Pembaca RNA M6 A YTHDF2 Mengawal Antitumor Sel NK Dan Kekebalan Antiviral Bahagian 4

Adalah diketahui umum bahawa YTHDF2 bertindak sebagai pembaca m6A, yang mengiktiraf dan mengikat RNA yang mengandungi m6A dan mengawal degradasi transkrip m6A.
Kami kemudian melakukan RNA immunoprecipitation (RIP) -seq menggunakan antibodi YTHDF2 untuk memetakan transkrip sasaran yang diikat oleh YTHDF2 dalam sel NK. Tapak pengikat YTHDF2-diperkaya dalam rantau jujukan pengekodan protein dan 39UTR (Rajah S5, E dan F).

Hubungan antara pembaca dan ingatan sangat rapat. Membaca adalah salah satu cara terbaik untuk meningkatkan kemahiran ingatan kita.

Apabila kita membaca, otak kita melalui proses yang kompleks. Semasa kita mengimbas perkataan dan mengubahnya menjadi makna, otak kita sentiasa mencipta sambungan neuron baharu. Sambungan neuron ini membentuk sistem ingatan kami dan membantu kami menyimpan maklumat dalam ingatan jangka panjang.

Di samping itu, membaca merangsang imaginasi dan kreativiti kita, yang juga membantu meningkatkan daya ingatan kita. Apabila kita membina imej dan adegan dalam fikiran kita, otak kita terlibat secara aktif, jadi lebih banyak sambungan neuron terbentuk, yang menguatkan keupayaan ingatan kita.

Akhir sekali, membaca juga meningkatkan tumpuan dan tumpuan kita. Apabila kita fokus membaca, otak kita sentiasa bersenam berulang kali, yang menjadikan daya ingatan kita lebih kuat.

Secara keseluruhannya, membaca boleh memberi impak yang sangat positif kepada ingatan kita. Dengan memupuk tabiat membaca dan merangsang otak kita melalui membaca, kita boleh meningkatkan kemahiran ingatan kita dan menikmati kehidupan yang lebih kaya dan menarik. Ia boleh dilihat bahawa kita perlu meningkatkan daya ingatan, dan Cistanche deserticola boleh meningkatkan daya ingatan dengan ketara kerana Cistanche deserticola adalah bahan perubatan tradisional Cina yang mempunyai banyak kesan unik, salah satunya adalah untuk meningkatkan daya ingatan. Keberkesanan Cistanche deserticola berasal daripada pelbagai bahan aktif yang terkandung di dalamnya, termasuk asid tannic, polisakarida, glikosida flavonoid, dll. Bahan-bahan ini boleh menggalakkan kesihatan otak melalui pelbagai laluan.

Klik tahu 10 cara untuk meningkatkan ingatan

Kami mengenal pasti 3, 951 potensi puncak pengikatan YTHDF2 daripada 1, 290 transkrip, 426 (33%) daripadanya dikesan dengan pengayaan m6A yang ketara. Analisis pengayaan GO menunjukkan bahawa 1,290 transkrip sasaran YTHDF2 telah diperkaya dalam terjemahan protein, pengikatan RNA, dan penyambungan RNA (Rajah S5 G).

Kami kemudiannya mengenal pasti transkrip sasaran yang berpotensi daripada transkrip bertindih melalui RNA-seq, m6A-seq, dan RIP-seqand mendapati bahawa satu set 29 transkrip yang diikat oleh YTHDF2 dan ditanda dengan m6A (dalam kedua-dua sel Ythdf2WT dan Ythdf2ΔNK NK) adalah dinyatakan secara berbeza antara sel NK daripada tikus Ythdf2WTand Ythdf2ΔNK (Rajah 7 G). Antaranya, 12 transkrip dikawal selia dan 17 transkrip telah dikurangkan dalam sel NK daripada tikus Ythdf2ΔNK berbanding dengan Ythdf2WT NKcells (Rajah 7 G).

Berdasarkan pencirian fungsi YTHDF2 dan analisis GO daripada data RNA-seq, kekurangan Ythdf2 mempengaruhi pembahagian dan percambahan sel NK, mungkin dengan memudahkan kemerosotan mRNA bagi pusat pemeriksaan kitaran sel atau pengawal selia negatif semasa pembahagian sel.

Di antara 12 transkrip terkawal, tiga telah dilaporkan mengawal pembahagian sel atau percambahan secara negatif, termasuk Mdm2 (murine double minit 2 [MDM2]; Frum et al., 2009; Giono dan Manfredi, 2007; Giono et al., 2017), Tardbp ( Protein pengikat DNA TAR 43 [TDP43]; Ayala et al., 2008; Sanna et al., 2020), dan Crebzf (faktor transkripsi CREB/ATFBZIP; Hu et al., 2020; López-Mateo et al., 2012) , menunjukkan bahawa mereka adalah sasaran berpotensi sel NK YTHDF2in.

Maklumlah, puncak m6A sesuai dengan tapak pengikat YTHDF2-di 39UTR Mdm2 dan Tardbp dan dengan gen 59UTR Crebzf, seperti yang ditunjukkan oleh Integrative Genomics Viewer(Gamb. 7 H).

RIP menggunakan sama ada antibodi m6A atau YTHDF2 berikutanqPCR mengesahkan bahawa Mdm2, Tardbp, dan Crebzf sememangnya m6Ametilasi dan diperkaya terutamanya oleh YTHDF2 dalam sel NK (Rajah 7, I dan J), menyokong data m6A-seq dan RIP-seq, yang menunjukkan bahawa ini tiga gen adalah sasaran berpotensi sel inNK YTHDF2.

Untuk menyiasat sama ada YTHDF2 mengawal ekspresi Mdm2, Tardbp, dan Crebzf melalui modulasi kestabilan mRNA, kami mengukur kemerosotan mRNA bagi tiga sasaran dengan menghalang transkripsi dengan actinomycin D dalam NKcells daripada tikus Ythdf2ΔNK dan Ythdf2WT.

Keputusan menunjukkan bahawa Mdm2 dan Tardbp, tetapi bukan Crebzf, mempunyai separuh hayat dalam sel NK yang lebih lama daripada tikus Ythdf2ΔNK berbanding dengan tikus Ythdf2WT (Rajah 7, K-M), menunjukkan bahawa Mdm2 dan Tardbpare dikawal secara langsung oleh YTHDF2 dalam sel NK.

Dengan menggunakan immunoblotting, kami mengesahkan bahawa tahap protein MDM2 dan TDP43 telah dikawal selia dalam sel NK daripada tikus Ythdf2ΔNK (Rajah S5 H). Untuk mengesahkan lagi bahawa kedua-dua gen ini adalah sasaran berfungsi YTHDF2, kami menggunakan Mdm2- atau Tardbp -siRNA khusus untuk mengetuk ekspresi dua gen secara in vitro (Rajah S5, I, dan J).

Kami kemudiannya membandingkan percambahan sel dan kemandirian sel Ythdf2ΔNKNK dengan berbanding tanpa penurunan Mdm2 atau Tardbp dengan kehadiran IL-15. Keputusan menunjukkan bahawa kejatuhan Tardbp sekurang-kurangnya dapat menyelamatkan sebahagian daripada kecacatan dalam percambahan sel dan kemandirian sel dalam sel NK daripada tikus Ythdf2ΔNK (Rajah 7, N, dan O).

Walau bagaimanapun, ketukan Mdm2 tidak mempunyai kesan penyelamatan (Rajah S5, K, dan L). Keputusan ini menunjukkan bahawa YTHDF2 mengawal percambahan dan pembahagian sel NK sekurang-kurangnya sebahagiannya dengan menghalang kestabilan mRNA Tardbp.

Perbincangan

Dalam kajian ini, kami melaporkan pelbagai peranan YTHDF2-metilasi m6A dalam imuniti sel NK. Kami mendapati bahawa YTHDF2, salah satu pembaca pengubahsuaian m6A yang paling penting, adalah penting untuk mengekalkan homeostasis sel NK, pematangan, kelangsungan hidup pengantara IL-15, dan antitumor dan antivirus.

Kami juga mengenal pasti gelung maklum balas positif baru antara STAT5 dan YTHDF2, hiliran IL-15, yang menyumbang kepada fungsi efektor dan kemandirian dalam sel NK tetikus. Kajian kami menjelaskan peranan biologi YTHDF2 atau metilasi m6A secara umum dalam imuniti semula jadi sel NK. Ia mengisi jurang pengetahuan tentang bagaimana YTHDF2 mengawal tindak balas imun semula jadi kepada transformasi malignan dan jangkitan virus.

Penemuan kami menyediakan hala tuju baharu untuk memanfaatkan antitumorim sel NK dan pada masa yang sama memajukan pemahaman kami tentang pengubahsuaian m6A dalam membentuk imuniti semula jadi. Protein pembaca m6A YTHDF2 mengawal kestabilan mRNA sasaran (Du et al., 2016; Wang et al., 2014). Banyak kajian telah menyokong kesan luas YTHDF2 dalam pelbagai proses biologi.

YTHDF2 menindas pengembangan sel stem hematopoietik normal dan pembaharuan diri tetapi juga diperlukan untuk penyelenggaraan sel stem hematopoietik jangka panjang (Li et al., 2018;Mapperley et al., 2021 Paris et al., 2019; Wang et al., 2018a). Baru-baru ini, gen ini terlibat dalam menahan keradangan semasa jangkitan bakteria (Wu et al., 2020a). Peranan dan mekanisme YTHDF2 dalam perkembangan tumor telah dikaji dengan baik.

YTHDF2 menggalakkan pembangunan sel stem leukemia dan permulaan leukemia myeloid akut (Paris et al., 2019). Selain leukemia, YTHDF2 telah ditunjukkan untuk menggalakkan perkembangan tumor pepejal, termasuk kanser prostat (Liet al., 2020), glioblastoma (Dixit et al., 2021), dan hepatocellularcarcinoma (Chen et al., 2018; Hou et al., 2019; Zhang et al., 2020), dengan menyasarkan pelbagai transkrip diubah suai m6A, seperti penindas astumor LHPP dan NKX3-1 (Li et al., 2020), IGFBP3(Dixit et al., 2021), OCT4 ( Zhang et al., 2020), dan SOCS2 (Chenet al., 2018).

Walaupun YTHDF2 memainkan peranan menggalakkan dalam perkembangan tumor, kajian kami mendedahkan peranan YTHDF2 yang bermanfaat dalam tindak balas imun terhadap sel tumor, terutamanya dalam sel NK, yang merupakan komponen utama imuniti semula jadi terhadap jangkitan virus dan transformasi malignan.

Oleh itu, perkembangan masa depan perencat YTHDF2 untuk menyasarkan sel tumor untuk terapi kanser harus dilakukan dengan berhati-hati kerana perencatan YTHDF2 boleh menjejaskan tindak balas antitumor tuan rumah oleh sel NK. Sebaliknya, memanfaatkan aktiviti antitumor YTHDF2 dalam sel NK atau sel imun lain harus mempertimbangkan kesan potensinya yang bertindak secara langsung pada sel ontumor. Penyasaran pembezaan YTHDF2 dalam sel tumor dan sel imun harus memaksimumkan aktiviti antitumor.

For more information:1950477648nn@gmail.com