Penyelidikan Farmakologi Acteoside Mengenai Tindakan Terhalang Mulakan Hiperlasia Prostatik dalam Tikus

Penyelidikan farmakologi acteoside mengenai tindakan yang dihalang memulakan hiperplasia prostat pada tikus

Untuk maklumat lanjut:ali.ma@wecistanche.com

ABSTRAK:Model tikus hiperplasia prostat (BPH) mula ditubuhkan, dan tiga kumpulan dosacteosidetelah ditadbir secara lisan selama 4 minggu, untuk mengkaji kesan acteoside yang disuling daripada Cistanche tubulosa pada apoptosis dan struktur ultramikro tanah prostat pada tikus dengan BPH. Perubahan ultrastruktur kelenjar prostat diperhatikan oleh mikroskop elektron penghantaran. Keputusan menunjukkan bahawaApoptosisprostat tikus normal tidak jelas, terdapat kadar pro-negara yang rendahapoptosisdalam kumpulan model, dalam rawatan acteoside dos tinggi, pro-state tikusapoptosisadalah jauh lebih tinggi daripada kumpulan model.Acteosideboleh menggalakkan proptosis prostat tikus, dan memainkan peranan dalam menghalang hiperplasia prostat jinak

KATA KUNCI:acteoside, Cistanche, mulakan hiperplasia prostat

Klik untuk cistanche tubulosa dos dan produk Cistanche

Apoptosis semasa hiperplasia prostat (BPH) adalah salah satu mekanisme yang lebih membimbangkan pada masa ini, yang dikodkan secara genetik dan membolehkan sel mengawal kematian sel dengan bertindak balas kepada isyarat tertentu. Selepas prostat berkembang menjadi saiz dewasa, kadar percambahan sel prostat dikekalkan pada 1 peratus - 2 peratus dengan tindakan seimbang kadar purata apoptosis, dan apabila keseimbangan ini dipecahkan, ia dianggap sebagai punca predisposisi. daripada BPH. Di bawah keadaan biasa, tahap wanita dan androgen dalam kelenjar prostat dan peredaran normalnya adalah keadaan homeostasis yang wujud antara percambahan dan apoptosis. Apabila percambahan tidak seimbang dengan apoptosis, ia membawa kepada pertumbuhan dan pembesaran kelenjar selanjutnya, terutamanya membenarkan pengembangan petak antara sel epitelium berlaku. Dalam ujian ini, kami memerhati dan menganalisis kesan salah satu komponen kimiaCistanche, acteoside(seperti phyllode), mengenai apoptosis dan perubahan ultrastruktur dalam prostat tikus dengan mewujudkan model tikus hiperplasia prostat, untuk menilai kegunaan acteoside dalam menghalang hiperplasia prostat, dan untuk menyediakan asas saintifik untuk membangunkan penggunaan baruCistanche, perubatan Cina.

1 bahan dan kaedah

1. 1 haiwan ujian

Lima puluh ekor tikus SD jantan berumur 6-7 minggu, gred bersih, seberat 80-100 g, disediakan oleh pusat perubatan perbandingan Universiti Yangzhou.

1. 2 reagen dan ubat

Suntikan propionat testosteron dihasilkan oleh Shanghai General Pharmaceutical Co., Ltd., spesifikasi 25 mg · ML - 1, lot 060708. Penyelesaian pewarna PI disediakan oleh pusat ujian Universiti Yangzhou. kandungan acteoside 945 g · kg - 1, disediakan di Jabatan analisis perubatan tradisional Cina, Universiti Farmaseutikal China.

1. 3 radas eksperimen

Philips TECNAI 12 mikroskop elektron penghantaran Philips Belanda; Cytometer aliran Facsaria dihasilkan untuk Becton Dickinson.

1. 4 kumpulan dan pemodelan

Model hiperplasia prostat telah ditubuhkan dengan suntikan subkutaneus testosteron propionat di belakang tikus selama 4 minggu mengikut kaedah kesusasteraan. Tikus model dibahagikan secara rawak kepada empat kumpulan: kumpulan model, kumpulan dos tinggi acteoside model, kumpulan dos sederhana acteoside model, kumpulan dos rendah acteoside model, dengan 10 tikus dalam setiap kumpulan; 10 lagi tikus biasa diambil sebagai kumpulan kawalan.

1. 5 kaedah pentadbiran

Seminggu selepas pemodelan, tikus dalam kumpulan dos tinggi -, sederhana - dan rendah masing-masing menerima 60, 30, dan 15 mg · (kg · d) - 1 secara gavage. Model dan kumpulan kawalan ditadbir secara intragastrik dengan jumlah garam biasa yang sama, sekali sehari selama 4 minggu, dan berat badan ditimbang sekali seminggu untuk menyesuaikan dos mengikut berat badan.

1. 6 pengumpulan dan pemprosesan sampel

1) Sampel dan penyediaan: 24 jam selepas penyusuan terakhir, berat badan tikus berpuasa ditimbang, dan tikus dikorbankan dengan dislokasi serviks, dan bahagian bawah abdomen segera dibuka dan tisu prostat di sekelilingnya dikeluarkan, dan prostat bebas. telah dikeluarkan, dan beberapa prostat telah dihomogenkan dalam homogenizer tisu dalam mandi ais untuk menyediakan penggantungan sel tunggal prostat, yang diwarnai dengan propidium iodide dalam prosedur satu langkah; Satu lagi bahagian tisu prostat telah ditetapkan dalam 25 g · L - 1 glutaraldehid, dan bahagian ultranipis telah disediakan.

2) Penyediaan penggantungan sel tunggal: prostat tikus yang utuh dikeluarkan ke dalam bekas di bawah keadaan steril, darah dan bekuan darah pada permukaan tisu prostat dibilas dengan PBS untuk membuang lemak cagaran di sekeliling dan lebihan membran berserabut dan sitoplasma, dan tisu prostat segar kira-kira 0.5 cm3 bersaiz telah dituai daripada prostat tikus yang sama, dicincang, dan penggantungan sel prostat telah disediakan.

Satu blok tisu prostat diletakkan di dalam cawan Petri dan sejumlah kecil PBS ditambah; Tisu digunting dengan gunting mata dalam mandi ais, dikisar homogenizer hingga ampaian, 10 ml PBS ditambah, homogenat tisu disedut dengan pipet, ditapis ke dalam tabung uji dengan 0.074 mm liang saiz nilon mesh, disentrifugasi pada 1500 R · min - 1 selama 3 min, dan pelet dibasuh tiga kali lagi dengan PBS, setiap kali dengan 500 R · min - 1 sentrifugasi kelajuan rendah masa singkat ke keluarkan serpihan sel, dan jaring nilon saiz liang 0.037 mm ditapis untuk mengeluarkan gumpalan sel. Sel telah dikira dan dilaraskan kepada kepekatan sel 2 × 109 · L - 1. Warnakan dengan 1 ml larutan pewarna PI selama 10 minit pada 4 darjah C dalam gelap.

3) Penyediaan bahagian ultrathin: penyediaan bahagian tisu ultrathin.

2 keputusan dan analisis

Ia diketahui daripada keputusan bahawa acteoside mempunyai kesan proapoptotik. Analisis statistik keputusan apoptosis sel menunjukkan bahawa kadar apoptosis tikus yang dirawat dengan dos tinggi, sederhana dan rendah acteoside masing-masing meningkat dengan ketara, dan perbezaan berbanding dengan kumpulan normal, kumpulan model, dan kumpulan positif adalah sangat jelas. . Ia menunjukkan bahawa acteoside boleh mendorong apoptosis sel, dan kesannya adalah lebih kuat daripada ubat kawalan positif alprostadil.

Kesan acteoside pada ultrastruktur sel hiperplasia prostat ditunjukkan oleh mikroskop elektron: dalam prostat tikus normal, nukleus yang boleh dilihat adalah utuh, nukleolus adalah jelas, dan taburan kromatin nuklear adalah sekata; Retikulum endoplasma kasar adalah konsisten dari segi saiz, tersusun secara teratur, tiada fenomena vakuolisasi, tiada protrusi mikrovili seperti jari pada permukaan epitelium, tiada fenomena pembengkakan mitokondria diperhatikan, dan terdapat sedikit rembesan luminal. Dalam kumpulan model, nukleus sel prostat jelas berubah bentuk dan mengecut, dan sitoplasmanya banyak; Retikulum endoplasma yang kasar telah diluaskan dengan ketara dan divakuolasi dengan ketara, dan vesikel dipenuhi dengan butiran protein berketumpatan tinggi; Mitokondria sedikit bengkak dengan rembesan padat sederhana dalam lumen dan butiran rembesan dilihat dalam beberapa sel. Dalam tikus yang dirawat dengan acteoside, nukleus adalah utuh berbanding dengan yang dalam kumpulan model, dengan nukleus sedikit pekat, peningkatan kekompakan nuklear, pengumpulan heterochromatin, beberapa vakuol dalam sitoplasma, dan lebih sedikit vakuol dalam retikulum endoplasma kasar; Dalam kumpulan acteoside dos rendah, nukleus sedikit mengecut, tidak teratur, dan sitoplasma lebih banyak, dan retikulum endoplasma kasar berkurangan.

3 Perbincangan

Pengesanan kuantitatif sel apoptosis oleh FCM adalah mudah, pantas dan objektif, dan boleh dilakukan dengan ujian multiparametrik, memberikan pemahaman yang lebih mendalam tentang perubahan dalam apoptosis dan kemungkinan mekanisme pengawalseliaannya.

Apoptosis ialah proses kematian sel yang diprogramkan dalam organisma multiselular untuk pengawalan perkembangan organisma, dan pengekalan homeostasis ditentukan oleh kod gen. Sel-sel apoptosis mempunyai ciri-ciri morfologi dan biologi yang unik: pyknosis kromatin dalam nukleus, degradasi pemecahan DNA yang meluas, pengecutan menyeluruh sel, pengecutan membran sel dengan proses luar menyelubungi organel, dan serpihan nukleus yang membentuk badan apoptosis ciri, supaya sel apoptosis bukan sahaja mengekalkan struktur dan fungsi membran sel yang utuh tetapi juga integriti struktur organel, yang berbeza daripada nekrosis sel. Mekanisme molekul apoptosis belum dijelaskan sepenuhnya sehingga kini, dan kajian telah menunjukkan bahawa pelbagai gen terlibat dalam pengawalan gen yang terlibat dalam apoptosis.

Apoptosis kini lebih berminat dalam proses BPH, yang dikodkan secara genetik dan membolehkan sel mengawal kematian sel dengan bertindak balas kepada isyarat tertentu. Selepas prostat berkembang kepada saiz dewasa, kadar percambahan sel prostat dikekalkan pada 1 peratus - 2 peratus oleh tindakan seimbang kadar apoptosis, dan gangguan keseimbangan ini telah lama dianggap sebagai punca BPH . Di bawah keadaan biasa, paras estrogen kepada androgen dalam prostat dan kitaran normal adalah keadaan homeostasis yang wujud antara proses proliferatif dan apoptosis. Apabila percambahan tidak seimbang dengan apoptosis, ia membawa kepada pertumbuhan dan pembesaran kelenjar selanjutnya, terutamanya melalui pengembangan antara septa sel epitelium. Gangguan keseimbangan ini mungkin berpunca daripada perubahan dalam tahap atau fungsi androgen; Sama ada tindak balas juga mungkin timbul daripada rangsangan DHT oleh AR atau daripada perubahan dalam tahap faktor pertumbuhan yang dimediasi oleh DHT. Dalam kajian ini, FCM telah dilakukan untuk mengesan apoptosis sel, dan didapati bahawa kadar apoptosis dalam prostat tikus yang diberi dos acteoside yang tinggi meningkat dengan ketara berbanding dengan kumpulan model. Mikroskopi elektron menunjukkan bahawa nukleus sel prostat dalam kumpulan model telah cacat, retikulum endoplasma kasar sangat diluaskan dalam vesikel, vesikel dipenuhi dengan zarah protein berketumpatan tinggi, dan vakuolisasi adalah jelas; Mitokondria sedikit bengkak, konsisten dengan laporan daripada kajian berkaitan

Tahap hiperplasia prostat pada tikus telah berkurangan dengan ketara selepas campur tangan acteoside. Kumpulan dos tinggi juga membangunkan tanda-tanda awal apoptosis: nukleus sel prostat sebahagian besarnya kekal utuh, dan vakuol retikulum endoplasma berkurangan dengan ketara. Nukleus telah terkondensasi dengan peningkatan kekompakan nuklear dan pengumpulan heterokromatin, serupa dengan pencirian sel daripada tisu prostat selepas pengebirian pada tikus. Digambarkan bahawa acteoside boleh mendorong apoptosis pada tikus dengan hiperplasia prostat, mengawal dan memulihkan keseimbangan antara apoptosis dan percambahan sel prostat, dan memberikan kesan perencatan pada percambahan sel prostat. Keputusan kajian semasa dan kajian terdahulu menunjukkan bahawa perencatan hiperplasia prostat oleh komponen kimia Cistanche, acteoside, mungkin dikaitkan dengan menggalakkan apoptosis sel dan melemahkan overexpression AR dan tgf-ur1, dan mekanisme terperinci masih perlu disiasat sepenuhnya.