Kesan Daya Maju Dan Antioksida Serbuk Beras Penyejukan Tradisional (bedak Sejuk) Diperbuat Daripada Oryza Sativa Ssp. Indica Dan Oryza Sativa Ssp. Japonica Pada Sel Melanoma B164A5 yang Disebabkan UVB

Hubungi: ali.ma@wecistanche.com

Ahmad Rohi Ghazali1 *, Raveena Vaidheswary Muralitharan1 , Chan Kam Soon1 , Tharsini Salyam1 , Nurul Najihah Ahmad Maulana1 , Ummul Aqeela Balqees Mohamed Thaha1 , Rasyidah Mohamad Halim1 , Sajidah Suhaifi1 Muhamad Haziq Md Khalid1 , Adibah Hanis Ahmad1 , Noorhisham Tan Kofli2

Abstrak

Latar belakang:Serbuk beras penyejukan tradisional (bedak sejuk) adalah berasaskan beras yang ditapaiKosmetikyang digunakan topikal pada kulit seseorang, sebagai topeng muka semalaman. Mengikut testimoni pengguna,bedak sejukmencantikkan dan memutihkan kulit, di mana faedah ini boleh digunakan sebagai agen chemopreventive melanoma yang berpotensi.

Objektif:Justeru kajian ini bertujuan untuk menentukan kesanbedak sejukdiperbuat daripada Oryza sativa ssp. indica (Indica) dan Oryza sativa ssp. japonica (Japonica) pada sel melanoma B164A5 yang disebabkan oleh UVB, dan juga mengenal pastiAntioksidankapasiti kedua-dua jenis bedak sejuk.

Kaedah:Dos optimum Indica dan Japonica bedak sejuk untuk merawat sel-sel adalah ditentukan melalui ujian MTT. Kemudian,Antioksidankapasiti kedua-dua jenisbedak sejuktelah ditentukan menggunakan FraP assay.

Keputusan:Dari ujian MTT, didapati bahawa Indica dan Japonica bedak sejuk tidak menunjukkan sitotoksik kesan pada sel. Oleh itu, tiada IC50 boleh diperolehi dan dua dos yang lebih tinggi, 50 dan 100 g/L dipilih untuk rawatan. Dalam ujian FRAP, Indica bedak sejuk pada 50 dan 100 g / L menunjukkan nilai FRAP 0.003 ± 0.001 μg AA (asid askorbik)/g bedak sejuk dan 0.004 ± 0.0003 μg AA/g ofbedak sejuk. Manakala Japonica bedak sejuk pada 50 g/L mempunyai nilai FRAP yang sama seperti Indica bedak sejuk pada 100 g / L. Bagi Japonica bedak sejuk pada 100 g / L, ia menunjukkan TertinggiAntioksidankapasiti dengan nilai FRAP 0.01 ± 0.0007 μg AA/g bedak sejuk yang secara statistik penting (p< 0.05)="" when="" compared="" to="" other="" tested="">

Kesimpulan:Kesimpulannya, Japonicabedak sejukmempunyai yang lebih tinggiAntioksidankapasiti berbanding dengan Indica bedak sejuk walaupun kedua-duanya tidak sitotoksik terhadap Sel. Walau apa pun, siasatan lanjut perlu dilakukan sebelum bedak sejuk boleh dibangunkan sebagai melanoma yang berpotensi ejen chemoprevention.

Kata kunci:Bedak sejuk- nasi yang ditapai- ditapaiKosmetik- Oryza sativa Indica- Oryza sativa Japonica

Klik kepadaekstrak cistanche dan cistanche deserticola ma for antioxidant

Pengenalan

Organ terbesar tubuh manusia adalah kulit, yang menyumbang 16% daripada berat badan manusia. The epidermis kulit berfungsi sebagai lapisan pelindung yang memisahkan organisma dari persekitaran luaran. Ini adalah penting dalam mengatasi tekanan alam sekitar seperti sebagai cahaya ultraviolet (UV). Apabila cahaya UV menembusi epidermis, pigmen melanin dalam bentuk keratinosit penutup pelindung di atas nukleus keratinosit. Ini memberikan perlindungan untuk kulit terhadap penembusan cahaya UV serta meneutralkan spesies oksigen reaktif (ROS) yang telah dihasilkan (D'Orazio et al., 2013; Aluwi et al., 2016; Woolridge Cooper, 2018).

Walau bagaimanapun, peningkatan pendedahan kepada cahaya UV adalah punca utama hiperpigmentasi dan kerosakan kulit (Chan et al., 2014; Persatuan Kanser Amerika, 2020). Cahaya UV dari Matahari yang menembus kulit adalah UVA (90 - 95 %) dan sinar UVB (5 - 10 %), di mana sejauh mana tahap kerosakan kulit bergantung pada panjang gelombang masing-masing Ray. Sinar UVA mempunyai panjang gelombang yang lebih panjang (320 – 400 nm) yang menembusi jauh ke dalam dermis dan menghasilkan percuma pembentukan radikal, terutamanya ROS. Bagi sinaran UVB, dengan panjang gelombang yang lebih pendek (280 - 320 nm) yang menembusi sehingga lapisan epidermal sahaja, sinaran merosakkan DNA yang seterusnya menyebabkan mutasi. Gabungan pembentukan ROS ini dan mutasi akhirnya menyumbang kepada perkembangan kanser kulit (Sander et al., 2003; Pfeifer dan Besaratinia, 2012; D'Orazio et al., 2013; Kamarulzaman et al., 2017; Pavel et al., 2017; Nagapan et al., 2018).

Sejenis kanser kulit yang timbul akibat pendedahan berlebihan kepada cahaya UV adalah melanoma. Melanoma berlaku apabila melanosit tumbuh di luar kawalan kerana mutasi di DNA. Walaupun melanoma menyumbang hanya kurang daripada 10 % daripada semua kanser kulit, ia menyumbang kepada majoriti kulit kematian yang berkaitan dengan kanser. Ini boleh dikaitkan dengan melanoma potensi metastatik yang tinggi dan ketahanan terhadap terapi (Pfeifer dan Besaratinia, 2012; Persatuan Kanser Amerika, 2020). Oleh itu, strategi chemoprevention melanoma lebih sesuai dalam menangani kejadian penyakit ini (Chhabra et al., 2017).

Selaras dengan strategi chemoprevention melanoma, idea untuk menggunakan tempatanKosmetikproduk yang mempunyai berpotensi untuk mengurangkan penjanaan ROS dan mutasi pada kulit manusia muncul. Produk ini, penyejukan tradisional serbuk beras, lebih dikenali sebagaibedak sejukDi Malaysia, adalah kosmetik berasaskan beras tradisional Produk. Bijirin beras yang telah ditapai sebelum ini Kajian untuk menghasilkan bedak sejuk adalah Oryza sativa ssp. indica (Indica) dan Oryza sativa ssp. japonica (Japonica) (Dzulfakar et al., 2015a). Bijirin beras Indica panjang, rata, langsing, hancur dengan mudah dan mempunyai kandungan amylose yang tinggi manakala bijirin beras Japonica pendek, bulat, tidak berkecai dengan mudah, dan mempunyai kandungan amylose yang rendah (Ricepedia, n.d.). Bedak sejuk sebagai produk penapaian bijirin beras adalah dalam bentuk titisan air atau pastilles berbentuk kon. Apabila pastilles ini dicampur dengan air dan digunakan ke kulit sebagai topeng muka semalaman, ia mengeluarkan a kesan penyejukan. Ia telah disokong oleh testimoni pengguna dari generasi ke generasi, yang mendakwa bedak sejuk mampu mencantikkan serta memutihkan kulit (Dzulfakar et al., 2015b; Dzulfakar et al., 2016c; Johar et al., 2018). Walau bagaimanapun, testimoni ini tidak pernah diuji dalam penetapan makmal terutamanya pada kesannya terhadap kulit sel kedua-dua normal dan malignan.

Oleh itu, kajian kami bertujuan untuk menentukan kesanbedak sejukdiperbuat daripada beras Indica dan Japonica subspesies menggunakan sel melanoma B164A5 yang disebabkan oleh UVB, serta mengenal pastiAntioksidankapasiti kedua-duanya jenis bedak sejuk.

Bahan dan Kaedah

Penyediaan Indica dan Japonica bedak sejuk

Thebedak sejukdiperbuat daripada Indica dan Japonica Subspesies beras telah disediakan dengan baik dari Fakulti Kejuruteraan dan Alam Bina, Universiti Kebangsaan Malaysia, 43600 Bangi, Selangor. Dalam rangka untuk menyediakan bijirin beras bedak sejuk, Indica dan Japonica telah direndam dalam air paip pada nisbah 1:1 (w/v) secara berasingan bekas tertutup yang tidak disterilkan. Bijirin beras kemudiannya dibenarkan menjalani penapaian semulajadi untuk 14 hari pada suhu persekitaran. Pada hari ke-14, nasi bijirin ditapis menggunakan kain muslin dan direndam lagi dalam kumpulan air baru (w / v). Perendaman bijirin beras diulang enam kali setiap 14 hari, membawa keseluruhan proses rendaman hingga 84 hari. Selepas 84 hari, pes beras yang terhasil dari setiap subspesies beras adalah dikumpulkan dan dikeringkan dalam ketuhar untuk menghasilkan serbuk form of bedak sejuk (Dzulfakar et al., 2016a). Bedak Sejuk kemudian disimpan di dalam peti sejuk pada 4o C sehingga selanjutnya Menggunakan. Sebelum eksperimen, bedak sejuk dibubarkan dalam air suling dan ditapis melalui Millipore 0.22 μm penapis jarum suntikan untuk pensterilan.

Budaya sel

Barisan sel melanoma murine B164A5 adalah dibeli daripada Koleksi Eropah disahkan Budaya Sel (ECACC). Sel-sel telah dikultur dalam Medium Helang Diubahsuai Dulbecco (DMEM) diperkaya dengan 10% serum lembu janin (FBS), 1% Campuran Penicillin-Streptomycin (Pen/Strep, 10,000 IU/ml), glukosa dan L-glutamine. Sel-sel itu kemudiannya diinkubasi dalam suasana lembap pada 37o C dalam 5% CO2. Apabila pertemuan sel mencapai 80%, sel-sel itu sub-budaya (Public Health England, n.d.). Sebelum Ujian telah dijalankan, lengkung pertumbuhan B164A5 sel-sel telah diplotkan. Dari lengkung pertumbuhan, dua kali ganda masa 24 jam diperolehi, di mana penemuan ini adalah disokong oleh kajian dari Danciu et al., (2013).

Ujian MTT

Cytotoxicity kedua-dua jenisbedak sejukke arah sel B164A5 dinilai melalui 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromida (MTT) ujian daya maju sel mengikut kaedah Mosmann (1983) dengan sedikit pengubahsuaian. 200 μL daripada 5 x 104 sel-sel telah dibiji dalam plat 96-baik rata-bawah dan diinkubasi selama 24 jam dalam suasana lembap pada 37o C dalam 5% CO2. Selepas 24 jam inkubasi, media dibuang dan digantikan dengan 200 μL PBS. Kemudian, sel-sel terdedah kepada sinaran UVB pada 30 mJ/ cm2 selama 36.4 saat (Lin et al., 2002). Sejurus selepas itu Pendedahan UVB, PBS dibuang dan sel-sel itu dirawat dengan kedua-dua jenis bedak sejuk dalam dicairkan secara bersiri kepekatan 6.25, 12.5, 25, 50 dan 100 g / L. Bagi pihak kawalan positif, sel-sel dirawat dengan menadione dalam kepekatan cair bersiri 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5 dan 1 mM menurut Basri et al., (2015), manakala kawalan negatif adalah sel-sel yang tidak dirawat. Berikut rawatan, sel-sel telah diinkubasi selama 24 jam lagi. Selepas tempoh inkubasi, 20 μL daripada 5 mg/mL MTT penyelesaian telah ditambah ke dalam setiap telaga dan diinkubasi untuk 4 Jam. Kemudian, 190 μL campuran dibuang dari setiap baik dan 200 μL DMSO telah ditambah dan diinkubasi untuk 15 minit. Akhirnya, plat digoncang selama 5 minit dan bacaan penyerapan diambil pada 570 nm menggunakan pembaca mikroplate. Peratusan daya maju sel adalah dikira menggunakan formula berikut: Daya maju sel (%)= (Mean OD sel yang dirawat)/(Mean OD kawalan negatif) ×100

Ujian Kuasa Antioksida Berkurangan Ferrik (FRAP)

TheAntioksidankapasiti kedua-dua jenisbedak sejukditentukan melalui ujian FRAP seperti yang diterangkan oleh Benzie dan Strain (1996). Ia adalah kaedah untuk menilai kuasa antioksidan melalui pengurangan ferrik (Fe3+) kepada ion ferus (Fe2+) pada pH rendah yang menghasilkan pembentukan kompleks ferus-tripyridyltriazine berwarna. Pertama, reagen kerja FRAP telah disediakan baru oleh mencampurkan penimbal asetat (30 mM, pH 3.6), besi (III) klorida (FeCl3 ) penyelesaian (20 mM) dan penyelesaian TPTZ (10 mM) dalam nisbah 10:1:1. Reagen kerja FRAP yang disediakan kemudian disimpan dalam mandi air di 37o C dan dilindungi daripada Cahaya. Ini diikuti dengan penyediaan besi (II) sulfat (FeSO4 ) lengkung penentukuran menggunakan dicairkan secara bersiri kepekatan yang berkisar antara 100 - 1,000 μM. Askorbik asid digunakan sebagai kawalan positif dan telah disediakan menggunakan kepekatan cair bersiri yang berkisar dari 3.125 - 50 μg / mL, dalam gelap (Hasiah et al., 2011). Bagi langkah-langkah percubaan, 50 μL FeSO4, askorbik asid dan kedua-dua jenis bedak sejuk telah ditambah ke dalam mereka telaga yang diperuntukkan dalam plat 96-baik. Selepas itu, 175 μL daripada Reagen kerja FRAP yang hangat telah ditambah kemudian ke dalam setiap telaga. Kemudian, plat itu diinkubasi pada 37o C untuk 5 minit. Akhirnya, bacaan penyerapan telah diambil di 595 nm menggunakan pembaca mikroplate dan nilai FRAP dinyatakan sebagai antioksidan bersamaan asid askorbik kapasiti (AEAC) (Gashahun dan Solomon, 2019).

serbuk cistanche

Analisis statistik

Perisian SPSS v25 digunakan untuk pembentangan data. Setiap data ujian dari tiga eksperimen bebas (n = 3) dinyatakan sebagai min ± SEM. Ujian ANOVA sehala digunakan untuk perbandingan antara cara. Alpha digunakan adalah 0.05 dan nilai p< 0.05="" was="" considered="" statistically="">

Keputusan

Cytotoxicity of Indica dan Japonica bedak sejuk

Cytotoxicity kedua-dua jenisbedak sejukAdalah dinilai terhadap sel melanoma B164A5 yang disebabkan oleh UVB melalui ujian MTT. Menadione, yang digunakan sebagai kawalan positif menunjukkan sitotoksisik dengan IC50 daripada 0.04 ± 0.02 mM (Rajah 1). Setiap kepekatan menadione adalah signifikan secara statistik (p< 0.05)="" when="" compared="" with="" the="" negative="" control.="" whereas="" indica="" and="" japonica="" bedak="" sejuk="" showed="" no="" cytotoxicity,="" hence="" no="" ic50="" values="" were="" obtained.="" both="" types="" of="" bedak="" sejuk="" had="" a="" reduction="" of="" cell="" viability="" at="" the="" beginning="" but="" gradually="" increased="" as="" the="" concentration="" increased="" (figures="" 2="" and="" 3).="" in="" addition,="" all="" concentrations="" of="" both="" types="" of="" bedak="" sejuk="" were="" not="" statistically="" significant="" (p="">0.05) jika dibandingkan dengan kawalan negatif. Keputusan menunjukkan bahawa kedua-duanya jenis bedak sejuk tidak sitotoksik kepada UVB yang disebabkan oleh UVB Sel melanoma B164A5.

Kapasiti antioksidan Indica dan Japonica bedak sejuk

Keupayaan mengurangkan kedua-dua jenis bedak sejuk sebagaiAntioksidantelah ditentukan melalui FRAP Cerakin. Nilai FRAP dinyatakan sebagai asid askorbik kapasiti antioksidan setara (AEAC) dalam unit μg AA (asid askorbik)/g bedak sejuk. Nilai FRAP untuk 50 dan 100 g/L Indica bedak sejuk adalah 0.003 ± 0.001 dan 0.004 ± 0.0003 μg AA/g bedak sejuk masing-masing (Rajah 4). Bagi Japonica bedak sejuk, nilai FRAP untuk 50 dan 100 g/L ialah 0.004 ± 0.0003 dan 0.01 ± 0.0007 μg AA/g daripadabedak sejukmasing-masing, menunjukkan cara yang bergantung kepada dos (Rajah 4).

Apabila nilai FRAP Indica bedak sejuk untuk 50 dan 100 g / L dibandingkan, ia tidak secara statistik penting (p = 0.803). Tetapi, nilai FRAP Japonica bedak sejuk untuk 50 dan 100 g / L adalah statistik penting (p = 0.006) jika dibandingkan. Di samping itu, nilai FRAP Japonica bedak sejuk untuk 100 g / L menunjukkan yang tertinggi kapasiti antioksidan adalah signifikan secara statistik apabila berbanding dengan nilai FRAP Indicabedak sejukuntuk kedua-duanya 50 (p = 0.001) dan 100 g / L (p = 0.003).

Perbincangan

Akhir-akhir ini, penggunaan produk semula jadi dalam penjagaan kulit telah menunjukkan trend yang semakin meningkat. Kebanyakan ini produk semulajadi telah terbukti mempunyaiAntioksidanciri-ciri selain memberi perlindungan kepada kulit terhadap cahaya UV (Abdul Wahab et al., 2014). Satu contoh produk sedemikian adalah bedak sejuk, yang ditapai produk kosmetik berasaskan beras. Untuk generasi,bedak sejukpastilles dicampur dengan air dan digunakan secara topikal pada kulit seseorang sebagai topeng muka semalaman (Dzulfakar et al., 2016c; Johar et al., 2018).

Dalam penapaian bijirin beras untuk menghasilkan bedak sejuk, bakteria asid laktik (LAB) biasanya terlibat, bersama acuan dan yis (Dzulfakar et al., 2015a; Dzulfakar et al., 2016b). PenggunaanKosmetikProduk yang mempunyai keputusan komponen beras yang ditapai LAB ini dalam pengembangan dan kelancaran produk juga sebagai perasaan basah apabila digunakan pada kulit (Sawaki et al., 2010). Pengalaman yang sama juga dilaporkan olehbedak sejukpengguna, di mana aplikasi bedak sejuk menghasilkan perasaan sejuk (Dzulfakar et al., 2015a). Terdapat juga hubungan yang menarik antara kulit dan penapaian oleh LAB, di mana LAB air rendaman yang digunakan semasa penapaian bijirin beras, mengandungi asid laktik dan asid amino lain yang menyumbang untuk penghidratan kulit. Faedah ini menjadikan LAB merendam air berguna sebagai sumber produk kosmetik. Oleh itu, gabungan substrat atau sederhana seperti bijirin beras dan strain LAB boleh membawa kesan kosmetik seperti kesan antioksidan, kawalan pH dan pencegahan tekanan sel (Izawa dan Sone, 2014). Faedah ini selaras dengan strategi chemoprevention melanoma. Walau bagaimanapun, bedak Ia masih belum disiasat kerana kesannya terhadap malignan sel kulit di makmal. Oleh itu, sebagai permulaan kajian untuk ejen chemoprevention melanoma yang berpotensi, sel melanoma murine B164A5 yang telah UVB yang disebabkan oleh adalah model kanser yang sesuai.

Pertama, dalam ujian MTT, didapati bahawa Indica dan Japonicabedak sejuktidak sitotoksik ke arah Sel melanoma B164A5 yang disebabkan oleh UVB. Walau bagaimanapun, ia adalah menyatakan bahawa terdapat penurunan daya maju sel pada tahap yang lebih rendah kepekatan bedak sejuk, diikuti dengan peningkatan dalam daya maju sel pada kepekatan bedak sejuk yang lebih tinggi. Penurunan daya maju sel ini boleh dikaitkan dengan fakta bahawa sinar UVB adalah sitotoksik terhadap sel, dalam hal ini kes, sel B164A5 (Pavel et al., 2017). Pada masa yang sama, kepekatan bedak sejuk yang lebih rendah tidak mencukupi untuk meningkatkan bilangan sel yang disebabkan oleh UVB. Walau apa pun, penurunan daya maju sel tidak jatuh di bawah tanda 50% dan oleh itu, tiada IC50 dapat diperolehi untuk kedua-dua jenis bedak sejuk. Akibatnya, dua daripada yang lebih tinggi dos, 50 g / L dan 100 g / L dipilih sebagai rawatan dos untuk ujian seterusnya.

Dalam ujian FRAP, didapati bahawa Japonica bedak sejuk mempunyai yang lebih tinggiAntioksidankapasiti berbanding dengan itu daripada Indicabedak sejuk. Perbezaannya boleh dijelaskan oleh fakta bahawa bijirin beras Japonica ditanam di kawasan yang sederhana dan sejuk di Asia, manakala nasi Indica bijirin ditanam di seluruh Asia tropika (Garris et al., 2005). Suhu persekitaran memainkan peranan penting peranan dalam aktiviti antioksidan tumbuhan, dan tumbuh-tumbuhan yang ditanam dalam cuaca yang lebih sejuk mempunyai antioksidan yang lebih ketara aktiviti berbanding dengan tumbuh-tumbuhan yang ditanam di cuaca yang lebih panas. Peningkatan aktiviti antioksidan ini boleh dikaitkan dengan pengeluaran lebih banyak fitokimia kerana tumbuhan mengalami tekanan dalam cuaca yang lebih sejuk (Kumar et al., 2017).

Terdapat juga produk beras lain yang ditapai yang telah mempamerkan hasil yang menjanjikan. Pertama, ada Galactomyces penapaian filtrate (GFF) yang merupakan produk sampingan penapaian beras oleh yis Galactomyces. The GFF ekstrak mengandungi campuran unik vitamin, mineral, peptida kecil dan oligosaccharides yang digunakan sebagaiKosmetikbahan-bahan dalam produk penjagaan kulit. Ekstrak telah berdemonstrasiAntioksidanciri-ciri dengan melindungi melanosit epidermal manusia biasa (NHEM) dari tekanan oksidatif (Woolridge Cooper, 2018). Penemuan ini GFF adalah serupa dengan penemuanbedak sejukdalam hal ini Kajian.

Dedak beras juga mempunyai aktiviti antioksidan yang kuat untuk titik menghasilkan sitotoksisitas ke arah melanosit. Tetapi, apabila dedak beras ditapai, cytotoxicity ekstrak dedak beras ke arah sel B16F1 telah Dihapuskan. Ini menunjukkan bahawa penapaian otak beras menghasilkan sebatian bermanfaat baru dengan biologi fungsi, walaupun sebatian yang tepat masih belum menjadi dijelaskan (Chung et al., 2009).

Akhirnya, nasi merendam air dari serbukbedak sejuksebenarnya mengandungi asid amino yang boleh memberi manfaat kepada aplikasi kosmetik. Terdapat 16 daripada 17 asid amino yang dikesan di Indica bedak sejuk sebagai serta air rendamannya. Asid Glutamic adalah yang tertinggi kepekatan asid amino yang terdapat dalam kedua-dua Indica bedak sejuk dan air rendamannya (Johar et al., 2018). Glutamine (terbitan asid glutamat), bersama arginin, tyrosine dan lysine yang dikesan dalam bedak sejuk dan rendamannya air adalah antara asid amino utama yang digunakan dalam industri kosmetik (Ha et al., 2018). Selain itu, asid amino DiKosmetikfungsi produk sebagaiAntioksidan(Ivanov et al., 2013) dan kandungan asid amino dalam Indica bedak sejuk jauh lebih tinggi dibandingkan dengan air rendamannya. Oleh itu, permohonan bedak sejuk lebih berkesan dari segi kandungan asid amino jika dibandingkan dengan air rendaman (Johar et al., 2018).

Ringkasnya, Indica dan Japonicabedak sejukPerlu untuk disiasat lebih lanjut sebelum mereka boleh dikatakan mempunyai potensi sebagai ejen chemoprevention melanoma iaitu dapat (1) mencegah melanoma, (2) mencegah perkembangan melanoma malignan dari lesi pra-malignan atau (3) mencegah berulangnya melanoma selepas berjaya rawatan melanoma (Chhabra et al., 2017).