Kajian Mengenai Pengekstrakan Dan Sifat Antioksidan Flavonoid dalam Cistanche

Untuk maklumat lanjut:ali.ma@wecistanche.com

Song Yang

(Institut Penyeliaan dan Pemeriksaan Kualiti Produk Anshan, Anshan 114006, Liaoning)

Abstrak: JumlahflavonoiddalamCistanchetelah diekstrak oleh "kaedah getaran ultrasonik" dan "kaedah pengekstrakan Soxhlet", dan kandungan danantioksidansifat dianalisis. Keputusan penentuan menunjukkan bahawa kandungan jumlahflavonoiddalamCistancheyang diekstrak dengan kaedah getaran ultrasonik adalah lebih tinggi daripada yang diekstrak dengan kaedah pengekstrakan Soxhlet. Kadar pemulihan yang ditentukan oleh eksperimen ialah 96.85 peratus -99.46 peratus , ketepatannya tinggi, dan larutan sampel sangat stabil dalam masa 2 jam, yang menunjukkan bahawa spektrofotometri UV-Vis mempunyai ketepatan yang tinggi, sisihan kecil dan kawalan mudah keadaan eksperimen. Menganalisis dan menentukanantioksidanaktiviti daripadaflavonoiddalamCistanchedengan kaedah pendarfluor, kadar kelegaan ialah 91.5 peratus , menunjukkan bahawaflavonoiddalamCistanchemempunyai kuatantioksidanharta benda. Dalam eksperimen, didapati bahawa menggunakan analisis pendarfluor untuk menentukanantioksidankapasiti keseluruhanflavonoiddalam ekstrak mempunyai kelebihan kepantasan, kesederhanaan, sensitiviti tinggi, dan kebolehulangan yang baik.

Kata kunci: Cistanche; Flavonoid; Ultrasound; Antioksidan

Nombor Klasifikasi Perpustakaan Cina: TQ028 Kod Pengenalan Dokumen: Nombor Artikel: 1004-0935 (2013) 01-0013-03

Cistanche

Klik pada Cistanche organik untuk anti-penuaan

Cistanchedigunakan secara meluas sebagai ubat tonik. Penyelidikan tentang kesan farmakologi dan komponen kimiaCistanchetelah mencapai kemajuan yang besar dalam beberapa tahun kebelakangan ini. Mongolia Dalaman AlxaCistancheKumpulan telah membangunkan satu siri Cistanche yang menyuburkan yin dan menyuburkan yang, melembapkan usus, meningkatkan fungsi imun manusia, mengawal endokrin, dan melambatkan penuaan. minuman keras,cistanchececair kesihatan. Di Jepun, hernia daging digunakan sebagai agen pemulihan atau terapeutik untuk disfungsi seksual dan amnesia. Di Amerika Syarikat, echinacea juga dijadikan produk kesihatan untuk meningkatkan imuniti badan. Atas dasar ini, kita harus menjalankan penyelidikan mendalam mengenai bahan aktif kesan farmakologinya dan mekanisme tindakannya. Di bawah premis untuk memastikan keberkesanan, kita harus menambah baik persediaan perubatan tradisional Cina, meningkatkan tahap kawalan kualiti, dan membangunkan kesan kuratif yang pasti, penggunaan selamat dan kualiti yang boleh dikawal. Produk baru perubatan tradisional Cina; sebaliknya, kita juga harus mengukuhkan penyelidikan teknologi penanaman Cistanche, merealisasikan penanaman piawai dan pengeluaran perindustrian Cistanche, menanam cistanche secara buatan dan menubuhkan pangkalan penanaman perindustrian cistanche dan tumbuhan perumahnya, dan menyelesaikan masalah kekurangan sumber. Pada masa yang sama, tadbir urus alam sekitar di kawasan gurun barat akan terus direalisasikan. Dengan penyelidikan mendalam yang berterusan dalam pelbagai aspek, perubatan tradisional Cina negara kita ini pastinya akan dipromosikan ke pasaran antarabangsa dan mempercepatkan pemodenan perubatan Cina.

1 Bahagian eksperimen

1.1 Instrumen eksperimen

H, H, S, 21-jenis pemanas elektrik suhu malar mandi air (Kilang Alat Perubatan Shanghai No. 5); Imbangan analisis elektro-optik TG328A (Kilang Alat Shanghai Tianping); Ayak 40 mesh (Kilang Alat Zhejiang Hongxing) KQ-250B pengekstrak ultrasonik ( Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); Pengekstrak Soxhlet (Kilang Alat Zhejiang Hongxing); Model 766-2 Pengeringan Sinaran Inframerah Jauh (Shanghai Sunshine Instrument Co., Ltd.); Model HX-200Penghancur Ubat Cina Berkelajuan Tinggi (Perkakasan Xi'an, Zhejiang Yongkang) Kilang Ubat); TU-1201 spektrofotometer UV (Beijing Puxi General Instrument Co., Ltd.); PHS-3Meter keasidan digital ketepatan C (dikilangkan oleh Shanghai Tianda Instrument Co., Ltd.); Spektrofotometer pendarfluor (VARIAN)

1.2 Reagen dan ubat eksperimen

Cistanche(disediakan di makmal); etanol mutlak (ketulenan analisis) (Kilang Reagen Shenyang Xinhua); rutin (standard) (disediakan di makmal); 50 g/L larutan natrium nitrit (buatan sendiri); 100g/L Larutan aluminium nitrat (buatan sendiri); 40 g/L larutan natrium hidroksida (buatan sendiri); PH=6.5 larutan fosfat campuran: 0.1mol/L disodium hidrogen fosfat, 0.1mol/L kalium dihidrogen fosfat; asid benzoik Penyelesaian: 0.400 0 g asid benzoik (Kilang Reagen AR Shenyang), dilarutkan dalam larutan fosfat campuran dengan pH=9.5, cairkan dengan air hingga 100 mL dan simpan dalam gelap selama penggunaan kemudian; Larutan Cu*: 1.0 x IO"g/mL; Hidrogen peroksida (AR, Kilang Reagen No. 1 Shenyang): 30 peratus ; 0.1 MoVL fosfat campuran (disodium hidrogen fosfat, AR, Loji Kimia Shenyang Xincheng; kalium dihidrogen fosfat, AR, Pengedaran Reagen Kimia Shenyang Hefu ) Penyelesaian; Airnya ialah air suling dua kali.

1.3 Pengekstrakan jumlah flavonoid dalam Cistanche

1.3.1 Pengekstrakan flavonoid daripada Cistanche deserticola (kaedah ultrasonik)

Timbang 2 dengan tepat.000 g (melepasi 40-ayak mesh)Cistanchedalam kelalang kon 100mL, tambah 95 peratus reagen etanol pada suhu bilik pada nisbah pepejal-ke-cecair 1:15, dan lakukan pengekstrakan ultrasonik setiap kali. Selepas 30 minit, lakukan penapisan sedutan, pulihkan sisa penapis, tambah 95 peratus reagen etanol untuk gegaran ultrasonik, penapisan sedutan, pengekstrakan ultrasonik 3 kali, gabungkan 3 turasan untuk mendapatkan ekstrak yang dikehendaki, tambah 95 peratus reagen etanol untuk menjadikan isipadu tetap Masukkan ke dalam kelalang volumetrik 100mL dan ketepikan.

1.3.2 Pengekstrakan flavonoid daripada Cistanche (kaedah pengekstrakan Soxhlet) P]

Timbang 10 dengan tepat.000 Og (melepasi 40-ayak mesh) puri terung, balut dengan kertas penapis yang telah dinyahlemak, ikat satu hujung dan masukkan ke dalam tiub pengekstrakan pengekstrak Soxhlet. Tambahkan 95 peratus reagen etanol pengekstrak ke dalam botol pengekstrakan selama lebih kurang. Ia adalah 1/2 daripada isipadu, kemudian pasangkan pengekstrak Soxhlet, gunakan tab mandi air suhu malar lebih tinggi sedikit daripada takat didih pengekstrak (etanol) untuk pengekstrakan Soxhlet selama 4 jam, kemudian sejukkan, lakukan penyejatan berputar, kepekatan, dan gunakan reagen etanol 95 peratus untuk menentukan Masukkan ke dalam kelalang volumetrik 100 mL dan ketepikan.

Anti penuaan

1.3 Penentuan kandungan bahan yang diekstrak dan eksperimen kadar pemulihan

1.3.1 Penentuan kandungan dan eksperimen pemulihan

Ambil enam kelalang volumetrik 25 mL, lukis 0.10, 0.20 dan 0.30 mL daripada cecair sampel Shuangrong daging yang diekstrak dengan kaedah ultrasonik ke dalam yang pertama. 3 kelalang volumetrik, tambahkan jumlah cecair sampel yang sama kepada 3 kelalang volumetrik yang terakhir, dan kemudian Tambah masing-masing 1.0 mL larutan piawai rutin, tambah 1 mL larutan natrium nitrit 50 g/L ke dalam 6 kelalang volumetrik, goncang dengan baik , dan biarkan selama 7 minit; tambah 1 mL larutan aluminium nitrat 100 g/L , Goncang sebati dan biarkan selama 7 min; tambah 10 mL larutan natrium hidroksida 40 g/L, dan juga goncang dengan baik dan biarkan selama 7 minit; cairkan hingga tanda dengan larutan etanol 95 peratus, goncang dengan baik, dan biarkan selama 15 minit; Penyelesaian kosong toner adalah rujukan, penyerapan A diukur pada 503 nm, dan kepekatan dikira dari lengkung piawai

Jadual 1 Kandunganflavonoid in Cistanche

Ambil enam kelalang volumetrik 25 mL, lukis 15 mL daripada kaedah pengekstrakan Soxhlet striata: larutan sampel puri dan isi semula isipadu dalam kelalang volumetrik 100 mL dan pipet 0 .40, 0.50 dan 0.60 mL daripadanya. Dalam 3 kelalang volumetrik, tambahkan jumlah larutan sampel yang sama kepada 3 kelalang volumetrik terakhir, kemudian tambahkan 1.0 mL larutan standard, tambah 1 mL larutan natrium nitrit 50 g/L, goncang dengan baik, dan biarkan selama 7 minit; Kemudian tambah 1 mL larutan aluminium nitrat 100 g/L, goncang dengan baik, dan biarkan selama 7 minit; kemudian tambah 10 mL larutan natrium hidroksida 40 g/L, goncang dengan baik, dan biarkan selama 7 minit; cairkan hingga tanda dengan larutan etanol 95 peratus, Goncang sebati, berdiri selama 15 minit, gunakan larutan kosong sebagai rujukan, ukur penyerapan A pada 503 nm, dan hitung kepekatan C dari lengkung piawai.

1.3.2 Penentuan eksperimen kestabilan

Pipet 0.2 mL larutan sampel, tambah 1 mL larutan natrium nitrit dengan 50 g/L reagen warna, goncang dengan baik dan biarkan selama 7 minit; tambah 1 mL larutan aluminium nitrat 100 g/L, goncang dengan baik, dan biarkan selama 7 minit; tambah 10 mL larutan natrium hidroksida 40 g/L, dan juga goncang dengan baik dan berdiri selama 7 minit; cairkan hingga tanda dengan larutan etanol 95 peratus, goncang dengan baik, dan berdiri selama 15 minit; ambil larutan kosong dengan pembangun sebagai rujukan, Dan kemudian diukur dengan spektrofotometer yang boleh dilihat ultraungu, masa ditetapkan selama 2 jam, dan didapati bahawa penyerapan larutan sampel adalah stabil dalam masa 2 jam dan pada dasarnya tidak berubah.

Jadual 2 Kandunganflavonoiddi Cistanche

1.4 Analisis aktiviti antioksidan flavonoid dalam Cistanche cistanche, penentuan fluorimetrik kinetik pemangkin kadar penghapusan ubat herba Cina pada radikal bebas hidroksil

1.4.1 Kaedah eksperimen

Tambah larutan asid benzoik kepada satu siri tiub kolorimetrik 25 mL, kemudian tambahkan sejumlah Co? tambah dan hidrogen peroksida, seterusnya, mencairkan dengan larutan fosfat campuran pH=6.5 kepada isipadu tetap 25 mL, goncang dengan baik, dan letakkan dalam air mendidih Selepas berdiri di dalam tab mandi selama 45 minit, pendarfluor keamatan setiap larutan diukur.

1.4.2 Penentuan kadar penghapusan sampel kepada radikal hidroksil

Penyediaan larutan sampel: Timbang 1 dengan tepat.000 Og sampel dengan saiz zarah 450 μm, dan pada suhu bilik, ekstrak ultrasonik 3 kali dengan 60 mL etanol mutlak, menggunakan 20 mL reagen setiap kali, dengan selang masa 10 min. Satukan 3 penapisan pengekstrakan, dan cairkan turasan dengan etanol mutlak ke dalam kelalang volumetrik 100 mL.

Penyediaan reagen: Timbang 7.16 g disodium hidrogen fosfat dan tambah 200 mL air untuk mendapatkan larutan 0.1 mol/L; timbang 2.72 g kalium dihidrogen fosfat dan tambah 2{16}}0 mL air untuk mendapatkan larutan 0.1 mol/L. Campurkan kedua-dua larutan dan gunakan meter pH untuk menyediakan fosfat bercampur dengan pH=6.5; timbang 0.400 0 g asid benzoik (Kilang Reagen AR Shenyang), larutkannya dengan larutan fosfat campuran dengan pH=9.5, dan cairkan kepada isipadu dengan air WOmL, disimpan dalam gelap untuk kemudian penggunaan; Timbang 0.1547 g Ci/ dan larutkannya dengan] mol/L asid hidroklorik untuk menyediakan 100 mL larutan 1 mol/L Cu*. Sediakan 30 peratus larutan hidrogen peroksida.

Ambil 0.2 ml larutan sampel ke dalam tiub kolorimetrik 25 mL, tambah asid benzoik, hidrogen peroksida dan mata Cu mengikut urutan, cairkan kepada 25 mL dengan larutan fosfat campuran pH=6. 5, goncang dengan baik, dan ukur mengikut formula kadar kelegaan Dapatkan kadar penghapusan sampel kepada radikal hidroksil.

1.4.3 Keputusan pengiraan

Jadual 3 Keputusan pengiraan

Kesimpulan: Flavonoid dalam Cistanche mempunyai sifat antioksidan yang kuat.

flavonoid dalam cistanche mempunyai kesan Anti-penuaan

2 Keputusan dan perbincangan

(1) Menggunakan "kaedah ultrasonik" dan "kaedah pengekstrakan Soxhlet" untuk mengekstrak jumlah keseluruhanflavonoiddalamCistanche deserticola, perbandingan kedua-dua kaedah ini menunjukkan bahawa kaedah ultrasonik sangat memendekkan masa pengekstrakan dan meningkatkan kadar pengekstrakan bahan yang berkesan. Kadar penggunaan sekali gus menjimatkan bahan mentah. Sebaliknya, kaedah pengekstrakan Soxhlet memakan masa dan susah payah, dan kesan pengekstrakan tidak baik. Oleh itu, pengekstrakan ultrasonik jumlahflavonoidadalah proses pengekstrakan terbaik, yang mempunyai kepentingan praktikal yang kuat.

(2) Analisis kualitatif jumlahflavonoidoleh spektroskopi UV menunjukkan bahawa rutin adalah produk standard yang sangat sesuai. Pengiraan eksperimen menunjukkan bahawa kandungan jumlahflavonoiddalamCistancheadalah sangat tinggi, dengan ketepatan yang tinggi, dan kadar pemulihan ialah 96.85 peratus ~ 99.46 peratus, sampel kekal stabil dalam masa 2 jam.

(3) Analisis anti-oksidan dan penentuan jumlahflavonoiddi dalamCistanchepadang pasir telah dijalankan dengan kaedah pendarfluor. Kesimpulan: Kadar pelepasan yang dikira ialah 91.5 peratus , menunjukkan bahawacistanchepes itu sendiri mempunyai kesan antioksidan yang kuat, yang boleh menghilangkan radikal bebas dan menghalang lipid. Pengoksidaan, dsb., amat bernilai dalam penyelidikan anti-penuaan, karsinogenesis, keradangan, iskemia tisu radiasi, dan penyakit lain dalam bidang perubatan.

Rujukan:

[1] Cheng Xiyu, Guo Bin, Ni Wen, Liu Chunchao. Kemajuan penyelidikan bagiCistanche[J]. Penyelidikan dan Pembangunan Produk Semula Jadi, 2005, 17 (2): 235-240.

[2] Hou Dongyan, Hui Ruihua, et al. Analisis spektrum jumlahflavonoiddalam honeysuckle dan penentuan aktiviti antioksidan [J]. Ujian Analitikal, 2004, 23 (11): 52-55.

[3] Zhou Gui, Deng Guanghui, Liang Dawen.'Kajian tentang pengekstrakanflavonoiddaripada daun hawthorn dengan kaedah ultrasonik [J]. Journal of Southwest Agricultural University, 2005, 27 (5): 605-607.