Vaksin Mendapat Kekebalan Selular Reaktif Silang Sangat Terhadap Varian Omicron-2 SARS-CoV

Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com

Jinyan Liu1*, Abishek Chandrashekar1*, Daniel Sellers1*, Julia Barrett1, Michelle Lifton1, Katherine McMahan1, Michaela Sciacca1,

Haley VanWyk1, Cindy Wu1, Jingyou Yu1, Ai-ris Y. Collier1, Dan H. Barouch1,2*

1 Pusat Perubatan Deaconess Beth Israel, Boston, MA, Amerika Syarikat;

2 Ragon Institute of MGH, MIT, dan Harvard, Cambridge, MA, Amerika Syarikat

Varian SARS-CoV-2 Omicron (B.1.1.529) yang sangat bermutasi telah ditunjukkan untuk mengelak sebahagian besar tindak balas antibodi meneutralkan yang ditimbulkan oleh vaksin semasa yang mengekod imunogen1 Spike WA1/2020, mengakibatkan peningkatan jangkitan terobosan dan mengurangkan keberkesanan vaksin. Tindak balas imun selular, terutamanya tindak balas sel T CD8 tambah, berkemungkinan penting untuk perlindungan daripada penyakit{10}} SARS-CoV{10}} yang teruk2-6. Di sini kami menunjukkan bahawa imuniti selular yang disebabkan oleh vaksin SARS-CoV{13}} semasa adalah sangat reaktif silang terhadap varian Omicron{16}} SARS-CoV. Individu yang menerima vaksin Ad26.COV2.S atau BNT162b2 menunjukkan tindak balas sel T CD8 plus dan CD4 plus yang tahan lama yang menunjukkan kereaktifan silang yang meluas terhadap kedua-dua varian Delta dan Omicron, termasuk dalam subpopulasi selular memori pusat dan effector. Median respons sel T CD8 tambah Omicron khusus ialah 82-84 peratus daripada respons sel T CD8 tambah WA1/2020-khusus. Data ini menunjukkan bahawa vaksin semasa mungkin memberikan perlindungan yang cukup besar terhadap penyakit yang teruk dengan varian SARS-CoV-2 Omicron walaupun terdapat pengurangan ketara dalam tindak balas antibodi yang meneutralkan.

manfaat kesihatan cistanche: meningkatkan imuniti

Kajian terbaru menunjukkan bahawa antibodi peneutral yang ditimbulkan oleh vaksin (NAbs) dikurangkan dengan ketara kepada varian SARS-CoV-2 Omicron yang sangat bermutasi, mengakibatkan penyebaran global yang cepat, termasuk jangkitan terobosan dalam individu yang divaksin sepenuhnya1. Untuk menilai kereaktifan silang tindak balas imun selular yang ditimbulkan vaksin terhadap varian Omicron-2 SARS-CoV, kami menilai tindak balas sel T CD8 plus dan CD4 plus dalam 51 individu yang telah divaksinasi dengan Ad26 berasaskan vektor adenovirus. Vaksin COV2.S7 (Johnson & Johnson; N=20) atau vaksin BNT162b2 berasaskan mRNA (Pfizer; N=31).

Berikutan vaksinasi BNT162b2, kami memerhatikan tindak balas NAb khusus WA1/2020-yang tinggi pada bulan 1, diikuti dengan penurunan mendadak menjelang bulan 8, seperti yang dijangkakan9,10 (Gamb. 1a). Berikutan vaksinasi Ad26.COV2.S, terdapat tindak balas NAb khusus WA1/2020-awal yang lebih rendah pada bulan 1, tetapi tindak balas ini lebih tahan lama dan berterusan pada bulan 89,11 (Gamb. 1a). Walau bagaimanapun, NAbs spesifik Omicron reaktif silang minimum telah diperhatikan untuk kedua-dua vaksin (Rajah 1a), selaras dengan data terkini tanpa adanya rangsangan tambahan1. Tindak balas antibodi pengikat khusus domain pengikat reseptor (RBD) dinilai oleh ELISA dan menunjukkan trend yang sama, dengan antibodi pengikatan spesifik Omicron reaktif silang minimum (Rajah 1b). Berbeza dengan tindak balas antibodi, tindak balas imun selular khusus Spike dinilai oleh peptida terkumpul IFN-g ELISPOT ujian menunjukkan kereaktifan silang yang besar kepada Omicron (Data Lanjutan Rajah 1). Kami seterusnya menilai tindak balas CD8 plus dan CD4 plus T spesifik Spike dengan ujian pewarnaan sitokin intraselular. Ad26.COV2.S induced median Spike-specific IFN-g CD8 ditambah respons sel T sebanyak 0.061 peratus , 0.062 peratus dan {{ 72}}.051 peratus terhadap WA1/2020, Delta dan Omicron, masing-masing, pada bulan 8 selepas vaksinasi (Gamb. 2a). BNT162b2 disebabkan median Spike-spesifik IFN-g CD8 ditambah tindak balas sel T sebanyak 0.028 peratus dan 0.023 peratus terhadap WA1/2020 dan Omicron, masing-masing, pada bulan 8 selepas vaksinasi (Gamb. 2a). Data ini mencadangkan bahawa respons sel T CD8 tambah Omicron khusus adalah 82-84 peratus reaktif silang dengan respons sel T CD8 tambah WA1/2020-khusus. Tindak balas sel IFN-g CD4 tambah T khusus spike yang ditimbulkan oleh Ad26.COV2.S ialah median sebanyak 0.026 peratus , 0.030 peratus dan 0.029 peratus berbanding WA1/2020, Delta dan Omicron, masing-masing, dan oleh BNT162b2 ialah median sebanyak 0.033 peratus dan 0.027 peratus berbanding WA1/2020 dan Omicron, masing-masing, menunjukkan kereaktifan silang yang besar bagi tindak balas sel CD4 ditambah T juga (Rajah 2b). Kereaktifan silang Omicron yang besar turut diperhatikan untuk TNF-a dan IL{94}} khusus Spike yang merembeskan respons sel CD8 tambah dan CD4 tambah T (Data Lanjutan Rajah 2).

Analisis regresi linear menunjukkan bahawa respons sel T CD8 tambah Omicron khusus berkorelasi dengan respons sel T CD8 tambah WA1/2020-khusus untuk vaksin Ad26.COV2.S untuk kedua-dua titik masa (R=0.78, P<0.0001, slope="" 0.75)="" and="" the="" bnt162b2="" vaccine="" (r="0.56,"><0.0001, slope="" 0.81),="" although="" two="" individuals="" had="" undetectable="" omicron-specific="" cd8+="" t="" cell="" responses="" following="" bnt162b2="" vaccination="" (fig.="" 3a).="" similarly,="" omicron-specific="" cd4+="" t="" cell="" responses="" correlated="" with="" wa1/2020-specific="" cd4+="" t="" cell="" responses="" for="" both="" the="" ad26.cov2.s="" vaccine="" (r="0.79,"><0.0001, slope="" 0.83)="" and="" the="" bnt162b2="" vaccine="" (r="0.90,"><0.0001, slope="" 0.88)="" (fig.3b).="" spike-specific="" ifn-g="" cd8+="" and="" cd4+="" t="" cell="" central="" memory="" and="" effector="" memory="" subpopulations="" elicited="" by="" ad26.cov2.s="" also="" showed="" extensive="" cross-reactivity="" to="" delta="" and="" omicron.="" at="" month="" 8,="" cd8+="" central="" memory="" responses="" were="" 0.076%,="" 0.054%,="" and="" 0.075%,="" cd8+="" effector="" memory="" responses="" were="" 0.168%,="" 0.143%,="" and="" 0.146%,="" cd4+="" central="" memory="" responses="" were="" 0.030%,="" 0.035%,="" and="" 0.038%,="" and="" cd4+="" effector="" memory="" responses="" were="" 0.102%,="" 0.094%,="" and="" 0.083%,="" against="" wa1/202,="" delta,="" and="" omicron,="" respectively="" (fig.="">

Data kami menunjukkan bahawa Ad26.COV2.S dan BNT162b2 menimbulkan imuniti selular reaktif silang secara meluas terhadap varian SARS-CoV-2 termasuk Omicron. Konsistensi pemerhatian ini merentas dua teknologi platform vaksin yang berbeza (vektor virus dan mRNA) mencadangkan kebolehgeneralisasian penemuan ini. Kereaktifan silang yang meluas bagi tindak balas sel T CD8 plus dan CD4 plus khusus Omicron berbeza dengan ketara dengan tindak balas antibodi peneutralan dan pengikat khusus Omicron yang berkurangan dengan ketara. Data ini konsisten dengan kajian terdahulu yang menunjukkan kereaktifan silang yang lebih besar bagi tindak balas imun selular yang ditimbulkan oleh vaksin berbanding dengan tindak balas imun humoral terhadap varian Alpha, Beta dan Gamma SARS-CoV{15}}12. 82-84 peratus kereaktifan silang tindak balas sel T CD8 tambah kepada Omicron adalah konsisten dengan ramalan teori berdasarkan mutasi Omicron6.

Kajian praklinikal telah menunjukkan bahawa sel T CD8 tambah menyumbang kepada perlindungan terhadap SARS-CoV-2 dalam kera rhesus, terutamanya apabila tindak balas antibodi adalah suboptimum5. Tindak balas CD8 plus dan CD4 plus T yang tahan lama juga telah dilaporkan berikutan jangkitan dan vaksinasi2- 4,6,9,11,13,14. Memandangkan peranan sel T CD8 tambah dalam pembersihan jangkitan virus, kemungkinan besar imuniti selular menyumbang dengan ketara kepada perlindungan vaksin terhadap penyakit SARS-CoV-2 yang teruk. Ini mungkin sangat relevan untuk Omicron, yang mengelak sebahagian besar tindak balas antibodi. Data kami mencadangkan bahawa vaksin semasa mungkin memberikan perlindungan yang besar terhadap penyakit yang teruk disebabkan oleh varian Omicron-2 SARS-CoV walaupun tindak balas antibodi meneutralkan berkurangan dan peningkatan jangkitan terobosan.

serbuk cistanche

Kaedah

Populasi kajian

Sampel daripada individu yang menerima vaksin BNT162b2 diperoleh daripada biorepositori spesimen Pusat Perubatan Deaconess Beth Israel (BIDMC). Sampel daripada individu yang menerima Ad26.COV2.S diperoleh daripada kajian COV1001 (NCT04436276). Kedua-dua kajian telah diluluskan oleh lembaga semakan institusi BIDMC. Semua peserta memberikan persetujuan termaklum. Individu dikecualikan daripada kajian ini jika mereka mempunyai sejarah jangkitan SARS-CoV- 2, menerima vaksin COVID-19 lain atau menerima ubat imunosupresif. Pseudovirus neutralizing antibodi assay

Pseudovirus SARS-CoV-2 yang mengekspresikan gen wartawan luciferase digunakan untuk mengukur antibodi peneutral pseudovirus. Secara ringkasnya, pembungkusan itu membina psPAX2 (Program Sumber dan Reagen AIDS), plasmid wartawan luciferase pLentiCMV Puro-Luc (Addgene), dan pcDNA3 pengekspres protein lonjakan.1-SARS-CoV-2 SΔCT adalah bersama- ditransfeksi ke dalam sel HEK293T (ATCC CRL_3216) dengan lipofectamine 2000 (ThermoFisher Scientific). Pseudovirus varian SARS-CoV-2 dijana menggunakan strain WA1/2020 (Wuhan/WIV04/2019, ID penyertaan GISAID: EPI_ISL_402124), varian B.1.1.7 (Alfa, ID penyertaan GISAID: EPI_ISL_601443), varian B.1.351 (Beta, ID penyertaan GISAID: EPI_ISL_712096), B.1.617. 2 (Delta, ID penyertaan GISAID: EPI_ISL_2020950), atau B.1.1.529 (Omicron, ID GISAID: EPI_ISL_7358094.2). Supernatan yang mengandungi virus pseudotype dikumpul 48 jam selepas pemindahan; virus pseudotaip telah disucikan melalui penapisan dengan penapis 0.45-μm. Untuk menentukan aktiviti peneutralan serum manusia, sel HEK293T-hACE2 telah disemai dalam 96-plat kultur tisu telaga pada ketumpatan 1.75 × 104 sel setiap telaga semalaman. Pencairan siri tiga kali ganda sampel serum yang tidak diaktifkan haba telah disediakan dan dicampur dengan 50 ul pseudovirus. Campuran diinkubasi pada 37 darjah selama 1 jam sebelum ditambah kepada sel HEK293T-hACE2. Selepas 48 jam, sel telah dilisiskan dalam Steady-Glo Luciferase Assay (Promega) mengikut arahan pengilang. Titer peneutralan SARS-CoV-2 ditakrifkan sebagai pencairan sampel di mana pengurangan 50 peratus (NT50) dalam unit cahaya relatif diperhatikan berbanding purata telaga kawalan virus.

Ujian imunosorben berkaitan enzim (ELISA)

Antibodi pengikat khusus SARS-CoV-2 spike receptor-binding domain (RBD) dalam serum telah dinilai oleh ELISA. 96-plat perigi disalut dengan 2 ug/mL SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (Delta), B.1.351 (Beta), atau B.1.1.529 (Omicron) protein RBD dalam 1× Dulbecco phosphate-buffered saline (DPBS) dan diinkubasi pada 4 darjah semalaman. Selepas pengeraman, plat dibasuh sekali dengan penimbal pencuci (0.05 peratus Tween 20 dalam 1× DPBS) dan disekat dengan 350 μL larutan blok kasein setiap telaga selama 2 hingga 3 jam pada suhu bilik. Selepas pengeraman, larutan blok dibuang dan plat dikeringkan. Pencairan bersiri serum yang tidak diaktifkan haba yang dicairkan dalam blok Casein telah ditambah ke dalam telaga, dan plat diinkubasi selama 1 jam pada suhu bilik, sebelum 3 kali pencucian lagi dan 1-jam pengeraman dengan pencairan 1:4000 anti- manusia IgG lobak pedas peroksidase (HRP) (Invitrogen, ThermoFisher Scientific) pada suhu bilik dalam gelap. Pinggan dicuci 3 kali, dan 100 μL larutan SeraCare KPL TMB SureBlue Start ditambahkan pada setiap telaga; pembangunan plat dihentikan dengan menambah 100 μL larutan SeraCare KPL TMB Stop setiap telaga. Penyerapan pada 450 nm, dengan rujukan pada 650 nm, telah direkodkan dengan pembaca plat mikro VersaMax (Peranti Molekul). Bagi setiap sampel, titer titik akhir ELISA dikira menggunakan 4-padanan lengkung logistik parameter untuk mengira pencairan serum timbal balik yang menghasilkan nilai penyerapan diperbetulkan (450 nm-650} nm) sebanyak 0.2. Titer titik akhir yang diinterpolasi telah dilaporkan.

ekstrak cistanche deserticola: meningkatkan imuniti

Ujian imuno-tompok berkaitan enzim (ELISPOT).

Plat ELISPOT disalut dengan antibodi IFN-monoklonal antimanusia tikus daripada MabTech pada 1 µg/telaga dan diinkubasi semalaman pada 4 darjah. Pinggan telah dibasuh dengan DPBS dan disekat dengan media R10 (RPMI dengan 10 peratus FBS yang tidak diaktifkan haba dengan 1 peratus daripada 100x penisilin-streptomisin, 1M HEPES, 100mM Natrium piruvat, 200mM L-glutamin dan 0.1 peratus daripada 55mM 2-Mercaptoethanol) selama 2-4 h pada 37 darjah . SARS-CoV-2 mengumpulkan peptida S daripada SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (Delta) atau B.1.1.529 (Omicron) (Biokimia Abad ke-21) telah disediakan dan disalut pada kepekatan 2 µg/telaga, dan 100,000 sel/telaga telah ditambahkan pada plat. Peptida dan sel telah diinkubasi selama 15-20 jam pada 37 darjah . Semua langkah selepas pengeraman ini dilakukan pada suhu bilik. Plat telah dibasuh dengan penimbal basuh ELISPOT dan diinkubasi selama 2-4 jam dengan antibodi IFN-monoklonal tikus anti-manusia Biotinilasi daripada MabTech (1 µg/mL). Plat telah dibasuh kali kedua dan diinkubasi selama 2-3 jam dengan AP anti-biotin Kambing terkonjugasi daripada Rockland, Inc. (1.33 µg/mL). Pencucian terakhir diikuti dengan penambahan larutan substrat Nitor-blue Tetrazolium Chloride/5-Bromo-4-chloro 3 'indolyl phosphate p-toluidine salt (NBT/BCIP chromagen) selama 7 minit. Kromagen dibuang dan plat dibasuh dengan air dan dikeringkan di tempat yang redup selama 24 jam. Plat diimbas dan dikira pada Penganalisis Immunospot Terhad Teknologi Selular.

Ujian pewarnaan sitokin intraselular (ICS).

Tindak balas sel CD4 plus dan CD8 plus T dikira dengan ujian pewarnaan sitokin intraselular (ICS) yang dirangsang peptida terkumpul. Kolam peptida mengandungi 15 peptida asid amino yang bertindih dengan 11 asid amino merangkumi SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (Delta) atau B.1.1 .529 (Omicron) Protein spike (Biokimia Abad ke-21). 106 perigi sel mononuklear darah periferi digantung semula dalam 100 µL media R10 ditambah dengan antibodi monoklonal CD49d (1 µg/mL) dan antibodi monoklonal CD28 (1 µg/mL). Setiap sampel dinilai dengan mock (100 µL R10 ditambah 0.5 peratus DMSO; kawalan latar belakang), peptida (2 µg/mL), dan/atau 10 pg/mL phorbol myristate acetate (PMA) dan 1 µg/ml ionomycin (Sigma- Aldrich) (100µL; kawalan positif) dan diinkubasi pada 37 darjah selama 1 jam. Selepas pengeraman, 0.25 µL GolgiStop dan 0.25 µL GolgiPlug dalam 50 µL R10 ditambah pada setiap telaga dan diinkubasi pada 37 darjah selama 8 jam dan kemudian dipegang pada 4 darjah semalaman. Keesokan harinya, sel-sel itu dibasuh dua kali dengan DPBS, diwarnai dengan pewarna hidup/mati aqua selama 10 minit dan kemudian diwarnai dengan titer antibodi monoklonal yang telah ditetapkan terhadap CD279 (klon EH12.1, BB700), CD4 (klon L200, BV711), CD27 (klon M-T271, BUV563), CD8 (klon SK1, BUV805), CD45RA (klon 5H9, APC H7) selama 30 minit. Sel-sel kemudiannya dibasuh dua kali dengan 2 peratus penimbal FBS/DPBS dan diinkubasi selama 15 minit dengan 200 µL larutan BD CytoFix/CytoPerm Fixation/Permeabilisation. Sel telah dibasuh dua kali dengan penimbal 1X Perm Wash (BD Perm/WashTM Buffer 10X dalam kit CytoFix/CytoPerm Fixation/Permeabilisation yang dicairkan dengan air MilliQ dan melalui penapis 0.22µm) dan diwarnakan dengan intrasel dengan antibodi monoklonal terhadap IFN- (klon B27; BUV395), dan CD3 (klon SP34.2, Alexa 700), selama 30 minit. Sel telah dibasuh dua kali dengan penimbal 1X Perm Wash dan dibetulkan dengan 250µL formaldehid 1.5 peratus yang baru disediakan. Sel tetap telah dipindahkan ke 96-plat bawah telaga bulat dan dianalisis oleh sistem BD FACSymphony™. Data dianalisis menggunakan FlowJo v9.9.

suplemen cistanche:meningkatkan imuniti

Rujukan

1. Cele S, Jackson L, Khan K, et al. SARS-CoV-2 Omicron mempunyai pelepasan yang meluas tetapi tidak lengkap daripada Pfizer BNT162b2 yang menimbulkan peneutralan dan memerlukan ACE2 untuk jangkitan. medRxiv 2021.

2. Dan JM, Mateus J, Kato Y, et al. Memori imunologi kepada SARS-CoV-2 dinilai sehingga 8 bulan selepas jangkitan. Sains 2021;371.

3. Sette A, Crotty S. Kekebalan adaptif kepada SARS-CoV-2 dan COVID-19. Sel 2021;184:861-80.

4. Goel RR, Pelukis MM, Apostolidis SA, et al. Vaksin mRNA mendorong ingatan imun tahan lama kepada SARS-CoV-2 dan varian yang membimbangkan. Sains 2021;374:abm0829.

5. McMahan K, Yu J, Mercado NB, et al. Kaitan perlindungan terhadap SARS-CoV-2 dalam kera rhesus. Alam Semula Jadi 2021;590:630-4.

6. Grifoni A, Weiskopf D, Ramirez SI, et al. Sasaran Tindak Balas Sel T kepada SARS-CoV-2 Coronavirus pada Manusia dengan Penyakit-19 COVID dan Individu Tidak Terdedah. Sel 2020;181:1489-501 e15.

7. Sadoff J, Grey G, Vandebosch A, et al. Keselamatan dan Keberkesanan Vaksin Ad26.COV2.S Dos Tunggal terhadap Covid-19. N Engl J Med 2021;384:2187-201.

8. Polack FP, Thomas SJ, Kitchin N, et al. Keselamatan dan Keberkesanan Vaksin Covid-19 BNT162b2 mRNA. N Engl J Med 2020.

9. Collier AY, Yu J, McMahan K, et al. Kinetik Berbeza Tindak Balas Imun yang Ditimbulkan oleh Vaksin-19 Covid. N Engl J Med 2021;385:2010-2.

10. Falsey AR, Frenck RW, Jr., Walsh EE, et al. Peneutralan SARS-CoV-2 dengan Dos Vaksin BNT162b2 3. N Engl J Med 2021.

11. Barouch DH, Stephenson KE, Sadoff J, et al. Tindak balas Humoral dan Imun Selular Tahan Lama 8 Bulan selepas Pemvaksinan Ad26.COV2.S. N Engl J Med 2021;385:951-3.

12. Alter G, Yu J, Liu J, et al. Imunogenisiti vaksin Ad26.COV2.S terhadap varian SARS- CoV-2 pada manusia. Alam Semula Jadi 2021;596:268-72.

13. Poon MML, Rybkina K, Kato Y, et al. Jangkitan SARS-CoV-2 menjana memori imunologi setempat tisu pada manusia. Imunologi sains 2021;6:eabl9105.

14. Vidal SJ, Collier AY, Yu J, et al. Kaitan Peneutralan terhadap SARS-CoV-2 Varian Kebimbangan oleh Sera Pandemik Awal. J Virol 2021;95:e0040421.

faedah suplemen cistanche:meningkatkan imuniti