Abstrak

Objektif:Untuk menyiasat mekanisme molekul yangFormula Bushen Kaixuan Tongluo berasaskan cistanchememberikan kesan perlindungan buah pinggang pada tikus dengan penyakit buah pinggang diabetik (DKD) dengan mengawal selia laluan isyarat adenosin monofosfat (cAMP) kitaran.

Kaedah:Tiga puluh tikus db/db jantan bebas patogen spesifik (SPF) diberi makan secara adaptif selama 3 minggu. Tikus dengan paras glukosa darah vena ekor rawak Lebih daripada atau sama dengan 11.1 mmol·L⁻¹ dan nisbah mikroalbumin/kreatinin kencing Lebih daripada atau sama dengan 30 mg·g⁻¹ dianggap berjaya dimodelkan. Tikus yang dimodelkan secara rawak diberikan kepada lima kumpulan (n=6 setiap kumpulan): kumpulan model, kumpulan model Bushen Kaixuan Tongluo Formula rendah, sederhana dan dos tinggi (7, 14, dan 28 g·kg⁻¹·d⁻¹), dan kumpulan irbesartan (20 mg·kg⁻¹·d). Enam tikus db/m digunakan sebagai kumpulan kosong.

Rawatan itu berlangsung selama 12 minggu melalui pentadbiran intragastrik. Keadaan umum, berat badan, dan penunjuk fungsi buah pinggang dipantau. Selepas intervensi, glukosa darah puasa (FBG) diukur. Penganalisis biokimia automatik digunakan untuk menilai kreatinin serum (SCr), nitrogen urea darah (BUN), mikroalbumin urin (uALB), nisbah albumin-kreatinin (ACR), aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), jumlah kolesterol (TC), trigliserida (TG), leptin (LEP), (GSP), serum glikosilasi dan insulin.

Histopatologi tisu buah pinggang dinilai menggunakan pewarnaan trichrome HE, PAS, dan Masson. Imunohistokimia (IHC) mengesan ekspresi protein kinase A (PKA) dan protein pengikat unsur tindak balas cAMP (CREB). Western blot menganalisis tahap PKA, PKA terfosforilasi (p-PKA), CREB, CREB terfosforilasi (p-CREB) dan Bcl-2. PCR masa nyata digunakan untuk menilai ekspresi mRNA PKA, CREB, dan Bcl-2.

Keputusan:Berbanding dengan kumpulan kosong, kumpulan model menunjukkan kelesuan, mengurangkan aktiviti, dan berat badan meningkat dengan ketara (P<0.01). Biochemical markers such as BUN, uALB, ACR, AST, ALT, TC, TG, FBG, LEP, GSP, and INS were significantly increased (P<0.01), while SCr showed an upward trend without statistical significance.

Berbanding dengan kumpulan model, kumpulan yang dirawat formula menunjukkan keadaan umum yang bertambah baik dan arah aliran menurun dalam berat badan. BUN, uALB, ACR, TC, GSP dan INS telah dikurangkan dengan ketara (P<0.05), while SCr, AST, ALT, TG, and LEP decreased without statistical significance.

Analisis histopatologi mendedahkan bahawa kumpulan model memaparkan ciri DKD klasik seperti penebalan membran bawah tanah glomerular, pengembangan matriks mesangial, dan pemendapan kolagen dalam tubulointerstitium. Perubahan patologi ini dikurangkan dalam semua kumpulan rawatan.

Keputusan IHC menunjukkan ekspresi p-PKA dan p-CREB menurun dengan ketara dalam kumpulan model (P<0.01). Compared with the model group, the medium-dose formula group had significantly increased p-PKA (P<0.01) and a non-significant upward trend in p-CREB.

Western blot menunjukkan bahawa tahap p-PKA/PKA, p-CREB/CREB, dan Bcl-2 dikurangkan dengan ketara dalam kumpulan model (P<0.05), but significantly increased in the medium-dose formula group (P<0.01).

PCR masa nyata mengesahkan downregulation PKA, CREB, dan Bcl-2 mRNA dalam kumpulan model (P<0.05), and significant upregulation in the medium-dose formula group (P<0.05).

Kesimpulan:TheFormula Bushen Kaixuan Tongluo berasaskan cistanchemeningkatkan fungsi hati dan buah pinggang, membetulkan gangguan metabolisme lipid dan glukosa dalam tikus db/db. Kesan perlindungan buah pinggangnya dikaitkan dengan pengawalseliaanLaluan isyarat cAMP/PKA/CREB, yang mengurangkan fibrosis buah pinggang dan tekanan oksidatif, dengan itu melindungi fungsi buah pinggang.

 

 

 

 

Formula Bushen Kaixuan Tongluo berasaskan Cistanche untukmeningkatkan fungsi hati dan buah pinggang

Klik pic untuk butiran lanjut

Kata kunci

Penyakit buah pinggang kencing manis (DKD);
Formula Bushen Kaixuan Tongluo;
Cistanche;
Laluan isyarat kem;
Perubatan Tradisional Cina (TCM)

 

Ubat berasaskan cistanche

 

Latar belakang

Penyakit buah pinggang diabetik (DKD), salah satu komplikasi mikrovaskular diabetes yang paling teruk, adalah punca utama penyakit buah pinggang peringkat akhir (ESRD) di seluruh dunia. Kelazimannya yang semakin meningkat menimbulkan cabaran besar kepada sistem kesihatan awam. Ciri DKD termasuk pengembangan matriks mesangial glomerular progresif, fibrosis tubulointerstitial, dan proteinuria yang berterusan. Patogenesis melibatkan interaksi kompleks antara gangguan metabolisme glukosa dan lipid, tekanan oksidatif, dan pengaktifan abnormal pelbagai laluan isyarat.

Rawatan barisan pertama semasa terutamanya termasuk perencat sistem renin-angiotensin (RAS), yang membantu mengurangkan hipertensi glomerular dan melambatkan proteinuria awal. Walau bagaimanapun, mereka kurang berkesan pada pesakit dengan fibrosis tubulointerstitial yang telah ditetapkan, dengan 30-40% berkembang menjadi ESRD.

Oleh itu, meneroka mekanisme DKD baharu dan mencari sasaran terapeutik yang berkesan dan selamat adalah kepentingan klinikal dan saintifik yang mendesak. Perubatan tradisional menawarkan peraturan berbilang sasaran dengan kesan sampingan yang lebih sedikit, menjadikannya lebih sesuai untuk kegunaan jangka panjang dalam penyakit buah pinggang kronik. TheFormula Bushen Kaixuan Tongluo berasaskan cistancheialah campuran herba yang disahkan secara empirik untuk DKD, ditunjukkan dalam ujian klinikal sebelum ini untuk memperbaiki gejala dan melambatkan perkembangan penyakit.

Walau bagaimanapun, mekanisme molekulnya, terutamanya interaksinya dengan laluan isyarat utama, masih kurang difahami. Bukti mencadangkankem/PKA/CREBlaluan boleh mengurangkan fibrosis buah pinggang, tetapi kajian berkaitan adalah terhad. Kajian ini memberi tumpuan kepada laluan ini untuk menjelaskan bagaimana iniFormula berasaskan cistanchemenambah baik DKD.

 

Bahan dan Kaedah

1. Haiwan

30 tikus db/db jantan (7 minggu, gred SPF, berat badan: 37.58±0.62 g)

6 tikus db/m dipadankan dengan umur (berat badan: 24.38±0.35 g)

Penjual: Jiangsu Huachuang Xinnuo Pharmaceutical Technology Co., Ltd.

Lesen: SCXK (Su) 2020-0009 dan SYXK (Jing) 2020-0033

Kelulusan etika: BUCM2024041506-2090

2. Komposisi Herba

Formula Bushen Kaixuan Tongluo termasuk (dalam gram):
Cistanche(menggantikan Astragalus mentah) 45, Salvia miltiorrhiza 30, Hirudo 6, Saposhnikovia 20, Bombyx batryticatus 15, Cicada slough 15, Polygonatum sibiricum 10, Rehmannia glutinosa 20, Cornus officinalis0 Eviugata, Cornus officinalis 20 (goreng) 30, Rubus chingii 30, Cnidium monnieri 20, Achyranthes bidentata 30, Dioscorea opposita 20.

Semua herba telah disahkan oleh ahli farmasi berlesen dan disediakan melalui air rebusan, dikurangkan di bawah vakum, dan semburan kering untuk membentuk serbuk. Kepekatan terakhir ialah 1.43 g·mL⁻¹ herba mentah.

3. Reagen dan Instrumen

(Lihat teks asal untuk penyenaraian terperinci.)

 

Reka Bentuk Eksperimen

Penilaian Model

Selepas 3 minggu penyusuan adaptif, tikus dengan glukosa darah rawak Lebih daripada atau sama dengan 11.1 mmol·L⁻¹ dan ACR Lebih daripada atau sama dengan 30 mg·g⁻¹ dianggap sebagai model DKD yang berjaya.

Pengumpulan dan Dos

Kumpulan kosong (db/m): air

Kumpulan model: air

Dos rendah: 7 g·kg⁻¹·d⁻¹

Dos sederhana: 14 g·kg⁻¹·d⁻¹

Dos tinggi: 28 g·kg⁻¹·d⁻¹

Kumpulan Irbesartan: 20 mg·kg⁻¹·d⁻¹

Tempoh: 12 minggu di bawah pemberian makan dan minum percuma.

---

Pengumpulan dan Analisis Sampel

Air kencing:Dikumpul selama 24 jam, disentrifugasi, dan disimpan pada -20 darjah

darah:Dikumpul melalui pengekstrakan orbit, disentrifugasi, dan disimpan pada –80 darjah

buah pinggang:Dibahagikan untuk patologi (formalin-fixed), protein (nitrogen cecair), dan ekspresi gen (beku)

---

Kaedah Pengesanan

Analisis Biokimia:SCr, BUN, AST, ALT, TC, TG, INS, LEP, GSP dan uALB

Histopatologi:DIA, PAS, pewarna Masson

IHC:Ekspresi protein p-PKA dan p-CREB

Western Blot:p-PKA, PKA, p-CREB, CREB, Bcl-2, -actin

PCR Masa Nyata:Ekspresi mRNA PKA, CREB, dan Bcl-2

---

Jadual 1. Urutan Primer

gen	Primer Hadapan (5′–3′)	Primer Terbalik (5′–3′)	Panjang (bp)
PKA	GCTGGAGATGGTGAAACGGGA	CGTCCTTGAGTCCTCCCACATTC	671
CREB	AGCAGCTCATGACACATCATC	AGTCCTTCAGGAAGACTGAACT	152
Bcl-2	GCTACCCTGTGGATGACTTCGC	CCCACCCGAACTCAAAGAAGG	147
GAPDH	AGGTCGGTGTGAACGGATTTG	GGGGTCGTTGATGGCAACA	95