Tindak Balas Sitotoksik Berkekalan Sel Mononuklear Darah Periferi Daripada Individu Tidak Divaksinasi yang Dimasukkan Ke ICU Kerana COVID Kritikal-19 Adalah Penting Untuk Mengelakkan Hasil Yang Membunuh

Abstrak: Objektif utama kajian ini adalah untuk menentukan pengaruh aktiviti sitotoksik sel mononuklear darah periferal (PBMC) terhadap hasil individu yang tidak divaksinasi dengan COVID kritikal-19 yang dimasukkan ke ICU. Sampel darah daripada 23 individu telah diambil semasa kemasukan dan kemudian setiap 2 minggu selama 13 minggu sehingga kematian (Kumpulan Exitus) (n=13) atau pelepasan (Kumpulan Survival) (n=10). Kami tidak menemui perbezaan yang ketara antara kumpulan dalam data sosiodemografi, klinikal atau biokimia yang mungkin mempengaruhi hasil yang membawa maut. Walau bagaimanapun, sitotoksisiti selular langsung PBMC daripada individu kumpulan Exitus terhadap sel Vero E6 yang dijangkiti SARS-CoV-2-pseudotaip telah berkurangan dengan ketara apabila diterima (−2.69-kali ganda; p=0. 0234) dan selepas 4 minggu di ICU (−5.58-lipat; p=0.0290), berbanding dengan individu yang terselamat, dan ia tidak bertambah baik semasa dimasukkan ke hospital. In vitro, rawatan dengan IL-15 sel-sel ini tidak memulihkan sitotoksisiti berkesan pada bila-bila masa sehingga hasil yang membawa maut, dan peningkatan ekspresi penanda keletihan imun diperhatikan dalam NKT, CD4+ dan CD 8+ sel T. Walau bagaimanapun, rawatan IL-15 PBMC daripada individu kumpulan Survival telah meningkatkan sitotoksisiti dengan ketara pada Minggu 4 (6.18-kali ganda; p=0.0303). Akibatnya, rawatan imunomodulator yang mungkin mengatasi keletihan imun dan mendorong aktiviti sitotoksik yang cekap dan berterusan boleh menjadi penting untuk kelangsungan hidup semasa dimasukkan ke hospital akibat COVID yang kritikal-19.

Kata kunci: SARS-CoV-2; COVID-19; tindak balas imun; tindak balas sitotoksik; IL-15

cistanche tubulosa-meningkatkan sistem imun

1. Pengenalan

Beberapa kes radang paru-paru virus atipikal yang berkaitan dengan wabak dalam pasaran makanan laut di Bandar Wuhan (Wilayah Hubei, China) telah dikesan pada Disember 2019. Koronavirus novel yang dinamakan coronavirus sindrom pernafasan akut teruk 2 (SARS-CoV-2) dengan cepat merebak ke seluruh dunia menyebabkan wabak penyakit coronavirus 2019 (COVID-19) [1]. Sejak itu, kira-kira 626 juta kes COVID-19 dan 6.5 juta kematian yang berkaitan telah dilaporkan di seluruh dunia (dikemas kini Oktober 2022) [2]. Faktor risiko dan komorbiditi yang berbeza mungkin mempengaruhi perkembangan COVID{13}} dalam kalangan individu, yang menjejaskan perbandingan data klinikal antara negara yang terjejas sejak permulaan wabak itu [3]. Walau bagaimanapun, telah ditentukan bahawa manifestasi klinikal COVID{15}} mungkin berbeza daripada jangkitan tanpa gejala kepada sindrom gangguan pernafasan akut (ARDS) [4]. Antara faktor risiko berbeza yang dikaitkan dengan kebarangkalian lebih tinggi untuk membangunkan bentuk COVID yang teruk-19 ialah usia tua, jantina lelaki dan komorbiditi terdahulu seperti diabetes, hipertensi dan/atau obesiti [5,6]. COVID yang teruk dan kritikal-19 juga telah dikaitkan dengan sitopenia, kebanyakannya daripada CD4+ limfosit T, serta dengan keletihan berlebihan pembunuh semulajadi (NK) dan CD8+ sel T, yang mengakibatkan keadaan imunokompromi yang tidak dapat membersihkan jangkitan, sebagai tambahan kepada perkembangan komplikasi serius seperti ribut sitokin dan kejadian trombotik [7]. Punca utama untuk membangunkan bentuk penyakit yang teruk dan kematian pada pesakit dengan COVID-19 telah dianggap sebagai tindak balas keradangan yang berlebihan yang boleh menggalakkan perkembangan kejutan dan/atau hipersitokinemia dengan disfungsi multiorgan [4]. Sindrom ini dikenali sebagai ribut sitokin [8], dan ia serupa dengan penyakit hemophagocytic lymphohistiocytosis (sHLH), yang terdiri daripada keadaan hiperinflamasi yang dicetuskan oleh jangkitan virus [9,10]. Ia boleh dikaitkan dengan fakta bahawa SARS-CoV-2 menggunakan reseptor enzim penukar angiotensin 2 (ACE2) untuk menjangkiti sel sasaran. Pengikatan SARS-CoV-2 kepada reseptor ACE2, yang dinyatakan secara meluas oleh sel-sel tisu yang berbeza [11], membawa kepada peningkatan angiotensin II, yang mengaktifkan faktor nuklear-κB (NF-κB). Pengaktifan faktor transkripsi penting ini merangsang ekspresi sitokin proinflamasi, kemokin, dan molekul lekatan [12]. Walaupun tindak balas keradangan yang berlebihan ini, nampaknya tidak berkesan untuk membersihkan jangkitan dan, disebabkan pengaktifan sel T, mungkin berakhir dengan apoptosis [13]. Ribut sitokin ini boleh bertanggungjawab untuk limfopenia [12,14] dan juga menurunkan tahap NK dan CD8+ sel T dengan fenotip yang letih dan peningkatan ekspresi reseptor perencatan seperti NKG2A dalam sel NK dan PD{{47 }} dalam CD8+ sel T [15,16]. Selain itu, ekspresi penanda degranulasi seperti CD107a biasanya dikurangkan pada permukaan sel ini [15], membuktikan kewujudan kemerosotan dalam kapasiti untuk menghapuskan sel yang dijangkiti dalam individu yang mempunyai COVID yang teruk dan kritikal-19 [17 ]. Walaupun tindak balas global yang pesat untuk membangunkan dan mentadbir vaksin yang berkesan, kemunculan varian baru yang mungkin terlepas daripada tindak balas imun yang disebabkan oleh vaksin telah mengakibatkan penurunan pesat dalam perlindungan terhadap penyakit bergejala [18]. Oleh itu, adalah perlu untuk meneruskan penyelidikan untuk terapi berkesan terhadap COVID-19. Beberapa rawatan telah diuji untuk memperbaiki status individu yang dimasukkan ke hospital akibat penyakit yang teruk dan kritikal, tetapi tiada satu pun yang terbukti khusus untuk menghapuskan sel yang dijangkiti atau mengurangkan kadar jangkitan [15,19]. Oleh itu, rawatan sokongan seperti terapi oksigen dan cecair masih merupakan antara strategi terpenting yang digunakan untuk pengurusan individu ini [2,4,16,20]. Rawatan yang tidak spesifik seperti kortikosteroid juga berfaedah untuk mengawal dan mengurangkan tindak balas keradangan yang berlebihan [21,22]. Baru-baru ini, beberapa ubat telah dibenarkan oleh FDA untuk rawatan individu dengan COVID sederhana hingga sederhana-19, seperti molnupiravir, nirmatrelvir dan ritonavir, tetapi hanya dalam keadaan kecemasan bagi individu yang berisiko tinggi untuk berkembang menjadi penyakit yang teruk [23–26]. Molnupiravir menunjukkan aktiviti antivirus spektrum luas kerana keupayaannya untuk mendorong mutagenesis RNA dengan gangguan beberapa polimerase RNA (RdRp) yang bergantung kepada RNA virus, termasuk RdRp yang digunakan oleh SARS-CoV-2 untuk replikasi dan transkripsi Genom RNA [27]. Gabungan nirmatrelvir dan ritonavir juga telah ditunjukkan mampu menghentikan penyebaran jangkitan dalam model haiwan dengan menghalang protease virus utama 3CLpro SARS-CoV-2- 2 [28]. Walau bagaimanapun, ubat antiviral ini perlu diberikan bersama-sama dengan langkah-langkah lain seperti vaksin untuk mencetuskan tindak balas imun sitotoksik yang kuat yang dapat menghapuskan sel yang dijangkiti. Kebanyakan sel yang mempunyai aktiviti sitotoksik, seperti CD{80}} limfosit T dan sel NK dan NKT, memerlukan kehadiran interleukin-15 (IL-15) untuk fungsi dan peraturan homeostatiknya [29]. IL-15 primes CD8+ sel T untuk pengaktifannya oleh antigen tertentu dan juga meningkatkan sitotoksisiti dan percambahan sel NK. Oleh itu, IL-15 boleh meningkatkan kedua-dua tindak balas imun selular semula jadi dan adaptif terhadap sel yang dijangkiti [22,25]. IL-15 juga menghalang sel NK dan T daripada apoptosis dengan mengawal selia faktor anti-apoptosis seperti Bcl-2 dan menurunkan faktor pro-apoptosis seperti GSK-3 [26], dengan itu mengelakkan sitopenia. Sehubungan itu, IL-15 telah dicadangkan sebagai sitokin imunomodulator baru dalam imunoterapi kanser dan telah dianggap sebagai pembantu dalam rejimen vaksin [26,30]. Ujian klinikal fasa 1 dengan infusi bolus iv manusia IL-15 (rhIL-15) atau IL-15 superagonis N-803 telah menunjukkan bahawa sitokin ini mungkin mendorong pengembangan dan/atau pengaktifan yang ketara CD{103}}, CD{104}} dan sel efektor NK dalam vivo, dan oleh itu, ia telah digunakan untuk merawat kanser atau jangkitan virus seperti HIV [31–35]. Oleh itu, penggunaan agen imunomodulator seperti IL{107}} yang mungkin memulihkan aktiviti sitotoksik pada individu yang dimasukkan ke hospital akibat COVID yang kritikal{108}} boleh berguna untuk membantu membersihkan virus daripada organisma. Dalam kajian pemerhatian dan membujur ini, kami mencirikan evolusi tindak balas imun sitotoksik terhadap SARS-CoV-2 dalam sel mononuklear darah periferal (PBMC) yang diasingkan daripada individu yang didiagnosis dengan COVID-19 yang dimasukkan ke dalam rawatan intensif. unit penjagaan (ICU) akibat komplikasi yang teruk, serta pengaruh tindak balas ini terhadap hasil akhir berbanding dengan faktor risiko penting yang lain. Kami juga menilai kapasiti sel ini untuk bertindak balas terhadap rawatan dengan IL-15 dan meningkatkan tindak balas antiviral sitotoksiknya. Hasil yang diperoleh dalam kajian ini mungkin menyumbang kepada pemahaman yang lebih baik tentang peranan tindak balas sitotoksik dalam hasil maut COVID-19 dan untuk maju ke arah pembangunan rawatan imunomodulator yang berkesan yang menggalakkan pembersihan virus.

cistanche tubulosa-meningkatkan sistem imun

Klik di sini untuk melihat produk Cistanche Enhance Immunity

【Minta lebih lanjut】 E-mel:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2. Bahan-bahan dan cara-cara

2.1. Subjek Kajian

Dua puluh tiga individu dengan COVID kritikal-19 dimasukkan ke ICU Hospital Universitario Ramón y Cajal (Madrid, Sepanyol) dari Oktober 2020 hingga April 2021 telah diambil untuk kajian ini. Tempoh ini meliputi kedua-dua gelombang pandemik kedua dan ketiga COVID-19 di Sepanyol (dari Jun hingga Disember 2020 dan dari Disember 2020 hingga Mac 2021, masing-masing). Para peserta telah diambil secara rawak semasa dimasukkan ke hospital mengikut kriteria berikut: kebenaran kebenaran bertulis atau lisan yang dimaklumkan disaksikan untuk mengambil bahagian dalam kajian, dimasukkan ke hospital di ICU kerana COVID yang kritikal-19, positif SARS-CoV-2 Ujian RT-qPCR dalam smear nasofaring dilakukan semasa kemasukan ke hospital mengikut protokol yang disahkan dalaman, berumur lebih daripada 18 tahun dan tidak divaksinasi terhadap SARS-CoV-2 pada masa jangkitan. Sampel darah periferal dan data klinikal dikumpul setiap 2 minggu selama 13 minggu, dan sampel darah diproses dan dipelihara sehingga saat analisis. Tempoh ini dikira dengan mengambil kira bahawa tempoh penginapan hospital di Sepanyol semasa gelombang pandemik pertama dianggarkan pada purata 35 hari [36], jadi kami boleh melakukan sekurang-kurangnya dua pusingan lengkap pengambilan dan susulan. Selepas 13 minggu, para peserta dibahagikan kepada dua kumpulan mengikut keputusan akhir: hasil maut (n=13), seterusnya Keluar; atau keluar dari hospital (n=10), seterusnya Survival.

2.2. Pernyataan Etika

Individu yang mengambil bahagian dalam kajian ini telah diambil dari Hospital Universitario Ramón y Cajal (Madrid, Sepanyol). Kesemua mereka memberi kebenaran bertulis termaklum untuk mengambil bahagian dalam kajian atau menyaksikan kebenaran lisan dengan kebenaran bertulis oleh wakil untuk mengelak daripada mengendalikan dokumen yang tercemar. Akta Perlindungan Data Sepanyol dan Eropah semasa memastikan kerahsiaan dan kerahsiaan semua peserta. Protokol untuk kajian ini (CEI PI 32_2020-v2) telah disediakan menurut Deklarasi Helsinki dan sebelum ini disemak serta diluluskan oleh Jawatankuasa Etika Instituto de Salud Carlos III (IRB IORG0006384) dan hospital yang mengambil bahagian.

2.3. sel

Lima mililiter darah keseluruhan telah dikumpulkan dalam tiub EDTA Vacutainer (Becton Dickinson, Madrid, Sepanyol) dan segera diproses untuk mengasingkan PMBC dan plasma oleh Ficoll-Hypaque (Pharmacia Corporation, North Peapack, NJ, USA) sentrifugasi kecerunan ketumpatan, dan kemudiannya cryopreserved sehingga analisis. Daya maju sel selepas pencairan dinilai oleh mikroskop optik dan sitometri aliran. Talian sel Vero E6 (buah pinggang monyet hijau Afrika) (ECACC 85020206) telah disediakan oleh Dr. Antonio Alcami (CBM Severo Ochoa, Madrid, Sepanyol), dan sel-sel ini telah dikultur dalam DMEM ditambah dengan 10% FCS, 2 mM L- glutamin, dan 100 unit/mL penisilin dan streptomisin (Lonza, Basel, Switzerland).

manfaat cistanche untuk lelaki-menguatkan sistem imun

2.4. Pseudotyped SARS-CoV-2 Infection Assay

Aktiviti sitotoksik terhadap SARS-CoV-2 PBMC daripada peserta telah dianalisis menggunakan sel Vero E6 yang dijangkiti oleh virus pseudotaip satu kitaran pNL4-3∆env_SARS CoV-2-S ∆19(G614)_Ren. Virus ini mengekodkan glikoprotein pancang SARS-CoV{11}} dengan mutasi D614G dalam genom HIV{13}} serta gen Renilla luciferase yang dijana seperti yang diterangkan sebelum ini [37,38]. Varian SARS-CoV-2 yang mengandungi mutasi D614G dalam protein spike (S) mula beredar pada awal pandemik dan menjadi dominan dengan cepat di banyak wilayah [39,40]. Secara ringkas, lapisan tunggal Vero E6 telah dijangkiti pNL4-3∆env_ SARS-CoV-2-S∆19(G614)_Ren (100 ng p24 Gag/well ) selama 48 jam. Kemudian sel dibasuh dan dikultur bersama selama 1 jam dengan PBMC daripada peserta (nisbah 1:1), sebelum ini dirawat atau tidak dengan IL-15 (13 ng/mL) selama 48 jam. Dos IL-15 yang digunakan untuk kajian ini telah dipilih, dengan mengambil kira dos yang diterangkan sebelum ini yang menyebabkan kesan tertinggi pada percambahan NK (10–25 ng/mL) [41] dan juga pengembangan keutamaan sitotoksik ingatan. CD8+ sel T ( Kurang daripada atau sama dengan 5 ng/mL) [42]. Aktiviti sitotoksik PBMC pada lapisan tunggal Vero E6 ditentukan selepas penyingkiran supernatan dengan sel dalam penggantungan dan pemisahan sel Vero E6 dari plat dengan larutan trypsin-EDTA (Sigma Aldrich-Merck, Darmstadt, Jerman) dan kuantifikasi aktiviti caspase-3 seterusnya dalam sel tertanggal dengan pendaran menggunakan sistem Analisis Caspase-Glo 3/7 (Promega, Madison, WI, USA). Untuk menentukan populasi sel sitotoksik mana yang bertanggungjawab untuk aktiviti ini, PBMC dikumpulkan daripada supernatan dan kemudian dianalisis oleh sitometri aliran.

2.5. Analisis Sitometri Aliran

Untuk mengotorkan penanda fenotaip permukaan sel, antibodi terkonjugasi berikut digunakan: CD{{0}}PE, CD8-APC-H7, CD56-FITC dan CD1{{24 }}7a-PE-Cy7, dibeli daripada BD Biosciences (San Jose, CA, USA). Untuk mengotorkan penanda keletihan, antibodi terkonjugasi berikut telah digunakan: CD3-BV510, CD8-APC-H7, CD56-FITC dan PD1-BV650, dibeli daripada BD Biosciences, serta CD{17}}PE, dibeli daripada Immunostep SL (Salamanca, Sepanyol) dan TIGIT-AlexaFluor700 yang dibeli daripada Thermo Fisher (Waltham, MA, USA). Sampel diperoleh dengan menggunakan sitometer aliran BD LSRFortessa X-20 dengan perisian FACS Diva v 6.0 (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, USA) dan kemudian dianalisis menggunakan perisian FlowJo v10.0.7 (Tree Star Inc., Ashland, OR , USA).

2.6. Pengesanan SARS-CoV-2 RNAemia

Jumlah RNA diekstrak daripada sampel plasma menggunakan Kit Virus QIAamp MinElute (Qiagen Iberia, Madrid, Sepanyol) dalam pengekstrak automatik QIAcube (Qiagen, Hilden, Jerman). Pengesanan RNA SARS-CoV-2 dilakukan oleh ujian RT-qPCR dengan sasaran dalam gen sampul (E) dan nukleokapsid (N), seperti yang diterangkan sebelum ini [43], yang merupakan sebahagian daripada Panduan Interim Kesihatan Sedunia. Organisasi (WHO) untuk ujian diagnostik SARS-CoV- 2 [44]. Sampel dianggap positif untuk analisis apabila nilai kitaran kuantifikasi (Cq) berada di bawah 45 kitaran.

manfaat cistanche untuk lelaki-menguatkan sistem imun

2.7. Analisis statistik

Semua analisis statistik dan grafik telah dilakukan menggunakan perisian GraphPad Prism versi 8.4.3 (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). Perbandingan kumpulan dilakukan menggunakan ujian Mann–Whitney U, ujian pangkat bertanda pasangan padanan Wilcoxon, ANOVA sehala, dan ujian perbandingan berbilang Tukey. Ujian tepat Fisher digunakan untuk menilai perbezaan ciri klinikal antara kedua-dua kumpulan. Nilai p < 0.{{10}}5 (dua ekor) dianggap signifikan secara statistik. Purata dan sisihan piawai digunakan untuk mengira statistik Cohen dengan menggunakan kalkulator saiz kesan Excel [45]. Saiz kesan 0.2, 0.5, 0.8 atau Lebih besar daripada atau sama dengan 1.2 ialah petunjuk saiz kesan kecil, sederhana, besar dan sangat besar, masing-masing [46].

3. Keputusan

3.1. Ciri-ciri Peserta

Kajian membujur pemerhatian ini termasuk 23 pesakit yang didiagnosis dengan COVID-19 yang telah dimasukkan ke ICU kerana komplikasi yang teruk. Sampel darah dikumpul setiap 2 minggu selama 13 minggu atau sehingga keputusan akhir. Tiada seorang pun daripada peserta dalam kajian ini dilaporkan telah diberi vaksin terhadap COVID-19 pada masa jangkitan dan kemasukan ke hospital. Ciri sosiodemografi dan klinikal utama semua peserta diringkaskan dalam Jadual 1.

Jadual 1. Data demografi dan klinikal semua peserta daripada kumpulan Exitus dan kumpulan Survival yang telah diambil untuk kajian ini.

Umur median kumpulan Exitus ialah 65.0 tahun (IQR 62.0–69.0), manakala umur median kumpulan Survival ialah 63.{{7} } tahun (IQR 59.0–68.5). Kebanyakan peserta (73.9%) adalah lelaki, dan 65.2% mempunyai sekurang-kurangnya satu komorbiditi. Komorbiditi utama ialah dislipidemia (52.2%), hipertensi (39.1%), dan diabetes mellitus (26.1%). Kebanyakan pesakit menerima kortikoid (82.6%), antibiotik (82.6%), dan antikoagulan (82.6%) sebagai rawatan standard. Mereka juga menerima rawatan lain seperti tocilizumab (17.4%) dan remdesivir (8.7%). Tanda dan simptom yang paling biasa ialah radang paru-paru (100%), batuk dan kahak (87.0}%), sesak nafas (87.0%) dan demam (87.0%). Semasa berada di ICU, 12 pesakit (92.3%) daripada kumpulan Exitus dan 10 pesakit (100%) daripada kumpulan Survival memerlukan pengudaraan mekanikal invasif. Kami tidak menemui perbezaan yang ketara antara kedua-dua kumpulan dalam data sosiodemografi dan klinikal. Kami juga menganalisis data biokimia darah pada garis dasar (sampel pertama) antara kedua-dua kumpulan, dan kami tidak menemui perbezaan yang signifikan antara kumpulan sama ada. Maklumat lebih terperinci tentang data klinikal, kemasukan ke hospital, dan data biokimia darah setiap peserta ditunjukkan dalam Jadual Tambahan S1 dan S2.

3.2. Tempoh Tinggal di Hospital dan ICU

Tempoh purata penginapan hospital ialah 59.0 (IQR 36.0–100.0) hari dalam kumpulan Exitus dan 73. 0 (IQR 44.5–90.{{20}}) hari dalam kumpulan Survival (Rajah 1A). Tempoh median tinggal ICU ialah 49.0 (IQR 25.5–82.0) hari dalam kumpulan Exitus dan 44.0 (IQR 25.0–66.5) hari dalam kumpulan Survival (Rajah 1B). Tiada perbezaan ketara dalam parameter ini ditemui antara kedua-dua kumpulan.

Rajah 1. Tempoh tinggal di hospital dan ICU. Tempoh penginapan hospital (A) dan ICU (B) (hari) bagi individu yang menghidap COVID kritikal-19 yang dibahagikan kepada dua kumpulan mengikut keputusan akhir: hasil maut, Kumpulan Exitus (titik terisi); atau pemulihan dan keluar hospital, Kumpulan hidup (titik kosong). Setiap titik sepadan dengan satu individu, dan garis menegak mewakili min ± ralat piawai min (SEM). Kepentingan statistik antara kumpulan dikira menggunakan ujian Mann-Whitney U.

3.3. Tahap Limfosit Darah Periferi

Individu daripada kumpulan Exitus menunjukkan limfopenia (<1000 cells/mm3 ) only at the time of hospitalization (t = 0), but at Week 2, all participants showed levels of lymphocytes above the threshold for lymphopenia (Figure 2). Lymphocyte count was 1.54 (p = 0.0318; Cohen's d = 1.00)- and 1.71 (p = 0.0030; Cohen's d = 3.17)-fold higher in patients from the Survival group in comparison with the Exitus group at baseline and after 4 weeks of hospitalization, respectively. Although both groups showed an increase in the levels of lymphocytes in peripheral blood during hospitalization, they remained on average 1.54-fold higher in individuals of the Survival group in comparison with the participants of the Exitus group for at least 10 weeks. In the Survival group, the lymphocyte counts steadily increased until Week 6 of hospitalization and then decreased until Week 10.

Rajah 2. Kiraan limfosit darah periferi semasa dimasukkan ke hospital akibat COVID yang kritikal-19. Kiraan limfosit (sel/mm3 ) ditentukan setiap 2 minggu selama 13 minggu atau sehingga hasil akhir dalam sampel darah daripada peserta kumpulan Exitus (titik terisi) dan Survival (titik kosong). Ambang untuk limfopenia ditunjukkan pada 1000 sel/mm3 dengan garis putus-putus. Setiap titik sepadan dengan min data, dan garis menegak mewakili SEM. Kepentingan statistik antara kumpulan dikira menggunakan ujian Mann-Whitney U, dan dalam kumpulan, ujian U Wilcoxon digunakan.

3.4. Aktiviti Sitotoksik PBMC terhadap Sel Vero E6 Dijangkiti Pseudotyped SARS-CoV-2

Kami menilai aktiviti sitotoksik PBMC pesakit yang dimasukkan ke hospital dalam sampel membujur dengan mengukur pengaktifan caspase-3 dalam satu lapisan sel Vero E6 yang dijangkiti pseudotyped SARS-CoV-2 selepas kultur bersama selama 1 jam ( nisbah 1:1). Kapasiti sitotoksik PBMC yang diasingkan daripada individu kumpulan Exitus tidak berubah dengan ketara semasa dimasukkan ke hospital, dan ia kekal rendah sehingga membawa maut (Rajah 3). Aktiviti sitotoksik ini tidak meningkat dengan ketara apabila sel-sel ini dirangsang dengan IL-15 selama 48 jam. Dalam kumpulan Survival, aktiviti sitotoksik PBMC meningkat 2.69-kali ganda (p=0.0234; Cohen's d=1.12) dalam sampel basal (t {{17} }) berbanding dengan kumpulan Exitus, dan ia terus meningkat sehingga Minggu 6 kemasukan ke hospital. Peningkatan ini menunjukkan kepentingan statistik dalam perbandingan antara kumpulan pada Minggu 4 (5.58-lipat; p=0.0290; Cohen's d=1.28). Dari Minggu 6 dan seterusnya, aktiviti sitotoksik berkurangan dalam kumpulan Survival sehingga keluar hospital, yang selaras dengan pereputan kiraan limfosit pada minggu yang sama dimasukkan ke hospital (lihat Rajah 2). Rawatan dengan IL-15 meningkat 2.30-kali ganda secara purata aktiviti sitotoksik PBMC individu daripada kumpulan Survival dalam semua sampel semasa susulan. Selepas 4 minggu dimasukkan ke hospital, IL-15-aktiviti sitotoksik teraruh meningkat 6.18-kali ganda (p=0.0303; Cohen's d=1.05) dalam PBMCs individu daripada kumpulan Survival.

Rajah 3. Sitotoksisiti selular langsung PBMC yang diasingkan daripada pesakit dimasukkan ke hospital dengan COVID kritikal-19. Kapasiti sitotoksik PBMC daripada individu kumpulan Exitus (titik terisi) dan Survival (titik kosong) diukur dengan mengukur aktiviti caspase-3 dalam satu lapisan sel Vero E6 yang dijangkiti pseudotyped SARS-CoV-2 selepas kultur bersama (1:1) selama 1 jam dalam keadaan basal (garisan kelabu) atau selepas rawatan dengan IL-15 selama 48 jam (garisan hitam). Setiap titik sepadan dengan min data, dan garis menegak mewakili SEM. Kepentingan statistik antara kumpulan dikira menggunakan ujian Mann-Whitney U, dan dalam kumpulan, ujian U Wilcoxon digunakan.

3.5. Tahap Sel NK dan NKT

Tahap sel dengan fenotip sitotoksik telah dianalisis dalam PBMC yang dikultur bersama dengan sel Vero E6 yang dijangkiti pseudotaip SARS-CoV-2. Kami tidak menemui perbezaan ketara antara tahap sel dengan fenotip NK (CD3-CD56+) antara kedua-dua kumpulan individu, walaupun selepas rawatan dengan IL-15 (Rajah 4A). Ekspresi penanda degranulasi CD107a pada permukaan sel-sel ini kekal tidak berubah pada individu dari kumpulan Exitus. Walaupun ungkapan ini semakin meningkat dari Minggu 4 sehingga keluar hospital dalam kumpulan Survival, perbezaan ini tidak mencapai kepentingan statistik dalam perbandingan dengan kumpulan Exitus (Rajah 4B). Rawatan dengan IL{11}} tidak mengubah suai ekspresi CD107a dalam sel ini dengan ketara. Dari Minggu 4, PBMC daripada individu kedua-dua kumpulan menunjukkan peningkatan dalam tahap sel dengan fenotip NKT (CD3+CD56+) iaitu 4.17-kali ganda lebih tinggi dalam PBMC daripada individu kumpulan Exitus pada Minggu 6, walaupun perbezaan ini tidak mencapai kepentingan (p=0.0571; Cohen's d=3.15) (Rajah 5A). Peningkatan ini lebih tinggi sedikit apabila sel dirawat dengan IL-15 dalam kedua-dua kumpulan, walaupun data tidak mencapai kepentingan statistik sama ada (Rajah 5A). Ungkapan CD107a tidak berubah dengan ketara antara kedua-dua kumpulan atau selepas rawatan dengan IL-15 (Rajah 5B).

Rajah 4. Tahap sel NK dalam PBMC daripada individu yang dimasukkan ke hospital dengan COVID kritikal-19. (A) Jumlah tahap sel NK (CD3-CD56+) dan (B) ekspresi penanda degranulasi CD107a dalam sel ini telah dinilai dalam PBMC dalam keadaan basal (garis kelabu) atau selepas rawatan dengan IL-15 selama 48 jam (garis hitam) selepas kultur bersama (1:1) dengan sel Vero E6 yang dijangkiti pseudotaip SARS-CoV-2 selama 1 jam. Setiap titik sepadan dengan min data, dan garis menegak mewakili SEM. Kepentingan statistik antara kumpulan dikira menggunakan Mann-Whitney U-test, dan dalam kumpulan, Wilcoxon U-test digunakan.

Rajah 5. Tahap sel NKT dalam PBMC daripada individu yang dimasukkan ke hospital dengan COVID kritikal-19. Jumlah tahap sel NKT (CD3+CD56+) (A) dan ekspresi penanda degranulasi CD107a dalam sel ini (B) dinilai dalam keadaan basal (garis kelabu) atau selepas rawatan dengan IL{ {5}} selama 48 jam (garis hitam) selepas kultur bersama (1:1) selama 1 jam dengan sel Vero E6 yang dijangkiti pseudotaip SARS-CoV-2. Setiap titik sepadan dengan min data, dan garis menegak mewakili SEM. Kepentingan statistik antara kumpulan dikira menggunakan ujian Mann-Whitney U, dan dalam kumpulan, ujian U Wilcoxon digunakan.

3.6. Tahap CD8+ Sel T

Kiraan CD8 dipertingkatkan 2.07-lipat ganda (p=0.0409; Cohen's d=0.94) dalam sampel basal (t=0) kumpulan Exitus sebagai perbandingan dengan kumpulan Survival, dan tahap ini kekal stabil sehingga hasil yang membawa maut (Rajah 6A). IL-15 tidak menghasilkan kesan berfaedah yang ketara pada tahap populasi sel ini. Dalam kumpulan Survival, CD{10}} sel T telah dikurangkan 1.51-kali ganda secara purata berbanding dengan kumpulan Exitus (Rajah 6A). Ungkapan CD107a menurun 1.53-kali ganda (p=0.0313) pada Minggu 4 dalam CD8+ sel T daripada individu kumpulan Exitus, dan ia kekal tidak berubah sehingga membawa maut hasil. Rawatan dengan IL-15 menunjukkan sedikit manfaat dalam ungkapan penanda degranulasi ini, tetapi perbezaan ini tidak ketara (Rajah 6B). Dalam kumpulan Survival, terdapat juga penurunan dalam ekspresi CD107a dalam CD8+ sel T pada Minggu 4, dan kemudian terdapat peningkatan dan seterusnya, tetapi tiada kepentingan dicapai sebelum atau selepas rawatan dengan IL{{26 }} (Rajah 6B).

Rajah 6. Tahap CD8+ sel T dalam PBMC daripada individu yang dimasukkan ke hospital dengan COVID kritikal-19. (A) Jumlah tahap CD8+ sel T (CD3+CD8+) dan (B) ungkapan penanda degranulasi CD107a dalam sel ini telah dinilai dalam PBMC dalam keadaan asas (kelabu garisan) atau selepas rawatan dengan IL-15 selama 48 jam (garisan hitam) selepas kultur bersama (1:1) dengan sel Vero E6 yang dijangkiti pseudotaip SARS-CoV-2 selama 1 jam. Setiap titik sepadan dengan min data, dan garis menegak mewakili SEM. Kepentingan statistik antara kumpulan dikira menggunakan ujian Mann-Whitney U, dan dalam kumpulan, ujian U Wilcoxon digunakan.

3.7. Tahap Penanda Keletihan

Tahap ekspresi penanda kelesuan imun PD-1 (Protein kematian sel terprogram) dan TIGIT (imunoreceptor sel T dengan domain Ig dan ITIM) telah dianalisis dengan sitometri aliran dalam CD4+ sel T dan sel sitotoksik daripada semua peserta. Sampel yang diperoleh semasa kemasukan ke hospital (t=0) sehingga Minggu 6 kemasukan ke hospital telah dianalisis, disebabkan kekurangan sampel yang tersedia selepas masa ini. CD4+ dan CD8+ sel T daripada individu kumpulan Exitus menunjukkan tahap PD-1 yang meningkat dengan ketara sebanyak 1.72 (p=0.0095; Cohen's d {{ 11}}.87)- dan 2.92-lipat ganda (p=0.0317; Cohen's d=2.07) selepas 4 minggu dimasukkan ke hospital, masing-masing, berbanding dengan individu daripada Kumpulan hidup (Rajah 7A, B, graf kiri). Dalam sel NKT, tahap TIGIT meningkat dengan ketara dari masa kemasukan ke hospital sehingga 6 minggu kemasukan ke hospital dalam individu daripada kumpulan Exitus, dan tahap ini meningkat 1.76-kali ganda (p=0.0357 ; Cohen's d=0.33) selepas 2 minggu dimasukkan ke hospital, berbanding dengan kumpulan Survival (Rajah 7C, graf kanan).

Tiada perbezaan ketara antara kumpulan diperhatikan dalam tahap ekspresi penanda keletihan ini dalam sel NK (Rajah 7D).

Rajah 7. Tahap ekspresi penanda keletihan dalam PBMC daripada individu yang dimasukkan ke hospital dengan COVID yang kritikal-19. Tahap ungkapan PD-1 dan TIGIT dalam CD4+ sel T (A), CD8+ sel T (B), sel NKT (C) dan sel NK (D). Setiap titik sepadan dengan min data, dan garis menegak mewakili SEM. Kepentingan statistik antara kumpulan dikira menggunakan ujian Mann-Whitney U, dan dalam kumpulan, ANOVA digunakan.

3.8. Kuantifikasi SARS-CoV-2 RNAemia dalam Plasma

Kehadiran RNA daripada SARS-CoV-2 telah dianalisis dalam plasma semua individu dalam sampel basal (t=0), dan tiada keputusan positif diperoleh dalam mana-mana peserta, dengan nilai Cq di bawah had pengesanan positif 45 kitaran.

4. Perbincangan

Jangkitan SARS-CoV-2 boleh menyebabkan beberapa pembentangan klinikal COVID-19 yang terdiri daripada jangkitan tanpa gejala kepada penyakit yang teruk, kritikal atau boleh membawa maut [4]. Walaupun vaksinasi am penduduk telah banyak mengurangkan bentuk penyakit yang teruk, kemunculan varian baharu SARS-CoV-2 meningkatkan bilangan individu yang menghidapi COVID kritikal-19 dan perlu dimasukkan ke hospital kerana jangkitan terobosan [47,48]. Oleh itu, masih menjadi keutamaan untuk membangunkan strategi pencegahan dan terapeutik yang mungkin mengelakkan perkembangan bentuk kritikal COVID-19 dan hasil yang membawa maut dalam pesakit dimasukkan ke hospital. Telah diterangkan bahawa orang tua yang mempunyai komorbiditi mempunyai risiko yang lebih tinggi untuk mendapat COVID yang teruk dan kritikal{{1{{3{0}}}} [49]. Di Sepanyol, peramal bebas yang paling ketara bagi kematian akibat COVID-19 ialah lelaki berumur lebih 50 tahun dengan komorbiditi yang berkaitan seperti hipertensi dan diabetes [36]. Dalam kajian kami, kebanyakan peserta kedua-dua kumpulan membentangkan ciri-ciri ini, tanpa perbezaan yang ketara antara mereka dalam data sosiodemografi, klinikal, atau biokimia yang mungkin mempengaruhi keterukan penyakit atau hasil yang membawa maut. Malah, kedua-dua kumpulan menunjukkan peningkatan paras parameter biokimia yang telah dikaitkan dengan risiko lebih tinggi daripada hasil buruk COVID-19, seperti C-reactive protein (CRP) dan lactate dehydrogenase (LDH) [50–56 ]. Sebaliknya, walaupun telah dilaporkan bahawa individu yang mempunyai COVID yang teruk-19 mungkin mempunyai SARS-CoV-2 RNAnemia [54] yang boleh dikesan, yang telah dikaitkan dengan peningkatan risiko kematian [55], tiada seorang pun daripada peserta dalam kajian kami membentangkan RNA yang boleh dikesan dalam serum, jadi kami tidak dapat mewujudkan korelasi antara viremia yang dapat dikesan dan hasil yang membawa maut. Akhir sekali, COVID-19 menunjukkan tempoh tinggal di hospital dan kadar kematian yang lebih tinggi berbanding dengan penyakit berjangkit lain yang memerlukan kemasukan ke ICU, seperti pneumonia yang diperoleh komuniti (CAP) atau sepsis [56], dan dianggarkan pada 35 hari secara purata bagi individu yang dimasukkan ke hospital di Sepanyol semasa gelombang pandemik pertama [36]. Dalam kajian kami, tempoh median tinggal di hospital adalah serupa antara kedua-dua kumpulan Exitus dan Survival (masing-masing 59.0 dan 73.0 hari), dan 50% daripada semua peserta tinggal lebih daripada 40 hari di ICU. Oleh itu, faktor pembezaan lain perlu dipertimbangkan untuk menjelaskan hasil maut dalam kumpulan Exitus dan pemulihan dalam kumpulan Survival.

Kebaikan cistanche tubulosa-menguatkan sistem imun

Limfopenia juga dianggap sebagai faktor risiko untuk keterukan penyakit yang telah dikaitkan dengan tempoh penginapan hospital yang lebih lama [57]. Dalam kajian kami, 73.9% daripada peserta kedua-dua kumpulan Exitus dan Survival menunjukkan jumlah limfosit yang rendah. Walau bagaimanapun, tahap jumlah limfosit adalah lebih tinggi secara purata dalam peserta kumpulan Survival, berbanding dengan kumpulan Exitus. Ini adalah selaras dengan pemerhatian sebelum ini bahawa individu yang meninggal dunia akibat COVID-19 mengalami limfopenia yang lebih teruk dari masa ke masa berbanding mereka yang masih hidup [58] dan limfosit ini biasanya menunjukkan fenotip yang letih, yang mengakibatkan kekurangan imun secara beransur-ansur [15,16]. Disebabkan tindak balas antiviral sitotoksik yang berkesan adalah penting untuk mengawal jangkitan virus, termasuk SARS-CoV-2 [17], penyusunan semula imun adalah penting untuk pemulihan daripada COVID-19. Percepatan penyusunan semula imun ini sangat bergantung pada pengembangan periferi homeostatik limfosit, yang boleh menjadi strategi yang baik untuk meningkatkan hasil individu yang dimasukkan ke hospital akibat COVID yang teruk-19 [58]. IL-15 ialah sitokin yang diperlukan untuk fungsi dan homeostasis CD{14}} sel T, NK dan sel NKT [29], dan ia telah dicadangkan sebagai rawatan imunomodulator baru untuk beberapa penyakit seperti kanser dan jangkitan HIV [26,30,35,59]. Oleh itu, dalam kajian ini, kami menilai sama ada rawatan in vitro dengan IL-15 boleh meningkatkan tindak balas sitotoksik dalam PBMC individu dimasukkan ke hospital dengan COVID yang teruk dan kritikal-19 semasa jangkitan itu berkembang, untuk menentukan kesahihannya sebagai calon untuk merangsang pembentukan semula imun semasa COVID-19. Dengan ujian dos, kami melihat peningkatan keseluruhan dalam tindak balas sitotoksik terhadap sel sasaran yang dijangkiti pseudotyped SARS-CoV-2 dalam PBMC bagi individu yang terselamat daripada COVID-19 selepas 44 hari secara purata dimasukkan ke hospital di ICU. Tindak balas sitotoksik ini secara berkesan meningkat 2.3-kali ganda secara purata selepas rawatan dengan IL-15 dalam semua sampel yang dikumpul semasa susulan, dengan Minggu 6 kemasukan ke hospital menjadi titik perubahan di mana kedua-dua kiraan limfosit dan aktiviti sitotoksik mula berkurangan sehingga keluar hospital. Walaupun berkongsi ciri sosiodemografi, klinikal dan biokimia yang serupa dan telah dimasukkan ke hospital untuk jumlah masa yang hampir sama (jumlah 59 hari, di mana 49 hari berada di ICU), kumpulan individu yang tidak terselamat daripada COVID{{34} } menunjukkan PBMC yang tidak bertindak balas dengan kehadiran sel sasaran yang dijangkiti, walaupun semasa ia dirangsang dengan IL-15. Jumlah tahap limfosit berada di atas ambang limfopenia dalam individu daripada kumpulan ini sejak Minggu 2 dimasukkan ke hospital. Walau bagaimanapun, tahap ini tidak meningkat dengan ketara semasa dimasukkan ke hospital dan tiada tindak balas antivirus yang berkesan dikesan, walaupun dengan kehadiran IL-15 pada dos yang diuji. Ketiadaan tindak balas kepada IL-15 telah diterangkan untuk jangkitan kronik lain seperti human immunodeficiency virus (HIV), virus hepatitis C (HCV), virus hepatitis B (HBV) dan human T lymphotropic virus (HTLV), di mana keletihan imun boleh menjejaskan ekspresi reseptor khusus IL-15, CD122, dalam CD8+ sel T [60], menjadikannya tidak bertindak balas terhadap rangsangan homeostatik ini. Keletihan imun yang merupakan ciri COVID-19 bukan sahaja telah diperhatikan dalam CD8+ sel T tetapi juga dalam jenis sel sitotoksik lain seperti sel NK dan NKT [15,16]. Oleh itu, ketiadaan tindak balas kepada IL-15 dalam PBMC daripada kumpulan Exitus mungkin berkaitan dengan peningkatan keletihan imun yang tidak dapat diatasi dengan rawatan IL-15 sahaja pada dos yang diuji. Ini juga telah diperhatikan dalam ujian klinikal Fasa I di mana monoterapi dengan IL-15 tidak berkesan walaupun terdapat pengembangan besar sel sitotoksik [31,32]. Oleh itu, rawatan kostimulasi lain akan diperlukan untuk mendorong tindak balas yang berkesan dalam individu ini, seperti perencat pusat pemeriksaan imunologi atau antibodi monoklonal yang menyasarkan sel yang dijangkiti, untuk meningkatkan sitotoksisiti selular yang bergantung kepada antibodi (ADCC).

Kami juga menentukan jenis sel yang terlibat terutamanya dalam pembangunan tindak balas sitotoksik yang dipertingkatkan ini dalam kumpulan individu yang terselamat daripada COVID-19. Telah ditunjukkan bahawa kehadiran sel T CD{1}} berfungsi adalah penting untuk melindungi model haiwan daripada perkembangan COVID yang teruk-19 [61,62]. Selain itu, ketiadaan tindak balas sitotoksik pengantara CD yang berkesan telah dilantik sebagai faktor penting untuk meningkatkan kerentanan orang tua untuk menghidapi COVID yang teruk atau kritikal-19 [63]. Yang menghairankan, tahap CD8+ sel T ialah 2.07-lipat ganda (p=0.0409) lebih tinggi dalam kumpulan Exitus pada masa dimasukkan ke hospital (t=0) , dan mereka kekal dipertingkatkan sehingga hasil yang membawa maut, berbanding dengan kumpulan Survival. Walaupun individu daripada kumpulan Exitus menunjukkan jumlah limfosit sedikit melebihi ambang limfopenia, tahap ini kekal hampir tidak berubah sepanjang masa mereka dimasukkan ke hospital. Selain itu, telah diterangkan bahawa limfopenia boleh membawa kepada corak penindasan dan pengaktifan yang wujud bersama di mana terdapat kehilangan sel T persisian serentak dengan percambahan sengit kumpulan sel T CD 8+ [64,65]. Ini akan menyumbang kepada peningkatan sedikit paras CD{17}} sel T yang diperhatikan dalam PBMC peserta daripada kumpulan Exitus sejak Minggu 6 kemasukan ke hospital dan seterusnya, walaupun jumlah tahap limfosit kekal tidak berubah dan melebihi ambang limfopenia, juga menunjukkan kemungkinan pengurangan CD{19}} sel T. Walau bagaimanapun, sel T CD8+ ini menunjukkan aktiviti sitotoksik yang rendah, seperti yang ditentukan oleh ekspresi rendah penanda degranulasi CD107a pada permukaan sel, manakala ekspresi penanda ini meningkat dalam sel8+ T CD daripada para peserta kumpulan Survival dari Minggu 4 dan seterusnya. Ungkapan CD107a dianggap sebagai biomarker untuk menilai kapasiti sitotoksik [66], dan ia telah diterangkan berkurangan di permukaan sel yang diasingkan daripada individu yang mempunyai COVID-19, berbanding dengan penderma yang tidak dijangkiti dan sihat [15 ].

Oleh itu, peningkatan ekspresi CD107a pada permukaan CD{1}} sel T mungkin sekurang-kurangnya sebahagiannya menerangkan sumbangan sel ini kepada aktiviti sitotoksik dipertingkat yang diperhatikan dalam PBMC peserta daripada kumpulan Survival. Selain itu, kami memerhatikan peningkatan ekspresi penanda keletihan PD-1 dalam kedua-dua CD4+ dan CD8+ sel T daripada individu kumpulan Exitus, yang mungkin turut menyumbang kepada pengurangan sitotoksik. aktiviti dan tindak balas kepada IL-15 sel ini. Populasi sel lain mungkin terlibat dalam aktiviti sitotoksik terhadap sel yang dijangkiti-2-SARS-CoV pseudotaip, seperti sel NK dan NKT. Seperti yang berlaku dengan jangkitan akut teruk yang lain, sel NK mungkin direkrut ke tapak jangkitan dengan SARS-CoV-2 [67], yang akan menjelaskan pengurangan bilangan sel NK yang beredar yang diperhatikan dalam semua peserta. Selain itu, ribut sitokin yang dibangunkan semasa COVID yang teruk dan kritikal-19 mungkin mengakibatkan status sel NK yang tidak berfungsi yang akan mengekspresikan reseptor pusat pemeriksaan perencatan yang tinggi seperti NKG2A atau PD-1 [68]. Dalam kajian kami, tahap sel NK adalah serupa antara kedua-dua kumpulan sehingga Minggu 6, di mana peserta kumpulan Survival menunjukkan peningkatan progresif sehingga keluar hospital. Ini dikaitkan dengan peningkatan ekspresi CD107a, yang telah dikaitkan dalam sel NK dengan rembesan sitokin yang dipertingkatkan dan lisis sel sasaran yang lebih baik [7,69], walaupun peratusan sel NK yang menyatakan penanda pengaktifan seperti CD107a telah digambarkan sebagai lebih rendah pada individu yang menghidap COVID-19 berbanding dengan kawalan yang sihat [70]. Sebaliknya, walaupun tahap sel NKT telah dipertingkatkan dengan banyak dalam kumpulan Survival dari Minggu 6 dan seterusnya, ekspresi CD107a kekal hampir tidak berubah, sementara mereka menunjukkan tahap penanda keletihan TIGIT yang dipertingkatkan pada permukaan sel yang meningkat secara berterusan sehingga Minggu 6 kemasukan ke hospital. . Salah satu batasan paling penting dalam kajian kami ialah saiz sampel yang dikurangkan. Namun begitu, kepentingan statistik telah dicapai antara kumpulan dalam beberapa parameter penting yang juga menunjukkan magnitud kesan yang besar atau sangat besar apabila perbezaan terkumpul antara kumpulan dikira.

cistanche tubulosa-meningkatkan sistem imun

5. Kesimpulan

Kesimpulannya, sumbangan paling penting kajian ini untuk memerangi imunopatologi yang disebabkan oleh jangkitan SARS-CoV-2 ialah pengesahan bahawa kapasiti antiviral PBMC yang terjejas nampaknya merupakan faktor kritikal dalam perkembangan kepada COVID yang membawa maut{ {2}}, malah melebihi faktor sosiodemografi, klinikal dan biokimia yang lain. Oleh itu, penggunaan rawatan imunomodulator yang boleh meningkatkan sitotoksisiti mungkin menyumbang kepada hasil yang positif semasa dimasukkan ke hospital akibat COVID yang kritikal-19. Peningkatan aktiviti sitotoksik yang dimediasi oleh IL-15 dalam individu daripada kumpulan Survival mungkin tidak bergantung pada peningkatan tahap sel sitotoksik tetapi pada imunokompeten sel ini untuk bertindak balas terhadap rangsangan tersebut. Oleh itu, pemantauan ekspresi penanda keletihan dan tindak balas terhadap rangsangan homeostatik seperti IL-15 populasi sel ini dalam individu dimasukkan ke hospital boleh berguna sebagai penanda peramal hasil yang membawa maut untuk memulakan langkah tambahan untuk mencegah ia. Akibatnya, kajian pemerhatian ini adalah bukti konsep bahawa penggunaan IL-15 dalam individu yang dimasukkan ke hospital dengan COVID-19 boleh meningkatkan tindak balas imun antivirus, walaupun rangsangan ini sahaja tidak akan berkesan pada individu yang tidak bertindak balas. sel akibat keletihan imun atau laluan isyarat IL-15R yang terjejas, yang penting dalam pencegahan keletihan [71], walaupun apabila ia menunjukkan bilangan limfosit melebihi ambang limfopenia. Lebih banyak kajian dengan populasi yang lebih besar diperlukan untuk menilai gabungan peningkatan dos IL-15 dengan agen imunomodulator lain seperti perencat pusat pemeriksaan imun atau antibodi monoklonal yang menyasarkan sel yang dijangkiti untuk membantu memulihkan dan meningkatkan tindak balas antivirus semasa bentuk kritikal COVID. -19.

Rujukan

1. Atzrodt, CL; Maknojia, I.; McCarthy, RDP; Oldfield, TM; Po, J.; Ta, KTL; Stepp, HE; Clements, TP Panduan untuk COVID-19: Pandemik global yang disebabkan oleh novel coronavirus SARS-CoV-2. FEBS J. 2020, 287, 3633–3650. [CrossRef] [PubMed]

2. Papan Pemuka WHO Coronavirus (COVID{1}}). Tersedia dalam talian: https://covid19.who.int/ (diakses pada 18 Oktober 2022).

3. Capalbo, C.; Aceti, A.; Simmaco, M.; Bonfini, R.; Rocco, M.; Ricci, A.; Napoli, C.; Rocco, M.; Alfonsi, V.; Teggi, A.; et al. Fasa eksponen pandemik-19 COVID di tengah Itali: Laluan penjagaan bersepadu. Int. J. Alam Sekitar. Res. 2020, 17, 3792. [CrossRef] [PubMed]

4. Huang, C.; Wang, Y.; Li, X.; Ren, L.; Zhao, J.; Hu, Y.; Zhang, L.; Fan, G.; Xu, J.; Gu, X.; et al. Ciri klinikal pesakit yang dijangkiti novel coronavirus 2019 di Wuhan, China. Lancet 2020, 395, 497–506. [CrossRef] [PubMed]

5. Haybar, H.; Kazemnia, K.; Rahim, F. Penyakit kronik yang mendasari dan jangkitan COVID{1}}: Kajian terkini. Jundishapur J. Chronic Dis. Penjagaan 2020, 9, e103452. [CrossRef] 6. Hamed, SM; Elkhatib, WF; Khairalla, AS; Noreddin, AM dinamik global bagi kelas{10} SARS-CoV dan kaitannya dengan epidemiologi-19 COVID. Sci. Rep. 2021, 11, 8435. [CrossRef]

7. Erdinc, B.; Sahni, S.; Gotlieb, V. Manifestasi hematologi dan komplikasi COVID-19. Adv. Clin. Exp. Med. 2021, 30, 101–107. [CrossRef]

8. Hu, B.; Huang, S.; Yin, L. Ribut sitokin dan COVID-19. J. Med. Virol. 2021, 93, 250–256. [CrossRef]

9. Ramos-Casals, M.; Brito-Zerón, P.; López-Guillermo, A.; Khamashta, MA; Bosch, X. Sindrom haemophagocytic dewasa. Lancet 2014, 383, 1503–1516. [CrossRef]

10. Mehta, P.; McAuley, DF; Brown, M.; Sanchez, E.; Tattersall, RS; Manson, JJ; bagi pihak HLH Across Specialty Collaboration, UK. Merentasi Kepakaran. COVID-19: Pertimbangkan sindrom ribut sitokin dan imunosupresi. Lancet 2020, 395, 1033–1034. [CrossRef]

11. Li, M.-Y.; Li, L.; Zhang, Y.; Wang, X.-S. Ekspresi gen reseptor sel SARS-CoV-2 ACE2 dalam pelbagai jenis tisu manusia. Jangkitan. Dis. Kemiskinan 2020, 9, 45. [CrossRef]

12. Jiang, Y.; Rubin, L.; Peng, T.; Liu, L.; Xing, X.; Lazarovici, P.; Zheng, W. Ribut sitokin dalam COVID-19: Daripada jangkitan virus kepada tindak balas imun, diagnosis dan terapi. Int. J. Biol. Sci. 2022, 18, 459–472. [CrossRef] [PubMed]

13. Zhan, Y.; Carrington, EM; Zhang, Y.; Heinzel, S.; Lew, AM Kehidupan dan kematian sel T yang diaktifkan: Bagaimanakah ia berbeza daripada sel T naif? Depan. Immunol. 2017, 8, 1809. [CrossRef] [PubMed]

14. Huang, I.; Pranata, R. Lymphopenia dalam penyakit coronavirus yang teruk-2019 (COVID-19): Semakan sistematik dan meta-analisis. J. Rawatan Rapi 2020, 8, 36. [CrossRef] [PubMed]

15. Zheng, M.; Gao, Y.; Wang, G.; Lagu, G.; Liu, S.; Matahari, D.; Xu, Y.; Tian, ​​Z. Keletihan fungsional limfosit antivirus dalam pesakit-19 COVID. sel. Mol. Immunol. 2020, 17, 533–535. [CrossRef]

16. Rha, M.-S.; Jeong, HW; Ko, J.-H.; Choi, SJ; Seo, I.-H.; Lee, JS; Sa, M.; Kim, AR; Joo, E.-J.; Ahn, JY; et al. PD-1-mengekspresikan SARS-CoV-2-sel T CD8+ khusus tidak habis, tetapi berfungsi pada pesakit COVID-19. Kekebalan 2021, 54, 44–52. [CrossRef]

17. Vigón, L.; Fuertes, D.; García-Pérez, J.; Torres, M.; Rodríguez-Mora, S.; Mateos, E.; Corona, M.; Saez-Marín, AJ; Malo, R.; Navarro, C.; et al. Tindak Balas Sitotoksik terjejas dalam PBMC daripada Pesakit dengan COVID-19 Dimasukkan ke ICU: Penanda Bio untuk Meramalkan Keparahan Penyakit. Depan. Immunol. 2021, 12, 665329. [CrossRef]

18. SIAPA. Kenyataan Interim mengenai Pertimbangan Membuat Keputusan untuk Penggunaan Varian Vaksin COVID-19 Yang Dikemas kini. Tersedia dalam talian: https://www.who.int/news/item/17-06-2022-interim-statement-on-decision-making-considerations-for-the-use-of variant-updated-covid{{15} }vaksin (diakses pada 15 Ogos 2022).

19. Mishra, SK; Tripathi, T. Kemas kini satu tahun tentang pandemik-19 COVID: Di manakah kita sekarang? Acta Trop. 2021, 214, 105778. [CrossRef] 20. Li, X.; Geng, M.; Peng, Y.; Meng, L.; Lu, S. Patogenesis imun molekul dan diagnosis COVID-19. J. Pharm. dubur. 2020, 10, 102–108. [CrossRef]

21. Kumpulan TRC. Dexamethasone dalam pesakit dimasukkan ke hospital dengan COVID-19. N. Inggeris. J. Med. 2021, 384, 693–704. [CrossRef]

22. Zhou, X.; Yu, J.; Cheng, X.; Zhao, B.; Manyam, GC; Zhang, L.; Schluns, K.; Bibir.; Wang, J.; Matahari, S.-C. Deubiquitinase Otub1 mengawal pengaktifan CD{3}} sel T dan sel NK dengan mengawal selia IL-15-pengantaraan penyebuan. Nat. Immunol. 2019, 20, 879–889. [CrossRef]

23. Parums, DV Status semasa rawatan ubat antiviral oral untuk jangkitan SARS-CoV-2 dalam pesakit bukan hospital. Med. Sci. Monit. 2022, 28, e935952-1. [CrossRef] [PubMed]

24. Couzin-Frankel, J. Pil antivirus boleh mengubah perjalanan pandemik. Am. Prof. Adv. Sci. 2021, 12, 799–800. [CrossRef] [PubMed]

25. Muntasell, A.; Ochoa, MC; Cordeiro, L.; Berraaondo, P.; de Cerio, AL-D.; Cabo, M.; López-Botet, M.; Melero, I. Menyasarkan pusat pemeriksaan sel NK untuk imunoterapi kanser. Curr. Pendapat. Immunol. 2017, 45, 73–81. [CrossRef] [PubMed]

26. Patidar, M.; Yadav, N.; Dalai, SK Interleukin 15: Sitokin utama untuk imunoterapi. Faktor Pertumbuhan Cytokine Rev. 2016, 31, 49–59. [CrossRef]

27. Kabinger, F.; Stiller, C.; Schmitzová, J.; Dienemann, C.; Kokic, G.; Hillen, HS; Höbartner, C.; Cramer, P. Mekanisme mutagenesis SARS-CoV-2 yang disebabkan oleh molnupiravir. Nat. Struktur. Mol. biol. 2021, 28, 740–746. [CrossRef] [PubMed]

28. Hung, Y.-P.; Lee, J.-C.; Chiu, C.-W.; Lee, C.-C.; Tsai, P.-J.; Hsu, I.-L.; Ko, W.-C. Terapi Nirmatrelvir/Ritonavir Oral untuk COVID-19: The Dawn in the Dark? Antibiotik 2022, 11, 220. [CrossRef]

29. Guo, Y.; Luan, L.; Patil, NK; Sherwood, ER Imunobiologi kompleks IL-15/IL-15R sebagai agen antitumor dan antivirus. Faktor Pertumbuhan Cytokine Rev. 2017, 38, 10–21. [CrossRef]

30. Zhang, S.; Zhao, J.; Bai, X.; Handley, M.; Shan, F. Kesan biologi IL-15 pada sel imun dan potensinya untuk rawatan kanser. Int. Immunopharmacol. 2021, 91, 107318. [CrossRef]

31. Waldmann, TA; Dubois, S.; Miljkovic, MD; Conlon, KC IL-15 dalam Gabungan Imunoterapi Kanser. Depan. Immunol. 2020, 11, 868. [CrossRef]

32. Dubois, SP; Miljkovic, MD; Fleisher, TA; Pittaluga, S.; Hsu-Albert, J.; Bryant, BR; Petrus, MN; Perera, LP; Müller, JR; Shih, JH; et al. IL kursus pendek-15 diberikan sebagai infusi berterusan membawa kepada pengembangan besar-besaran sel NK yang berkesan: Implikasi untuk terapi gabungan dengan antibodi antitumor. J. Immunother. Kanser 2021, 9, e002193. [CrossRef]

33. Conlon, KC; Potter, EL; Pittaluga, S.; Lee, C.-CR; Miljkovic, MD; Fleisher, TA; Dubois, S.; Bryant, BR; Petrus, M.; Perera, LP; et al. IL15 oleh Infusi Intravena Berterusan kepada Pesakit Dewasa dengan Tumor Pepejal dalam Subset Sel NK-Dramatik Percubaan Fasa I. Clin. Kanser Re. 2019, 25, 4945–4954. [CrossRef]

34. Romee, R.; Cooley, S.; Berrien-Elliott, MM; Westervelt, P.; Verneris, MR; Wagner, JE; Weisdorf, DJ; Blazar, BR; Ustun, C.; DeFor, TE; et al. Kajian klinikal fasa 1 pertama dalam manusia bagi IL-15 kompleks superagonist ALT-803 untuk merawat kambuh selepas pemindahan. Darah Am. J. Hematol. 2018, 131, 2515–2527. [CrossRef] [PubMed]

35. Miller, JS; Davis, ZB; Helgeson, E.; Reilly, C.; Thorkelson, A.; Anderson, J.; Lima, NS; Jorstad, S.; Hart, GT; Lee, JH; et al. Keselamatan dan Impak virologi IL-15 superagonis N-803 pada orang yang hidup dengan HIV: Percubaan fasa 1. Nat. Med. 2022, 28, 392–400. [CrossRef] [PubMed]

36. Berenguer, J.; Ryan, P.; Rodríguez-Baño, J.; Jarrín, I.; Carratalà, J.; Pachón, J.; Yllescas, M.; Arriba, JR; Muñoz, EA; Gil Divasson, P.; et al. Ciri dan peramal kematian dalam kalangan 4035 pesakit berturut-turut dimasukkan ke hospital dengan COVID-19 di Sepanyol. Clin. mikrobiol. Jangkitan. 2020, 26, 1525–1536. [CrossRef]

37. Garcia-Perez, J.; Sanchez-Palomino, S.; Perez-Olmeda, M.; Fernandez, B.; Alcami, J. Strategi baru berdasarkan virus rekombinan sebagai alat untuk menilai kerentanan dadah jenis virus immunodeficiency manusia 1. J. Med. Virol. 2007, 79, 127–137. [CrossRef] [PubMed]

38. Ou, X.; Liu, Y.; Lei, X.; Bibir.; Mi, D.; Ren, L.; Guo, L.; Guo, R.; Chen, T.; Hu, J.; et al. Pencirian glikoprotein lonjakan SARS-CoV-2 pada kemasukan virus dan kereaktifan silang imunnya dengan SARS-CoV. Nat. Commun. 2020, 11, 1–12. [CrossRef] [PubMed]

39. Volz, E.; Bukit, V.; McCrone, JT; Harga, A.; Jorgensen, D.; O'Toole, Á.; Southgate, J.; Johnson, R.; Jackson, B.; Nascimento, FF; et al. Menilai kesan mutasi pancang SARS-CoV-2 D614G pada kebolehtransmisian dan kepatogenan. Sel 2021, 184, 64–75. [CrossRef]

40. Korber, B.; Fischer, WM; Gnanakaran, S.; Yoon, H.; Theiler, J.; Abfalterer, W.; Hengartner, N.; Giorgi, EE; Bhattacharya, T.; Foley, B.; et al. Menjejaki perubahan dalam lonjakan SARS-CoV-2: Bukti bahawa D614G meningkatkan kejangkitan virus-19 COVID. Sel 2020, 182, 812–827. [CrossRef]

41. Nandagopal, N.; Ali, AK; Komal, AK; Lee, S.-H. Peranan kritikal laluan IL-15–PI3K–mTOR dalam fungsi efektor sel pembunuh semulajadi. Depan. Immunol. 2014, 5, 187. [CrossRef]

42. Rosenthal, R.; Groeper, C.; Bracci, L.; Adamina, M.; Feder-Mengus, C.; Zajac, P.; Iezzi, G.; Bolli, M.; Weber, WP; Frey, DM; et al. Responsif Berbeza kepada IL-2, IL-7 dan IL-15 Sitokin Rangkaian Reseptor Biasa oleh Sel T Naif Darah Periferal atau Memori Sitotoksik8+ khusus Antigen daripada Penderma Sihat dan Pesakit Melanoma. J. Immunother. 2009, 32, 252–261. [CrossRef]

43. Corman, VM; Landt, O.; Kaiser, M.; Molenkamp, ​​R.; Meijer, A.; Chu, DKW; Bleicker, T.; Brünink, S.; Schneider, J.; Schmidt, ML; et al. Pengesanan 2019 novel coronavirus (2019-nCoV) oleh RT-PCR masa nyata. Eurosurveillance 2020, 25, 2000045. [CrossRef] [PubMed]

44. SIAPA. Ujian Diagnostik untuk SARS-CoV-2: Panduan Interim, 11 September 2020; Pertubuhan Kesihatan Sedunia: Geneva, Switzerland, 2020.

45. Becker, LA Effect Size (ES); Universiti Colorado Colorado Springs: Colorado Springs, CO, Amerika Syarikat, 2000.

46. ​​Cohen, J. Analisis Kuasa Statistik untuk Sains Tingkah Laku; Routledge: Abingdon, UK, 1988. [CrossRef]

47. Moreno-Perez, O.; Ribes, I.; Boix, V.; Martinez-García, M.; Otero-Rodriguez, S.; Reus, S.; Sánchez-Martínez, R.; Ramos, JM; Chico-Sánchez, P.; Merino, E. Pesakit dimasukkan ke hospital dengan terobosan COVID-19: Ciri klinikal dan peramal hasil yang lemah. Int. J. Jangkitan. Dis. 2022, 118, 89–94. [CrossRef] [PubMed]

48. Lee, CM; Lee, E.; Park, WB; Choe, PG; Lagu, K.-H.; Kim, ES; Park, S.-W. Jangkitan COVID{3}} Terobosan semasa Tempoh Dominan Varian Delta: Penjagaan Individu Berdasarkan Status Pemvaksinan Diperlukan. J. Med Korea. Sci. 2022, 37, e252. [CrossRef] [PubMed]

49. Ejaz, H.; Alsrhani, A.; Zafar, A.; Javed, H.; Junaid, K.; Abdalla, AE; Abosalif, KO; Ahmed, Z.; Younas, S. COVID-19 dan komorbiditi: Kesan buruk pada pesakit yang dijangkiti. J. Jangkitan. Kesihatan Awam 2020, 13, 1833–1839. [CrossRef] [PubMed]

50. Azevedo, RB; Botelho, BG; de Hollanda, JVG; Ferreira, LVL; de Andrade, LZJ; Oei, SSML; Mello, TDS; Muxfeldt, ES COVID-19 dan sistem kardiovaskular: Kajian menyeluruh. J. Hum. Hipertensi. 2021, 35, 4–11. [CrossRef]

51. Zhang, JJ; Lee, KS; Ang, LW; Leo, YS; Young, BE Faktor risiko penyakit teruk dan keberkesanan rawatan pada pesakit yang dijangkiti COVID-19: Kajian sistematik, analisis meta dan analisis regresi meta. Clin. Jangkitan. Dis. 2020, 71, 2199–2206. [CrossRef]

52. Kermali, M.; Khalsa, RK; Pillai, K.; Ismail, Z.; Harky, A. Peranan biomarker dalam diagnosis COVID-19–Semakan sistematik. Life Sci. 2020, 254, 117788. [CrossRef]

53. Malik, P.; Patel, U.; Mehta, D.; Patel, N.; Kelkar, R.; Akrmah, M.; Gabrilove, JL; Sacks, H. Biomarker dan hasil kemasukan ke hospital-19 COVID: Kajian sistematik dan meta-analisis. BMJ Evid. Berasaskan Med. 2021, 26, 107–108. [CrossRef]

54. Li, Y.; Schneider, AM; Mehta, A.; Sade-Feldman, M.; Kays, KR; Gentili, M.; Charland, NC; Gonye, ​​AL; Gushterova, I.; Khanna, HK; et al. Virus SARS-CoV-2 dikaitkan dengan laluan proteomik yang berbeza dan meramalkan hasil-19 COVID. J. Clin. Menyiasat. 2021, 131, e148635. [CrossRef]

55. Rodríguez-Serrano, DA; Roy-Vallejo, E.; Cruz, NDZ; Ramírez, AM; Rodríguez-García, SC; Arevalillo-Fernández, N.; Galván-Román, JM; García-Rodrigo, LF; Vega-Piris, L.; Llano, MC; et al. Pengesanan RNA SARS-CoV-2 dalam serum dikaitkan dengan peningkatan risiko kematian dalam pesakit COVID-19 yang dimasukkan ke hospital. Sci. Rep. 2021, 11, 13134. [CrossRef]

56. Serafim, RB; Póvoa, P.; Souza-Dantas, V.; Kalil, AC; Salluh, JI Kursus klinikal dan hasil pesakit kritikal dengan jangkitan COVID-19: Kajian sistematik. Clin. mikrobiol. Jangkitan. 2021, 27, 47–54. [CrossRef] [PubMed]

57. Liu, X.; Zhou, H.; Zhou, Y.; Wu, X.; Zhao, Y.; Lu, Y.; Tan, W.; Yuan, M.; Ding, X.; Zou, J.; et al. Faktor risiko yang dikaitkan dengan keterukan penyakit dan tempoh penginapan hospital dalam-19 pesakit COVID. J. Jangkitan. 2020, 81, e95–e97. [CrossRef]

58. Luo, XH; Zhu, Y.; Mao, J.; Du, imunobiologi sel T RC dan ribut sitokin COVID-19. Scand. J. Immunol. 2021, 93, e12989. [CrossRef] [PubMed]

59. Harwood, O.; O'Connor, S. Potensi terapeutik IL-15 dan N-803 dalam jangkitan HIV/SIV. Virus 2021, 13, 1750. [CrossRef] [PubMed]

60. Shin, H.; Wherry, disfungsi sel EJ CD8 T semasa jangkitan virus kronik. Curr. Pendapat. Immunol. 2007, 19, 408–415. [CrossRef]

61. McMahan, K.; Yu, J.; Mercado, NB; Loos, C.; Tostanoski, LH; Chandrashekar, A.; Liu, J.; Peter, L.; Atyeo, C.; Zhu, A.; et al. Kaitan perlindungan terhadap SARS-CoV-2 dalam kera rhesus. Alam 2021, 590, 630–634. [CrossRef]

62. Zhuang, Z.; Lai, X.; Matahari, J.; Chen, Z.; Zhang, Z.; Dai, J.; Liu, D.; Li, Y.; Li, F.; Wang, Y.; et al. Pemetaan dan peranan tindak balas sel T dalam tikus yang dijangkiti SARS-CoV-2. J. Exp. Med. 2021, 218, e20202187. [CrossRef]

63. Westmeier, J.; Paniskaki, K.; Karaköse, Z.; Werner, T.; Sutter, K.; Dolff, S.; Overbeck, M.; Limmer, A.; Liu, J.; Zheng, X.; et al. Tindak balas sel T CD sitotoksik8+ terjejas dalam pesakit COVID-19 tua. MBio 2020, 11, e02243-20. [CrossRef]

64. Laing, AG; Lorenc, A.; del Barrio, IDM; Das, A.; Ikan, M.; Monin, L.; Muñoz-Ruiz, M.; McKenzie, DR; Hayday, TS; Francos Quijorna, I.; et al. Tandatangan imun COVID-19 dinamik termasuk perkaitan dengan prognosis yang buruk. Nat. Med. 2020, 26, 1623–1635. [CrossRef]

65. Kuri-Cervantes, L.; Pampena, MB; Meng, W.; Rosenfeld, AM; Ittner, CAG; Weisman, AR; Agyekum, RS; Mathew, D.; Baxter, AE; Vella, LA; et al. Pemetaan komprehensif gangguan imun yang dikaitkan dengan COVID yang teruk-19. Sci. Immunol. 2020, 5, eabd7114. [CrossRef]

66. Aktas, E.; Kucuksezer, UC; Bilgic, S.; Erten, G.; Deniz, G. Hubungan antara ekspresi CD107a dan aktiviti sitotoksik. sel. Immunol. 2009, 254, 149–154. [CrossRef]

67. Björkström, NK; Strunz, B.; Ljunggren, H.-G. Sel pembunuh semulajadi dalam imuniti antivirus. Nat. Rev. Immunol. 2022, 22, 112–123. [CrossRef] [PubMed]

68. Bi, J. Disfungsi sel NK pada pesakit dengan COVID-19. sel. Mol. Immunol. 2022, 19, 127–129. [CrossRef] [PubMed]

69. Alter, G.; Malenfant, JM; Altfeld, M. CD107a sebagai penanda berfungsi untuk mengenal pasti aktiviti sel pembunuh semulajadi. J. Immunol. Kaedah 2004, 294, 15–22. [CrossRef] [PubMed]

70. Gustine, JN; Jones, D. Immunopathology of Hyperinflammation dalam COVID-19. Am. J. Clin. Pathol. 2021, 191, 4–17. [CrossRef] [PubMed]

71. Dia, C.; Zhou, Y.; Li, Z.; Farooq, MA; Ajmal, I.; Zhang, H.; Zhang, L.; Tao, L.; Yao, J.; Du, B.; et al. Ekspresi bersama IL-7 memperbaik terapi sel CAR T berasaskan NKG2D pada kanser prostat dengan meningkatkan pengembangan dan menghalang apoptosis dan keletihan. Kanser 2020, 12, 1969. [CrossRef]