Aktiviti Antioksidan, Profil Fenolik dan Potensi Nefroprotektif Daripada Ekstrak Etanolik Dan Akueus Anastatica Hierochuntica Terhadap CCl4-Nefrotoksisiti Teraruh dalam Tikus

Kenalan:ali.ma@wecistanche.com

Tariq I. Almundarij et al

Abstrak:Kaff-e-Maryam (Anastatica hierochuntica L.) digunakan secara meluas untuk merawat pelbagai masalah kesihatan, terutamanya untuk memudahkan bersalin dan mengurangkan gangguan berkaitan sistem pembiakan. Kajian ini bertujuan untuk menilai kesan A. hierophantic ethanolic (KEE), dan pengekstrakan akueus (KAE) CCl4-tegasan oksidatif yang disebabkan dan nefrotoksisiti dalam tikus menggunakan penanda biokimia untukbuah pinggangfungsidan status antioksidan serta pemeriksaan histopatologi tisu buah pinggang.A. hierophantic mengandungi 67.49 mg GAE g−1 daripada jumlah sebatian fenolik (TPC), 3.51 µg g−1 daripada jumlah karotenoid (TC), dan 49.78 dan 17.45 mg QE g−1 daripada jumlah flavonoid (TF) dan jumlah flavonol(TFL), masing-masing. Ia menghasilkan 128.71 µmol TE g−1 DPPH-RSA dan 141.92 µmol TE g−1 ABTS-RSA. A. hierophantic dipersembahkan unggulaktiviti antioksidandengan menghalang radikal asid linoleik dan mengkelat logam pengoksidaan. Analisis HPLC menghasilkan 9 dan 21 asid fenolik dan 6 dan 2 flavonoid dalamKEEdan KAE dengan dominasi asid sinapic dan syringic, masing-masing. Suntikan intramuskular vit. E plus Se dan pentadbiran lisan KEE, KAE, dan KEE ditambah KAE pada 250 mg kg−1 berat badan memulihkan kreatinin serum, urea, K, jumlah protein dan albumin serum dengan ketara. Selain itu, mereka mengurangkan malondialdehid (MOD), memulihkan glutathione terkurang (GSH), dan meningkatkan tahap superoksida dismutase (SOD). KEE, KAE, dan KEE serta KAE melindungibuah pinggangdaripada CCl4-nefrotoksisiti kerana ia terutamanya melemahkan tekanan oksidatif teraruh. Jumlahnefronbahagian adalah kira-kira 83.27 peratus , 97.62 peratus dan 78.85 peratus masing-masing untuk KEE, KAE dan KEE campur KAE. Kedua-dua vit. Ekstrak E plus Se dan A. hierophantic melemahkan perubahan histopatologi dalam4-tikus yang dirawat CCl. Kesimpulannya, A. hierophantic, terutamanya KAE, mempunyai potensi keupayaan untuk memulihkan kestabilan oksidatif dan meningkatkanbuah pinggangberfungsi selepas CCl4kecederaan buah pinggang akutlebih baik daripada KEE. Oleh itu, A. hierophantic mempunyai potensi untuk menjadi agen terapeutik yang berguna dalam rawatan nefrotoksisiti akibat dadah.

Kata kunci:Kaff-e-Maryam; polifenol; bioaktiviti; metabolit sekunder;penanda buah pinggang; enzim antioksidan;buah pinggangdisfungsi

Cistanche NZ untuk mencegah penyakit buah pinggang, klik di sini untuk mendapatkan sampel

1. Pengenalan

Penyakit buah pinggangadalah penyebab utama kematian ke-9 dengan lebih daripada 1 dalam 7, iaitu, 15 peratus daripada orang dewasa AS atau 37 juta orang, dianggarkan mempunyaipenyakit buah pinggang yang kronik(CKD) [1]. Hebatnya, penyebab CKD yang paling biasa seperti yang direkodkan pada tahun 2015 adalah diabetes mellitus diikuti oleh tekanan darah tinggi dan glomerulonephritis [2]. Penyebab lain CKD termasuk idiopatik (sering dikaitkan dengan buah pinggang kecil pada ultrasound buah pinggang) [3]. Sebelum ini, CCl4 digunakan untuk penyahgris logam, cucian kering, tompok kain, cecair pemadam api, dan pengasapan bijirin [4]. Ia menyebabkan gangguan teruk pada hati, paru-paru, dan testis serta dalam darah dengan menghasilkan radikal bebas aktif [5]. Menurut penemuan Ogeturk et al. [6], pendedahan kepada pelarut ini menghasilkan kerosakan buah pinggang akut dan kronik. Peroksidasi lipid yang disebabkan oleh radikal bebas dipercayai menjadi salah satu punca utama kerosakan membran sel, yang membawa kepada pelbagai keadaan patologi [7]. Penjanaan radikal reaktif telah terlibat dalam nefrotoksisiti akibat CCl{10}}, yang terlibat dalam peroksidasi lipid dan pengumpulan protein tidak berfungsi, yang membawa kepada kecederaan pada buah pinggang [8]. Kegunaan tradisional tumbuhan ubatan yang menakjubkan telah berkembang sejak beberapa tahun kebelakangan ini, dan banyak penyiasatan telah mengesahkan peranan terapeutik mereka terhadap beberapa penyakit [9-12].

2. Bahan-bahan dan cara-cara

2.1. Penyediaan sampel

sampel tumbuhan Kaff-e-Maryam (A. hierophantic L.) telah dibeli dari pasar asli di bandar Buraydah, wilayah Qassim, Arab Saudi. Bahan tumbuhan itu telah disahkan oleh Jabatan Pengeluaran dan Perlindungan Tumbuhan, Kolej Pertanian dan Perubatan Veterinar, Universiti Qassim, Arab Saudi. Sampel dicuci dengan air paip bersih untuk menghilangkan pasir dan kotoran dari daun dan kemudian bahan tumbuhan yang dikeringkan dengan udara (pada 28 ± 1 ◦C selama 48 jam.) diserbuk secara mekanikal dan disimpan dalam beg polietilena legap pada suhu 4 ± 1 ◦C sehingga digunakan.

2.2. Penyediaan Ekstrak Etanol dan Berair

Kira-kira 200 g A. hierophantic kering telah diekstrak dengan 300 mL 70 peratus etanol dalam pengekstrak Soxhlet untuk menyediakan pengekstrakan etanol (KEE). Ekstrak itu dipekatkan oleh penyejat berputar pada 40 ◦C untuk menyejat pelarut yang tinggal, kemudian dikeringkan di bawah aliran N2. Pengekstrakan akueus (KAE) telah dijalankan seperti yang diterangkan oleh Asuzu [23] dengan pengubahsuaian kecil. Dua ratus gram bahan tumbuhan kering ditambah kepada 500 mL air suling steril panas. Campuran kemudian digoncang dengan baik dan dibiarkan selama 1 jam. Kemudian kondenser refluks dilekatkan pada kelalang dan kemudian dipanaskan sehingga mendidih perlahan-lahan selama 10 minit, disejukkan, digoncang dengan baik, dan ditapis melalui kertas turas Whatman No. 1. Turasan telah disejat oleh penyejat berputar, kemudian kering di bawah aliran N2. Ekstrak alkohol dan akueus (250 mg mL−1) baru dirumus dalam air suling untuk digunakan untuk pentadbiran lisan.

2.3. Jumlah Kandungan Fenolik (TPC)

Kandungan TPC A. hierophantic ditentukan mengikut kaedah yang disesuaikan oleh Bettaieb et al. [24]. Hasilnya dibandingkan dengan lengkung piawai asid gallik (GA) yang diplot yang dibuat dalam julat 50–500 mg mL−1 (R2=0.99), dan TPC dikira sebagai mg setara asid gallik (GAE ) setiap gram A. hierophantic (mg GAE g−1 ).

2.4. Jumlah Karotenoid (TC), Jumlah Flavonoid (TF), dan Jumlah Flavonol (TFL)

Seperti yang dilaporkan oleh Al-Qabba et al. [10], 5 g A. hierophantic diekstrak berulang kali dengan campuran aseton dan eter petroleum (1:1, v/v). Jumlah kandungan karotenoid (TC) ditentukan secara spektrofotometri pada 451 nm. TC dinyatakan sebagai mg g−1 DW. Kandungan TF A. hierophantic telah diuji mengikut protokol yang diterangkan oleh Mohdaly et al. [25]. Kandungan TF dikira sebagai mg quercetin equivalent (QE) setiap 100 g−1 DW. Dalam konteks yang sama, kandungan TFL telah dijalankan [26]. Penyerapan pada 440 nm telah direkodkan, dan TFL dikira sebagai mg quercetin equivalent (QE) setiap 100 g−1 DW.

2.5. Penentuan Kapasiti Antioksidan

Ujian penghapusan radikal DPPH: RSA telah diuji secara spektrofotometri bergantung pada pelunturan larutan berwarna ungu DPPH mengikut teknik yang diubah oleh Lu et al. [27]. Kapasiti antiradikal dibentangkan sebagai µmol setara Trolox (TE) setiap gram A. hierophantic (µmoL TE g−1 ). Aktiviti penghapusan radikal ABTS: RSA A. hierophantik terhadap radikal ABTS telah diuji dengan kaedah disesuaikan Lu et al. [27]. Keputusan dinyatakan sebagai µmoL TE g−1. -ujian pelunturan asid karotena-linoleik: Peratusan antioksidan A. hierofantik dinilai dari segi pelunturan -karotena berbanding hidroksianisole (BHA) berbutil yang menggunakan protokol spektrofotometri tersuai yang ditetapkan oleh Koleva et al. [28]; keputusan diberikan sebagai peratusan berkaitan BHA. Tindakan chelating A. hierophantic pada ion ferus: Aktiviti chelating A. hierophantic diukur seperti yang diprotokol oleh Zhao et al. [29]. Peratusan perencatan ferrozine-Fe2 ditambah penciptaan kompleks sebagai tindakan pengkelat logam diukur dan dibentangkan sebagai mg mL-1 apabila asid etilenadiaminetetraacetic (EDTA) sebagai kawalan positif digunakan.

2.6. Pecahan Sebatian Polifenol A. Hierofantik Aqueous dan Ekstrak Etanol

Penentuan polifenol daripada ekstrak etanol dan akueus dilakukan oleh sistem HPLC HP1100 (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA) yang dilengkapi dengan pensampel automatik, pam kuaternari dan pengesan tatasusunan diod (Hewlett Packard 1050) menggunakan lajur (Altima). C18 150 × 4.6 mm, 5 µm) dengan tiang pelindung Altima C18 5 mm (Alltech, Nettetal, Jerman) menurut Goupy et al. [30]. Sistem pelarut yang digunakan ialah kecerunan A (asid asetik 2.5 peratus), B (asid asetik 8 peratus), dan C (asetonitril). Kadar sesama pelarut ialah 1 mL min−1, dan pengasingan dilakukan pada 35 ◦C. Isipadu yang disuntik ialah 10 µL. Sebatian fenolik telah diuji dengan penentukuran piawai luaran dan dinyatakan sebagai mg g−1 DW setara ( tambah )-catechin untuk flavan-3-ols dan kumarin setara untuk sebatian aromatik polar. Kebolehubahan sebanyak 8 peratus telah ditentukan pada lima pengekstrakan fenolik daripada sampel yang sama. Semua nilai adalah min suntikan pendua. Polifenol dan derivatifnya dikenal pasti dan dikira pada 280 dan 320 nm, manakala flavonoid dikenal pasti pada 360 nm.

2.7. Reka bentuk eksperimen

Semua eksperimen telah diluluskan oleh Institutional Animal Ethics Committee (IAEC)QU (No. {{0}}), KSA, yang dikawal oleh Tujuan Kawalan dan Penyeliaan Eksperimen terhadap Haiwan (CPCSEA) Jawatankuasa di bawah Jawatankuasa Bioetika Kebangsaan (NCBE), Peraturan Pelaksana Undang-undang Etika Penyelidikan terhadap Makhluk Hidup. Sebanyak 36 tikus albino jantan telah digunakan dalam kajian semasa dan dibahagikan kepada 6 kumpulan 6 haiwan setiap satu dan dirawat seperti berikut: Kumpulan I (Kawalan) menerima suntikan intraperitoneal (ip) minyak zaitun (1.0 mL kg−1 dua kali seminggu) dan 0.5 mL air suling secara lisan/harian selama 21 hari berturut-turut. Kumpulan II menerima suntikan ip campuran segar dengan isipadu CCl4 dan minyak zaitun yang sama (pada dos 1.0 mL kg−1 dua kali seminggu) dan 0.5 mL air suling secara lisan/ setiap hari menurut Al-Qabba et al. [10] dengan pengubahsuaian kecil. Kumpulan III (kumpulan rujukan) menerima suntikan intramuskular (im) sebanyak 50 mg kg−1 vit. E plus Se (Selepherol, Vetoquinol Co., Magny-Vernois, Perancis) dua kali seminggu, menurut Asuka et al. [31] dan El-Desoky et al. [32], dan 0.5 mL air suling secara lisan/harian. Kumpulan IV berkhidmat sebagai ujian dan menerima 250 mg kg−1 KEE secara lisan/harian bersama-sama dengan CCl4 ip dua kali seminggu. Kumpulan V menerima 250 mg kg−1 KAE secara lisan/harian bersama CCl4 ip dua kali seminggu. Kumpulan VI menerima 250 mg kg−1 KEE ditambah KAE (1:1) secara lisan/harian bersama CCl4 ip dua kali seminggu. Dua puluh empat jam selepas rawatan terakhir (hari ke-21), tikus dibius dengan campuran (alkohol: kloroform: eter, 1:2:3). Sampel darah dari tusukan jantung telah dikumpulkan untuk semua haiwan, dan serum dipisahkan dengan sentrifugasi pada 4000 rpm selama 10 minit dan disimpan pada -20 ◦C untuk pemeriksaan biokimia.

2.7.1. Analisis Biokimia Buah Pinggang

Kreatinin serum, urea, jumlah protein dan kepekatan albumin ditentukan oleh kaedah spektrofotometri automatik (Autoanalisis BM/Hitachi-911; Boehringer Mannheim, Jerman) mengikut arahan pengeluar. Tahap kalium ditentukan oleh fotometri nyalaan pada 766 nm.

2.7.2. Anggaran Aktiviti Antioksidan Buah Pinggang

Selepas pengumpulan sampel darah, haiwan semua kumpulan telah dikorbankan; betulbuah pinggangtelah diasingkan dengan cepat dan dibilas dengan garam ais sejuk. Tisu itu kemudiannya dipotong, dibilas dengan garam sejuk, dikeringkan dan diletakkan di atas ais serta-merta. Menggunakan penyeragam tisu elektrik, bahagian tisu (1.0} g) ditimbang dan dihomogenkan dengan 9 isipadu ais sejuk 0.05 M penimbal fosfat pada pH 7.4. Serpihan sel dialihkan melalui sentrifugasi pada 12,000 rpm (4 ◦C) selama 20 minit untuk mengumpul supernatan bagi penentuan kepekatan malondialdehid (MDA) [33], aktiviti superoksida dismutase (SOD) [34] dan dikurangkan kandungan glutation (GSH) [35]. Kepekatan protein dalambuah pingganghomogenat ditentukan menggunakan kaedah Bradford [36].

2.7.3. Peratusan Nefroproteksi

Peratusan nefroproteksi (F) vit. E tambah Se, KEE, KAE, dan KEE ditambah KAE dikira untuk setiap parameter biokimia secara berasingan mengikut Wakchaure et al. [37] menggunakan persamaan berikut:

dengan nilai purata T=bagi kumpulan rawatan, nilai purata C=bagi kumpulan kawalan positif dan nilai purata N= bagi kumpulan kawalan negatif. Selain itu, jumlah peratusan nefroproteksi (peratus TFP ) dibandingkan dengan vit. E plus Seas berikut:

2.7.4. Kajian Histopatologi

Sampel bedah siasat dikumpul dari sebelah kiribuah pinggangkumpulan tikus yang berasingan dan tetap dalam 10 peratus garam formalin selama 24 jam. Mencuci dengan air paip diikuti dengan dehidrasi dengan siri pencairan alkohol (metil, etil, dan etil mutlak). Spesimen dibersihkan dalam xilena dan dibenamkan dalam parafin selama 24 jam pada suhu 56 ◦C dalam ketuhar udara panas. Blok tisu lilin lebah parafin telah disediakan untuk pembahagian pada ketebalan 4-mikron menggunakan mikrotom kereta luncur. Kepingan tisu dikumpulkan pada slaid kaca, deparafinized, dan diwarnai dengan hematoxylin dan eosin untuk pemeriksaan biasa di bawah mikroskop elektrik ringan [38].

2.8. Analisis statistik

Keputusan ditunjukkan sebagai min ± ralat piawai (SE). Kepentingan perbezaan antara min dalam pelbagai kumpulan telah diperiksa menggunakan analisis varians sehala (ANOVA) diikuti dengan ujian Duncan, dan nilai p antara min diberikan pada tahap p < 0.05="" [39].="">

3. Keputusan

3.1. Fitokimia dan Kapasiti Antioksidan A. hierophantic

Analisis kuantitatif fitokimia hierofantik A. dan aktiviti antioksidan yang berkaitan menggunakan DPPH dan ABTS pemusnah radikal, aktiviti pelunturan -karotena–asid linoleik, dan keupayaan kelat (CA) telah dilakukan. Seperti yang dapat dilihat dengan jelas dalam Jadual 1, kandungan TPC ialah 67.49 mg GAE g−1. Kandungan TC ialah 3.51 µg g−1. Kandungan TF dan TL ialah 49.78 dan 17.45 mg QE g−1, masing-masing. Selain itu, DPPH-RSA dan ABTS-RSA digunakan untuk mengukur perkembangan aktiviti antioksidan. Keputusan menunjukkan 128.71 µmol TE g−1 dan 141.92 µmol TE g−1 untuk DPPH-RSA dan ABTS-RSA, masing-masing. Selain itu,aktiviti antioksidan(AOA) A. hierophantic dibentangkan dalam Jadual 1. Peratusan perencatan radikal asid linoleik dikira sebagai 45.74 peratus berbanding BHA menggunakan -Carotene bleaching ( -CB) assay. Tambahan pula, penilaian aktiviti pengkelat logam mendedahkan 42.89 mg g−1, yang nampaknya mahir dalam mengganggu pembentukan kompleks Fe2 plus –ferrozine, yang menunjukkan keupayaannya untuk mengelat logam pengoksidaan.

3.2. Kuantifikasi Sebatian Fenolik A. hierofantik

Analisis kuantitatif sebatian fenolik untuk KEE dan KAE oleh analisis HPLC telah dijalankan, dan data dijadualkan dalam Jadual 2. Sembilan asid fenolik yang diasingkan dan enam flavonoid telah dikenal pasti dalam jumlah yang boleh dikesan daripada KEE A. hierophantic. Asid fenolik yang paling banyak ialah asid hidroksisinamik seperti asid sinapik (28.704 mg 100 g−1 ) diikuti oleh asid caffeic (6.621 mg 10{ {61}} g−1 ), asid rosmarinic (2.884 mg 100 g−1 ), asid ferulik (1.854 mg 100 g−1), dan asid sinamik (0.094 mg 100 g−1 ); dan asid hidroksi-benzoik seperti asid p-hydroxybenzoic (3.440 mg 100 g−1 ), asid protocatechuic (1.811 mg 100 g−1 ), asid vanillic (3.326 mg 100 g−1 ), dan asid syringic (1.083 mg 10. −1 ). Flavonoid seperti miricetin (16.269 mg 100 g−1 ), D-catechin (2.410 mg 100 g−1 ), kaempferol (0.434 mg 100 g−1 ), rutin (0.539 mg 100 g−1 ), apigenin{{56} }glukosida (0.192 mg 100 g−1), dan quercetin (0.184 mg 100 g−1 ) jumlah yang tidak ternilai telah dikesan. Sebatian fenolik dalam KAE A. hierophantic juga ditentukan, dan data dijadualkan dalam Jadual 2. Asid syringik direkodkan sebagai asid fenolik tertinggi di kalangan 21 fenolik yang dikenal pasti. Catechol dan pyrogallol ialah 2.526 dan 1.589 mg 100 g−1, masing-masing. Data

menunjukkan bahawa beberapa asid fenolik seperti caffeic, catechin, chlorogenic, epicatechin,e-vanillic, p-hydroxybenzoic, dan asid protocatechuic telah dikesan dalam jumlah sederhana 0.725, 0.256, { {6}}.136, 0.193, {{10}}.443, 0.223 dan 0.454 mg 100 g−1, masing-masing. Dalam konteks yang sama, jumlah rendah 3,4,5-time ethoxy cinnamic, 4-aminobenzoic, benzoic, cinnamic, coumarin, ellagic, ferulic, gallic, iso-ferulic, -coumaric, p-coumaric , dan asid salisilik dikira selepas dikenal pasti. Epicatechin dan D-catechin sebagai flavonoid dikira dalam KAE A. hierophantic juga.

3.3. Serum Kreatinin, Urea, K, Jumlah Protein, dan Tahap Albumin

Suntikan CCl4 secara ketara meningkatkan tahap kreatinin serum, urea, dan k dalam tikus GII jika dibandingkan dengan tikus kawalan (GI). Sebaliknya, jumlah paras protein dan albumin telah menurun dengan ketara dalam4-tikus yang dirawat CCl (Jadual 3). Vit. Ekstrak hierofantik E ditambah Se dan A. (G III, IV, V, dan VI) mengurangkan dengan ketara perubahan kreatinin dan urea yang disebabkan oleh suntikan CCl4, sementara ia meningkatkan albumin dan jumlah protein menjadi hampir kepada nilai normal dalam GI (Jadual 3). ). Tahap k serum meningkat dengan ketara dalam CCl4-tikus yang dirawat (GII) jika dibandingkan dengan GI (Jadual 3). Suntikan vit. E tambah Se dan pentadbiran A. hierophantic alkohol dan ekstrak akueus (G IV, V, dan VI) juga telah meningkat secara positif tahap k jika dibandingkan dengan GI (Jadual 3).

3.4. Biomarker Antioksidan Renal

Seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 4, pentadbiran CCl4 mengurangkan tahap SOD dan GSH dengan ketara dan meningkatkan tahap MDA dalam GIIbuah pinggangtisu homogen. Walau bagaimanapun, jika dibandingkan dengan GI, tikus dirawat dengan kedua-dua vit. Ekstrak E plus Se dan A. hierophantic (GIII, VI, V, dan VI) menunjukkan peningkatan yang ketara dalam aktiviti enzim antioksidan SOD dan GSH, serta pengurangan tahap MDA (Jadual 4). A. ekstrak alkohol hierofantik (GIV) mengatasi prestasi A. ekstrak akueus hierofantik (GV) dan gabungan A. ekstrak alkohol dan akueus hierofantik dalam melemahkan paras antioksidan, dan memerangi proses autooksidasi menghasilkan paras MDA yang rendah jika dibandingkan dengan GI.

3.5. Peratusan Nefroproteksi

Peratusan nefroproteksi (berbanding dengan kumpulan kawalan negatif (GI) dan positif (GII)) bagibuah pinggangfungsi seperti kreatinin, urea, k, TP, dan albumin serta aktiviti antioksidan dalam homogenat buah pinggang (MDA, SOD, GSH) digambarkan dalam Jadual 5. Peratus nefroproteksi mencatatkan nilai tertinggi sebagai kreatinin, urea, k dalam GIII, TP, dan albumin dalam GV, MDA dan GSH dalam GIII dan SOD dalam GV (Jadual 5). Jumlah peratus nefroproteksi berbanding vit. Rawatan E plus Se mencatatkan tahap maksimum dalam kumpulan yang dirawat KAE (GV, 97.62 peratus), kemudian KEE (GIV, 83.27 peratus), dan kemudian KEE ditambah KAE (GVI, 78.85 peratus), seperti yang didedahkan dalam Jadual 5.

3.6. Kesan Ekstrak A. hierophantic pada Sejarah Renal

Keputusan penyiasatan biokimia disokong oleh pemeriksaan histopatologi. Jadual 6 dan Rajah 1 menunjukkan tahap perubahan histologi dalam struktur asas tikus.buah pinggangdalam pelbagai kumpulan eksperimen yang dirawat dengan ekstrak A. hierophantic. Dalam siasatan semasa, pihakbuah pinggangdaripada kumpulan kawalan (GI) didapati mempunyai struktur histologi yang normal (Rajah 1(I.1)). Histoarchitecture tikus yang dirawat CCl4- (GII) menunjukkan penyusupan sel radang fokus ( tambah tambah ) antara tubul pada korteks, kesesakan ( tambah tambah ) saluran darah antara tubul (Rajah 1(II.2) ), pelbagai formasi tuangan eosinofilik ( tambah tambah ) dalam lumen sesetengah tubul, dan pendarahan fokus ( tambah tambah ) antara tubul yang merosot pada bahagian kortikomedular (Rajah 1(II.3), Jadual 6). Dalam GIII, menyuntik vit. E plus Se, mentadbir ekstrak alkohol A. hierophantic (GIV), ekstrak akueus A. hierophantic (GV), dan gabungan ekstrak A. hierophantic (GVI) melemahkan kesan sitotoksik CCl4 dan merekodkan ringan ( tambah ) kepada kesesakan sederhana ( tambah tambah ) dalam saluran darah di antara tubulus di korteks (Rajah 1(III.4–VI.8), Jadual 6) dengan kapsul Bowman yang berkembang dengan baik dengan glomerulus dan tubul berbelit-belit dibesarkan. Selain itu, ekstrak akueus A. hierophantic (GV) merekodkan penyusupan sel radang fokus ( tambah tambah ) pada bahagian korticomedular (Rajah 1(V.7), Jadual 6).

4. Perbincangan

Fitokimia kebanyakannya adalah penghapus radikal bebas yang berkesan dan dianggap sebagai agen antioksidan unggul berasaskan tumbuhan. Bahan polifenol dianggap mempunyai sifat anti-karsinogenik dan anti-mutagenik pada manusia [40]. Kandungan TPC yang berharga dalam A. hierophantic adalah lebih tinggi sedikit daripada yang diperoleh oleh Mohamed et al. [21] sebagai 51.97 mg GAE g × 1 dalam herba hierophantic A. dan oleh AlGamdi et al. [41], yang menemui 4 mmol L × 1 GAE dalam benih A. hierophantic. Baru-baru ini, Zin et al. [42] menunjukkan kehadiran tanin dalam A. hierophantic sebagai sebatian bioaktif dan mengesyorkan bioaktivitinya, yang perlu disiasat secara mendalam. Kandungan -karotena, sebagai sebahagian daripada jumlah karotenoid, ialah 2.27 µg g × 1 seperti yang disebutkan oleh Mohamed et al. [21], malah keputusan semasa menunjukkan jumlah karotenoid sebagai 3.51 µg g × 1 . Penemuan yang sama dalam kandungan flavonoid dan flavonol telah ditunjukkan oleh Mohamed et al. [21]. Komponen aktif secara biologi, seperti sebatian fenolik, hadiraktiviti antioksidansebagai pemecahan tindak balas rantai pengoksidaan lipid dengan memberikan hidrogen kepada radikal bebas aktif. Potensi penghapusan fenolik ini untuk menghalang radikal telah dijelaskan oleh kumpulan hidroksil fenolik mereka [8,10,22]. Asid fenolik ini telah digambarkan sebagai komponen antioksidan yang berkesan, termasuk hidrogen peroksida, radikal hidroksil, dan anion superoksida [43]. A. aktiviti pengkelat logam hierofantik nampaknya mahir dalam mengganggu pembinaan kompleks "Fe2 plus –ferrozine", mencadangkan keupayaannya untuk menangkap ion "ferrous" sebelum "ferrozine". Hubungan positif antara peningkatan kandungan sebatian fenolik secara langsung ditunjukkan dengan kapasiti antioksidannya [42]. Andjelkovi'c et al. [44] menubuhkan aktiviti pelbagai asid fenolik untuk membentuk kompleks dengan logam. TPC yang berharga dan aktiviti antioksidan yang relevan menggunakan pendekatan pengukuran yang berbeza memberikan plat jelas daripada dan mengesahkan bioaktiviti A. hierophantic sebagai herba perubatan untuk aplikasi makanan atau minuman.

Komponen antioksidan yang berkesan, termasuk hidrogen peroksida, radikal hidroksil, dan anion superoksida [43,45,47]. Sebatian yang dikenal pasti dan dikira oleh HPLC dalam KAE A. hierophantic adalah lebih tinggi daripada bilangan sebatian yang dikenal pasti dalam KEE, tetapi sebatian yang dikenal pasti dalam KEE A. hierophantic dibentangkan dalam jumlah yang lebih tinggi [22]. Keputusan menunjukkan bahawa A. hierophantic yang memakan boleh membentangkan banyak komponen dalam kedua-dua bentuk kutub dan bukan kutub. Keputusan ini juga dibentangkan oleh AlGamdi et al. [41] kerana mereka mengenal pasti dan mengira 20 sebatian polifenol dalam benih A. hirerochuntica. Ekstrak mengandungi asid klorogenik dan asid hidroksibenzoik, tetapi komponen utama adalah flavon C-glikosida, C-diglycosides, O-glikosida, dan O-glikosida-C-glikosida yang terdapat terutamanya sebagai konjugat luteolin. Di samping itu, 14 daripada 20 sebatian dalam ekstrak hierofantik A. dipamerkanaktiviti antioksidanmenggunakan sistem pengesanan antioksidan dalam talian HPLC [41]. Menariknya, data semasa mengesahkan bahawa A. hierophantic kaya dengan sebatian fitokimia dan merupakan sumber antioksidan semulajadi yang baik dengan potensi manfaat kesihatan, seperti yang jarang ditonjolkan sebelum ini dalam biji benih [41]. Oleh itu, teh yang disediakan daripada keseluruhan serbuk tumbuhan adalah bentuk penggunaan tradisional; data menggambarkan sebatian bioaktif baru yang dikenal pasti dalam KEE dan KAE A. hirerochuntica, yang berbeza daripada yang terdapat dalam AlGamdi et al. [41]

Dalam banyak kajian, nefrotoksisiti teraruh CCl4-digunakan sebagai sistem model untuk menguji kesan nefroprotektif ekstrak/ubat tumbuhan [48,49]. Kajian semasa melihat kesan ekstrak A. hierophantic pada CCl4-teraruhbuah pinggangkerosakan, serta nefroproteksi dan potensi antioksidannya dalam tikus. Dalam kajian semasa, kumpulan rawatan CCl4 (GII) dengan ketara meningkatkan tahap kreatinin, urea, dan k dan menurunkan jumlah kepekatan protein dan albumin jika dibandingkan dengan GI. Ini mungkin kerana keracunan CCl4 adalah sumber utama penghasilan radikal bebas dalam banyak organ, termasuk hati, buah pinggang, paru-paru, otak, dan darah [50]. Ia juga telah diperhatikan bahawa selepas suntikan CCl4 pada tikus, kepekatan CCl4 diedarkan lebih sekata di buah pinggang daripada di hati [51], sejakbuah pinggangmempunyai pertalian tinggi untuk CCl4 dan mengandungi sitokrom P450, terutamanya dalam korteks. Radikal bebas yang paling biasa daripada CCl4 ialah radikal trichloromethyl (CCl3• ) dan radikal trichloromethyl peroxyl (CCl3O2• ) [52]. Radikal ini melekat pada protein intraselular, lipid membran sel, dan DNA, menyebabkan denaturasi protein, peroksidasi lipid, dan kerosakan DNA oksidatif yang membawa kepada kematian sel [53]. Sebaliknya, merawat CCl4-tikus dengan vit. Ekstrak E plus Se (GIII) dan A. hierophantic (GVI: VI) dengan cekap melemahkan kenaikan tahap kreatinin dan urea ini serta peningkatan albumin serum dan jumlah protein menjadi sangat hampir dengan paras mereka dalam GI. Ini mungkin disebabkan oleh sifat antioksidan dan kandungan fenolik yang kaya dengan ekstrak hierofantik A. dan kapasiti antioksidan dan aktiviti pengkelat vit. E plus Se, yang menghilangkan radikal bebas dengan itu menghalang kerosakan buah pinggang. Fitokimia adalah penghapus radikal bebas yang paling berkesan dan dianggap sebagai agen antioksidan yang unggul daripada tumbuhan [54]. Sebatian fenolik yang paling banyak ialah asid hidroksisinamik, seperti asid sinapik, antara sembilan sebatian fenolik yang dikenal pasti dalam KEE, manakala asid syringik adalah asid fenolik tertinggi di antara 21 asid fenolik yang dikenal pasti dalam KAE. Enam flavonoid dikenal pasti dalam KEE dan dua dalam KAE menggunakan analisis HPLC [55]. Tambahan pula, sebagai antioksidan, vit. E dipercayai melindungi tisu daripada bahaya yang disebabkan oleh metabolit oksigen reaktif. Selenium juga diiktiraf sebagai mineral surih penting untuk kesihatan manusia, melindungi sel daripada kesan merosakkan radikal bebas [22].

Dalam kajian semasa, pentadbiran CCl4 telah menurunkan GSH dan SOD dengan ketara dan meningkatkan tahap MDA dalambuah pingganghomogenat berbanding GI. Vit. Ekstrak E plus Se dan A. hierophantic memperbaiki kesan pelbagai CCl4 dengan memulihkan aktiviti agen antioksidan yang diubah seperti SOD dan GSH dan mungkin menyahaktifkan proses penghasilan MDA, seperti yang dilaporkan baru-baru ini [15,21,40,41] . GSH ialah antioksidan bukan enzimatik yang terdapat dalam semua sel mamalia. Dengan bentuk teroksidanya, GSSG, GSH bertindak sebagai kofaktor untuk banyak enzim penyahtoksik (GPx, GST, dan lain-lain) terhadap tekanan oksidatif dan mengekalkan keseimbangan redoks selular [47]. Penemuan ini adalah mengikuti penemuan Khan dan Siddique [56] dan Makni et al. [57], yang melaporkan bahawa CCl4 menurunkan tahap GSH dalam buah pinggang tikus. Rawatan dengan vit. Ekstrak E plus Se dan A. hierophantic menunjukkan perlindungan terhadap pengurangan tahap GSH yang dicetuskan oleh CCl4. Dalam konteks yang sama, SOD memangkinkan pemisahan dua molekul anion superoksida (*O2) kepada hidrogen peroksida (H2O2) dan oksigen molekul (O2), seterusnya menjadikan anion superoksida yang berpotensi berbahaya kurang berbahaya [58,59]. Keracunan CCl4 mengubah tahap ekspresi gen dengan mengurangkan SOD buah pinggang [60]. Penurunan dalam aktiviti SOD adalah indeks sensitif kerosakan selular. Ekstrak A. hierophantic kami yang diuji memperbaiki ketoksikan buah pinggang dengan mengurangkan tahap SOD. Ia mengambil bahagian dalam pelbagai proses enzimatik untuk mengurangkan kepekatan tindak balas detoksifikasi [61]. MDA ialah produk pertama peroksidasi lipid dan merupakan salah satu penanda penting bagi tekanan oksidatif. A. ekstrak hierofantik mengurangkan peningkatan paras MDA dan memulihkan jumlah kuasa antioksidan dalam4-buah pinggang tikus yang dirawat CCl. Kesan perlindungan ini mungkin disebabkan oleh aktiviti antioksidan kuat A. ekstrak hierofantik [15,21,40,41]. Keputusan ini juga mencadangkan bahawa ekstrak A. hierophantic boleh melemahkan tekanan oksidatif dengan mengurangkan tahap lipid peroksida dalam CCl4-buah pinggang tikus terdedah dan mencegah kerosakan buah pinggang. Keputusan ini bersetuju dengan keputusan aktiviti antioksida Zn pada CCl4-yang disebabkan nefrotoksisiti akut [62,63].

A. ekstrak hirerochuntica membentangkan kapasiti nefroproteksi yang berharga mengenaibuah pinggangujian fungsi (kreatinin, urea, K, TP, dan albumin) dan aktiviti antioksidan homogenat buah pinggang (GSH, SOD, MDA) dalam GIV, V, dan IV, masing-masing. Jumlah peratus nefroproteksi berbanding vit. Rawatan E plus Se mencatatkan tahap maksimum dalam kumpulan yang dirawat KAE (GV, 97.62 peratus ), kemudian KEE (GIV, 83.27 peratus ), dan kemudian KEE tambah KAE (GVI, 78.85 peratus), masing-masing, dalam susunan menurun. Ini mungkin disebabkan oleh perbezaan dalam kuantiti dan kualiti kandungan fenolik dan antioksidan ekstrak A. hirerochuntica, yang mempunyai hubungan dengan kapasiti antioksidan [15,19,22,40,42].

Penemuan histopatologi dalambuah pinggangadalah konsisten dengan anggaran biokimia kumpulan eksperimen yang disiasat. Pentadbiran CCl4 (GII) menyebabkan lesi glomerular dan tubular dengan vasocongestion di buah pinggang. Dogukan et al. [64] menemui corak histologi yang serupa dalam tisu buah pinggang tikus sebagai tindak balas kepada rawatan CCl4 yang berpanjangan. Ia juga dianggap bahawa perubahan histologi disebabkan oleh beban berlebihan fungsi nefron, yang membawa kepada disfungsi buah pinggang [65], dan/atau disebabkan oleh kemusnahan tisu yang diprovokasi sebagai akibat daripada penjanaan radikal bebas melalui metabolisme CCl4 [56,66] . Kesan vit. E plus Se dan A. ekstrak hierophantik untuk membaiki dan memulihkan kesan pemusnahan buah pinggang CCl4 adalah ketara. Ini mungkin kerana vit. E plus Se (sebagai antioksidan yang kuat) bertindak pada ROS yang disebabkan oleh CCl4 [67]. A. ekstrak hierophantik menindas CCl{10}}nefrotoksisiti akut disebabkan oleh peranan antioksidan dan sifat penghapusan radikal bebas sebatian fenolik yang terdapat dalam ekstrak A. hirerochuntica [22]. Penemuan kami adalah konsisten dengan penyelidik lain yang telah menunjukkan bahawa pelbagai derivatif tumbuhan mempunyai kesan farmakologi dengan menghapuskan penyalahgunaan CCl4 dan memulihkan kenormalan [6].

5. Kesimpulan

Keputusan kajian ini jelas menunjukkan bahawa tumbuhan A. hierophantic kaya dengan sebatian fenolik polar dan nonpolar dengan kapasiti antioksidan yang unggul, yang berkaitan secara langsung dengan kandungan fitokimia. A. hierophantic (terutamanya ekstrak akueus) melindungi tikus daripada CCl4-tegasan oksidatif dan akutbuah pinggangkecederaan, seperti yang dibuktikan oleh penurunan ketara dalam tahap MDA dan peningkatan aktiviti GSH dan SOD, serta pemberhentian perubahan biokimia dan histologi dalam buah pinggang. Keberkesanan perlindungan mungkin timbul daripada sifat antioksidan dan penghapusan radikal bebas bagi sebatian fenolik yang terdapat dalam ekstrak A. hierofantik. Ciri-ciri ini membantu menjelaskan keberkesanan ubat tumbuhan sebagai ubat herba. Lebih banyak penyelidikan diperlukan untuk menerangkan sepenuhnya prinsip aktif dalam A. hierophantic, dan kajian ini bertujuan untuk merangsang penyelidikan berkaitan yang lebih komprehensif untuk menawarkan data dan cadangan yang mencukupi untuk menentukan mekanisme dan dos yang selamat.

Sumbangan Pengarang:Pengkonsepan, TIA, YMA dan HB; metodologi, penyiasatan, HB dan HAA-R.; penyusunan data, TIA dan YMA; penulisan—penyediaan, semakan dan penyuntingan draf asal; HB dan HAA-R. Semua pengarang telah membaca dan bersetuju dengan versi manuskrip yang diterbitkan.

Pembiayaan:Para penyelidik ingin mengucapkan terima kasih kepada Dekan Penyelidikan Saintifik, Universiti Qassim, kerana membiayai penerbitan projek ini.

Penyata Ketersediaan Data:Data yang dibentangkan dalam kajian ini tersedia atas permintaan daripada pengarang yang berkaitan.

SingkatanABTS:2,2'-azino-bis(3-etilbenzena tiazolin-6-asid sulfonik); AOA:aktiviti antioksidan; BHA: hidroksianisole berbutil; BHA: hidroksianisole berbutil; DPPH: 1,1-difenil-2-pikril hidrazin; DW: berat kering; GA: asid gallic; GAE: asid gallic setara; GSH: glutation terkurang; HPLC-DAD: pengesanan tatasusunan diod kromatografi cecair berprestasi tinggi; KAE: A. ekstrak akueus hierophantik; KEE: A. ekstrak etanol hierofantik; MDA: malonaldehid; QE: quercetin equivalent; RAA: aktiviti antioksidan relatif; ROS: spesies oksigen reaktif; RSA: aktiviti pemusnahan radikal; Se: selenium; SE: ralat piawai; SOD: superoksida dismutase; TC: jumlah karotenoid; TC: jumlah karotenoid; TF: jumlah flavonoid; TE: Trolox setara; TFL: jumlah flavonol; TPC: jumlah sebatian fenolik.

References

1. Statistik, KD Penyakit Buah Pinggang Kronik di Amerika Syarikat. 2021. Tersedia dalam talian:(diakses pada 20 Julai 2021).

2. Ku, E.; Glidden, DV; Johansen, KL; Sarnak, M.; Tighiouart, H.; Grimes, B.; Hsu, CY Persatuan antara kawalan tekanan darah yang ketat semasa penyakit buah pinggang kronik dan kematian yang lebih rendah selepas permulaan penyakit buah pinggang peringkat akhir. Buah Pinggang Int. 2015, 87, 1055–1060.

3. Tumlin, JA; Madaio, MP; Hennigar, R. Idiopathic IgA nephropathy: Patogenesis, histopatologi, dan pilihan terapeutik. Clin. J. Am. Soc. Nephrol. 2007, 2, 1054–1061.

4. Olah, G.; Reddy, VP; Prakash, GS; Reaksi, ensiklopedia teknologi kimia FC Kirk-Othmer. Kanta Lekap 1978, 720–742.

5. Ozturk, F.; Ucar, M.; Ozturk, IC; Vardi, N.; Batcioglu, K. Karbon tetraklorida yang disebabkan nefrotoksisiti dan kesan perlindungan betaine dalam tikus Sprague-Dawley. Urologi 2003, 62, 353–356.

6. Ogeturk, M.; Kus, I.; Colakoglu, N.; Zararsiz, I.; Ilhan, N.; Sarsilmaz, M. Asid kafein phenethyl ester melindungi buah pinggang daripada ketoksikan karbon tetraklorida dalam tikus. J. Ethnopharmacol. 2005, 97, 273–280.

7. Slater, Mekanisme Radikal Bebas TF dalam Kecederaan Tisu. Dalam Fungsi Sel dan Penyakit; Cañedo, LE, Todd, LE, Packer, L., Jaz, J., Eds.; Springer: Boston, MA, Amerika Syarikat, 1988; ms 209–218.

8. Khan, MR; Rizvi, W.; Khan, GN; Khan, RA; Shaheen, S. Karbon tetraklorida yang disebabkan nefrotoksisiti dalam tikus: Peranan pelindung Digerati muricata. J. Ethnopharmacol. 2009, 122, 91–99.

9. Afsar, T.; Khan, MR; Razak, S.; Ullah, S.; Mirza, B. Aktiviti antipiretik, anti-radang dan analgesik Acacia hydaspica R. Parker dan analisis fitokimianya. Pelengkap BMC. Altern. Med. 2015, 15, 1–12.

10. Al-Qabba, MM; El-Mowafy, MA; Althwab, SA; Alfheeaid, HA; Aljutaily, T.; Barakat, H. Profil fenolik, aktiviti antioksidan, dan meningkatkan keberkesanan pucuk Chenopodium quinoa terhadap tekanan oksidatif yang disebabkan oleh CCl4 dalam tikus. Nutrien 2020, 12, 2904.

11. Al Zhrani, MM; Althwab, SA; Aljutaily, T.; Alfheeaid, HA; Ashish, IS; Barakat, H. Kesan perlindungan minuman berasaskan moringa terhadap hiperlipidemia dan hiperglisemia dalam tikus yang disebabkan oleh diabetes jenis 2. Makanan Re. 2021, 5, 279–289.

12. Khalifa, I.; Nawaz, A.; Sobhy, R.; Althwab, SA; Barakat, H. Antosianin terpoliasilasi membina rangkaian dengan residu dyad pemangkin 3CLpro 2019-nCoV daripada antosianin monomerik: Kajian aktiviti perhubungan struktur dengan 10 antosianin menggunakan pendekatan dalam siliko. J. Mol. Graf. Model. 2020, 100, 107690.

13. Yusof, J.; Mahdy, ZA; Noor, RM Penggunaan ubat pelengkap dan alternatif dalam kehamilan dan kesannya terhadap hasil obstetrik. Pelengkap. Di sana. Clin. Berlatih. 2016, 25, 155–163.

14. Salah, SH; Abdou, HS; Abd El-Azeem, A.; Abdel-Rahim, E. Kesan antioksida beberapa tumbuhan ubatan sebagai agen hipoglikemik pada penyimpangan kromosom dan metabolisme asid nukleik yang tidak normal yang dihasilkan oleh tekanan diabetes pada tikus albino dewasa lelaki.J. Diabetes Mellit. 2011, 1, 6–14.

15. Daur, I. Sifat kimia herba perubatan Kaff Maryam (Anastatica hierochuntica L.) dan kaitannya dengan penggunaan ubat rakyat. Afr. J. Mikrobiol. Res. 2012, 6, 5048–5051.