Kajian Mengenai Pemisahan Dan Imunisi Ekstrak Air Dari Polysaccharide Dari Cistanche Tubulosa

untuk lebih banyak information:ali.ma@wecistanche.com

Ailadan· Maimaitiaili1,LI Yang1,YAO Jun1,YUAN Jie2

（1. Sekolah Farmasi,Universiti Perubatan Xinjiang, Urumqi 830011,China;2. Kolaj Houbo, Universiti Perubatan Xinjiang,Xinjiang Klamayi 834000,China)

OBJEKTIF ABSTRAK:Untuk mengasingkan ekstrak airpolysaccharides dari Cistanche tubulosa,dan untuk menyiasat imun kecekapan mereka in vitro. KAEDAH: Ab-8 resin penjerapan makroporous digunakan untuk mendekorasi C. tubulosa polysaccharide. Proses penyahwarnaan dioptimumkan oleh ujian ortogonal dengan kadar pengekalan dan kadar dekonlorisasi polysaccharide sebagai skor komprehensif, dan menggunakan kadar penjerapan, masa penyahwarnaan, kepekatan sampel sebagai faktor. Ujian pengesahan telah dijalankan. Lajur pertukaran ion DEAE-650M digunakan untuk memisahkan ekstrak air C. tubulosa polysaccharide yang dinyahlorasi. Ujian CCK-8 digunakan untuk mengesan kesan kepekatan polysaccharide yang berbeza (6.25-100 μg / mL) sebelum dan selepas pengasingan pada kadar percambahan tikus makrophage RAW264.7. Kaedah Griess dan ujian ELISA telah diterima pakai untuk mengesan kesan kepekatan polisakarida rendah, sederhana dan tinggi (12.5,25,25,50 μg/mL)pada pelepasan NO,IL-6 dan TNF-α dalam sel RAW264.7 yang disebabkan oleh LPS. KEPUTUSAN: Dalam proses penyahwarnaan optimum resin penjerapan makroporous AB-8, kadar aliran penjerapan adalah 1.2 BV / h, masa penyahwarnaan adalah 9 h, dan kepekatan sampel adalah 25 mg / mL. Skor komprehensif 3 kali ujian pengesahan adalah 63.43% ,63.29% dan 63.34%, masing-masing, dengan purata 63.35% (RSD = 0.11% ,n = 3). Satu polysaccharide neutral (CTZ)dan 5 asid polysaccharides (CT1, CT2, CT3, CT4,CT4,CT5) diasingkan daripada polysaccharide C. cistanche, kandungannya adalah 299.2,168.0,123.2,121.6,54.4,11.2 mg/g. Berbanding dengan kumpulan kawalan,6.25-100 μg/mL CTZ (kecuali 6.25 μ g/mL),CT2,CT4,CT5 dan 6.25 μ g/mL CTC (polisaccharide sebelum seperation) boleh meningkatkan kadar percambahan sel RAW264.7 (P<0.05), manakala="" 6.25-100="" μg/ml="" ct1,ct3="" dan="" 50="" μg/ml="" ctc="" boleh="" mengurangkan="" kadar="" percambahan="" raw264.7="" sel=""><0.05). berbanding="" dengan="" kumpulan="" lps,="" pelepasan="" no="" menurun="" dengan="" ketara="" dalam="" kumpulan="" kepekatan="" rendah,="" sederhana="" dan="" tinggi="" ctc,="" ct2,ct3="" dan="" ct5,kumpulan="" kepekatan="" rendah="" ctz=""><0.05), sementara="" meningkat="" dengan="" ketara="" dalam="" kumpulan="" kepekatan="" tinggi="" ct1="" dan="" ct4=""><0.05). pelepasan="" il-6="" (kecuali="" kumpulan="" kepekatan="" tinggi="" ct1="" dan="" kumpulan="" kepekatan="" rendah="" ct5)dan="" tnf-α="" (kecuali="" kumpulan="" kepekatan="" sederhana="" ct1)="" menurun="" dengan="" ketara="" dalam="" kumpulan="" kepekatan="" rendah,="" sederhana="" dan="" tinggi=""><0.05). kesimpulan:="" teknologi="" penyahwarnaan="" resin="" penjerapan="" makroporous="" yang="" dioptimumkan="" adalah="" stabil="" dan="" boleh="" dilaksanakan="" dalam="" kajian="" ini.="" satu="" polysaccharide="" neutral="" dan="" 5="" polysaccharides="" berasid="" boleh="" diasingkan="" daripada="" ekstrak="" air="" c.="" tubulosa="" polysaccharides,di="" antaranya="" ct2="" polysaccharide="" mempunyai="" keupayaan="" anti-radang="" yang="" lebih="">

KATA KUNCI:Cistanche tubulosa polysaccharide; Decolorization;Separation;Immunocompetence

Cistanche tubulosaadalah batang kering, berisi dengan daun skalaCistanche tubulosa (Schenk) Wightkeluarga Lidanaceae. Kajian moden telah menunjukkan bahawa Cistanche Tubula mengandungi glikosida alkohol phenethyl, glikosida iridoid, lignans, polysaccharides, alkaloids, dan bahan aktif biologi lain, yang mempunyai sifat aphrodisiac, julap, perlindungan hati dan anti-penuaan. , Anti-keletihan meningkatkan imuniti, dan kesan nootropik [1-4], boleh digunakan untuk rawatan klinikal kekurangan buah pinggang yang, kekurangan intipati dan darah, mati pucuk dan kemandulan, kelemahan pinggang dan lutut, kelemahan otot dan tulang, usus kering, dan sembelit [5].

Klik ke produk herba Cistanche

Ekstrak airCistanche tubulosa polysaccharideadalah coklat-kuning. Percubaan sebelumnya kumpulan penyelidikan kami mendapati bahawa sebagai tambahan kepadaCistanche tubulosa polysaccharide, ekstrak air juga mengandungi komponen bukan sasaran seperti pigmen larut air dan protein. Ini menyumbang kepada pemisahan dan pemurnian polysaccharides. Penyelidikan aktiviti biologi telah menyebabkan kesukaran yang besar. Rawatan penyahwarnaan pelarut organik tradisional akan memusnahkan struktur kimia komponen sasaran dalam ekstrak mentah, dan mengurangkan aktiviti farmakologi orang itu, dan pengenalan bahan-bahan berbahaya kepada tubuh manusia [6]. Resin penjerapan makroporous adalah bahan biasa untuk penyahwarnaan polysaccharides dalam ekstrak perubatan Cina. Ia adalah bahan penjerapan polimer yang kos efektif dengan sifat fizikal dan kimia yang stabil. Ia boleh disasarkan oleh penjerapan terpilih dan prestasi penapis untuk komponen pigmen. Untuk mengeluarkan pigmen dalam ekstrak perubatan tradisional Cina, di samping itu, ia boleh dijana semula dengan penjerukan dan mencuci alkali, jadi ia digunakan secara meluas [7]. Kajian ini berhasrat untuk menggunakan resin penjerapan makroporous untuk menyahlorasi ekstrak air cistanche Tubula polysaccharide, dan menggunakan percubaan ortogonal untuk mengoptimumkan keadaan dekorlorisasi; selepas penyahwarnaan ekstrak, mengikut sifat kumpulan yang berbeza yang dibawa oleh polysaccharide, ia dirancang untuk menggunakan Kaedah kromatografi lajur pertukaran ion selanjutnya memisahkan komponen polysaccharide neutral dan berasid dalam polysaccharideCistanche tubulosa.

Kajian telah menunjukkan bahawakilang cistanchepolysaccharides mempunyai kesan imunomodulator dan imunomodulator semulajadi yang boleh mengaktifkan sistem pelengkap dan sel imun seperti limfosit T / B, makrofaj, sel pembunuh semula jadi (NK), dan juga dapat mempromosikan pelbagai pelepasan sitokin, dan mempromosikan pengeluaran antibodi, dan lain-lain [8-11]. Lipopolysaccharide (LPS) boleh mengaktifkan laluan isyarat keradangan makrofaj, mendorong nitrik oksida (NO), dan sitokin pro-radang seperti interleukin 6 (IL-6) dan tumor nekrosis factor-alpha (TNF-α). Sintesis dan pelepasan, dengan itu mencetuskan satu siri tindak balas keradangan dalam badan [12]. Kajian ini berhasrat untuk menubuhkan model keradangan makrophage tetikus RAW264.7 yang disebabkan oleh LPS, bermula dari kesan polisaccharide Cistanche Tubula terhadap percambahan makrophage, rembesan faktor keradangan, dan TIADA pengeluaran, dan penilaian awal kesannya terhadap aktiviti imun badan Ia bertujuan untuk menyediakan asas teori untuk kajian mendalam mengenai asas bahan aktif anti-radangCistanche tubulosapolysaccharide dan pembangunan sumber polysaccharidenya.

Kajian awal mendapati bahawa apabila polysaccharides di Cistanche cistanche diekstrak dengan air, lebih banyak bahan larut air akan dibubarkan bersama, yang menjejaskan kesuciancistanche cistanche polysaccharides. Oleh itu, pemisahan dan pemurnian selanjutnya boleh meletakkan asas untuk kajian asas bahan polysaccharide dan aktiviti biologi. Kaedah resin penjerapan makroporous adalah kaedah penyahwarnaan yang biasa digunakan [17-19]. Oleh kerana masih tidak jelas mengenai komposisi pigmen diCistanche tubulosa, jadi kumpulan penyelidikan menggunakan eksperimen penjerapan statik untuk menyaring resin penjerapan makroporous yang paling sesuai AB-8 dari resin penjerapan makroporous dari polariti yang berbeza. Polysaccharide of Cistanche deserticola mempunyai keupayaan pengekalan yang baik. Untuk mencapai kesan penyahwarnaan yang lebih baik, penyelidikan ini berdasarkan penyelidikan sebelumnya dan menggunakan eksperimen ortogonal untuk menentukan proses penyahwarnaan (mencuci Kadar aliran desorpsi, masa penyahwarnaan, dan kepekatan jisim sampel) telah dioptimumkan. Akibatnya, kaedah penyahwarnaan optimum untuk polysaccharide of Cistanche tubulosa adalah kadar aliran wuduk 1.2 BV / h, masa dekorasi 9 h, dan kepekatan jisim sampel 25 mg / mL. Hasil percubaan pengesahan menunjukkan bahawa kaedah penyahwarnaan boleh dilaksanakan.

Ketulenan dan jenis polysaccharides semulajadi adalah faktor penting yang mempengaruhi aktivitinya. Oleh itu, penyelidikan yang berkaitan mengenai kaedah pengasingan dan pembersihan polysaccharides masih menjadi tumpuan kerja penyelidikan polysaccharides aktif semulajadi. Kaedah yang biasa digunakan untuk pemisahan polysaccharides termasuk pemendakan, kromatografi gel, kromatografi pertukaran anion, kromatografi lajur resin makroporous, dan ultrafiltrasi [20]. Oleh kerana komposisi monosaccharides yang berbeza, polysaccharides mempunyai sifat caj yang berbeza. Mereka boleh dibahagikan kepada polysaccharides neutral dan polysaccharides asid. Polisakarida neutral adalah polimer yang terdiri daripada dua atau lebih monomer berasaskan gula yang berbeza yang tidak mengandungi asid organik. Polisakarida berasid lebih kompleks daripada polysaccharides neutral dari segi komposisi dan struktur, kecuali untuk mengandungi lebih daripada dua monomer berasaskan gula. , Juga mengandungi asid uronik mono Badan [21]. Kromatografi lajur pertukaran anion menggunakan perbezaan yang bertanggungjawab terhadap polysaccharides untuk memisahkan polysaccharides neutral daripada polysaccharides berasid [22]. Atas sebab ini, kajian ini menggunakan lajur kromatografi lajur pertukaran ion DEAE-650M untuk memisahkan polysaccharides Cistanche Tubula, dan sejumlah 1 polysaccharide neutral dan 5 polysaccharides asid dipisahkan. Macrophages adalah sel imunokompeten yang boleh mengawal imuniti dengan menelan dan membunuh mikroorganisma patogen. Kajian telah menunjukkan bahawa apabila tubuh manusia dirangsang oleh kerosakan patologi atau mekanikal, campur tangan ubat boleh mengaktifkan makrofaj untuk meningkatkan kapasiti fagositik makrofaj yang disebabkan oleh LPS, dengan itu menghalang pengeluaran NO dan satu siri sel keradangan seperti IL-6 dan REmbesan Faktor TNF-α, Dengan itu melindungi tuan rumah daripada patogen [23]. Untuk tujuan ini, kajian ini menguji kesan pelbagai cistanche tubulosa polysaccharides pada kadar percambahan sel RAW264.7, serta kesan ke atas makrofaj yang disebabkan oleh LPS untuk melepaskan NO, IL-6, dan TNF-α. Akibatnya, dalam julat kepekatan jisim 12.5, 25, dan 50 μg / mL, ia bukan sahaja menggalakkan percambahan sel RAW264.7 tetapi juga menghalang percambahan sel RAW264.7 dengan ketara.

Thepolysaccharide of Cistanche tubulosadalam sel RAW264.7 yang disebabkan oleh LPS untuk melepaskan NO, IL-6 dan TNF-α adalah CT2. Kajian yang relevan telah menunjukkan bahawa komposisi monosaccharide dan berat molekul polysaccharides akan menjejaskanimunomodulatorAktiviti. Monosaccharides seperti galaktosa, arabinose, mannose, dan glukosa berkorelasi secara positif dengan aktivitas kekebalan tubuh polysaccharides [24]. Polysaccharides dengan berat molekul yang lebih besar mungkin mengandungi lebih tinggi Pelbagai knot yang sangat berulang Struktur, boleh menyambung silang reseptor permukaan membran plasma pelbagai arah, dan secara khususmeningkatkan imunomodulatorkesan [25]. Oleh itu, komposisi monosaccharide polysaccharide CT2 berasid dalam kajian ini mungkin mengandungi monosaccharides khas atau pelbagai monosaccharides yang berkaitan secara positif dengan aktiviti imun, dan berat molekul mungkin lebih besar daripada polysaccharides neutral dan polisakarida berasid lain, tetapi penyelidikan lanjut diperlukan untuk mengesahkan. Ringkasnya, proses penyahwarnaan resin penjerapan makroporous yang dioptimumkan dalam penyelidikan ini stabil dan boleh dilaksanakan; 1 polysaccharide neutral dan 5 polysaccharides asid boleh dipisahkan dari ekstrak air Cistanche cistanche cistanche Cistanche, di antaranya aktiviti imunologi asid polysaccharide CT2 Stronger. Kajian ini boleh meletakkan asas eksperimen untuk pembangunan dan penggunaan polysaccharides Cistanche Tubula.