Kesan Cistanche Shenqiwan Terhadap Kerosakan Buah Pinggang, GRP78, Dan Faktor Berkaitan Autophagy dalam Tikus Lemak Diabetik Zucker Dengan Diabetes Mellitus Jenis 2

jumlah garam biasa. Tikus diberikan secara berterusan selama 4 minggu. Keadaan umum tikus diperhatikan dengan kerap. Paras glukosa darah puasa (FBG) dan 24-jam mikroalbumin kencing (24 jam U-mAlb) telah diukur. Tisu buah pinggang diwarnakan dan morfologi diperhatikan. Struktur ultra mikro diperhatikan oleh mikroskop elektron penghantaran. Tahap mRNA GRP78, Beclin-1 dan LC3 dalam tisu buah pinggang tikus telah diperiksa oleh PCR masa nyata dan tahap protein telah diperiksa dengan Western blotting. Keputusan Berbanding dengan kumpulan model, tikus dalam kumpulan Shenqiwan menunjukkan

kilauan bulu yang lebih baik, peningkatan berat badan dan lebih banyak aktiviti; kedua-dua tahap FBG dan 24 jam U-mAlb telah menurun (P < 0.05). Thebuah pinggangtikus dalam kumpulan model menunjukkankapilari glomerular diluaskan, membran bawah tanah yang menebal secara tidak teratur, kawasan mesangial yang melebar, dan sklerosis segmen; atrofi tiub buah pinggang dan tisu berserabut celahan buah pinggang juga diperhatikan dalam buah pinggang ini. Perubahan patologi ini telah dikurangkan dalam kumpulan Shenqiwan. Berbanding dengan kumpulan model, kedua-dua tahap gen dan protein GRP78 telah menurun (P < 0.05) dalam kumpulan Shenqiwan; tahap protein Beclin-1

telah menurun (P < {{0}}.05); dan tahap protein LC3 telah meningkat (P <0.05). Kesimpulan Shenqiwan boleh mengurangkan kerosakan buah pinggang pada tikus ZDF dan melambatkan perkembangan penyakit buah pinggang diabetik dengan mengurangkan tekanan retikulum endoplasma dan meningkatkan autophagy.

 

Kata kunci: Shenqiwan;diabetes mellitus jenis 2; penyakit buah pinggang kencing manis; tekanan retikulum endoplasma;autophagy; GRP78; Tikus berlemak kencing manis Zucker

Klik Di Sini Untuk Mengetahui Maklumat Lanjut tentang Produk Cistanche untuk Rawatan penyakit buah pinggang Diabetik

TANYA UNTUK MAKLUMAT LANJUT:

wallence.suen@wecistanche.com 0015292862950

 

 

Penyakit buah pinggang kencing manis(DKD) adalah komplikasi mikrovaskular yang penting bagikencing manisdan punca utamapenyakit buah pinggang peringkat akhir[1]. DKD adalah pentingkomplikasi mikrovaskular diabetesdanpunca utama penyakit buah pinggang peringkat akhir[1]. Pesakit dengan DKD mungkin mengalami proteinuria yang berterusan dan berkurangan secara berterusankadar penapisan glomerular[2]. Thepatogenesis DKDadalah kompleks, dan kajian baru-baru ini telah menunjukkan bahawa tekanan retikulum endoplasma (ERS) dalam buah pinggang adalah penyebab paling biasa penyakit buah pinggang peringkat akhir. （Tegasan retikulum endoplasma (ERS) dan autophagy juga berkait rapat dengan DKD, dan kajian patogenesisnya mungkin penting untuk rawatan DKD. DKD lebih mirip dengan "kepupusan yang lebih rendah" dalam kategori gangguan dahaga dalam perubatan Cina.
Gejala tipikal dahaga dan minum berlebihan serta membuang air kecil direkodkan dalam Jin Kui Yao (Essentials of the Golden Horoskop), danPil Qi Buah Pinggangdicadangkan sebagai formula terapeutik utama. Jin Kui Yao (金匮要略) merekodkan simptom tipikal dahaga dan kencing yang berlebihan dan mencadangkanPil Qi Buah Pinggangsebagai formula rawatan utama. Rawatan DKD dengan TCM sememangnya boleh melindungi fungsi buah pinggang dengan berkesan dan mempunyai ciri-ciri yang selamat dan boleh dipercayai [5-6]. Rawatan DKD dengan perubatan Cina boleh melindungi fungsi buah pinggang dengan berkesan dan mempunyai ciri-ciri selamat dan boleh dipercayai [5-6]. Keberkesanan Pil Qi Buah Pinggang dalam menguatkan buah pinggang dan membantu Yang telah disahkan dalam kajian berkaitan [7]. Kajian terdahulu kami juga Kajian terdahulu kami juga menunjukkan bahawa pil qi buah pinggang mempunyai kesan perlindungan yang baik pada struktur dan fungsi tisu buah pinggang pada tikus diabetes [8]. Dalam kajian ini, kami memerhatikan kesan pil qi buah pinggang pada Dalam kajian ini, kami melihat kesan pil qi buah pinggang terhadap kerosakan tisu buah pinggang, ERS, dan faktor berkaitan autophagy dalam tikus lemak diabetes Zucker (ZDF). Dalam kajian ini, kami menyiasat kemungkinan mekanisme kerosakan buah pinggang dalam tikus ZDF dengan memerhatikan kesan pil qi buah pinggang padakerosakan tisu buah pinggang, ERS dan faktor berkaitan autophagy yang dimediasi oleh pil qi buah pinggang.

1 Bahan
1.1 Haiwan eksperimen
Dua puluh 12-tikus ZDF jantan SPF seminggu (jisim badan 390-410 g, diberi makan ayam tikus berkualiti tinggi 5C08 selama 4 minggu untuk melengkapkan induksi diabetes jenis 2) dan tujuh 12-minggu- tikus SPF jantan Zucker Lean (ZL) lama (jisim badan 350-380 g) telah dibeli daripada Beijing Viton Lehua Laboratory Animal Technology Co. Semua tikus ditempatkan di persekitaran penghalang Institut Perubatan Klinikal, Hospital Persahabatan China-Jepun , nombor lesen: SYXK (Beijing) 2016-0043, dan platform menyediakan sistem pengudaraan bebas di dalam penghalang, mengekalkan 12-jam bergantian terang dan gelap, suhu bilik 23-25 darjah , dan kelembapan bandingan bilik sebanyak 50 peratus -60 peratus . Semua tikus dibenarkan minum dan makan secara bebas semasa tempoh makan.

1.2 Kajian semula etika
Eksperimen haiwan telah diluluskan oleh Jawatankuasa Kecil Etika Haiwan Eksperimen Jawatankuasa Akademik Universiti Perubatan Tradisional Cina (BUCM) Beijing dengan nombor kelulusan BUCM-4-2021102801-4034.
1.3 Ubat dan reagen utama
Tablet (Shu Di Huang, Shan Yu Fei, Shan Yao, Mudan Pi, Fu Ling,Cistanche, Ze Xie, Gunner's Fructus, Gui Zhi) untuk merebusQi buah pinggangPil dibeli daripada Beijing Tong Ren Tang Co. Physiological saline, spesifikasi: 500 mL, disediakan oleh Shandong Hualu Pharmaceutical Co. Silver Staining Solution (Beijing Regen Biotechnology Co., Ltd., Lot No. DG0090), Magic SYBR Mixture (Jiangsu Kangwei Century Biotechnology Co., Ltd.), Kit Transkripsi Terbalik mRNA (Thermo Fisher Scientific, Inc.), RNA TRIzol Reagent (RNA TRIzol Reagent), RNA TRIzol Reagent (RNA TRIzol Reagent). Reagen RNA TRIzol (Beijing Solabao Technology Co., Ltd.), Kit ELISA Mikroalbumin Urin Tikus (Jiangsu Kote Biotechnology Co., Ltd., No. Lot KT8560-A), Antibodi GRP78 BiP, Antibodi LC3B dan Beclin{ {5}} Antibodi (Abcam, UK) (nombor kelompok: ab108613, ab192890, ab207612), antibodi poliklonal anti-GAPDH arnab (Proteintech, USA), kambing anti-arnab IgG(H&L)-HRP (Beijing Baiao Yijie Technology Co. Ltd.).

 

Meter glukosa darah, jalur ujian glukosa darah (Shanghai Roche Diagnostic Products Co. Ltd.), emparan berkelajuan tinggi suhu rendah (Eppendorf, Jerman), instrumen PCR kuantitatif pendarfluor, instrumen elektroforesis menegak berganda dan instrumen elektroforesis pemindahan (Burroughs Life Medical Products Co. Ltd.), pengimejan gel (Protein Simple, USA), mikroskop cahaya (Leica, Jerman), mikroskop elektron penghantaran (Leica, Jerman) dan pengimejan gel. (Leica, Jerman), mikroskop elektron penghantaran (Hitachi, Jepun).

2 Kaedah
2.1 Penyediaan ubat eksperimen
Air rebusan daripadaPil Buah Pinggang-Qitelah disediakan dengan menukarkan dos Pil Kidney-Qi dalam Jin Kui Yao [9] mengikut nisbah kuno dan moden sistem metrologi Han dalam edisi pertama "Kajian tentang Dos dan Perkadaran Preskripsi Typhoid" [2015] ], dan dos rebusan yang diperlukan untuk eksperimen adalah seperti berikut: Shu Di Huang 24 g, Shan Yu Fei 12 g,Cistanche10 g, Shan Yao 12 g, Mudan Pi 9 g, Fu Ling 9 g, Ze Xie 9 g, Gunnera 3 g dan Gui Zhi 3 g. Dadah direndam dalam air suling selama 2 jam. Air rebusan itu kemudiannya dipekatkan selama 30 minit dan ditapis melalui kain kasa steril. Rebus herba selama 30 minit, kemudian masukkan ubat yang tinggal dan rebus selama 1 jam. Selepas suhu larutan diturunkan ke suhu bilik, larutan dipekatkan dan ditapis melalui kasa steril, dan turasan dibungkus dan disimpan pada -20 darjah . Ubat harus disimpan selama tidak lebih dari 1 minggu, dan larutan harus dibawa ke suhu bilik sebelum diberikan.

2.2 Penubuhan dan pengelompokan model haiwan
Tikus ZDF telah diinduksi dengan diet tinggi lemak 5C08 selama 4 minggu dan glukosa darah diukur dengan pengumpulan darah hujung ekor pada usia 12 minggu. Tikus dalam kumpulan pil qi buah pinggang diberi air rebusan pil qi buah pinggang, dan dos harian 8.12 g/kg setiap tikus dikira mengikut formula dalam "Model penyakit dalam haiwan eksperimen" [10], dan kepekatan dos ialah 0.812 g/mL, dan tikus dalam model dan kumpulan kawalan diberi garam dalam jumlah yang sepadan selama 4 minggu.

2.3 Keadaan am dan ujian glukosa darah puasa (FBG) tikus
Keadaan umum tikus diperhatikan dan direkodkan setiap hari, dan jisim badan ditimbang secara berkala. Pada penghujung umur 12 minggu dan 16 minggu, darah dikumpulkan dari hujung ekor tikus selepas 8 jam berpuasa, dan FBG diukur dengan meter glukosa darah Roche dan jalur ujian. 2.4 24-h mikroalbumin kencing (24-h U-mAlb) diukur pada penghujung umur 16 minggu dan 24-h kepekatan U-mAlb diukur mengikut arahan daripada kit LISA.

2.5 Pengumpulan spesimen tisu buah pinggang
Pada akhir umur 16 minggu, semua tikus berpuasa selama 8 jam. Selepas anestesia, rongga perut dibuka dan buah pinggang dua hala terdedah, dan peritoneum dikeluarkan secara utuh dan dikupas. Korteks buah pinggang dipisahkan dan sebahagiannya difiksasi dalam 4 peratus paraformaldehid untuk penyediaan bahagian parafin 3 μm; sebahagiannya dipotong menjadi blok tisu 1 mm3 dan difikatkan dalam 2.5 peratus glutaraldehid untuk penyediaan bahagian ultranipis. Tisu buah pinggang yang tinggal disimpan pada -80 darjah untuk PCR Masa Nyata dan ujian Western blotting.

 

2.6 Aplikasi pemerhatian morfologi tisu buah pinggang
Pewarnaan PAS, pewarnaan Masson, dan pewarnaan hexaammonium silver-hematoxylin-eosin digunakan untuk memerhatikanperubahan histopatologi buah pinggangdi bawah mikroskop cahaya dan untuk mendapatkan imej. Mikroskopi elektron penghantaran digunakan untuk memerhatikan perubahan ultrastruktur tisu buah pinggang dan imej telah dikumpulkan.

 

2.7 Ujian PCR masa nyata
bekutisu buah pinggangdikisar di atas ais dan reagen TRIzol telah ditambah untuk mengekstrak jumlah RNA, dan disentrifugasi pada 4 darjah dengan jejari 9.5 cm. Supernatan diekstrak dengan sentrifugasi pada 12 000 r/min selama 10 min, dan kemudian diempar selama 15 minit dengan kloroform. Supernatan itu disentrifugasi semula selama 15 minit pada suhu bilik selama 10 minit, dan supernatan itu dibasuh dengan 75 peratus etanol. ekspresi pada tahap mRNA. Primer direka bentuk menggunakan perisian Primer Premier 5.0 dan disintesis oleh Shanghai Bioengineering Co. Ltd. Urutan primer adalah seperti berikut.