Kaedah Pengesanan Peredaran Eksosomal PD-L1

Hubungi:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Masih terdapat kekurangan kaedah yang diterima dan arus perdana untuk pengesanan PD-L1 eksosomal yang beredar. Kaedah pengesanan eksosom tradisional seperti ujian imunosorben berkaitan enzim (ELISA) dan analisis aliran boleh digunakan untuk mengesan PD-L1 dalam eksosom yang beredar, dan ELISA merupakan kaedah yang paling biasa digunakan pada masa ini. Kaedah ELISA secara kuantitatif boleh mengesan kandungan PD-L1 dalam eksosom yang beredar dan mudah dikendalikan. Sitometri aliran boleh digunakan untuk mengesan secara kuantitatif PD-L1 eksosomal yang beredar dalam sampel besar, tetapi ia memerlukan peralatan pengesanan yang tinggi. Dengan penyelidikan yang mendalam tentang eksosom, kaedah pengesanan protein eksosom dan asid nukleik juga diperkaya dan dibangunkan, dan beberapa kaedah baharu telah diperkenalkan ke dalam bidang pengesanan PD-L1 dalam eksosom beredar (Rajah).

PengesananberedareksosomalPD-L1

1. PCR Digital

Oleh kerana sejumlah kecil asid nukleik yang terkandung dalam eksosom, adalah sukar bagi kaedah pengesanan konvensional untuk mengesan nombor salinan gen mereka dengan tepat. Teknologi PCR digital ialah kaedah pengesanan asid nukleik dengan sensitiviti yang sangat tinggi dan kuantiti mutlak. Sensitivitinya boleh mencapai tahap molekul asid nukleik tunggal, jadi ia mempunyai kelebihan dalam mengesan kandungan asid nukleik eksosom. Para penyelidik menggunakan teknologi PCR digital untuk menganalisis secara kuantitatif nombor salinan mRNA PD-L1 dalam eksosom plasma pesakit dengan melanoma dan kanser paru-paru bukan sel kecil dan mendedahkan hubungan antara nombor salinan mRNA PD-L1 eksosomal plasma dan Korelasi anti-PD1 antara kesan rawatan. Pengenalan teknologi PCR digital telah meningkatkan dengan ketara keupayaan pengesanan mRNA PD-L1 eksosomal, yang sangat penting kepada penyelidikan PD-L1 eksosomal. Walau bagaimanapun, mungkin terdapat ketidakkonsistenan antara kandungan mRNA PD-L1 eksosomal dan ekspresi protein PD-L1. Oleh itu, pengesanan mRNA PD-L1 eksosomal sahaja mungkin mempunyai kecacatan tertentu, yang memerlukan penyelidikan dan penjelasan lanjut.

Manfaat cistanche gurun anti-kanser daripada ekstrak cistanche

2. ELISA

ELISA ialah kaedah analisis imunologi tradisional, yang sering digunakan untuk mengesan protein molekul kecil dalam plasma atau medium kultur. Ia mempunyai sensitiviti yang tinggi dan boleh dianalisis secara kuantitatif. ELISA juga boleh digunakan untuk mengesan protein PD-L1 eksosomal dan boleh mencapai pengesanan kuantitatif bagi kumpulan besar sampel. Kit pengesanan protein PD-L1 berdasarkan prinsip kaedah ELISA juga telah digunakan untuk pengesanan kuantitatif protein PD-L1 eksosomal plasma. Chen et al. membina sistem pengesanan protein PD-L1 eksosomal berdasarkan prinsip ELISA, yang digunakan untuk pengesanan protein PD-L1 eksosomal yang diperoleh daripada medium kultur sel atau plasma. Julat pengesanan linear ialah {{10}}.2-12.0 ng/mL. ELISA ialah kaedah yang baik untuk mengesan protein PD-L1 eksosomal, yang mudah dikesan secara kuantitatif dan mempunyai kebolehulangan yang baik. Walau bagaimanapun, disebabkan kehadiran protein PD-L1 percuma dalam plasma, ia akan mengganggu ketepatannya. Oleh itu, kaedah ini mengesan peredaran. Kepekaan dan kekhususan protein PD-L1 eksosomal masih perlu diterokai lebih lanjut.

Akar cistanche herba: anti-kanser

3. Kaedah analisis aliran

Sitometri aliran sering digunakan untuk menaip dan mengira sel atau zarah biologi lain yang terampai dalam cecair, jadi kaedah ini juga telah diperkenalkan ke dalam pengesanan dan pengiraan eksosom. THEODORAKIS et al. mula-mula menggunakan kromatografi untuk mengasingkan eksosom pada mulanya dalam plasma pesakit kanser kepala dan leher dan kemudian menggunakan analisis aliran untuk mengesan dan mengira PD-L1-eksosom positif. Ekspresi protein PD-L1 dinyatakan sebagai keamatan pendarfluor. Keputusan menunjukkan bahawa kaedah tersebut mempunyai kebolehulangan yang baik dalam mengesan protein PD-L1 eksosomal, dan variasi intra-individunya ialah 7 peratus apabila pelbagai ujian selari dilakukan pada sampel pesakit tunggal. Pada masa yang sama, untuk mengesahkan ketepatan kaedah, para penyelidik menggunakan analisis pendarfluor confocal sebagai kaedah rujukan untuk pengesanan protein PD-L1 eksosomal. Tiga sampel telah diuji secara selari, dan hasilnya dibandingkan, dan didapati bahawa keputusan sitometri aliran dan analisis pendarfluor confocal adalah sangat konsisten, menunjukkan bahawa sitometri aliran adalah kaedah yang tepat untuk analisis kuantitatif exosomal PD-L1. Di samping itu, LUX et al. juga berjaya mengesan ekspresi protein PD-L1 dan c-Met eksosomal dalam serum pesakit kanser pankreas melalui sitometri aliran, tetapi prestasi kaedah pengesanan perlu dikaji lebih lanjut. Pada masa ini, penganalisis aliran yang digunakan khas untuk pengesanan eksosom juga telah dilancarkan, seperti penganalisis aliran nano ultra-sensitif Apogee, yang lebih sesuai untuk pengesanan protein eksosom daripada penganalisis aliran tradisional.

Manfaat suplemen ekstrak cistanche tubulosa: anti-tumor dan kanser

4. Teknologi Penyebaran Raman yang Dipertingkatkan Permukaan

Penyebaran Raman yang dipertingkatkan permukaan (SERS) ialah teknik spektroskopi cap jari yang sangat sensitif yang telah digunakan secara meluas dalam bidang bioperubatan. Pada masa ini, sarjana telah menggunakan teknologi SERS untuk mengesan protein PD-L1 eksosomal. Para penyelidik mula-mula menggunakan TiO2-manik magnet yang diubah suai untuk menjerap eksosom secara tidak khusus dalam plasma, dan kemudian menggunakan probe SERS yang dikaitkan dengan antibodi PD-L1 untuk mengubah suai nanozarah emas, dan kemudian mengeram sampel eksosom dengan nanozarah emas. Ia membentuk struktur kompleks nanopartikel manik-eksosom-emas magnetik, dan akhirnya menggunakan medan magnet untuk memperkaya dan memisahkan kompleks, dan kemudian meletakkan pada spektrometer Raman confocal laser untuk pengesanan, untuk merealisasikan pengesanan eksosom positif PD-L1 . Pengesanan kandungan badan. Kaedah ini mempunyai sensitiviti pengesanan yang tinggi, dan had pengesanan terendahnya boleh mencapai 1 PD-L1 ditambah plasma exosome/μL. Selain itu, penyelidik menggunakan kaedah ini untuk mengesan sekumpulan sampel dengan kepekatan yang berbeza. Keputusan menunjukkan bahawa keamatan SERS adalah berkaitan secara linear dengan logaritma kepekatan sampel eksosom, menunjukkan bahawa kaedah pengesanan mempunyai kestabilan yang baik dan boleh digunakan secara langsung dalam plasma. Kesan eksosom tanpa langkah pengasingan eksosom tambahan. Pada masa ini, terdapat beberapa kajian mengenai aplikasi langsung teknologi SERS untuk pengesanan protein PD-L1 eksosomal, tetapi penyelidikan mengenai aplikasi teknologi SERS untuk pengesanan eksosom lain telah dijalankan, yang juga mempunyai rujukan penting. untuk pengesanan nilai protein PD-L1 eksosomal.

Keadaan tumbuh cistanche desertliving

5. kaedah HOLMES-ExoPD-L1

Kaedah HOLMES-ExoPD-L1 ialah kaedah pengesanan baru bagi protein PD-L1 eksosomal. Dalam kaedah ini, aptamer MJ5C baharu yang menyasarkan protein PD-L1 telah direka bentuk, yang boleh mengikat protein PD-L1 dengan cekap pada membran eksosom dan tidak diganggu oleh glikosilasi protein PD-L1. Dalam kaedah ini, aptamer dan eksosom MJ5C berlabel pendarfluor pertama kali diinkubasi bersama dalam kapilari nipis untuk mengikat antara satu sama lain, dan laser inframerah difokuskan ke dalam kapilari nipis untuk membentuk kecerunan suhu skala mikron. Kadar termoforesis bagi kompleks aptamer MJ5C bebas dan kompleks aptamer MJ5C eksosomal adalah berbeza dengan ketara, dan penyusutan termoforesis aptamer bebas adalah lebih cepat daripada kompleks aptamer eksosom. dipisahkan. Oleh itu, di bawah tindakan cahaya pengujaan, kandungan protein PD-L1 eksosomal boleh ditentukan dengan mengesan keamatan pendarfluor aptamer berlabel pendarfluor. Kaedah ini mempunyai sensitiviti yang tinggi dan had pengesanan 17.6 pg/mL. Di samping itu, ia juga mempunyai kelebihan jumlah sampel yang kurang dan masa pengesanan yang singkat. Ia adalah kaedah yang sangat asli untuk pengesanan protein PD-L1 eksosomal, yang sangat penting untuk pembangunan yang baru Kaedah pengesanan protein PD-L1 eksosomal mempunyai nilai yang mencerahkan.

Anti-tumor: suplemen cistanche

Exosomal PD-L1 mempunyai prospek aplikasi yang luas dalam bidang imunoterapi tumor malignan dan telah menjadi salah satu titik panas dalam bidang penyelidikan eksosom. Berbanding dengan pengesanan ekspresi PD-L1 tisu, pengesanan PD-L1 eksosomal yang beredar lebih mudah untuk mendapatkan spesimen dan menjalankan pengesanan masa nyata, sambil mengelakkan masalah heterogeniti tisu yang disebabkan oleh pensampelan patologi; exosomal PD-L1 juga membawa kepada imuniti tumor. Ia adalah punca penting untuk melarikan diri dan berkaitan dengan perkembangan tumor malignan, dan mungkin menjadi penunjuk penting untuk penilaian penyakit dan ramalan prognosis. Di samping itu, paras PD-L1 eksosomal plasma juga dijangka digunakan untuk menyaring pesakit yang sesuai untuk imunoterapi anti-PD-L1 dan meramalkan tindak balas mereka terhadap rawatan. Walau bagaimanapun, masih terdapat kekurangan kaedah yang diiktiraf dan berkesan untuk pengesanan eksosom beredar PD-L1. Adalah perlu untuk mewujudkan eksosom beredar yang ideal dengan pemisahan yang mudah atau tiada, permintaan sampel yang kurang, kepekaan tinggi, kebolehulangan yang baik dan isyarat pengesanan yang kurang terdedah. Kaedah untuk pengesanan PD-L1 dalam vivo. Kaedah pengesanan mengedarkan PD-L1 eksosomal masih memerlukan penyelidikan yang lebih mendalam, tetapi dipercayai bahawa dengan pembangunan dan penggunaan kaedah pengesanan baharu pada masa hadapan, PD-L1 eksosomal yang beredar akan dapat membimbing imunoterapi anti-PD1 dengan lebih baik. dan digunakan dalam diagnosis dan rawatan tumor malignan. memainkan peranan yang lebih penting.