E-mel:wallence.suen@wecistanche.com
 

 

pengenalan

Hiperplasia prostat jinak (BPH)adalah keadaan biasa pada lelaki pertengahan umur dan lebih tua, dengan kelaziman meningkat dengan usia. Laporan menunjukkan bahawa prevalens BPH melebihi 50% di kalangan lelaki berumur lebih 50 tahun. BPH dan simptom saluran kencing bawah (LUTS) yang berkaitan mengenakan beban yang besar terhadap kualiti hidup dan kos penjagaan kesihatan jangka panjang. Secara klinikal, 5 -perencat reduktase dan ‑penghalang reseptor adrenergik adalah farmakoterapi yang disyorkan. Walau bagaimanapun, ‑penghalang tidak mengurangkan jumlah prostat, dan 25–30% pesakit tidak menunjukkan peningkatan dalam LUTS dengan 5 -perencat reduktase; lebih-lebih lagi, 5–7% mungkin bertambah teruk. Walaupun inovasi pembedahan seperti prostatektomi laser thulium semakin digunakan berbanding dengan reseksi transurethral prostat, LUTS selepas pembedahan masih berlaku pada kadar melebihi 23%.

Bukti semasa mencadangkan tiga proses patobiologi utama dalam BPH: hiperplasia kelenjar, pengecutan otot licin, dan fibrosis prostat. Proses ini bertindak secara bebas atau sinergi untuk memacu perkembangan klinikal. BPH biasanya (walaupun tidak selalu) wujud bersama LUTS; fibrosis, dicirikan oleh pemendapan matriks ekstraselular yang berlebihan, menjejaskan fleksibiliti uretra dalam prostat dan menyumbang kepada halangan kencing. Namun, pilihan terapeutik yang khusus menyasarkan fibrosis organ kekal terhad.

Cistanche (Cistanche spp.) ialah sejenis tumbuhan ubatan dan pemakanan tradisional. Glikosida fenilethanoid cirinya (secara kolektif dirujuk di sini sebagai glikosida cistanche, seperti echinacoside dan acteoside) mempamerkan bioaktiviti yang luas, termasuk kesan antimikrobial, hipolipidemik, antiallergik, kardiotonik, antidiabetik, antitumor, neuroprotektif, antioksidan dan imunomodulator. Bukti terkumpul menunjukkan tindakan anti-fibrotik glikosida ini dalam organ seperti buah pinggang, paru-paru, jantung, dan hati. Walau bagaimanapun, kesannya terhadap fibrosis prostat tidak dilaporkan. Kajian ini mengkaji kesan glikosida cistanche pada fibrosis prostat dan meneroka mekanisme asas, memfokuskan pada paksi miRNA‑483‑3p/MK2 yang berkaitan dengan pembentukan semula matriks ekstraselular.

Cistanche Deserticola Berkualiti Terbaik

 

Bahan dan Kaedah

Bahan

 

miRNA‑483‑3p antagomir (diubah suai secara kimia): dibeli daripada Shanghai GenePharma Co., Ltd. (No. Kumpulan: 12953).

Suntikan propionat testosteron: Tianjin Jinyao Pharmaceutical Co., Ltd. (No. Kumpulan: 150822).

Glikosida cistanche: Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd. (ketulenan Lebih daripada atau sama dengan 98%, No. Kelompok: M14062). Nota untuk pembangun nutraseutikal: bahan sepadan dengan pecahan glikosida phenylethanoid piawai; memastikan spesifikasi oleh kandungan HPLC (cth, jumlah PEGL, echinacoside/acteoside).

Tablet Finasteride: MSD (Hangzhou) Pharmaceutical Co., Ltd. (No. Kelompok: U011856; 5 mg/tablet).

Kit ujian wartawan Luciferase (No. Kumpulan: E2920) dan vektor psiCHECK‑2 (No. Kumpulan: C8021): Promega (AS).

Kit pengesanan qPCR: KAPA Biosystems (No. Kelompok: KM4101).

Kit ujian Hydroxyproline (Hyp): Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute (No. Batch: 20190626).

Primer untuk TGF‑ 1, MK2 dan MKK6 telah disintesis oleh Wuhan Tianyi Huiyuan Biotechnology Co., Ltd.

Cistanche Deserticola Berkualiti Terbaik

 

Haiwan

Tikus C57BL/6 jantan bebas patogen spesifik (SPF) tujuh minggu (22–24 g) diperoleh daripada Universiti Pertanian Huazhong (No. Lesen Pengeluaran: SCXK Hubei 2015‑0019). Haiwan ditempatkan pada 23 ± 2 darjah, kelembapan 50 ± 5%, di bawah kitaran gelap 12 jam/12 jam.

 

peralatan

 

Sistem PCR masa nyata StepOnePlus (Applied Biosystems, USA).

Luminoskan 5200110 mikroplate luminometer (Thermo Fisher Scientific, USA).

Reka Bentuk Eksperimen dan Model BPH
Selepas 1 minggu penyesuaian, tikus diperuntukkan secara rawak (jadual nombor rawak) kepada lima kumpulan (n=6 setiap kumpulan): kawalan normal, kawalan model BPH, finasteride, glikosida cistanche dan glikosida cistanche + antagomir miRNA‑483‑3p. Model BPH telah diinduksi oleh pengebirian pembedahan ditambah suntikan subkutaneus harian testosteron propionat pada 7.5 mg·kg⁻¹ selama 30 hari. Kumpulan finasteride menerima finasteride oral 1 mg·kg⁻¹ setiap hari (larut dalam 0.5% CMC‑Na). Kumpulan glikosida cistanche menerima glikosida cistanche oral 100 mg·kg⁻¹ setiap hari. Kumpulan gabungan menerima glikosida cistanche oral 100 mg·kg⁻¹ setiap hari ditambah suntikan vena ekor miRNA‑483‑3p antagomir pada 10 mg·kg⁻¹ setiap 5 hari mengikut arahan pengilang. Kumpulan kawalan model normal dan BPH menerima volum yang sama sebanyak 0.5% CMC‑Na secara lisan.

Selepas 30 hari, tikus telah dibius dengan suntikan intraperitoneal natrium pentobarbital (80 mg·kg⁻¹) dan dieutanasi dengan dislokasi serviks. Prostat telah dipotong; bahagian telah ditetapkan dan dibenamkan untuk pewarnaan trichrome Masson dan Sirius Red, dan tisu segar telah diproses untuk qPCR, Western blotting, dan ujian biokimia. Prosedur haiwan mematuhi Peraturan Wilayah Hubei mengenai Pengurusan Haiwan Makmal (No. Kelayakan Operator: TY20190784).

Cistanche Deserticola Berkualiti Terbaik

 

Penilaian Fibrosis Prostatik

Pemendapan kolagen dinilai oleh pewarnaan trichrome Sirius Red dan Masson. Kandungan hyp dalam tisu prostat dikira mengikut arahan kit. Bagi setiap slaid, tiga medan rawak dianalisis menggunakan Image‑Pro Plus 6.0 untuk mengira peratusan kawasan bernoda positif.

Penilaian Aktiviti Laluan MK2

qPCR: Tahap mRNA prostatik MK2, TGF‑ 1, dan MKK6 diukur. Urutan primer:

MK2 (264 bp) ke hadapan 5'-GGAAGTGCCTGCTGAT-3', belakang 5'-AGTTGTGACTGGTGGTTT-3';

TGF‑ 1 (153 bp) ke hadapan 5'-AGGAGACGGAATACAGGG-3', belakang 5'-ATGAGGGAGCAGGAAGGG-3';

MKK6 (146 bp) ke hadapan 5'-CCTCAGACCAGTTCCAC-3', belakang 5'-CGCATCTTCTCCACCA-3'.

Western blot: Tahap protein TGF‑1, MK2, p‑MK2, MKK6 dan p‑MKK6 ditentukan mengikut protokol yang telah ditetapkan sebelum ini.

Pengukuran miRNA‑483‑3p
primer miRNA‑483‑3p: hadapan 5'-GGGTCACTCCTCCCCT-3', belakang 5'-AACTGGTGTCGTGGAGTCGGC-3'; RT primer 5'-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGAAGACGGG-3'. qPCR dilakukan setiap arahan kit.

 

Ujian Wartawan Luciferase

MK2 3'UTR telah diklonkan ke dalam vektor psiCHECK‑2 untuk membina plasmid wartawan jenis liar (WT) dan mutan (MUT). Sel HEK‑293T telah ditransfeksi bersama dengan miRNA‑483‑3p dan plasmid wartawan menggunakan Lipofectamine 3000; sel kawalan menerima vektor kosong. Selepas 24 jam, aktiviti luciferase diukur mengikut protokol kit.

Analisis Statistik
Data dianalisis menggunakan SPSS 17.0. ANOVA sehala digunakan selepas pengesahan kenormalan dan kehomogenan varians. Keputusan dinyatakan sebagai min ± SD. Ujian post hoc LSD digunakan untuk pelbagai perbandingan. Perbezaan dianggap signifikan secara statistik pada P <0.05.

 

Keputusan

Berbanding dengan kumpulan kawalan biasa, kumpulan kawalan model BPH mempamerkan peningkatan ketara dalam pemendapan kolagen prostat; ekspresi mRNA tinggi TGF‑ 1, MK2, dan MKK6; dan tahap protein yang lebih tinggi bagi TGF‑1, p‑MK2, dan p‑MKK6 (semua P <0.01). tahap miRNA-483-3p telah dikurangkan dengan ketara (P <0.01).

Berbanding dengan kawalan model BPH, glikosida cistanche mengimbangi miRNA‑483‑3p dengan ketara, menurunkan tahap mRNA TGF‑1, MK2 dan MKK6, menurunkan tahap protein TGF‑1, p‑MK2, dan p‑MKK6, dan mengurangkan deposisi kolagen prostat.

Berbanding dengan glikosida cistanche sahaja, gabungan glikosida cistanche dengan antagomir miRNA-483-3p dengan ketara menurunkan miRNA-483-3p dan peningkatan pemendapan kolagen, ditambah tahap mRNA TGF-1, MK2, dan MKK6, serta tahap protein TGF-2, p-6M (semua P <0.01).

Ujian wartawan luciferase mengesahkan bahawa miRNA‑483‑3p secara langsung menyasarkan MK2.

 

Perbincangan (ringkas, berfokuskan nutraseutikal)

Kajian ini menunjukkan bahawa glikosida cistanche melemahkan fibrosis prostat dalam model BPH yang disebabkan oleh pengebirian/testosteron dengan mengawal selia miRNA‑483‑3p dan menyekat aktiviti laluan MK2 di hiliran isyarat TGF. Memandangkan keterbatasan farmakoterapi BPH semasa dalam menangani pembentukan semula fibrotik, glikosida cistanche mungkin mewakili strategi nutraseutikal pelengkap yang bertujuan untuk keseimbangan matriks ekstraselular.

Untuk pembangunan makanan tambahan, pertimbangan termasuk:

Penyeragaman: mentakrifkan jumlah glikosida phenylethanoid dan sebatian penanda (cth, echinacoside Lebih besar daripada atau sama dengan 20%, acteoside Lebih besar daripada atau sama dengan 10% oleh HPLC).

Terjemahan dos: 100 mg·kg⁻¹ pada tikus lebih kurang 8–12 mg·kg⁻¹ dos setara manusia (HED) menggunakan penskalaan kawasan permukaan badan, kira-kira 500–800 mg/hari untuk dewasa 60–70 kg; pengesahan klinikal diperlukan.

Kualiti dan keselamatan: pastikan identiti (sumber botani, bahan cemar, logam berat, racun perosak), dan menilai potensi interaksi dengan ‑blocker atau 5 ‑reductase inhibitors.

Tuntutan: tuntutan struktur/fungsi harus menumpukan pada "menyokong aliran kencing dan keseimbangan tisu prostat" dan mengelakkan bahasa rawatan penyakit tanpa bukti klinikal.

 

Kesimpulan

Glikosida cistanchemengurangkan fibrosis prostat dalam BPH dengan mengawal selia miRNA‑483‑3p dan menghalang isyarat MK2. Penemuan ini menyokong penyelidikan translasi lanjut mengenai ekstrak cistanche piawai sebagai nutraseutikal tambahan untuk kesihatan prostat.

 

Ucapan terima kasih

Kerja ini disokong oleh National Natural Science Foundation of China (Grant No. 81703594).

Maklumat Pengarang
Yang Chuhao (1991–), perempuan, Wuhan, Hubei, ahli farmasi klinikal, MS; bidang penyelidikan utama: farmasi klinikal. ORCID: 0000-0002-8921-5758; Tel: +86-27-82440854.