Kesan Xiaoyaosan Pada Laluan Isyarat KEM dalam Korteks Serebrum Tikus Tertekan

 

Abstrak

Objektif:Untuk menilai perubahan dalam serum prostaglandin E2 (PGE2) dan bahan P (SP) dan ekspresi mRNA bagi kitaran adenosin monofosfat (cAMP) dan protein pengikat unsur tindak balas cAMP 1 (CREB1) dalam korteks serebrum tikus yang tertekan, dan untuk meneroka mekanisme molekul yang Xiaoyaosan memberikan kesan antidepresan.

Kaedah: Empat puluh lapan tikus SD jantan telah diperuntukkan secara rawak kepada empat kumpulan (n=12 setiap satu): normal, model, Xiaoyaosan dan fluoxetine. Model kemurungan telah ditubuhkan menggunakan tekanan imobilisasi kronik (CIS). Xiaoyaosan ditadbir secara gavage 30 minit sebelum pemodelan harian selama 21 hari. Kesan seperti antidepresan dinilai oleh pemerhatian tingkah laku makroskopik, ujian keutamaan sukrosa, ujian medan terbuka, dan ujian berenang paksa. Tahap kortikal cAMP dan CREB1 mRNA dikira oleh qPCR pendarfluor masa nyata. Serum PGE2 dan SP diukur dengan ujian imunosorben berkaitan enzim (ELISA).

Keputusan: Berbanding dengan kumpulan model, kedua-dua Xiaoyaosan dan fluoxetine melemahkan tingkah laku seperti kemurungan dengan ketara; peningkatan penggunaan sukrosa, kiraan pemeliharaan menegak, lintasan mendatar, dan dandanan dalam ujian medan terbuka; dan mengurangkan masa imobilitas kumulatif dalam ujian renang paksa. Kedua-dua rawatan meningkatkan histopatologi kortikal, peningkatan cAMP dan ekspresi mRNA CREB1 dalam korteks serebrum, dan mengurangkan tahap serum PGE2 dan SP (P <0.01).

Kesimpulan:Xiaoyaosan memberikan kesan antidepresan yang jelas pada tikus yang tertekan, berpotensi melalui peraturan laluan isyarat cAMP kortikal.

Kata kunci: Xiaoyaosan; Kemurungan; perkhemahan; CREB1; Prostaglandin E2 (PGE2); Bahan P (SP)

 

pengenalan

Kemurungan adalah punca utama morbiditi dan ketidakupayaan di seluruh dunia, sangat menjejaskan kualiti hidup. Xiaoyaosan, formula perubatan tradisional Cina (TCM) berbilang herba klasik, telah menunjukkan utiliti klinikal merentasi persembahan kemurungan biasa, menyokong perkembangan berterusannya sebagai terapi botani.

Secara mekanikal, lata isyarat cAMP-protein kinase A (PKA)-CREB adalah penting kepada peraturan mood dan tingkah laku afektif. Downregulation laluan ini boleh mencetuskan fenotip kemurungan. CREB terlibat dalam patofisiologi kemurungan, dan pengaktifan oleh cAMP meningkatkan transkripsi gen hiliran; polimorfisme dan pengurangan fungsi dalam paksi ini telah dianggap sebagai faktor kerentanan kemurungan.

Pengantara keradangan juga menyumbang kepada kemurungan. Prostaglandin E2 (PGE2) mengantara tindak balas keradangan, dan PGE2 yang tinggi boleh menyebabkan tingkah laku kemurungan. Bahan P (SP), neuropeptida yang dikaitkan dengan tekanan dan kesan, sering dinaikkan dalam serum pesakit yang mengalami kemurungan. Oleh itu, kem kortikal yang diubah dan ekspresi mRNA CREB1 bersama-sama dengan serum PGE2 dan SP yang tinggi mungkin mewakili mekanisme molekul yang mendasari kecederaan kortikal dalam kemurungan.

Walaupun banyak formula kompaun TCM telah disiasat untuk mekanisme antidepresan, pengaruh kebanyakan formula pada laluan cAMP masih tidak jelas. Menggunakan paradigma tekanan imobilisasi kronik (CIS) untuk mendorong tingkah laku seperti kemurungan pada tikus, kajian ini menyiasat lagi mekanisme antidepresan Xiaoyaosan dan membandingkannya dengan fluoxetine, bertujuan untuk memaklumkan perkembangan terapeutik botani pada masa hadapan dan memberikan pandangan yang boleh diambil tindakan untuk orang yang mencari bantuan untuk kemurungan.

BAGAIMANA SUPPLEMEN HERBA TCM MELEGAKAN GEJALA PROSTATITIS

Bahan

 

Haiwan

Empat puluh lapan tikus dewasa Sprague–Dawley jantan yang sihat gred SPF (8 minggu, 200–220 g) telah dibeli daripada Beijing Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd. [No. Lesen: SCXK (Beijing) 2016-0006]. Tikus ditempatkan di kemudahan haiwan penghalang Universiti Perubatan Tradisional Cina Guizhou pada 22 ± 2 darjah, kelembapan relatif 35%–55%, 12 jam terang/12 jam gelap (7:00–19:00), empat ekor tikus setiap sangkar, dengan 7 hari penyesuaian. Kelulusan etika: Guizhou University of TCM (Tidak. 20210142).

BAGAIMANA SUPPLEMEN HERBA TCM MELEGAKAN GEJALA PROSTATITIS

 

 

 

 

SUPPLEMEN HERBA TCM UNTUK DIJUAL

Butiran Penyenaraian

 

 

 

Dadah

Formula Xiaoyaosan mengikut perkadaran Taiping Huimin Heji Ju Fang. Herba mentah dibeli dari Beijing Tongrentang (Bozhou) Decoction Pieces Co., Ltd.: Bupleurum (Chaihu), White Peony (Baishao), Angelica sinensis (Danggui), Atractylodes Tumis (Baizhu), Poria (Fuling), Licorice Goreng Madu (Zhigancao), dan Nisbah Segar (Zhigancao), Mentha Ginger (B) Segar. 5:5:5:5:5:4:1:5. Air rebusan dan kepekatan disediakan mengikut Farmakope Republik Rakyat China edisi 2020 oleh Hunan Jiuzhitang, yang berfungsi sebagai campur tangan TCM. Dos telah ditukar untuk tikus, dilarutkan dalam air ternyahion, dan disediakan sebagai ampaian.

Kapsul Fluoxetine hydrochloride (Patheon France; dibungkus oleh Eli Lilly Suzhou Pharmaceutical Co., Ltd.; No kumpulan. 6663B; 20 mg/kapsul) telah digunakan sebagai antidepresan rujukan.

Reagen

ExTaq (TAKARA, Cat. DRR100A); SYBR Green/Fluorescein qPCR Master Mix (2×) (Fermentas, Cat. #K0242); primer (Qingke Bio); Kit PGE2 dan SP ELISA tikus (Pusat Bioteknologi Shanghai Yuanju, Cat. CK-E30697 dan CK-E30122).

 

Instrumen

7900 sistem qPCR pendarfluor masa nyata (Applied Biosystems, USA); mikropipet (Eppendorf); mikrotom parafin (HY1508, Jinhua Huiyou); Sistem air ultratulen Aquapro (AJY-0501, Aikepu).

Kaedah

 

Pengelompokan dan pemodelan
Tikus ditugaskan secara rawak kepada kumpulan normal, model, Xiaoyaosan dan fluoxetine (n=12 setiap satu). Kecuali kumpulan normal, semua kumpulan menjalani CIS selama 3 jam/hari pada masa rawak selama 21 hari. Tikus biasa tidak dihalang tetapi kekurangan makanan dan air pada masa yang sama tingkap untuk dipadankan dengan pengendalian.

 

Pentadbiran dadah

Berdasarkan kajian terdahulu, Xiaoyaosan ditadbir secara gavage pada 2.22 g dadah mentah·kg−1·hari−1; fluoxetine pada 2.0 mg·kg−1·hari−1. Dadah dilarutkan dalam air ternyahion. Dos dikira dengan penukaran kawasan permukaan badan; isipadu gavage ialah 10 mL/kg, diberikan 30 minit sebelum setiap sesi sekatan harian. Kumpulan normal dan model menerima jumlah air ternyahion yang sama.

 

Langkah dan prosedur hasil

 

3.1 Pemerhatian makroskopik

Pemerhatian harian merekodkan status mental, pergerakan, dan penampilan umum.

 

3.2 Ujian keutamaan sukrosa

Tikus dilatih selama 3 hari. Hari 1: dua botol sukrosa 1% setiap sangkar. Hari 2: satu botol digantikan dengan air suling dua kali isipadu yang sama. Selepas 24 jam kekurangan makanan dan air, setiap tikus menerima satu botol sukrosa 1% dan satu air suling dua kali selama 1 jam. Botol ditimbang untuk mengira keutamaan sukrosa (%): pengambilan sukrosa / (sukrosa + pengambilan air) × 100%.

 

3.3 Ujian padang terbuka

Padang terbuka berdinding hitam (125 cm × 125 cm × 50 cm) telah digunakan di dalam bilik yang sunyi. Tikus diletakkan di tengah; lebih 5 minit, kiraan pembesaran menegak, lintasan grid mendatar dan acara dandanan telah direkodkan. Arena telah dibersihkan dengan 75% etanol dan air antara percubaan.

 

3.4 Ujian berenang paksa

Tikus diletakkan secara individu dalam silinder kaca dengan air 35 cm pada 20 ± 2 darjah . Daripada rendaman, tingkah laku telah dirakam selama 5 minit dengan kamera resolusi tinggi. Masa imobilitas kumulatif selama 5 minit telah diukur (imobiliti ditakrifkan sebagai pergerakan minimum untuk mengekalkan hidung di atas air, sedikit lenturan badan untuk keseimbangan). Air ditukar antara haiwan.

3.5 Histopatologi

Tikus telah dibius dengan 3% natrium pentobarbital (0.15 mL/100 g). Enam tikus setiap kumpulan menjalani perfusi transkardial dengan 4% paraformaldehid diikuti dengan 0.9% garam untuk penetapan, pemenggalan kepala, dan pengekstrakan otak. Otak telah direndam dalam 4% paraformaldehid (4 darjah) selama 72 jam, parafin tertanam, dipangkas, dan dipotong pada ~ 5 μm. Bahagian diapungkan pada 48 darjah, dipasang, dibakar pada suhu 60 darjah selama 4 jam, dinyahparafin dan dihidrat semula, diwarnakan dengan hematoksilin, dibezakan, dibilas, diwarnakan balas dengan eosin, dihidratkan, dibersihkan, dan ditutup untuk pemeriksaan mikroskopik. Baki enam ekor tikus bagi setiap kumpulan telah dibunuh; korteks serebrum dibedah dengan cepat di atas ais dan disimpan pada −80 darjah untuk pengekstrakan RNA.

 

3.6 kuantifikasi mRNA

Urutan sasaran telah diambil daripada NCBI dan primer yang direka dengan Primer 6.0.

kem: Ke hadapan 5'-CCGTGCTGTGGATGACTTCAACC-3'; Songsang 5′-AGTCTCCTTCACTCGGAACCTCA-3′; 133 bp.

CREB1: Hadapan 5′-GGAGCAGACAACCAGCAGAGTG-3′; Songsang 5'-GGATACCTGGGCTAATGTGCA-3'; 105 bp.

GAPDH: Hadapan 5′-AAGGGCTCATGACCACAGTC-3′; Songsang 5′-GGATGCAGGGATGATGTTCT-3′; 116 bp.

Syarat qPCR: pra-pendenaturan 90 darjah selama 30 saat; 45 kitaran 95 darjah 10 s, 60 darjah 30 s, 72 darjah 30 s. Analisis lengkung lebur: 95 darjah 1 min, 55 darjah 1 min, 95 darjah 1 min.

 

3.7 Faktor keradangan serum

Untuk ELISA: (i) tetapkan piawaian dan sampel; tambahkan piawaian 50 μL pada kepekatan berperingkat kepada telaga piawai; (ii) tambahkan 40 μL pelarut sampel kepada telaga kosong dan sampel, kemudian 10 μL sampel dan campurkan; (iii) tambah 100 μL konjugat enzim kepada semua kecuali kosong; (iv) menutup dan mengeram pada 37 darjah selama 1 jam; (v) penimbal pencuci pekat cair 1:20; (vi) basuh 5 kali dan keringkan; (vii) tambah 50 μL Substrat A kemudian 50 μL Substrat B, eramkan pada 37 darjah terlindung daripada cahaya selama 15 minit; (viii) tambah larutan henti; (ix) baca penyerapan pada 450 nm dengan kosong ditetapkan kepada sifar.

 

Analisis statistik

Data dianalisis dalam SPSS 26.0 dan dinyatakan sebagai min ± SD. Selepas mengesahkan kenormalan dan kehomogenan varians, ANOVA sehala telah digunakan. P <0.05 dianggap signifikan secara statistik.

Nota pembaca untuk pengamal dan orang yang mencari bantuan

Untuk pembangun antidepresan botani/TCM: Kajian ini mengaitkan formula klasik kepada laluan neurobiologi tertentu (cAMP-CREB) dan mediator inflamasi (PGE2, SP). Isyarat dwi modulasi-neuroplastik dan keradangan sejajar dengan biologi kemurungan kontemporari dan boleh membimbing pengoptimuman formula, pemilihan biomarker dan strategi gabungan dengan SSRI seperti fluoxetine.

Bagi individu yang meneroka bantuan untuk kemurungan: Keputusan praklinikal tidak boleh menggantikan rawatan perubatan, tetapi mereka mencadangkan Xiaoyaosan boleh meningkatkan tingkah laku kemurungan dengan menormalkan isyarat otak dan mengurangkan isyarat keradangan. Jika anda mempertimbangkan pilihan herba, berunding dengan doktor yang berkelayakan, terutamanya jika anda menggunakan antidepresan, untuk mengelakkan interaksi dan memastikan dos dan kawalan kualiti.

 

Bawa pulang peralihan

Xiaoyaosan mempertingkatkan tingkah laku, histologi otak dan penanda molekul dalam tikus tertekan yang disebabkan oleh CIS, mungkin melalui mengimbangi isyarat cAMP/CREB kortikal sambil menurunkan PGE2 dan SP persisian. Berdasarkan perkara ini, kajian seterusnya akan membedah pengawal selia hulu cAMP (cth, isoform adenilil siklase dan fosfodiesterase) dan menentukan sama ada Xiaoyaosan secara langsung memodulasi sasaran ini atau bertindak terutamanya melalui laluan anti-radang yang menumpu pada CREB.