Peranan MikroRNA dalam Penurunan Proteostasis Dan Pengagregatan Protein
Aug 31, 2022
Sila hubungioscar.xiao@wecistanche.comuntuk maklumat lanjut
Abstrak:Penuaan boleh ditakrifkan sebagai kemerosotan progresif sel, tisu, dan fungsi organisma dari semasa ke semasa. Perubahan dalam homeostasis protein, juga dikenali sebagai proteostasis, adalah ciri penuaan yang membawa kepada ketidakseimbangan protein dan pengagregatan protein, fenomena yang juga berlaku dalam penyakit berkaitan usia. Di antara pelbagai pengawal selia proteostasis, mikroRNA (miRNA) telah dilaporkan memainkan peranan penting dalam kawalan pasca transkrip gen yang terlibat dalam mengekalkan proteostasis semasa jangka hayat dalam beberapa tisu organisma. Dalam ulasan ini, kami menyatukan laporan yang diterbitkan baru-baru ini yang menunjukkan bagaimana miRNA mengawal proses berkaitan proteostasis asas yang berkaitan dengan penuaan tisu, dengan penekanan pada dua tisu yang paling banyak dikaji, tisu otak dan otot rangka. Kami juga meneroka perspektif yang baru muncul tentang peranan rangkaian pengawalseliaan miRNA dalam pengagregatan protein berkaitan usia, ciri khas penuaan dan penyakit berkaitan usia yang diketahui, untuk menjelaskan calon miRNA yang berpotensi untuk sasaran diagnostik dan terapeutik anti-penuaan.
Sila klik di sini untuk mengetahui lebih lanjut
Kata kunci:miRNA; penuaan tisu mamalia; pengagregatan protein yang berkaitan dengan usia; rangkaian proteostasis
1. Pengenalan
Menjelang 2050, 22 peratus penduduk dunia akan berumur lebih dari 60 tahun, yang akan membawa kepada peningkatan dalam kejadian penyakit berkaitan usia dan memberi kesan kepada umur panjang dan kesejahteraan warga tua [1]. Perubahan dalam proteostasis adalah ciri penyakit neurodegeneratif yang berkaitan dengan usia seperti Alzheimer dan Parkinson, dan juga penuaan normal [2-4]. Penurunan proteostasis terdiri daripada ketidakseimbangan beransur-ansur dalam sintesis protein, lipatan dan proses degradasi dari semasa ke semasa yang membawa kepada peningkatan salah lipatan protein dan tekanan proteotoksik yang akhirnya mengurangkan umur panjang organisma [2,5-8].
Cistanche boleh anti-penuaan
Pengeluaran protein tersalah lipat mengakibatkan pengagregatan protein dan dalam pengaktifan laluan tindak balas tekanan berkaitan proteostasis, yang secara kolektif dikenali sebagai rangkaian proteostasis (PN) dan melibatkan tindak balas kejutan haba (HSR), tindak balas protein terungkap dalam retikulum endoplasma ( ER) (UPREN) dan dalam mitokondria (UPRmt), sistem ubiquitin-proteasome (UPS), dan laluan autophagy-lisosomal (ALP). Pengaktifan PN adalah perlu untuk melipat semula dan/atau merendahkan agregat protein, yang mengurangkan tahap tekanan dan menghalang kematian sel [9-12]. Pengagregatan protein semasa penuaan normal juga telah dikaji dalam beberapa model organisma, iaitu dalam buah pinggang dan pankreas Rattus norvegicus [13,14], dalam jantung, sumsum tulang, dan limpa Mus musculus [15,16], dan dalam korteks manusia[17,18]. Walau bagaimanapun, mekanisme asas fenomena ini masih tidak jelas sehingga kini.
MicroRNAs (miRNAs) ialah kelas RNA kecil, bukan pengekodan 21 hingga 23 nukleotida panjang yang mengawal ekspresi gen selepas transkripsi dengan menyasarkan dan menghalang terjemahan RNA utusan tertentu (mRNA). Mereka mengawal selia banyak proses selular, iaitu pertumbuhan dan pembezaan sel, perkembangan organisma, fungsi fisiologi dan homeostasis sel[19-21]. Malah, ~2500 miRNA yang dilaporkan pada manusia mengawal kira-kira 60 peratus gen pengekodan protein, manakala setiap miRNA mengawal, secara purata, 200 gen sasaran melalui tapak sasaran pelengkap [22]. Sepanjang dekad yang lalu, ekspresi berlebihan miRNA dan/atau eksperimen knockdown telah ditunjukkan secara langsung mengubah jangka hayat dalam C.elegans, D.melanogaster dan M.musculus[23-26]. Terutama, kajian dalam centenarians telah memberikan lebih banyak pengetahuan tentang bagaimana profil miRNA manusia dinamik sepanjang penuaan [27,28] Sebagai contoh, peningkatan biogenesis miRNA diperhatikan dalam centenarians berbanding dengan octogenarians [29]. Kajian yang lebih baru menunjukkan bahawa miRNA mengawal proses yang berkaitan dengan usia, dan beberapa bukti menghubungkan miRNA dengan pengagregatan protein dalam tisu mamalia, iaitu di otak dan otot rangka [30,31].
Walau bagaimanapun, ekspresi miRNA boleh menjadi khusus tisu atau khusus sel, dan pada masa yang sama, miRNA boleh menjadi autonomi bukan sel, bertindak sebagai mediator merentasi pelbagai tisu [32]. Perubahan berkaitan usia yang mempengaruhi keluarga miRNA tertentu mungkin berbeza berdasarkan jenis sel dan tisu, menjadikan analisis ini mencabar kerana kerumitan dan kesalinghubungan rangkaian miRNA dalam satu organisma [19,26]. Selain itu, miRNA yang beredar (c-miRNA) dan pengangkutannya (iaitu vesikel ekstraselular) baru-baru ini dicatatkan sebagai penanda penuaan fisiologi yang sihat, dengan miR-19a-3p dan miR-19 b-3p didapati meningkat pada individu yang semakin tua tetapi berkurangan pada usia seratus tahun yang sihat, sekali gus menambah satu lagi lapisan kerumitan pada rangkaian pengawalseliaan miRNA[27,28]. Atas sebab ini, kajian lepas telah menyediakan kompilasi miRNA yang dikaitkan dengan ciri penuaan tertentu dalam pelbagai organisma model untuk memberikan perwakilan miRNA yang lebih baik yang dikaitkan dengan penuaan merentas beberapa tisu [33]. Kajian ini memberi tumpuan kepada laporan yang diterbitkan baru-baru ini mengenai peraturan miRNA bagi sasaran gen yang terlibat dalam proses berkaitan proteostasis yang berkaitan dengan penuaan tisu, dengan penekanan khusus pada penuaan tisu mamalia.
2. Biogenesis dan Pengikatan Sasaran miRNA
RNA polymerase II mentranskripsi miRNA, menghasilkan transkrip miRNA primer (miRNA terdahulu) yang kemudiannya diproses oleh Drosha/DGC8, kompleks mikropemproses enzim RNase III, untuk menghasilkan ~70-100 nukleotida (nt) miRNA prekursor gelung batang (pra -miRNAs) [21,34]. Pra-miRNA ini dieksport daripada nukleus ke dalam sitoplasma melalui Exportin-5, protein pengikat RNA dan pengangkutan nuklear yang bergantung kepada RanGTP, dua untai, dan kemudian dibelah oleh enzim RNase II Dicer, menghasilkan {{ 13}} nt dupleks miRNA matang dua untaian [35,36]. MiRNA mungkin berasal dari sisi 5 dari pra. miRNA dipanggil helai "5p", atau dari hujung 3', yang dikenali sebagai helai "3p" [37]Pada masa lalu, proses pemilihan helai dilaporkan bermula dengan salah satu helai miRNA dupleks dikenali sebagai miR atau helai panduan, yang dipilih dan dimuatkan ke dalam protein Argonaute untuk membentuk kompleks pembungkaman yang disebabkan oleh miRNA (miRISC), manakala helai lain, secara tradisinya dilambangkan sebagai helai penumpang atau miR', telah dikeluarkan daripada kompleks dan terdegradasi [37]. ]. Namun begitu, dalam beberapa kes, mana-mana helai boleh dipilih dan dimuatkan ke dalam protein Argonaute untuk mengawal ekspresi gen, seperti kes miR-34 di mana miR-34b-5p dan miR{ {27}}b-3p hadir dalam kepekatan yang lebih kurang sama pada manusia, membenarkan penyasaran mRNA yang berbeza [37-39]. Fenomena yang dirujuk sebagai "pensuisan lengan miRNA", ialah pemilihan keutamaan sama ada lengan 3' atau 5'miRNA untuk pemilihan helai boleh bergantung sama ada pada jenis tisu atau pada peringkat perkembangan kehidupan, manakala penyahkawalseliaan ini proses dikaitkan dengan penyakit [37-39]MiRISC boleh menyasarkan mRNA tertentu melalui pelengkap jujukan antara jujukan benih untaian panduan miRNA yang dimuatkan (2-7 nukleotida) dan dalam kebanyakan kes, 3 kawasan yang tidak diterjemahkan (3 'UTR) daripada mRNA sasaran [32,34]. Dalam sesetengah kes, hujung 3' miRNA boleh menjalani pengikatan pelengkap keutamaan kepada motif di kawasan 5'UTR mRNA sasaran [40,41]. Pensuisan lengan boleh mengakibatkan pengumpulan miRNA matang dengan urutan benih yang diubah, yang secara drastik mengubah penyasaran mRNA[42]Semasa penuaan, terdapat perubahan umum dalam ekspresi lengan miRNA 3 dan 5'matang, dengan peningkatan 5 ungkapan 'matang dan berkurangan 3' dari semasa ke semasa, terutamanya untuk miR-6786 dalam sampel plasma manusia [42]. Pada masa yang sama, miR-4423 telah dikenal pasti dengan nisbah ekspresi 5' yang paling menurun, iaitu dalam susu ibu, jantung, testis, sel stem dan sel darah, sekali gus menandakan bahawa variasi berkaitan umur dalam 3' hingga Nisbah ekspresi miRNA 5'matang mungkin bergantung kepada tisu [42]
Pada zaman penjujukan generasi akan datang, telah ditunjukkan bahawa satu lokus miRNA tunggal mampu menghasilkan beberapa isoform miRNA atau isomiR yang berbeza, yang merupakan varian jujukan miRNA yang telah mengubah hujung 3' dan/atau 5' disebabkan oleh nukleotida. penambahan, penghapusan, atau penggantian [43]. Biogenesis isomiRs boleh bergantung kepada templat, mengakibatkan peralihan 5'atau 3'nukleotida, atau tidak bergantung kepada templat, yang membawa kepada penyuntingan dan tailing RNA pasca-transkripsi [44]. IsomiR boleh dikelaskan sebagai 3', 5', polimorfik, dan bercampur, bergantung kepada variasi jujukan dan perubahan panjang [4]. Pengubahsuaian jujukan selepas pematangan seperti pemangkasan (penyingkiran nukleotida melalui exoribonucleases pada hujung 3') dan tailing (penambahan nukleotida oleh pemindahan nukleotidil terminal pada hujung 3') menimbulkan 3' isomiRs (juga dikenali sebagai 3'-isomiR -trimmed dan 3'-isomiR-tailed)[43-45]Telah juga dilaporkan bahawa 5' isomiR sebahagian besarnya dihasilkan oleh belahan tidak tepat jujukan miRNA melalui Drosha dan/atau Dicer[43]. IsomiR polimorfik mengandungi perubahan dalam jujukan matang dan tidak berubah panjangnya, manakala isomiR campuran mengandungi perubahan dalam panjang dan jujukan[46,47]. Terutamanya, penjanaan isomiRs telah ditunjukkan sebagai sel dan tisu khusus dalam mamalia, dan ia digunakan sebagai biomarker kanser dan terlibat dalam penyakit Alzheimer [48,49].
Terdapat sangat sedikit kajian yang menjelaskan sepenuhnya peranan isomiRs dalam konteks penuaan. Baru-baru ini, isomiR-19a-3p didapati meningkat dengan ketara dalam centenarian yang tidak sihat jika dibandingkan dengan centenarian yang sihat, menunjukkan bahawa isomiR ini boleh digunakan sebagai penanda berpotensi untuk penuaan yang sihat [28]. Tambahan pula, penjujukan isomiR bagi sel endothelial urat umbilical-vena manusia (HUVEC) yang dirawat dengan metformin (rawatan jangka hayat) yang dirawat dengan metformin (HUVECs) semasa penuaan replikasi mendedahkan bahawa jujukan bukan kanonik menyumbang hampir 40 peratus daripada jumlah kumpulan miRNA, di mana rawatan metformin telah mengubah relatifnya dengan ketara. kelimpahan 133 isomiR yang dikenal pasti sebagai varian 73 miRNA individu [50]. Menariknya, gen sasaran miRNA dan isomiR ini didapati sebagai sebahagian daripada laluan phosphatidylinositol{11}}kinase (PI3K)-Akt dan sasaran mamalia bagi laluan isyarat rapamycin (mTOR) [50]. Terutamanya, kebanyakan isomiR yang terjejas oleh rawatan metformin dikenal pasti sebagai 3'isomiRs; walau bagaimanapun, sekitar 5 peratus dikenal pasti sebagai 5' isomiRs, yang ditunjukkan untuk mengalihkan jujukan benih dan menghasilkan lebih banyak gen sasaran yang tidak biasa dalam sasaran miRNA dalam kajian ini [50]. Sekali lagi, isomiRs kelihatan sebagai penanda yang berkesan untuk menilai penuaan yang sihat dan lanjutan jangka hayat. Walau bagaimanapun, kesan biologi perubahan dinamik dalam isomiRs melalui penuaan dan penuaan harus diterokai dengan lebih lanjut.
Kajian melaporkan bahawa sekurang-kurangnya padanan enam pasangan asas miRNA kepada mRNA diperlukan untuk pembungkaman ekspresi gen, dan disebabkan pengikatan pelengkap ini dengan mRNA sasaran, miRNA individu boleh mempunyai berbilang mRNA sasaran (kira-kira 100 mRNA) dan boleh secara serentak. menyasarkan 3-tapak UTR yang berbeza bagi mRNA yang sama, manakala miRNA yang berbeza juga boleh menyasarkan mRNA yang sama, yang menambah kerumitan hasil kawal selia untuk mRNA yang sama [32]. Ini menandakan bahawa setiap jenis sel dan tisu membentangkan corak miRNA yang sangat kompleks, dan disregulasi satu atau lebih komponen dalam rangkaian miRNA boleh mengakibatkan ketidakseimbangan homeostasis, jangka hayat yang dipendekkan, dan penyakit [5152]. Malah, centenarian memaparkan penyelarasan ekspresi miRNA, iaitu miR-16,miR-18a, dan miR-21, manakala ekspresi mRNA RNA Polymerase Ⅱ, Drosha, Exportin{{ 10}}, dan Dicer juga semuanya dikawal selia berbanding dengan oktogenarian [29].
3. Degradasi miRNA yang Diarahkan Sasaran dan Peranannya dalam Proses Selular Asas
Berbeza dengan biogenesis miRNA, peranan pereputan/degradasi miRNA-terutamanya degradasi miRNA terarah sasaran (TDMD)-dalam kesihatan dan penyakit hanya mula dijelaskan. TDMD berlaku apabila RNA sasaran dapat mendorong kemerosotan/pereputan miRNA serumpunnya dan bukannya menimbulkan penindasan sasaran, yang membolehkan modulasi pelbagai proses selular. TDMD berlaku apabila terdapat pengikatan pelengkap yang meluas di rantau 3'miRNA, yang mendorong perubahan konformasi yang merangsang hujung 3'dilepaskan daripada poket pengikat domain Ago PAZ [53-55]Pendedahan seterusnya hujung 3'membolehkan degradasi enzimatik miRNA [54]Proses ini juga mungkin disertai dengan pengubahsuaian pasca transkrip urutan miRNA, seperti tailing (oleh pemindahan nukleotidil terminal) dan pemangkasan (dengan 3'-ke{{9 }}'exonucleases), mengakibatkan penghasilan isomiRs[56,57]. Sasaran TDMD juga dapat memerangkap Ago2 dalam konformasi tertentu yang membolehkan pendedahan hujung miRNA 3' untuk tailing dan pemangkasan sambil terus-menerus melepasi Ago2 [54,55]. Menariknya, adalah mungkin untuk mengukur kadar pereputan miRNA dalam sel mamalia dengan metodologi gabungan seperti pelabelan "pulse-chase" berasaskan RNA 4sU dengan penjujukan RNA throughput tinggi, di mana pemangkasan dan tailing ditunjukkan sebagai dinamik dari semasa ke semasa dalam fibroblas [ 57]Metodologi ini mungkin terbukti berguna dalam kajian masa depan yang menilai pereputan miRNA sepanjang penuaan fisiologi.
Segelintir kajian telah meneroka TDMD endogen dan fungsinya dalam mamalia, mengenal pasti gen sasaran utama yang terlibat dalam fenomena ini. Sebagai contoh, Serpinel, yang mengekodkan perencat protease serine-threonine, bertindak sebagai sasaran TDMD untuk mengawal degradasi miR-30b-5p dan miR-30c-5p dalam tetikus fibroblas, dengan itu menggalakkan kemasukan semula kitaran sel fibroblas senyap[58]. Menariknya, semua ahli keluarga miR-30 (miR-30a -30b,-30c,-30d,dan-30e)boleh untuk berinteraksi dengan Serpinel; walau bagaimanapun, hanya miR-30b dan miR-30c mempamerkan pelengkap akhir 3' yang dilanjutkan (juga dikenali sebagai gandingan 3C) pada transkrip Serpinel, membuktikan bahawa gandingan 3C ini adalah asas kepada TDMD [58]. Secara keseluruhannya, interaksi Serpinel.miR-30b/c memainkan peranan pengawalseliaan utama dalam fenotip sel mamalia dengan memudahkan kemasukan semula kitaran sel sel senyap. Satu lagi contoh sasaran TDMD endogen, gen protein berkaitan penjanaan semula neuron (Nrep), dilaporkan mengarahkan degradasi miR-29b melalui pemangkasan 3', mengawal koordinasi motor keseluruhan dan pembelajaran motor pada tikus[59]. Biasanya, Nrep mengehadkan ekspresi miR-29b semata-mata kepada neuron Purkinje cerebellar, manakala gangguan tapak miR-29 dalam Prep mengembangkan ekspresi miR-29b kepada lapisan berbutir cerebellar, yang membawa kepada abnormal pembelajaran motor dan koordinasi pada tikus [59]. Lebih khusus lagi, perebutan tapak miR-29 dalam Nrep dalam sel progenitor neural mengakibatkan ketiadaan isoform miR-29 yang dihasilkan melalui pemangkasan atau tailing 3'[59]. Menariknya, tapak Prep miR-29 juga ditunjukkan mempunyai persamaan jujukan yang tinggi dengan libra RNA bukan pengekodan dalam ikan zebra, yang mengawal selia tingkah laku seperti kebimbangan dan penerokaan dalam ikan zebra [59]. Diambil bersama, TDMD, melalui sasaran endogen, adalah penting dalam mengekalkan fungsi dan tingkah laku otak mamalia yang betul dan dalam mengawal fenotip selular.
4. Profil Ekspresi miRNA Adalah Dinamik dan Khusus Tisu sepanjang Penuaan
Semasa penuaan tisu, terdapat penurunan progresif dalam kelimpahan miRNA, yang pertama kali dilaporkan disebabkan oleh penurunan yang berkaitan dengan usia dalam biogenesis miRNA yang berlaku melalui downregulation Dicer[60]. Sesungguhnya, biogenesis miRNA ditunjukkan untuk meningkatkan toleransi tekanan dan umur panjang dalam C. elegans dan dalam tisu adipos pada tikus, manakala miRNA khusus dikaitkan dengan rintangan tekanan dan penuaan [23,60]. Baru-baru ini, didapati bahawa gen miRNA-biogenesis sebenarnya, sangat disasarkan oleh miRNA yang terlibat dalam proses berkaitan usia, iaitu miRNA-71, yang ditunjukkan untuk mengecilkan ekspresi miRNA global dan membawa kepada peningkatan kebolehubahan ekspresi mRNA mengikut umur [19]. Keputusan ini selari dengan bukti terdahulu yang menetapkan miR-71 sebagai salah satu miRNA yang paling banyak dikaji dalam konteks penuaan dan umur panjang, dengan ekspresinya dikawal dengan ketara sepanjang masa dewasa awal hingga pertengahan [24,25]. Menariknya, miR-71 juga baru-baru ini dilaporkan merangsang perolehan protein yang bergantung kepada ubiquitin, khususnya dalam usus, memanjangkan jangka hayat C. elegans, manakala perencatannya menjejaskan proteostasis organisma [61]. Khususnya, bau makanan yang dirasai oleh C. elegans melalui neuron pencium AWC bersilia 1) merangsang regulasi sel-bukanautonomi terhadap degradasi protein yang bergantung kepada ubiquitin melalui sistem ubiquitin-proteasome (UPS) dan melalui degradasi protein yang berkaitan dengan endoplasma-retikulum (ER). (ERAD) dan 2) menambah rintangan tekanan haba dalam usus [61]. Pengarang menunjukkan bahawa miR-71 secara khusus menghalang protein domain penerima Tol (TIR-1) dalam neuron pencium sayap amphid"C"(AWC), manakala miR-71 dan/atau TIR{ {29}}cacing kalah mati memaparkan disfungsi UPS dan ERAD, menghapuskan pengaruh sumber makanan dalam tindak balas ini [61]. Satu perkara penting yang timbul ialah rangkaian pengawalseliaan miRNA sangat rumit dalam beberapa model organisma, dan profil ekspresi miRNA nampaknya kedua-dua khusus tisu dan, pada masa yang sama, saling berkaitan dengan pelbagai tisu.
Kebanyakan kajian yang telah meneroka peranan miRNA dalam penuaan tisu mamalia normal telah memberi tumpuan kepada eksperimen menggunakan sampel terutamanya dari otak dan tisu otot rangka, mungkin disebabkan kecenderungan tisu ini untuk perkembangan penyakit berkaitan usia [62] Satu kajian yang sangat dikaji. miRNA dalam penyakit penuaan dan berkaitan usia ialah miR-34. MiRNA ini ditunjukkan untuk dikawal selia dalam penuaan C. elegans [63], manakala ekspresi berlebihannya memanjangkan jangka hayat dalam Drosophila dan mengurangkan kecenderungan untuk neurodegenerasi berkaitan usia [64]Walau bagaimanapun, bertentangan dengan organisma lain, ahli miR{{7} } keluarga memainkan peranan yang memudaratkan dalam penuaan otak mamalia, di mana penyelarasan miR-34c ditemui dalam hippocampus tetikus dalam kedua-dua penuaan normal dan model AD dan dikaitkan dengan penurunan kognitif [65]. Selain itu, peningkatan kawal selia miR-29a dan miR{12}}b dalam otak tetikus yang dikaitkan dengan umur membawa kepada disregulasi mikroglia dan peningkatan dalam keradangan saraf, juga tanda penuaan otak [66]. Begitu juga, semasa proses penuaan, degenerasi dan pertumbuhan semula otot tidak seimbang, menyebabkan kehilangan homeostasis otot. Selain itu, miRNA, iaitu miR-29, dikaitkan dengan sarcopenia, kehilangan fungsi otot yang berkaitan dengan usia dan ditunjukkan untuk memodulasi isyarat apoptosis, penuaan dan faktor pertumbuhan seperti insulin (IGF-1) dalam penuaan sel otot [67]. Oleh itu, miRNA boleh digunakan sebagai biomarker penuaan dalam lebih daripada satu tisu dan untuk fenotip berkaitan umur tertentu seperti sarcopenia.
Baru-baru ini, sekumpulan kajian meneroka peranan miR-206 semasa vaskular (iaitu otot jantung) dan penuaan otot rangka dan homeostasis[68-74]. Ekspresi tambahan miR-206 dikaitkan dengan penuaan vaskular, terutamanya pada individu yang mengalami aritmia, [74]dan juga ditunjukkan untuk menghalang percambahan sel otot licin vaskular dan menggalakkan aterosklerosis[72,73]. Kajian-kajian ini menekankan kepentingan meneroka peraturan miRNA dalam satu tisu mamalia tertentu agar dapat mencari sasaran terapeutik baharu untuk patologi berkaitan usia tertentu.
Dengan mengambil kira semua penemuan terbaru ini, adalah jelas bahawa rangkaian pengawalseliaan miRNA menengahi penuaan dan umur panjang sedikit sebanyak. Walau bagaimanapun, adalah penting untuk menjelaskan peranan miRNA untuk setiap model organisma kerana sifat kompleks rangkaian pengawalseliaan miRNA dan pelbagai sasaran berpotensi yang mungkin dimiliki oleh setiap miRNA. Dalam bahagian berikut, kami menyerlahkan dengan lebih dekat kesan penurunan proteostasis berkaitan usia khusus miRNA yang melibatkan proses degradasi dan pembersihan protein, diringkaskan dalam Rajah 1, dan menyelidiki potensi pengaruhnya terhadap pengagregatan protein yang meluas semasa penuaan mamalia.
5. Peranan Peraturan miRNA dalam Penurunan Autofagik Berkaitan Usia dalam Otak dan Otot Rangka
Digambarkan sebagai modulator utama beberapa laluan degradasi berkaitan proteostasis semasa penuaan tisu mamalia, laporan saintifik telah memberi tumpuan kepada rangkaian pengawalseliaan miRNA yang melibatkan laluan autophagy-lysosome (ALP), dengan penekanan khusus pada sasaran mamalia kompleks rapamycin (mTOR), terutamanya dalam otak dan otot [24,75].Inukai dan rakan sekerja (2012) menjalankan salah satu kajian pertama menggunakan penjujukan mendalam Solexa untuk mengenal pasti hubungan antara ekspresi pembezaan miRNA semasa penuaan otak dan isyarat mTOR [24].cistanche แอ ม เว ย์Dalam kajian ini, kebanyakan miRNA yang dinyatakan secara berbeza merosot dalam kelimpahan relatif dalam 24-25-tikus berumur sebulan berbanding dengan 5-bulan, dengan analisis KEGGenrichment mendedahkan bahawa miRNA, iaitu miR-5620 isomiR dan miR-341 isomiR, terlibat dalam isyarat mTOR/ protein kinase B(Akt)/Forkhead box kelas O (FOXO) [24].
Satu jenis autophagy, dipanggil macrophagy, melibatkan degradasi dan kitar semula komponen sitoplasma, termasuk serpihan sel dan protein tersalah lipat, yang dibungkus ke dalam vesikel dua membran yang dipanggil autofagosom, yang bercantum dengan liso-somes untuk didegradasi oleh hidrolase lisosom [ 75]. Agregat protein boleh ditelan oleh autofagosom dan terdegradasi, dan penuaan boleh mengubah pelepasan autofagik melalui kecacatan dalam pembentukan autofagosom, gabungan autofagosom-lisosom yang gagal, dan pengasidan lisosom [76]. Disfungsi autofagik berkaitan usia juga boleh mengakibatkan perkembangan penyakit berkaitan usia, iaitu sarcopenia dan penyakit neurodegeneratif. Untuk ulasan yang luas, lihat [75]. Semasa penuaan otot rangka, aktiviti autofagik ditunjukkan berkurangan pada pesakit tua dengan sarcopenia dan dalam tisu otot murine, di mana tahap protein LC3, penanda autofagosom dan autolysosomes, dan E1-seperti enzim ATG7 menurun dengan usia [ 62]. Baru-baru ini telah disahkan bahawa miR-34a ialah pemain utama dalam aktiviti autofagik dalam penuaan otak, dengan pengawalseliaannya mengakibatkan autofagi yang rosak dan dinamik mitokondria yang tidak normal dalam model penuaan tikus yang disebabkan oleh d-galaktosa [77]. Dalam kajian yang sama ini, disfungsi autofagik telah diterbalikkan melalui pentadbiran miR-34perencat kepada sel SH-SY5Y yang disebabkan d-galaktosa dan mengakibatkan ekspresi terkawal protein berkaitan autophagy, iaitu LC3, Beclin 1, ATG7, dan degradasi P62[7]Secara bersama-sama, miRNA-34a mungkin merupakan sasaran terapeutik yang berkesan untuk melemahkan dan/atau membalikkan penurunan autofagik berkaitan usia dalam otak mamalia.
MiRNA yang diperkaya otot, dikenali sebagai myo-miRNA, seperti miR-1 dan miR-206, boleh mengawal selia sasaran melalui laluan PI3K/AKT/mTOR/FOXO, yang mengawal kitaran sel, percambahan dan proses pembezaan dalam miosit [68-71]. Baru-baru ini, pesakit hemodialisis yang menjalani latihan rintangan fizikal secara tetap ditunjukkan mempunyai tahap miR-206 yang lebih rendah, yang mengakibatkan myogenesis yang lebih besar dan lebih sedikit kalsifikasi jantung, tanda penuaan vaskular [69]. Penulis membuat kesimpulan bahawa, selepas latihan biasa, downregulation miR-206 berkemungkinan merangsang myogenesis melalui pengikatan faktor pertumbuhan seperti insulin 1 (IGF1) dan pengaktifan laluan PI3K/AKT/mTOR [70]. Begitu juga, dalam otot rangka manusia, 26 miRNA dikenal pasti dikawal oleh umur, senaman atau gabungan kedua-duanya, di mana sembilan daripada miRNA ini, iaitu miR-99a-5p, miR{{18 }}b-5p, miR-100-5p, miR-199a dan miR-196b-5p, telah mengesahkan jujukan sasaran dalam 3'UTRs daripada gen sasaran yang terlibat dalam laluan isyarat Akt/mTOR, seperti mTOR, Akt, protein berkaitan pengawalseliaan kompleks MTOR 1 (RPTOR), dan IGF1[71].
Terutamanya, miR-378 juga dikenal pasti penting untuk homeostasis otot dengan mengekalkan autophagy melalui penyasaran langsung protein kinase 1 (PDK1 yang bergantung kepada fosfoinositide), menggalakkan isyarat Akt-mTORCl, dan mengurangkan apoptosis miosit melalui penyasaran caspase 9. [69]. MiR-378-tikus kalah mati menunjukkan autophagy terjejas dan pengumpulan mitokondria yang rosak, manakala ekspresi berlebihan miR-378 ditunjukkan untuk mengurangkan fosforilasi unc-51-seperti autophagy mengaktifkan kinase 1 (ULK1), seterusnya menggalakkan pembentukan autofagosom, hasil yang telah disahkan oleh ekspresi LC3 terkawal dan puncta dalam garisan sel C2C12myotube [69]. Kajian ini penting kerana ia mengesahkan bahawa miR-378 memainkan peranan yang bermanfaat dalam mempromosikan autophagy dan mengenal pasti dua sasaran langsungnya:(1)PDK1, yang mengaktifkan Akt dan mTORCl untuk menggalakkan autophagy dalam otot rangka dan (2)Caspase9, yang menyekat apoptosis miosit. Walau bagaimanapun, masih terdapat banyak aspek peraturan miRNA autophagy untuk diterokai dalam konteks penuaan tisu, terutamanya dalam spesies mamalia.
Dalam konteks pengagregatan protein yang berkaitan dengan usia, miR-1 ditunjukkan untuk mengawal selia fungsi otot dan meningkatkan pengepaman pharyngeal sebagai tindak balas kepada tekanan proteotoksik dari semasa ke semasa, sambil turut menyekat pengagregatan protein polyglutamine 35(polyQ35) dalam C.elegans [30 ]. Subunit v-ATPase,vha-13 dikenal pasti sebagai sasaran langsung miR-1, yang mengawal biogenesis dan fungsi lisosom [30]. Oleh itu, miR-1 harus dikaji sebagai strategi terapeutik yang diduga untuk memerangi pengagregatan protein khusus otot dan meningkatkan motilitas otot merentasi jangka hayat. Sebelum ini, peningkatan tahap miR-1 ditunjukkan untuk menggalakkan autophagy sekali gus mengurangkan pengumpulan agregat protein dalam C. elegans dan sel mamalia[78]Terutama, dalam neuron kortikal tetikus dan sel HeLa, miR-1 diaktifkan autophagy melalui penyasaran Tre-2/Bub2/CDC16(TBC) Rab GTPase-activating protein (TBC1D15) sebagai tindak balas kepada pengumpulan agregat huntingtin mutan[78]. TBC1D15 ditunjukkan untuk menyekat autophagy dengan menyahaktifkan Rab7, yang mengawal gabungan autophagosome dan lisosom. Sekali lagi, miR-1 nampaknya merupakan calon yang berkesan untuk terapeutik antipenuaan yang menyasarkan proses berkaitan autophagy.
6.miRNAs Mengantara Sistem Ubiquitin-Proteosom dalam Penuaan Otak dan Atrofi Otot
Sistem ubiquitin-proteasome (UPS) ialah proses degradasi proteolitik selular yang terdiri daripada proteasom 26S sebagai komponen pusatnya, merangkumi dua komponen pengawalseliaan 19S dan satu teras 20S [79]. Aktiviti proteasomal berkurangan semasa penuaan normal dan dalam neurodegeneration [80]. Dalam tahun lepas, dua kajian telah menerangkan sumbangan peraturan miRNA pada perubahan berkaitan UPS sepanjang penuaan dalam konteks bukan penyakit [81-83]. Contohnya, miR-127-5p didapati telah mengurangkan ekspresi dalam otak tikus C57BL/6] yang berumur yang menjalani iskemia akibat LPS, dan buat pertama kalinya, mengenal pasti 26S proteasome bukan ATPase subunit kawal selia 3 (Psmd3) sebagai salah satu sasarannya [82]. Kajian ini penting kerana pengarang bukan sahaja menyediakan miRNome otak melalui penjujukan miRNA matang tetapi juga mengenal pasti miRNA novel dalam otak, miR-127, yang dikaitkan dengan apoptosis sel dan aktiviti proteasomal semasa penuaan dan iskemia. Tambahan pula, dalam pembawa sihat polimorfisme apolipoprotein E(ApoE c4), dikaitkan dengan pelepasan A dan peningkatan risiko untuk pembangunan AD, miR-153-3p ditunjukkan meningkat, yang membawa kepada penyumbatan faktor nuklear eritroid{{ 23}}related-factor-2(Nrf2)-mediated fungsi proteasomal dan pengumpulan eritrosit A dalam plasma [81]Selain itu, komponen yang berkaitan dengan proteasome, seperti plasma Kelch-like ECH-related protein 1 (Keapl) dan erythrocyte histone deacetylase 6 (HDAC6), juga meningkat dalam pembawa Apoes4 berbanding dengan bukan pembawa [81]. Polimorfisme ApoE a4, bersama-sama dengan komponen berkaitan proteoasom dan miR-153-3p, boleh digunakan sebagai plasma atau penanda edaran untuk menilai kerentanan kepada pengumpulan A dan disfungsi proteasomal yang berkaitan semasa penuaan otak, dan, pada masa yang sama, untuk menilai kecenderungan untuk pembangunan neurodegenerasi yang berkaitan dengan usia patologi dan pengagregatan protein, dengan itu menyediakan langkah bukan invasif untuk pembawa.
Atrofi otot dicirikan oleh degradasi protein yang menyimpang melalui laluan UPS [83].berapa banyak cistanche yang perlu diambilDalam otot rangka, jari manis otot 1 (MuRF1) dan atrofi otot F-box (MAFbx)/atrogin-1 ialah ligase ubiquitin E3 yang dianggap terlibat dalam ubiquitination substrat untuk degradasi oleh proteasome 26S, di mana peningkatan dalam komponen UPS ini menggalakkan atrofi otot [83]. Semasa atrofi otot, terdapat ekspresi berlebihan MuRFI dan MAFbx/atrogin-1, manakala perencatan komponen ini memperlahankan kehilangan otot [84,85].bioflavonoidBeberapa kajian telah menyerlahkan peranan miRNA dalam pengawalan ekspresi MuRFl dan MAFbx/atrogin-1. Sebagai contoh, miR-23a ditunjukkan untuk menghalang pengaktifan translasi MuRFl dan MAFbx/atrogin-1, mengatasi atrofi otot dalam model tetikus atrofi otot yang disebabkan oleh deksametason [86].apa itu cistancheSelain itu, peningkatan ekspresi miR khusus otot-1 didapati dapat mengurangkan tahap HSP70, mengurangkan fosforilasi AKT dan membawa kepada pengaktifan FOXO3 dan akhirnya mengakibatkan pengawalseliaan ekspresi MuRFl dan MAFbx/atrogin-1 semasa atrofi otot yang disebabkan oleh dexamethasone pada tikus [87]. Khususnya, apabila induksi dexamethasone, miR-1, mengawal defosforilasi dan pengaktifan FoxO3a yang seterusnya melalui isyarat HSP70/Akt, yang secara langsung atau tidak langsung menghalang protein yang mengatasi atrofi otot [87]Baru-baru ini, perencatan MuRF1 dan MAFbx/ transkripsi atrogin-1 telah ditunjukkan untuk meningkatkan kehilangan otot dalam otot rangka (khususnya, otot gastrocnemius) 40-tikus rawan 8 (SAMP8) pecutan penuaan seminggu (SAMP8) jika dibandingkan dengan penuaan yang dipadankan dengan umur -tikus tahan tikus dipercepatkan (SAMR1) berikutan rangsangan dengan epigallocatechin-3-gallate (EGCG), komponen katekin dalam teh hijau yang diketahui dapat memulihkan kehilangan otot [88]. EGCG ditunjukkan untuk menghalang myostatin dan untuk mengawal selia miR-486-5p, yang secara langsung menindas fosfatase dan tensin homolog (PTEN), menambah fosforilasi Akt dan mengakibatkan perencatan FoxOla aktif dan penindasan MuRFl dan MAFbx/atrogin{{ 25}} transkripsi dalam otot rangka 40-tikus SAMP8 berusia seminggu serta dalam sel mioblast C2C12 laluan lewat [88]. Kajian ini menemui campur tangan kehilangan otot yang unik menggunakan komponen EGCC teh hijau untuk mengubah peraturan miRNA dalam proses ubiquitin-proteasome dan isyarat PI3K/Akt/FOXO dalam otot rangka. Malah, penemuan ini memberikan bukti bahawa pengaktifan UPS yang berkaitan dengan miRNA menggalakkan atrofi otot terutamanya melalui penyasaran MuRFI dan MAFbx/atrogin-1 dalam otot rangka.
7.miRNA sebagai UPR dan Pengatur Pengagregatan Protein
Dalam keadaan tekanan, protein tersalah lipatan terkumpul dalam lumen ER dan menimbulkan UPRER untuk degradasi protein ini melalui tiga laluan utama, iaitu kinase ER kinase(PERK) seperti RNA protein kinase, enzim yang memerlukan inositol-1 alfa (IRE-1o)/Protein pengikat kotak-X-1 (XBP-1), dan laluan mengaktifkan faktor transkripsi 6(ATF6)[890]. Aktiviti UPRFR dikurangkan semasa keadaan tekanan ER yang semakin tua, manakala ekspresi berlebihan XBP-1 dapat meningkatkan rintangan tekanan ER dan umur panjang [89,90]. Secara keseluruhannya, adalah jelas bahawa UPRER memainkan peranan berfungsi dalam penuaan dan jangka hayat.
miRNA dilaporkan sama ada secara langsung memodulasi tindak balas tekanan ER atau, sebaliknya, menjalani peraturan melalui tekanan ER [91]. Malah, sensor tekanan ER, iaitu PERK, boleh mengawal secara langsung ekspresi miRNA yang menyelaraskan isyarat pro dan anti-apoptosis pada tekanan ER [92]. Contohnya, miR-30c-2-3p melalui isyarat pengantara PERK membawa kepada penurunan dalam mRNA XBP-1, yang seterusnya menggalakkan kematian sel dalam NIH-3T3 fibroblas [92 ]Semasa tekanan ER, penurunan regulasi keluarga miR-106b-25 melalui pengaktifan PERK membolehkan pengaktifan gen keluarga limfoma sel B pro-apoptosis 2 (BCL-2) seperti Bim, dengan itu menimbulkan apoptosis yang disebabkan oleh tekanan ER dalam garisan sel [93]. Penurunan peraturan keluarga miR106b-25 dan apoptosis akibat tekanan ER juga ditemui dalam model tetikus ALS (mutant SOD1 G93A), yang menghubungkan keluarga miRNA ini dan sasarannya kepada neurodegenerasi dalam ALS[93]. Baru-baru ini, dalam neuron kortikal dan hippocampal tikus, apabila rangsangan dengan glikasi lanjutan produk akhir albumin serum lembu (AGE-BSA) untuk mendorong tekanan ER, miR-24,-27b,{{ 30}},-224,-290,-351, dan-488 didapati kurang dikawal, manakala mRNA sasaran UPR (Prk, Irela, Chop dan Puma) dikawal selia, sekali gus menunjukkan bahawa miRNA ini adalah pengawal selia UPR yang berkemungkinan [94]Menggunakan algoritma ramalan sasaran-miRNA, pengarang mendapati bahawa PERK disasarkan oleh miR-24 dan miR-488, Irelo oleh miR{{ 40}},-124,-290,-351 dan -488, Cincang dengan miR-224, dan Puma dengan miR-24,{{ 47}}b, dan -351 [94]. Apabila terdedah kepada gula, glikasi lanjutan protein menghasilkan interaksi antara produk akhir glikasi lanjutan (AGEs) dan RAGE (reseptor AGEs), yang menggalakkan pengumpulan protein toksik yang menyimpang, tekanan oksidatif selular berikutnya, dan tekanan ER[94]. Di samping itu, beberapa miRNA ini juga ditemui dalam kajian pemprofilan ekspresi dalam neurodegenerasi, iaitu miR-27b, -124 dan -488 [95], menunjukkan bahawa miRNA ini boleh sesuai penanda penuaan dalam kedua-dua konteks. Walau bagaimanapun, hubungan kausal langsung antara pengagregatan protein dan disregulasi miRNA masih perlu diwujudkan dalam konteks kedua-dua penuaan yang sihat dan neurodegenerasi patologi yang berkaitan dengan usia.
8. Protein Pengikat miRNA juga Mengawal Jangka Hayat melalui Komponen Rangkaian Proteostasis
Banyak laporan telah menunjukkan bahawa protein pengikat miRNA mengawal penuaan melalui komponen rangkaian proteostasis. Dalam C. elegans, sebagai contoh, Argonaute, Dicer, Drosha, dan DGCR8/Pasha ditunjukkan untuk mengawal penuaan dan umur panjang [19,24,25]. Argonaute-1 (alg-1) telah ditunjukkan untuk menggalakkan umur panjang, manakala Argonaute-2(alg-2)memendekkan jangka hayat di mana banyak gen yang dinyatakan secara berbeza dalam alg mutan{{10 }} dan alg-2 C elegans ialah sebahagian daripada laluan isyarat insulin/IGF-1 (IS), dengan peraturan melalui DAF. 16/FOXO [96]. Tambahan pula, khususnya dalam alg-1 mutan, faktor renjatan haba 1 (hsf1), faktor transkrip yang merupakan sebahagian daripada tindak balas tegasan renjatan haba, didapati dikurangkan [96]. Kultur sel agregasi Huntingtin dan model tetikus, serta sampel bedah siasat daripada pesakit dengan penyakit Huntington, juga telah menunjukkan bahawa Argonaute-2(AGO2), komponen teras RISC, menyetempat semula dan terkumpul dalam butiran tekanan terletak di neuron striatal yang mengekspresikan agregat Huntingtin (mHTT) mutan, sekali gus menghalang gabungan autofagosom dan lisosom lewat dan, pada masa yang sama, membawa kepada peningkatan global dalam ekspresi miRNA [31]. Walau bagaimanapun, disebabkan penyetempatan semula AGO2 dan pembentukan kompleks miRNA2-AGO dalam butiran tegasan, penulis menyatakan bahawa keseluruhan aktiviti miRNA, terutamanya pembungkaman sasaran, telah dihalang dalam neuron pengekspres mHTT [31]. Dalam kes ini, agregat protein ditunjukkan untuk mengganggu pelepasan autofagik, yang menggalakkan pengumpulan AGO2 dan perubahan dalam tahap dan aktiviti miRNA, mungkin membawa kepada kerosakan neuron. Keputusan ini membentangkan perspektif baru, diringkaskan dalam Rajah 2, yang menonjolkan peranan pengagregatan protein berkaitan usia dalam disfungsi autofagik, biogenesis miRNA, dan aktiviti miRNA semasa penuaan mamalia (Rajah 2).
survival neuron dengan mengurangkan kelemahan khusus kepada tekanan ER yang disebabkan oleh thapsigargin, menunjukkan bahawa biogenesis miRNA melalui Dicer adalah neuroprotektif terhadap tekanan ER. Penurunan regulasi Dicer semasa penuaan boleh menjejaskan biogenesis miRNA dan membawa kepada tekanan ER terkumpul dan neurodegenerasi neuron dopamin [9]. Teknik penjujukan inovatif seperti penjujukan silang yang dipertingkatkan ribonukleosida fotoaktif dan penjujukan immunoprecipitation (PAR-CLIP) telah mengenal pasti fungsi alternatif Dicer dalam sel manusia serta dalam C.elegans, di mana Dicer ditunjukkan terlibat dalam kemerosotan beberapa struktur. RNA yang sebelum ini tidak dapat dikesan dengan metodologi lain [9]
Lebih-lebih lagi, Drosha boleh membelah struktur jepit rambut yang tertanam dalam mRNA, mengganggu kestabilannya dan oleh itu mengawal ekspresi mRNA secara langsung. Drosha ditunjukkan untuk membelah mRNA untuk faktor pembezaan yang asas untuk neurogenesis [10]. Di samping itu, apabila jangkitan virus, Drosha dilaporkan dieksport ke dalam sitoplasma untuk membelah RNA genomik virus untuk menyekat replikasi virus [101,102]. Fosforilasi dan eksport nuklear Drosha juga berlaku berikutan kejutan haba dan tekanan oksidatif, menjejaskan biogenesis miRNA yang dimediasi Drosha[103]. Satu lagi teknik penjujukan inovatif, dipanggil immunoprecipitation dan penjujukan silang silang formaldehid (fCLIP-seq), telah mendedahkan bahawa Drosha membelah substrat bukan kanonik yang berasal daripada loi bukan miRNA kepada penyepit rambut pendek, menghasilkan RNA kecil[104]Protokol menggunakan PAR-CLIP dan fCLIP boleh mengenal pasti potensi interaksi antara protein pengikat miRNA dan RNA struktur dalam sampel tisu dan dalam konteks penyakit berkaitan usia [104]. Diambil bersama, hasil kajian ini menyediakan saluran penyelidikan baharu untuk menyasarkan komponen biogenesis miRNA untuk menukar ekspresi miRNA, dan mungkin sasaran mRNA baru, untuk menambah kecekapan rangkaian proteostasis dalam membersihkan protein toksik dan melemahkan pengagregatan protein yang berkaitan dengan usia.
9. Kesimpulan
Matlamat utama kajian ini adalah untuk memberikan bukti sokongan, berdasarkan kajian baru-baru ini, untuk prospek baru yang menarik bahawa miRNA, dan sedikit sebanyak protein pengikat miRNA, boleh mengawal secara langsung proteostasis, yang berkaitan dengan pengembangan jangka hayat organisma, dan mereka boleh juga digunakan sebagai penanda penuaan tisu yang sihat untuk perbandingan dengan penyakit berkaitan usia. Terutamanya, gen sasaran miRNA dalam laluan degradasi berkaitan proteostasis seperti sistem UPS dan ALP nampaknya sangat spesifik tisu dalam otak mamalia dan otot rangka semasa penuaan, merentasi pelbagai model organisma. Di samping itu, peranan peraturan miRNA dalam disfungsi berkaitan usia degradasi protein dan mekanisme pelepasan telah menjadi lebih jelas dalam kajian terbaru mengenai otak mamalia dan tisu otot rangka.beli cistancheBerdasarkan penemuan yang menunjukkan peraturan proteostasis yang dimediasi miRNA semasa penuaan mamalia, kami berteori bahawa kajian masa depan harus meneroka hubungan kausal langsung antara pengagregatan protein dan disregulasi miRNA dalam konteks kedua-dua penuaan yang sihat dan neurodegenerasi patologi berkaitan usia dan atrofi otot, yang ditunjukkan dalam Rajah 2. Memandangkan terdapat beberapa profil miRNA yang bertindih diubah dalam kedua-dua konteks penuaan normal dan patologi, potensi untuk memodulasi miRNA, terutamanya meningkatkan tahap miRNA yang menyasarkan pelepasan protein dan gen berkaitan autophagy, mungkin relevan untuk masa hadapan. strategi terapeutik anti-penuaan.
Sumbangan Pengarang: Pengkonsepan, SF,VM, ARSdan MAS; penulisan—penyediaan draf asal, SF; menulis—menyemak dan menyunting, SF, VM., MF, AR, GM, ARS dan visualisasi MAS, SF dan VM; sumber, GM, A.RS.dan MAS;penyeliaan, A.RS.dan M.ASS, pemerolehan pembiayaan, GM, ARSdan MASSAsemua pengarang telah membaca dan bersetuju menerima versi manuskrip yang diterbitkan.
Pembiayaan: Penyelidikan ini dibiayai oleh PORTUGUESE FOUNDATION FOR SCIENCE AND TECHNOLOGY (FCT) dan FEDER (FUNDO EUROPEU DE DESENVOLVIMENTO REGIONAL) melalui COMPETE2020, PROGRAM OPERASI UNTUK BERSAING DAN INTERNATIONAL-IZATION (2}POCI) (Generasi{2}POCI} FEDER-022184;HIKMAH: POCI-0145-FEDER-029843); MEDICIS(CENTRO-01-0246-FEDER-000018);dan projek "Piloto untuk perincian strategi e uma rede regional for a medicine personalized/precisao"Grant(CENTRO-08-5864-FSE{{9} }).
Unit penyelidikan iBiMED disokong oleh FCT (UID/BIM/04501/2020). SF dan MF disokong secara langsung oleh geran FCT (SFRH/BD/148323/2019 dan SFRH/BD/131736/2017).A.RS.disokong oleh kontrak penyelidikan tambahan CEEC individu (CEECIND/00284/2018).
Artikel ini dipetik daripada Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, 3232. https://doi.org/10.3390/ijms23063232 https://www.mdpi.com/journal/ijms
