Yishen Qingli Heluo Granule dalam Rawatan Penyakit Buah Pinggang Kronik: Analisis Farmakologi Rangkaian Dan Pengesahan Eksperimen

latar belakang:Penyakit buah pinggang yang kronik(CKD) dianggap sebagai masalah kesihatan awam global dengan morbiditi dan kematian yang tinggi. Butiran Yishen Qingli Heluo (YQHG) adalah wakilperubatan tradisional Cina(TCM) ubat untukrawatan klinikal CKD. Kajian ini bertujuan untuk meneroka mekanisme YQHG pada CKD melalui farmakologi rangkaian dan pengesahan eksperimen.

Kaedah:Sistem Perubatan Tradisional CinaPangkalan data Farmakologi (TCMSP) dan perlombongan literatur berskala luas digunakan untuk menyaring sebatian aktif YQHG. Pelbagai alat bioinformatik dan pangkalan data dalam talian telah digunakan oleh kami untuk mendapatkan sasaran YQHG dan CKD yang berkaitan. Sasaran persimpangan antara YQHG dan CKD dianggap sebagai sasaran calon. Rangkaian interaksi sasaran kompaun, calon herba, dan protein-protein telah dibina dan divisualisasikan untuk analisis topologi. Analisis pengayaan GO dan KEGG telah dijalankan untuk menentukan proses biologi dan laluan isyarat. Docking molekul digunakan untuk mengesahkan kebolehpercayaan farmakologi rangkaian. Akhirnya, penilaian farmakologi dilakukan untuk meneroka mekanisme YQHG terhadap CKD pada model nefrectomy 5/6.

Keputusan:Tujuh puluh sembilan sasaran calon, sepuluh proses biologi teras dan satu laluan isyarat utama (p53) telah disaring. PTGS2 dikenal pasti sebagai sasaran utama berdasarkan rangkaian H-CT. Docking molekul menunjukkan bahawa Quercetin, Kaempferol, Luteolin adalah tiga sebatian utama dengan aktiviti pengikatan terbaik. Di samping itu, IL6 dan Quercetin boleh membentuk kompleks yang stabil dengan pertalian mengikat tinggi (-7.29 kcal/mol). Eksperimen in vivo mendedahkan bahawa YQHG meningkatkan fungsi buah pinggang dan fibrosis dalam 5/6 tikus nefrektomi. Selain itu, ekspresi penurunan PTGS2, IL6, dan peningkatan ekspresi p53 diperhatikan dalam tisu buah pinggang. Terutamanya, mikrobiota usus tikus yang dirawat dengan YQHG telah dibentuk semula, yang dicirikan oleh nisbah Firmicutes/Bacteroidota yang berkurangan.

Kesimpulan: Keputusan kami meramalkan dan mengesahkan potensi sasaran YQHG padaCKDdari perspektif holistik, dan memberikan hala tuju berharga untuk penyelidikan lanjut YQHG.

Kata kunci:Butiran Yishen Qingli Heluo, farmakologi rangkaian,penyakit buah pinggang yang kronik, 5/6 nefrektomi, mikrobiota usus

DAPATKAN EKSTRAK CISTANCHE ORGANIK SEMULAJADI DENGAN 25% ECHINACOSIDE DAN 9% ACTEOSIDE UNTUK JANGKITAN BUAH PINGGANG

pengenalan

Penyakit buah pinggang yang kronik(CKD) semakin diiktiraf sebagai isu kesihatan awam global dengan morbiditi tinggi (8724 setiap 100,000 orang) dan kematian (15.9 setiap 100,000 orang).1 Faktor risiko dan laluan penyakit yang membawa kepada fungsi buah pinggang terjejas adalah pelbagai dan kurang jelas. Akibatnya, beberapa strategi tersedia untuk melambatkan perkembangan CKD, dengan kebanyakan strategi rawatan semasa tertumpu pada pengurangan proteinuria dan menurunkan tekanan darah dan asid urik. Sebagai contoh, perencat sistem renin-angiotensin adalah ubat terapeutik utama untuk rawatan CKD dari segi mengurangkan proteinuria dan melindungi fungsi buah pinggang.2,3 Walau bagaimanapun, kajian melaporkan bahawa ubat-ubatan ini mungkin tidak membantu mencegahperkembangan CKDkepadapenyakit buah pinggang peringkat akhir(ESRD);4 selain itu, ia mungkin menyebabkan beberapa siri kesan sampingan, seperti peningkatan serum kalium, kreatinin, dan risiko kanser.5–8 Pada masa ini, bilangan orang yang menerima terapi penggantian buah pinggang telah melebihi 2.6 juta dan dijangka akan dua kali ganda kepada 5.4 juta di seluruh dunia menjelang 2030.9 Sebaik sahaja CKD berkembang menjadi ESRD, ia bukan sahaja akan membawa beban ekonomi kepada pesakit tetapi juga menjejaskan kualiti hidup mereka ke tahap yang besar. Sehubungan itu, terdapat keperluan mendesak untuk meneroka ubat terapeutik yang berpotensi untuk mencegah dan merawat CKD dalam bidang ini.

Perubatan Cina Tradisional (TCM) telah diiktiraf sebagai pilihan rawatan yang berpotensi untuk CKD kerana keberkesanannya yang terbukti, pelbagai aplikasi dan sedikit kesan sampingan. Banyak kes telah menunjukkan bahawa herba TCM dianggap sebagai sumber alternatif untuk melambatkan perkembangan CKD disebabkan oleh pengalaman konvensional dan ciri berbilang sasaran.10–12 Yishen Qingli Heluo granule (YQHG) dibangunkan secara bebas oleh Hospital Perubatan Cina Wilayah Jiangsu sebagai Ubat TCM untuk rawatan klinikal CKD. Kajian klinikal menunjukkan bahawa YQHG boleh memperbaiki gejala klinikal dan mengurangkan tahap kreatinin serum (Scr). Selain itu, perkembangan CKD3 kepada CKD4 juga boleh ditangguhkan oleh YQHG.13,14 Kajian terdahulu kami menunjukkan bahawa YQHG boleh melemahkan kecederaan buah pinggang dengan mengawal selia autophagy, apoptosis, dan tindak balas keradangan.15 Walau bagaimanapun, kebanyakan kajian mengenai granul terutamanya tertumpu pada beberapa laluan isyarat klasik seperti MAPK, TGF- dan laluan yang berkaitan, yang kurang komprehensif. Disebabkan ketiadaan kaedah sistematik yang berkesan pada masa lalu, penyelidikan mengenai sebatian berkesan, sasaran dan mekanisme farmakologi yang sepadan YQHG terhadap CKD adalah terhad. Oleh itu, penyelidikan telah tertumpu kepada mekanisme monomer atau sebatian aktif YQHG dalam merawat CKD. Walau bagaimanapun, YQHG adalah seperti orkestra canggih pelbagai instrumen. Bagaimana 10 herba ini berfungsi bersama untuk memainkan repertoir yang sempurna masih perlu diterokai. Oleh itu, adalah penting untuk mencari jalan baharu untuk memahami secara menyeluruh mekanisme YQHG terhadap CKD. Farmakologi rangkaian ialah metodologi canggih, yang pertama kali dicadangkan oleh Hopkins.16 Kaedah ini konsisten dengan pandangan holistik TCM. Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, ia telah digunakan secara meluas untuk menjelaskan mekanisme TCM dalam rawatan penyakit kronik, termasuk CKD.17–19

Dalam kajian ini, kami mula-mula menggunakan pendekatan farmakologi rangkaian sebagai alat untuk meneroka sebatian aktif YQHG dan menyiasat mekanisme tindakan asasnya dalam rawatan CKD. Kemudian, dok molekul digunakan untuk mengesahkan kebolehpercayaan farmakologi rangkaian. Di samping itu, kami mengesahkan potensi nefroprotektif YQHG dan ungkapan sasaran utama dalam 5/6 tikus nefrektomisasi. Perlu diingat bahawa kajian terdahulu telah menunjukkan bahawa mikrobiota usus memainkan peranan penting dalam kesan terapeutik TCM.20–22 Mikrobiota usus boleh mengubah komposisi kimia herba TCM untuk menjadikannya mempunyai bioavailabiliti, aktiviti biologi atau ketoksikan yang berbeza daripada pendahulunya. Herba TCM juga boleh membentuk semula kepelbagaian dan komposisi mikrobiota usus untuk mengurangkan penyakit yang berkaitan.23 Oleh itu, penjujukan rRNA 16S digunakan untuk menganalisis hubungan antara herba TCM, CKD dan profil mikrobiota usus, meletakkan asas untuk penyelidikan lanjut tentang YQHG. Butiran proses analisis penyelidikan ini ditunjukkan dalam Rajah 1.

Bahan dan Kaedah

Analisis Farmakologi Rangkaian

Memperoleh Sebatian Aktif dan Sasaran Berkaitan dalam Sebatian YQHG bagi setiap herba dalam YQHG diperoleh daripada pangkalan data TCMSP (https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php) dan perlombongan kesusasteraan berskala luas. Kompaun telah ditapis melalui sistem penilaian ADME, di mana bioavailabiliti oral (OB) dan keserupaan dadah (DL) adalah parameter utama. OB Lebih besar daripada atau sama dengan 30% dan DL Lebih besar daripada atau sama dengan 0.18 ialah nilai ambang kaedah penapisan ADME yang disyorkan oleh pangkalan data TCMSP.24 TCMSP, STITCH (http://stitch.embl.de /), pangkalan data PubChem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/) dan Swiss Target Prediction (//www.swisstargetprediction.ch/) telah digunakan untuk mengenal pasti sasaran yang sepadan dengan setiap sebatian aktif dalam YQHG . Pangkalan data Uniprot (https://www. uniprot.org/) telah digunakan untuk menyeragamkan keputusan.

Memancing untuk Sasaran Calon YQHG dalam Merawat Sasaran CKD yang berkaitan dengan CKD diperoleh daripada GeneCards (https://www.genecards.org/), OMIM (http://www.omim.org/), DisGeNET (https:// pangkalan data www.disgenet.org/), TTD (http://db.idrblab.net/ttd/) dan MalaCards (https://www.malacards.org/). Semua sasaran CKD dan YQHG yang dikumpul telah digabungkan selepas diseragamkan oleh pangkalan data Uniprot.

Sasaran calon YQHG terhadap CKD telah dikenal pasti oleh platform Venn (//bioinformatics.psb.ugent.be/ web tools/Venn/), dan hasilnya digunakan untuk analisis lanjut.

Pembinaan Rangkaian

(1) Compound-target (C-T) network of YQHG: The data of active compounds and their corresponding targets were imported into Cytoscape software (v3.6.0, Boston, MA, USA) to construct the C-T interaction network. The degree centrality, betweenness centrality, and closeness centrality were evaluated by the Network Analyzer plug-in of Cytoscape software. According to the three topological parameters of each node, the key active compound of YQHG was selected and analyzed. (2) Herb-Candidate target (H-CT) network of YQHG: The data of 10 herbs and candidate targets were imported into Cytoscape software to construct the H-CT interaction network. The pie chart was used to indicate the herb to which the candidate target (represented by circular nodes) belonged. (3) Protein-protein interaction (PPI) network of candidate targets: The visualization of PPI network was obtained by combining the STRING database (https://string-db.org/) and Cytoscape software. The species were limited to Homo sapiens, and the PPI confidence score>0.9 ialah parameter penapisan yang disyorkan oleh pangkalan data STRING.25 Nod dan tepi mewakili sasaran calon dan interaksi protein-protein dalam rangkaian PPI, masing-masing. Dalam kajian ini, protein sasaran teras telah dipilih dan dikenal pasti oleh parameter " Darjah ". Ijazah digunakan untuk menilai kepentingan topologi nod dalam rangkaian, yang dikira oleh pemalam Penganalisis Rangkaian perisian Cytoscape.

Analisis Pengayaan Laluan GO dan KEGG

Untuk menyiasat syarat utama proses biologi GO dan laluan isyarat kritikal sasaran calon, pakej R (clusterProfiler, versi 4.1.0) telah digunakan untuk analisis pengayaan GO dan KEGG.26 Nilai P terlaras<0.05 was considered statistically significant.

Pelabuhan Molekul

Dalam kajian dok molekul, perisian Autodock Vina 1.1.2 digunakan untuk menentukan mod pengikatan dan interaksi antara sebatian aktif utama YQHG dan protein hab yang dikenal pasti berdasarkan analisis PPI dan penganalisis rangkaian. Pendekatan ini melibatkan langkah-langkah utama berikut: (1) Penyediaan molekul ligan. Struktur 3D sebatian aktif telah dimuat turun dalam format mol2 daripada pangkalan data TCMSP. AutodockTools 1.5.6 telah digunakan untuk membuka molekul ligan, menambah hidrogen, cas gasteiger, mengesan akar ligan, mencari dan menentukan ikatan boleh putar, dan akhirnya menyimpannya dalam format pdbqt. (2) Penyediaan molekul reseptor. Struktur 3D protein hub telah dimuat turun dari RCSB Protein Data Bank (www.rcsb.org). AutodockTools 1.5.6 telah digunakan untuk memuat naik protein. Selepas menambah semua atom hidrogen, mengira cas Gasteiger, dan menggabungkan hidrogen bukan kutub, ia ditakrifkan sebagai reseptor dan disimpan sebagai format pdbqt. (3) Penetapan parameter dok. Alat AutoGrid untuk menetapkan parameter kotak dok (koordinat XYZ dan saiz grid). Untuk meningkatkan ketepatan pengiraan, nilai kehabisan ditetapkan kepada 20. (4) Perlaksanaan dan output. Perisian Autodock Vina 1.1.2 telah digunakan untuk dok separa fleksibel, dan konformasi terbaik dipilih sebagai konformasi dok akhir. (5) Analisis dan visualisasi. Konformasi dengan pertalian pengikatan terbaik telah dipilih untuk analisis mod dok. Perkaitan pengikatan protein adalah kurang daripada -5 kcal/mol, menunjukkan bahawa protein mempunyai aktiviti pengikatan tertentu dengan kompaun tersebut.27 Keputusan dok kompaun dan protein dengan konformasi terbaik telah dianalisis dan divisualisasikan oleh perisian PyMol.

Penyediaan YQHG

YQHG (nombor kelompok 20051031) terdiri daripada 10 butiran TCM tunggal: Angelicae Sinensis Radix (Danggui, DG), Achyranthis Bidentatae Radix (Niuxi, NX), Centella Asiatica (L.) Urban (Jixuecao, JXC), Polygonati Rhizoma (Huang HJ), Smilacis Glabrae Rhixoma (Tufuling, TFL), Radix Rhei Et Rhizome (Dahuang, DH), Pyrrosiae Folium (Shiwei, SW), Hedysarum Multijugum Maxim (Huangqi, HQ), Serissa Japonica (Thunb.) Thunb (Liuyuexue, LYX ), Polygoni Cuspidati Rhizoma Et Radix (Huzhang, HZ), yang dikeluarkan oleh Jiangyin Tianjiang Pharmaceutical Co., Ltd. (Wuxi, Jiangsu, China). Nisbah granul TCM tunggal kepada ubat mentah yang sepadan disenaraikan dalam Jadual 1. Semua butiran di atas telah disahkan oleh Profesor Wei Sun (Universiti Perubatan Cina Nanjing, Nanjing, Jiangsu, China). Format dos ubat berasaskan berat (setiap kg) digunakan dalam kajian ini untuk mengira dos YQHG dalam tikus.28 Dikira dengan berat badan dewasa 70 kg, dos setara klinikal yang ditukar kepada tikus ialah 2.8g/kg, iaitu digunakan sebagai dos sederhana YQHG. Dos rendah dan dos tinggi dalam kajian ini masing-masing adalah separuh dan dua kali ganda dos sederhana YQHG. UHPLC-MS telah dijalankan untuk mengesahkan kestabilan dan keberkesanan ekstrak YQHG.

Pembinaan 5/6 Nephrectomy dan Pentadbiran YQHG

Tikus jantan Sprague Dawley (SD) (no. 20210312Aazz0619000112, 6–8 minggu, 200–230g) telah disediakan oleh Vital River Experimental Animal Co., Ltd. (Zhejiang, China). Tikus ditempatkan di pusat haiwan eksperimen bebas patogen khusus di Universiti Perubatan Cina Nanjing. Secara khusus, tikus ditempatkan di dalam sangkar plastik dan dibekalkan dengan makanan dan air standard yang mencukupi secara bebas. Keadaan persekitaran bilik tempat tikus dibesarkan termasuk suhu (22±2 darjah ), kelembapan (50±10%), dan kitaran cahaya/gelap 12/12 jam. Semua eksperimen haiwan dilakukan mengikut protokol yang diluluskan oleh Jawatankuasa Penjagaan dan Penggunaan Haiwan Universiti Perubatan Cina Nanjing [nombor kebenaran 202101A047]. Garis panduan yang diikuti untuk kebajikan haiwan makmal ialah Garis Panduan Haiwan Makmal untuk Kajian Etika Kebajikan Haiwan (GB/T 35892–2018). Semua pembedahan dilakukan di bawah anestesia yang sesuai, dan segala usaha dilakukan untuk meminimumkan penderitaan haiwan.

CKD diinduksi dalam 24 tikus dengan nefrektomi 5/6 dua langkah seperti yang diterangkan sebelum ini.29 Prosedur kedua-dua pembedahan adalah seperti berikut: ablasi 2/3 parenkim buah pinggang kiri (elakkan hilum buah pinggang), dan kemudian dengan cepat diletakkan span gelatin pada permukaan hirisan untuk menghentikan pendarahan selama 4–5 minit. Seminggu kemudian, nefrektomi unilateral sebelah kanan dilakukan. Pedikel buah pinggang diikat dengan jahitan steril 3–0, dan kemudian buah pinggang kanan dipotong. Rongga perut disiram dengan 0.9% garam steril untuk mengelakkan lekatan perut selepas pembedahan selepas dua pembedahan. Induksi dan penyelenggaraan anestesia (penggunaan Isoflurane ialah 6mL/j dan 3mL/j, masing-masing) semasa operasi dijalankan dengan Mesin Anestesia Gas Rodent (Yuyan-ABS). Enam ekor tikus yang menjalani operasi palsu digunakan sebagai kawalan. Tikus CKD dibahagikan secara rawak kepada empat kumpulan (n=6 untuk setiap kumpulan). Subkumpulan dan dos harian bahan gavage adalah seperti berikut: I) Kumpulan model (air steril); II Kumpulan YQHG Dos Rendah (1.4g/kg YQHG); III) YQHG Dos Pertengahan (2.8g/kg YQHG); IV) YQHG Dos Tinggi (5.6g/kg YQHG). Semasa eksperimen, semua tikus ditimbang dua kali seminggu, dan dos ubat diselaraskan dengan sewajarnya. Pada akhir eksperimen, sampel air kencing dan najis diambil daripada tikus sebelum dikorbankan. Sampel darah dan tisu buah pinggang telah dikumpul untuk kajian lanjut.

Reagen

Scr, blood urea nitrogen (BUN) dan kit ujian kuantiti protein urin (C011-2-1, C013-2-1, C035-2-1) telah dibeli daripada Nanjing Jiancheng Biotech Co., Ltd. (Nanjing, Jiangsu, China). Kit IL-6 ELISA (bsk00042) telah dibeli daripada Nanjing Jinyibai Biotech Co., Ltd. (Nanjing, Jiangsu, China). Kit ujian kepekatan protein BCA (PC0020) diperoleh daripada Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd. (Beijing, China). Antibodi Anti-PTGS2 (ab179800), Antibodi Anti-p53 (ab227655), antibodi Anti-GAPDH (ab181602) dan Kambing Anti-Arnab IgG H&L (HRP) (ab6721) telah dibeli dari Abcam (Cambridge, UK).

Scr, BUN dan Kuantifikasi Protein Kencing 24j

Tahap protein kencing Scr, BUN dan 24 jam diukur menggunakan Scr, BUN dan kit ujian kuantiti protein kencing mengikut arahan. Antaranya, kuantifikasi protein urin dilakukan dengan pengumpulan air kencing 24 jam dengan sangkar metabolik pada hari sebelum tikus dikorbankan. Formulanya adalah seperti berikut: Protein urin (mg/24j)=kepekatan protein urin (mg/L)×24j isipadu air kencing (L).

Penilaian Histopatologi Tisu Buah Pinggang

Buah pinggang tikus dibilas dengan PBS (Solarbio) yang telah disejukkan dan kemudian difiksasi dalam 4% paraformaldehyde (biosharp). Bahagian (4μm) dipotong daripada tisu buah pinggang tertanam parafin dan diwarnai dengan hematoxylin dan eosin (H&E) atau trichrome Masson (Masson) (Solarbio). Imej mikroskop cahaya diambil gambar menggunakan Pengimbas Slaid Digital (Spesifikasi jenis: Pannoramic DESK, P-MIDI, P250; Syarikat: 3D HISTECH; Negara: Hungary; Perisian pengimbasan: Pannoramic Scanner). Langkah-langkah untuk mengira luas fibrosis glomerular dan tubulointerstitial adalah seperti berikut: Pertama sekali, perisian CaseViewer2.4 digunakan untuk memilih kawasan glomerular (tubulointerstital) untuk pengimejan 40×. Cuba penuhkan seluruh medan pandangan dengan tisu dan pastikan cahaya latar belakang setiap imej adalah konsisten. Kedua, perisian Image-Pro Plus 6.0 melakukan analisis imej, menetapkan piksel sebagai unit standard, dan dua medan pandangan telah dipilih untuk setiap kepingan. Akhir sekali, kawasan fibrosis dinilai, iaitu peratusan kawasan fibrosis (%)=kawasan fibrosis glomerular (tubulointerstital)/kawasan glomerular (tubulointerstitial)×100%.

Analisis Mikrobiota Usus

Najis semua tikus dalam lima kumpulan (Sham, Model, LD YQHG, MD YQHG, HD YQHG) telah dikumpulkan untuk analisis mikrobiota usus. Empat langkah utama yang terlibat dalam penjujukan mikrobiota usus adalah seperti berikut: I) Pengekstrakan DNA genom: Jumlah DNA najis diekstrak oleh Kit DNA Tanah EZNA® (Omega Bio-tek) mengikut protokol pengilang. Kepekatan dan ketulenan DNA dipantau pada 1% gel agarose. II) Penguatan PCR: Rantau V3-V4 gen 16S rRNA telah dikuatkan menggunakan primer khusus (338F_806R) dengan kod bar. Penguatan PCR telah dijalankan menggunakan kit polimerase DNA TransStart Fastpfu. III) Kuantifikasi, pencampuran dan penulenan produk PCR: Rujuk kepada keputusan kuantifikasi awal elektroforesis, QuantiFluor™ -ST Assay Kit (Promega) telah digunakan untuk mengesan dan mengukur produk PCR, dan kemudian mencampurkan perkadaran yang sepadan mengikut keperluan penjujukan bagi setiap sampel. Kemudian, campuran produk PCR telah disucikan dengan Kit Pengekstrakan Gel GeneJET (Thermo Fisher Scientific). IV) Penyediaan dan penjujukan perpustakaan: Pemprofilan telah dijalankan pada platform MiSeq (Illumina, Inc., San Diego, CA). Pelarasan Panjang Pantas Bacaan Pendek (FLASH, Versi 1.2.11) telah digunakan untuk menapis data penjujukan rRNA 16S. Unit taksonomi operasi (OTU) telah dipilih pada potongan persamaan 97%, dan amplikon yang telah disucikan telah disusun pada platform Illumina MiSeq di Majorbio Biopharm Technology Co. Ltd. (Shanghai, China) mengikut protokol standard.

Western Blot dan ELISA

Jumlah protein sampel buah pinggang beku telah diekstrak dengan penimbal lisis RIPA (Beyotime) yang mengandungi 1% PMSF (Beyotime). Kepekatan protein ditentukan oleh kit ujian kepekatan protein BCA (Solarbio) mengikut arahan. Protein dipisahkan oleh gel SDS-PAGE dan dipindahkan ke membran PVDF (Solarbio). Selepas menyekat dengan 5% BSA (Solarbio), membran diinkubasi dengan antibodi utama PTGS2 (1:1000), p53 (1:1000), GAPDH (1:10,000) pada 4 darjah semalaman. Selepas itu, membran dibasuh dengan TBST (Solarbio) dan diinkubasi selama 60 minit pada suhu bilik dengan Goat Anti-Arnab IgG H&L (HRP) (1:20,000). Membran telah diinkubasi dengan Kit Pengesanan ECL Ultrasensitif (Proteintech) selama 1-2 minit dan kemudian dikesan pada Sistem Pengimejan Gel BIO-RAD ChemiDoc XRS+ (Bio-Rad, California, Amerika Syarikat). Nilai kelabu jalur protein dianalisis menggunakan perisian Makmal Imej (Bio-Rad).

PBS telah ditambahkan pada tisu buah pinggang (1mL/0.1g), dan sampel yang dihomogenkan elektro telah disentrifugasi untuk mengumpul supernatan. Selepas itu, kit IL-6 ELISA tikus telah digunakan untuk mengesan ungkapan IL-6 mengikut arahan.

Analisis statistik

Semua data dinyatakan sebagai min ± SEM. Perisian GraphPad Prism 9.0 (GraphPad, CA, USA) telah digunakan untuk analisis statistik dan pembinaan imej. Kami menggabungkan plot QQ (Tambahan Rajah 1) dengan ujian Shapiro-Wilk untuk menilai kenormalan data. Untuk data taburan normal, ANOVA sehala diikuti dengan ujian Tukey telah digunakan. Bagi data yang tidak bertaburan secara normal, ujian Kruskal-Wallis diikuti dengan ujian jumlah pangkat Wilcoxon bukan parametrik telah digunakan. hlm<0.05 was considered statistically significant.

Perkhidmatan Sokongan Wecistanche-Pengeksport cistanche terbesar di China:

E-mel:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Beli Untuk Butiran Spesifikasi Lebih Lanjut:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

DAPATKAN EKSTRAK CISTANCHE ORGANIK SEMULAJADI DENGAN 25% ECHINACOSIDE DAN 9% ACTEOSIDE UNTUK JANGKITAN BUAH PINGGANG