Adakah jumlah glikosida cistanche mempunyai kesan ke atas penciuman?

Hubungi:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Kesan jumlah glikosida cistanche pada sel pencium bau tikus dan rembesan faktor neurotropiknya

Li Chuangfeng, Guo Jinyu, Zhang Xu, Liu Yunnan

Kecederaan saraf tunjang (SCI) adalah kecederaan serius pada bahagian tengahsistem saraf, menyumbang {{0}}.2 peratus —0.5 peratus daripada jumlah trauma. Dalam patah tulang belakang, 16 peratus —40 peratus adalah rumit oleh kecederaan saraf tunjang, selalunya meninggalkan kecacatan yang teruk, membawa kepada Kesukaran dalam kehidupan seharian yang menjejaskan kualiti hidup pesakit, dan menyebabkan beban yang besar kepada keluarga dan masyarakat.Penciumansel ensheathing (OEC) ialah sejenis gam saraf khas. Sel plasma boleh berhijrah ke otak denganpenciumanakson saraf dan boleh merembeskan banyak faktor pertumbuhan seperti NGF, GDNF, BDNF, NT-3, neuropeptide-Y, dan S-100. Oleh kerana ciri-ciri inipenciumansel ensheathing, OEC dianggap sebagai salah satu sel benih yang menjanjikan untuk pemindahan sel untuk membaiki SCI. Pada masa ini, rawatan SCI dalam bidang perubatan pemulihan adalah berdasarkan pemulihan menyeluruh. Bagi mencari kaedah yang lebih berkesan, kajian berikut telah dijalankan terhadap kesancistanchejumlahglikosidapada OEC:

Jumlah glikosida cistanche untuk sel ensheathing Olfactory

1 Bahan dan kaedah

1.1 Bahan eksperimen

Tikus Wistar (disediakan oleh Pusat Haiwan Universiti Mongolia Dalam);cistanchejumlahglikosida, medium DMEM/F12, serum anak lembu janin (FCS), poly-D-lysine, arabinoside (Ara-C), trypsin, larutan D -Hanks, anti-p75NGFR arnab (Santa Cruz), kit ELISA (Promega), inkubator sel (Thermo-HEPA Class 100), mikroskop kontras fasa terbalik (Olympus CKX41, Jepun), meja kerja ultra-bersih (Suzhou Antai Air Technology Co., Ltd.) Syarikat, SW-CJ-2FD), enzim penganalisis label (Wellscan MKH), sitometer aliran, dsb.

1.2 Kaedah penyelidikan

1.2.1 Budaya, penulenan dan pengenalan OEC: Tikus Wistar dikorbankan dengan memenggal kepala dan direndam dalam wain selama 5 minit. Tengkorak hadapan dibuka untuk mendedahkanpenciumanmentol. Kedua-duapenciumanmentol dikeluarkan sepenuhnya di bawah mikroskop membedah. Basuh dalam larutan D-Hanks; potongpenciumanmentol dengan gunting mikrobedah, tambah 2ml 0.25 peratus pancreatin dan eramkan pada 37 darjah selama 20 minit; tambahkan medium kultur D MEM/F12 yang mengandungi 10 peratus serum anak lembu ke dalam tiub emparan 2ml Pencernaan telah ditamatkan di tengah; pipet bas menyedut tisu yang tidak dicerna sepenuhnya pada 800 rpm dan disentrifugasi selama 5 minit, membuang supernatan; akhirnya menggunakan medium berhawa dingin (20 peratus FCS tambah 20|i, mol/LForskolin tambah 20|ig/mlBPE tambah DMEM /F12) Jadikan ia ke dalam ampaian sel tunggal lx 107ml, inokulasi dalam kelalang kultur sel bersalut polilisin, letakkan ia dalam inkubator 37 darjah, 5 peratus CO2, dan kemudian menambah Pemurnian Ara-c telah dijalankan pada 36h. Gunakan antibodi sekunder IgG anti-arnab anti-p75E dan kambing berlabel FITC untuk pengecaman sel imunohistokimia dan pemerhatian mikroskop pendarfluor.

1.2.2 Gunakan MTT dan flow cytometry untuk menentukan kesanjumlah glikosida cistanchepadapenciumansel ensheathing: inokulasi yang dikultur dan disucikanpenciumanmenyelubungi sel dalam 96-plat perigi pada 1X106 dan tambahjumlah glikosida cistanche(kepekatan tindakan ialah Ijig/ml, 10mg/ml, 100mg/ml), ukur nilai OD dan ukur sitometri aliran sel selepas 24j tindakan. Sediakan kumpulan Kawalan danJumlah glikosida cistanchekumpulan kepekatan yang berbeza: Kumpulan A (Kumpulan kawalan): Medium kultur yang mengandungi serum digunakan sebagai kawalan negatif; Kumpulan B (jumlah glikosida cistanchekumpulan kepekatan rendah: llig/ml); Kumpulan C (jumlah kepekatan sederhana glikosida cistanche Kumpulan: L10jxg/MK); Kumpulan D (jumlah glikosida cistanchekumpulan kepekatan tinggi: 100|xg/mlo): 15 ekor tikus dalam setiap kumpulan.

1.2.3 Penentuan kandungan faktor neurotropik dalam supernatan oleh ELISA: inokulasi yang dikultur dan ditulenkanpenciumanmenyelubungi sel dalam 6-plat perigi pada 1x106, tambahjumlah glikosida cistanche(kepekatan yang sama seperti di atas) selepas 24 jam dan bertindak selama 24 jam, dan kumpulkan supernatan secara berasingan, Disimpan pada -80 Lama. Kandungan faktor pertumbuhan saraf dalam cecair ditentukan oleh kaedah ELISA.

1.3 Analisis statistik

Data dalam kajian ini dianggap sebagai data ukuran dan data yang diperoleh dinyatakan sebagai min ± sisihan piawai dan perisian statistik SPSS 11.0 digunakan untuk analisis statistik. Data yang diperolehi dianalisis dengan analisis varians, dan P<0.05 indicates="" that="" there="" is="" a="" significant="">

2 Keputusan

2.1 Kesan daripadacistanchejumlah glikosida padapenciumansel ensheathing

2.1.1 Keputusan penentuan kaedah Methyl oxazolyl tetrazol (MT): Kumpulan A: 0.617±0.149; Kumpulan B: 0.589±0.147; Kumpulan C: 0.761±0.138; Kumpulan D: 0.732±0.234. Perbandingan antaraJumlah glikosida cistanche group (B) and Control group (A), P>0.05, perbezaannya tidak ketara;Jumlah glikosida cistanche10mg/ml, 100mg/ml kumpulan kepekatan (C, D) berbanding kumpulan Kawalan (A) P<0.05, the="" difference="" is="">

2.1.2 Keputusan penentuan sitometri aliran ditunjukkan dalam Rajah 1. Berbanding dengan kumpulan Kawalan,jumlah glikosida cistanchekumpulan adalah lebih tinggi daripada kumpulan Kawalan, dan peratusan sel apoptosis adalah lebih rendah daripada kumpulan Kawalan.

2.2 Keputusan ujian imunosorben berkaitan enzim (ELISA).

Keputusan ujian menunjukkan bahawa kandungan glial-cell-line-derived neurotrophic factor (GDNF): sebelum dos: 302.1±16.6 pg/ml, kumpulan A: 340.5±13.2pg/ml; kumpulan B: 333.2±23.6pg/ml; Kumpulan C: 355.2±17.6pg/ml; Kumpulan D; 379.2±15.3pg/ml. Berbanding dengan pra-pentadbiran, kandungan GDNF meningkat dengan ketara; berbanding dengan kumpulan Kawalan (A), kandungan GDNF bagiJumlah glikosida cistancheKumpulan kepekatan (D) 100mg/ml telah meningkat dengan ketara.

3 Perbincangan

Kesukaran dalam penjanaan semula akson adalah salah satu sebab utama mengapa sukar untuk pulih selepas kecederaan saraf tunjang. OEC mempunyai peranan dalam penjanaan semula akson neuron pusat yang jenis sel lain sukar diganti. Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, penyelidikan mengenaipenciumansel ensheathing telah menjadi tempat panas.Penciumansel ensheathing ialah sejenis sel glial khas yang mempunyai ciri-ciri sel Schwann dan astrosit. Mereka berasal daripenciumanmembran bawah tanah dan diedarkan secara meluas pada permukaanpenciumanmukosa,penciumansaraf, danpenciumanmentol. Ia mempunyai keupayaan untuk membahagikan dan menjana semula seumur hidup dan boleh mengiringipenciumanakson saraf untuk berhijrah ke dalam otak. Akson daripadapenciumansaraf boleh melalui persimpangan antara sistem saraf periferi dan sistem saraf pusat setiap 30-60 hari, tumbuh semula menjadipenciumansarung dan wujudkan sambungan sinaptik4.Penciumansel ensheathing boleh merembeskan banyak faktor pertumbuhan seperti NGF, BDNF, GDNF, NT-3, neuropeptide-Y, dan S-100. Kajian telah menunjukkan bahawa faktor pertumbuhan saraf (NGF) boleh menghalang neuron nukleus merah tulang belakang daripada atrofi dan menguatkan saluran kortikospinal Sprout dan menggalakkan penjanaan semula laluan saraf saraf tunjang nukleus merah; kedua-dua faktor neurotropik yang diperolehi oleh otak (BDNF) dan neurotropin-3 (NT-3) boleh menghalang apoptosis sel saraf tunjang nukleus merah pada tikus dewasa dengan kecederaan axotomized dan menyelamat neuron yang mati dan menggalakkan penjanaan semula aksonal P. Sebagai tambahan,penciumansel ensheathing juga menyatakan faktor lain pada membran selnya, seperti faktor lekatan sel saraf (N-CAM), yang terlibat dalam lekatan sel dan pertumbuhan akson. Oleh kerana ciri-ciri inipenciumansel ensheathing, OEC dianggap sebagai salah satu sel benih yang menjanjikan untuk pemindahan sel untuk membaiki SCI.

Komponen kimia bagiCistancheterutamanya termasuk glikosida phenylethanoid, iridoid, komponen meruap, lignan, polisakarida, dan alkaloid. Kajian mendapati bahawaCistanchedan komponen kimianya mempunyai kesan neuroprotektif. Deng et al. mengkaji kesan tubulosa B pada apoptosis neuron SH-SY5Y yang disebabkan oleh faktor nekrosis tumor (TNF). Keputusan menunjukkan bahawa selepas 100ug/ Neuron SH-SY5Y selepas 36 jam rawatan TNF oleh L menunjukkan ciri apoptosis tipikal, manakala rawatan tubulin B selama 2 jam dapat mengurangkan apoptosis yang disebabkan oleh TNF dengan ketara. Selain itu, kajian juga menunjukkan bahawa glikosida phenylethanoid boleh menghalang apoptosis sel granul cerebellar tikus dengan menghalang caspase-3 dan caspase-8, dan terhadap tikus hitam C57 yang disebabkan oleh metil fenil tetrahydropyridine (MPTP). Kerosakan neuron dopaminergik berkualiti mempunyai kesan perlindungan. Bukan itu sahaja, tetapiCistanchejuga boleh mengurangkan pelbagai kerosakan seperti iskemia-reperfusi sistem saraf. Eksperimen kecederaan iskemia otak tikus menunjukkan bahawa julat infark 24j dan 48j selepas iskemia dalam kumpulan reperfusi iskemia serebrum ialah 72.98 peratus dan 60.45 peratus secara purata. Sebaliknya, yangcistanchejumlah glikosida kumpulan dos besar, sederhana dan rendah (250.0mg·kg/d; 125.0mg·kg/d; 62.5mg·kg/d) masing-masing boleh menjadikan otak tikus selepas iskemia-reperfusi serebrum 24j Saiz infark dikurangkan kepada 25.94 peratus, 25.81 peratus, dan 31.13 peratus, dan saiz infarksi serebrum dikurangkan kepada 22.14 peratus, 20.06 peratus, dan 22.27 peratus selepas 48 jam. Terdapat perbezaan yang ketara antara kedua-duanya, menunjukkan kesan perencatan yang ketara terhadap apoptosis neuron.

Dalam kajian ini, kepekatan yang berbeza bagijumlah glikosida cistanchetelah digunakan untuk OEC. Kaedah MTT dan pengukuran sitometri aliran mengesahkan bahawa 10mg/ml100mg/mljumlah glikosida cistancheboleh menggalakkan percambahanpenciumansel ensheathing. Keputusan sitometri aliran menunjukkan bahawajumlah glikosida cistancheboleh menggalakkan percambahanpenciumansel ensheathing Ia terutamanya menggalakkan percambahan kitaran G1penciumansel sperma dan mengurangkan sel apoptosis dengan ketara. Oleh itu,Jumlah glikosida cistanchebukan sahaja boleh menggalakkan percambahanpenciumansel-sel ensheathing tetapi juga meningkatkan aktiviti sel dan menghalang apoptosis mereka. Ujian imunosorben berkaitan enzim membuktikannyaJumlah glikosida cistancheboleh menggalakkan dengan ketara rembesan GDNF olehpenciumansel ensheathing. Keputusan di atas menyediakan asas eksperimen untuk aplikasi klinikalJumlah glikosida cistanche.

Rujukan

[1] Qiu Weihong, Zhu Hongxiang, Zhang Baixiang, et al. Faktor yang mempengaruhi kualiti hidup pesakit yang mengalami kecederaan saraf tunjang semasa pemulihan [J]. Jurnal Perubatan Pemulihan Cina, 2009, 4(24): 313.

[2] Richter MW, Fletcher PA, Liu J, et al. Lamina propria danpenciumansel ensheathing lembu jantan mempamerkan integrasi dan penghijrahan berbeza dan menggalakkan akson deferential bercambah dalam saraf tunjang lesi [J]. J Neurosci,2005.25(46):10700 -10711.

[3] Fairless R, Bamet SC. sel ensheathing olfactory: peranan mereka dalam pembaikan sistem saraf pusat[J.Int J Biochem Cell Biol. 2005,37(4):693-699.

[4] Chen X, Fang H. Schwob JE. Pelbagai potensi disucikan. sel basal glukosa yang dipindahkan ke dalampenciumanepitelium [J]. J Comp Neurol,2004, 46914):457—474.

[5] La P, Jones LL. Tuszynski MH. sel marostromal yang mengekspresikan BDNF; menyokong pertumbuhan akson yang meluas di tapak d kecederaan saraf tunjang[J]. Exp Neurol, 2005,191(2):344—360.

[6] Deng M, Zhao JY, Ju XD, et al. Kesan perlindungan tubulosa B pada apoptosis yang disebabkan oleh TNF dalam sel neuron [J]. Acta Pharmacol Sin,2004,25(102 1276

[7] TianXue-Fei, PuXiao-Ping.PhenylethanoidglikosidadaripadaCistanchessalsa menghalang apoptosis yang disebabkan oleh 1-metil-4-ion phenylpyridinium dalam neuron[J]. J Ethnopharmacol,2005,97 (1):59.

[8] Geng X, Lagu L.Pu X, et al. Kesan neuroprotektif