Kesan Polysaccharide Mentah Dari Cistanche Deserticola Pada Antibody Vaksin Virus Penyakit Kaki dan Mulut Antibody Dan Subkumpulan Sel T

Hubungi: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com

ZHANG Ai-Lian; BA Xue-li; WANG Dan-yang; ZHAO Bing

Penyakit kaki dan mulut (FMD)adalah penyakit yang disebabkan olehvirus penyakit kaki dan mulut (FMDV)yang merebak di kalangan haiwan cloven-hoofed, serius membahayakan kesihatan ternakan dan menyebabkan kerugian ekonomi yang besar. Vaksinasi digunakan secara meluas sebagai cara yang berkesan untuk mencegah penyakit kaki dan mulut dan telah mencapai hasil yang luar biasa. Oleh kerana imunogenik virus penyakit kaki dan mulut yang lemah dalam antigen yang tidak aktif, sering diperlukan untuk menambah pembantu untuk memainkan peranannya [1-2]. Pada masa ini, adjuvant yang biasa digunakan dalam vaksin penyakit kaki dan mulut komersial adalah emulsi minyak ISA-206, yang merupakan pengaktif sel-sel dan juga boleh meningkatkan tindak balas imun humoral, tetapi kesan sampingannya agak besar. Walaupun terdapat banyak jenis adjuvants, seperti adjuvants yang biasa digunakan (adjuvants garam aluminium, emulsi air minyak, dan lain-lain) dan adjuvants baru (MF59, polysaccharides tumbuhan, dan lain-lain), adjuvants yang digunakan untuk vaksin penyakit kaki dan mulut masih terhad, terutamanya termasuk aluminium hidroksida, Span, minyak mineral ringan, dan lain-lain, semuanya mempunyai kecacatan yang berbeza, seperti kesan imun yang tidak memuaskan atau kesan yang sangat toksik dan sampingan [3-4]. Oleh itu, terdapat keperluan mendesak untuk membangunkan adjuvants baru yang cekap tinggi dan rendah ketoksikan untuk vaksin penyakit kaki dan mulut untuk meningkatkan kesan perlindungan imun vaksin, yang mempunyai kepentingan positif bagipencegahan dan rawatan penyakit kaki dan mulut.

Perubatan CinaHerba mempunyai prospek aplikasi yang luas dalam pencegahan dan rawatan penyakit berjangkit. Perubatan herba Cina mempunyai sejarah yang panjang untuk merawat penyakit manusia dan haiwan. Dalam bidang penyelidikan adjuvan vaksin, penyelidik domestik dan asing telah mengeluarkan polysaccharides dari pelbagai ubat herba Cina untuk mengkaji kesan adjuvan mereka, seperti ginseng polysaccharides, astragalus polysaccharides, tuckahoe polysaccharides, epimedium polysaccharides, dan lain-lain, dan mendapati bahawa mereka mempunyai fungsi imun terhadap manusia dan haiwan. Ia mempunyai kesan promosi yang baik dan menjadi calon baru [5-7].

Cistanche (Cistanche deserticola Y.C.Ma)adalah tumbuhan keluarga Dang keluarga. Ia adalah ubat herba Cina yang biasa digunakan dan telah digunakan sebagai makanan berkhasiat untuk kegunaan jangka panjang oleh orang ramai. Dalam tahun-tahun kebelakangan ini, penyelidik telah menjalankan banyak kerja penyelidikan mengenai struktur kimia dan aktiviti farmakologi Polysaccharide dari Cistanche dan mendapati bahawa bahan-bahan aktifnya terutamanya termasuk polysaccharides, jumlah phenylethanoid glikosida, alkaloid, dan lain-lain, di antaranya kandungan polysaccharides agak tinggi dan boleh diselaraskan. Sistem imun mempunyai kesan anti-pengoksidaan dan anti-penuaan [8-9].

Cistanche(Cistanche deserticola Y.C.Ma)

Kajian awal mendapati bahawa gabungan pasir cistanche mentah polysaccharide dan tikus yang diimunisasi OVA dengan ketara meningkatkan tahap antibodi khusus OVA, dan keserasian dengan vaksin influenza dapat meningkatkan tahap antibodi antibodi vaksin influenza [10-11]. Memandangkan ini, kajian ini menggunakan polysaccharide mentah Cistanche deserticola sebagai calon adjuvant untuk vaksin penyakit kaki dan mulut yang tidak aktif, dan adjuvants larut air terpilih dengan kesan peningkatan imun yang ketara dan kesan sampingan yang kecil, supayaPolysaccharide mentah dari Cistanche deserticola boleh digunakan dengan berkesan sebagai pembantu baru untuk vaksin penyakit kaki dan mulut.

Penyediaan ejen

Dalam kajian ini,Polysaccharide Crude dari Cistanche deserticola (CDCP)telah digabungkan denganvirus penyakit kaki dan mulutuntuk menyediakan vaksin. Tikus ICR telah diimunisasi melalui laluan otot. Kesan imunisasi terhadap tindak balas imun humoral dan selular tikus telah dikesan dan keselamatan mereka diperhatikan. Pembangunan pembantu baru yang selamat untuk vaksin penyakit kaki dan mulut memberikan rujukan.

Polysaccharide Crude dari Cistanche deserticola

Kesan Polysaccharide Crude dari Cistanche deserticola (CDCP) pada tahap antibodi khusus FMDV dalam serum

Tahap serum IgG menunjukkan trend peningkatan secara beransur-ansur pada 14 hari, 21 hari, dan 28 hari selepas wabak awal (Rajah 1). Pada 14 dan 21 hari selepas imunisasi awal, tahap antibodi kumpulan FMDV Ag/CDCP jauh lebih tinggi daripada kumpulan bebas adjuvant FMDV-Ag (P<0.05), and="" there="" was="" no="" significant="" difference="" from="" the="" fmdv="" group="" (p="">0.05). Pada 28 hari selepas imunisasi awal, berbanding dengan FMDV-Ag tanpa adjuvant, tahap antibodi IgG FMDV-Ag/CDCP meningkat dengan ketara (P P<0.05), but="" it="" was="" extremely="" significantly="" lower="" than="" that="" of="" the="" fmdv/isa-206="" group=""><0.01). the="" antibody="" level="" of="" the="" fmdv-ag="" adjuvant-free="" group="" was="" significantly="" different="" from="" that="" of="" the="" 0.9%="" nacl="" control="" group=""><>

Polysaccharide crude dari Cistanche deserticola (CDCP) mengenai percambahan limfosit splenic

21 hari selepas imunisasi awal, kaedah MTT digunakan untuk mengesan kesan percambahan Polysaccharide Crude dari Cistanche deserticola pada limfosit splenik. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 2, selepas FMDV-Ag merangsang limfosit splenic in vitro, indeks rangsangan limfosit kumpulan FMDV-Ag/CDCP jauh lebih tinggi daripada kumpulan FMDV-Ag no adjuvant (P<0.05), and="" compared="" with="" fmdv/isa-206="" there="" was="" no="" significant="" difference="" between="" the="" groups="" (p="">0.05). Selepas rangsangan oleh ConA dan LPS, ia boleh meningkatkan percambahan limfosit splenic (P<>

Kesan Polysaccharide Crude dari Cistanche deserticola (CDCP) pada ungkapan sel CD4+ dan CD8+ T

21 hari selepas imunisasi awal, kesan CDCP dan FMDV-Ag pada sel CD4+ dan CD8+ T dalam limpa tikus telah diuji. Keputusan ditunjukkan dalam Rajah 3-A D. Nisbah subset sel CD3+, CD4+, CD3+, CD8+ T dalam kumpulan FMDV-Ag/CDCP jauh lebih tinggi daripada kumpulan bebas adjuvant FMDV-Ag (P<0.05), and="" compared="" with="" fmdv/isa-="" the="" difference="" between="" the="" 206="" groups="" was="" not="" significant="" (p="">0.05). Kumpulan bebas adjuvan FMDV-Ag tidak meningkatkan ekspresi sel CD4+ dan CD8+ T.

Kesan Polysaccharide Mentah dari Cistanche deserticola (CDCP) pada CD4+, CD44+, dan CD8+CD44+ subset sel T

Untuk memerhatikan kesan Polysaccharide Crude dari Cistanche deserticola pada sel T efektor, sitometri aliran digunakan untuk mengesan ungkapan CD4+, CD44+, dan CD8+, CD44+ dalam sel limpa tikus selepas imunisasi. Keputusan ditunjukkan dalam Rajah 4-AD. Peratusan CD4+, CD44+, dan CD8+, CD44+ dalam kumpulan FMDV Ag/CDCP jauh lebih tinggi daripada yang berada dalam kumpulan bebas adjuvant FMDV-Ag (P<0.05), and="" were="" different="" from="" the="" fmdv/isa-206="" group="" not="" significant="" (p="">0.05).

Kesan Polysaccharide Crude dari Cistanche deserticola (CDCP) pada pertumbuhan tikus

Selepas mengimunisasi haiwan dengan Polysaccharide Crude dari Cistanche deserticola melalui laluan otot, pertumbuhan tikus diperhatikan sepanjang tempoh imunisasi dan berat badan ditimbang setiap minggu untuk memerhatikan granuloma di tapak suntikan (Jadual 1). Selepas imunisasi, tikus tidak mengalami keguguran rambut atau keengganan untuk makan. Berat setiap kumpulan tikus meningkat secara normal pada 14 d, 21 d, dan 28 d selepas imunisasi, dan tidak ada perubahan ketara dalam berat badan antara kumpulan (P>0.05). Tikus dalam kumpulan FMDV Ag/CDCP tidak mempunyai granuloma di tapak suntikan, dan tikus divirus penyakit kaki dan mulutKumpulan vaksin yang mengandungi ISA 206 adjuvan minyak mempunyai granulomas di tapak suntikan.

Adjuvants telah digunakan dalam pelbagai vaksin untuk masa yang lama, boleh membantu vaksin untuk memainkan kesan yang menggalakkan imun, mengurangkan dos vaksin, dan memainkan peranan yang sangat penting dalam pencegahan dan wabak penyakit berjangkit [3]. Dengan pembangunan vaksin baru, sama ada dalam bidang penyelidikan vaksin veterinar atau penyelidikan vaksin manusia, keperluan untuk kuantiti dan kualiti adjuvants vaksin semakin tinggi dan lebih tinggi. Adjuvan baru yang ideal harus mempunyai kesan merangsang yang berkesan terhadap imuniti selular atau humoral badan, mempunyai kesan yang tahan lama dan stabil, mengurangkan bilangan imunisasi, mempunyai kesan sampingan yang lebih sedikit, dan mudah dihasilkan dan mudah disuntik [13].

Divirus penyakit kaki dan mulutvaksin yang tidak aktif, adjuvants minyak biasanya ditambah untuk meningkatkan imuniti vaksin, tetapi terdapat kelemahan seperti tekanan imun yang tinggi. Berbanding dengan adjuvants minyak, adjuvants air mudah digunakan, boleh disalah anggap dengan antigen vaksin dalam sebarang nisbah, tidak memerlukan emulsifikasi, dan mudah disuntik. Oleh itu, adjuvants air mempunyai prospek aplikasi yang baik dalam vaksin FMDV. Polisakarida herba Cina mempunyai kesan imunomodulator yang baik, digabungkan dengan kelebihannya dalam keselamatan, pleiotropi, dan kemerdekaan, dan menjadi titik panas dalam penyelidikan adjuvants vaksin baru [14]. Dalam bidang penyelidikan adjuvan vaksin FMDV, beberapa polysaccharides herba Cina digunakan dalam penyelidikan adjuvants baru. Sebagai contoh, polysaccharides astragalus digunakan sebagai adjuvants untuk vaksin FMDV. Imunisasi oral boleh meningkatkan imuniti humoral dan selular, dan dos yang rendah boleh menghalang sel dendritik matang, dos yang tinggi boleh menggalakkan kematangannya.

Penyelidik juga telah menggunakan polysaccharides dari Baizu dan polysaccharides dariEucommiasebagai adjuvants of thevirus penyakit kaki dan mulutvaksin untuk meneroka kesan peningkatan imun mereka [15-17]. Oleh kerana perbezaan besar dalam kandungan bahan aktif ubat-ubatan herba Cina yang berbeza, pemeriksaan yang luas dari ubat-ubatan herba Cina dengan aktiviti imunologi untuk mencari adjuvants yang sesuai adalah sangat penting untuk pencegahan penyakit dan kesihatan manusia dan juga merupakan hotspot penyelidikan dalam bidang vaksinologi. Dalam percubaan ini, aPolysaccharide Crude dari Cistanche deserticolatelah dipilih sebagai calon pembantu untukvirus penyakit kaki dan mulutvaksin, dan kajian eksperimen kesan adjuvan telah dijalankan. Pencegahan dan rawatan penyakit berjangkit terutamanya bergantung kepada tindak balas imun humoral yang dimediasi oleh limfosit B dan tindak balas imun selular yang dimediasi oleh limfosit T [18-20].

Keranavirus penyakit kaki dan mulutvaksin sebenarnya menggunakan imunisasi otot dalam pengeluaran, laluan otot digunakan untuk mengimunisasi tikus dalam eksperimen, dan kesan peningkatan imun CDCP dinilai dengan menilai kesan CDCP pada pengeluaran antibodi dan subset sel T, dan keselamatannya dinilai. Pemerhatian awal. Hasil kajian menunjukkan bahawa polysaccharide mentah cistanche Cistanche boleh meningkatkan tahap antibodi khusus untuk FMDV pada 14 dan 21 hari selepas imunisasi, dan tidak ada perbezaan yang signifikan antara kesan dan tahap ADjuvant ISA-206; tahap antibodi pada 28 hari selepas imunisasi adalah lebih rendah daripada ISA-206 minyak Adjuvant, yang menunjukkan bahawaPolysaccharide crude dari Cistanche deserticola boleh meningkatkan tahap imuniti humoraldalam tempoh masa tertentu selepas imunisasi. Kadar percambahan limfosit secara positif dikaitkan dengan tahap indeks rangsangan. Dalam percubaan MTT,Polysaccharide mentah dari Cistanche deserticola boleh menggalakkan percambahan limfositdirangsang oleh antigen FMDV, ConA, dan LPS. Dalam percubaan subkumpulan sel T, CDCP bukan sahaja dapat meningkatkan ekspresi sel CD4+ dan CD8+ T, tetapi juga meningkatkan tahap sel CD4+, CD44+ dan CD8+, CD44+ effector T, dan tidak ada perbezaan yang signifikan dari kumpulan adjuvant ISA-206; dalam keselamatan Dalam eksperimen seksual, didapati bahawa tikus dalam kumpulan vaksin yang mengandungi ISA-206 mempunyai granulomas di tapak suntikan, manakala kumpulan vaksin yang mengandungi adjuvan air CDCP tidak menemui granulomas, yang secara preliminarily menunjukkan bahawaPolysaccharide Crude dari Cistanche deserticola mempunyai keselamatan yang baik. Untuk keselamatan selanjutnya, eksperimen yang berkaitan perlu dijalankan untuk mengesahkan.

Polysaccharide Crude dari Cistanche deserticolabukan sahaja meningkatkan tindak balas imun humoral, tetapi juga meningkatkan tahap percambahan limfosit, mempromosikan tahap subset sel CD4+ dan CD8+ T, sel T efektor aktif, dan tiada granulomas di tapak suntikan ditemui selepas suntikan. Tikus tumbuh secara normal dan tidak mempunyai tingkah laku yang tidak normal. Hasil penyelidikan ini menyediakan asas untuk penyelidikan lanjut mengenaiPolysaccharide Crude dari Cistanche deserticolasebagai pembantu baru untukvirus penyakit kaki dan mulutvaksin dan juga menyediakan rujukan yang berguna untuk penggunaan adjuvants polysaccharide dalam vaksin lain.

Rujukan

[1]Diaz-san Segundo F, Median GN, Steinfeldt C, et al. Vaksin penyakit kaki dan mulut[J]. Vet Microbiol, 2017, 206:102-112.

[2]Park JH. Keperluan untuk vaksin yang lebih baik terhadap wabak penyakit kaki dan mulut[J]. Clin Exp Vaccine Res, 2013, 2(1): 8-18.

[3]Cao Y. Adjuvants untuk vaksin virus penyakit kaki dan mulut: kemajuan baru-baru ini[J]. Pakar Rev Vaksin, 2014, 13(11):1377-1385.

[4]Parid AS. Vaksinasi terhadap virus penyakit kaki dan mulut: strategi dan keberkesanan[J]. Pakar Rev Vaksin, 2009, 8:347-365.

[5]Licciardi PV, Underwood JR. Ubat-ubatan yang berasal dari tumbuhan: kelas baru adjuvants imunologi[J]. Int Immunopharmacol, 2011, 11(3):390-398.

[6]Sun B, Yu S, Zhao D, et al. Polysaccharides sebagai adjuvants vaksin[J]. Vaksin, 2018, 36:5226-5234.

[7]Meng XY, Chu ZF, Zhang JJ, et al. Fungsi Imunomodulator Ginkgo biloba meninggalkan polysaccharide pada vaksin vvIBDV[J]. ChinaJ Vet Sci, 2019, 39(4):640-645.

[8]Tu PF, Jiang Y, Guo YH, et al. Penyelidikan dan pembangunan perindustrian Cistanche[J]. Chin Pharm J, 2011, 46(12):882-887.

[9]Zhang W, Huang J, Wei W, et al. Pengekstrakan, pemurnian, pencirian dan aktiviti antioksidan polysaccharides dari Cistanche tubulosa[J]. Int J Biol Macromol, 2016, 93:448-458.