Kajian Mengenai Phenylethanol Glycosides dalam Cistanche Tubulosa

Abstrak: Objektif: Untuk mengesahkan glikosida phenylethanoid dalam herba ubatan Cistanche deserticola (Xinjiang) dan mewujudkan kaedah kromatografi cecair (HPLC) berprestasi tinggi untuk penentuan serentak glikosida phenylethanoid. Kaedah: Lajur kromatografi ThermoSyncronis C18 (250}mm) telah digunakan × ４．６ｍｍ,５ μ ｍ）; Acetonitril sebagai fasa mudah alih A, 0.1 peratus larutan asid fosforik sebagai fasa mudah alih B, elusi kecerunan (0-10min, 10 peratus A{{10}} peratus A; 10-20min, 15 peratus A-18 peratus A; 20-45min, 18 peratus A-27 peratus A); Kadar aliran 1.0mL/min; Suhu lajur 30 darjah ; Panjang gelombang pengesanan ialah 330nm; Isipadu suntikan 10 μＬ. Keputusan: Cistanche deserticola mengandungi enam phenylethanol glycosides, termasuk echinaside, anthocyanin A, piloside, isopiloside, 2'- acetylpiloside, dan anthocyanin B, tanpa sebarang glikosida feniletanol lain; Kaedah kromatografi cecair berprestasi tinggi yang telah ditetapkan untuk pemisahan enam glikosida feniletanol menunjukkan hasil yang baik, antara 80.438 hingga 1287.000 mg/L, 7.552 hingga 120.834 mg/L, 28.144 hingga 450.305 mg/L, 865 hingga 301.840 mg/L, dan 1.100 hingga 17.593 mg/L, masing-masing Hubungan linear adalah baik dalam julat 0.382~6.113mg/L (R2 Lebih besar daripada atau sama dengan 0.9998); RSD ketepatan, kestabilan dan kebolehulangan adalah kurang daripada 3.2 peratus; Kadar pemulihan purata adalah antara 97.19 peratus dan 102.51 peratus , dan kaedahnya tepat dan boleh dipercayai. Kesimpulan: Cistanche deserticola (Xinjiang) mengandungi enam phenylethanolamine glycosides, termasuk echinacoside, anthocyanin A, poolside, isopiloside, 2'- acetylpiloside, dan anthocyanin B. Kaedah kromatografi cecair berprestasi tinggi yang ditubuhkan adalah mudah, pantas, tepat dan boleh dihasilkan semula, dan secara serentak boleh menentukan kandungan enam phenylethanolamine glycosides dalam Cistanche deserticola, Ini boleh memberikan asas saintifik untuk penyelidikan dan kawalan kualiti Cistanche deserticola.

Kata kunci: Tiub Cistanche; Phenylethanol glikosida; ＨＰＬＣ

Produk ini adalah batang berisi kering dengan daun bersisik dari Cistanchetu hulosa (Schenk) Wish, tumbuhan keluarga Orobaceae. Ia mempunyai kesan mengencangkan buah pinggang, pati berkhasiat dan darah, dan melembapkan usus untuk melegakan sembelit. Ia digunakan untuk merawat kekurangan buah pinggang yang, kekurangan intipati dan darah, mati pucuk, dan kemandulan, pinggang dan lutut lemah, otot dan tulang lemah, dan kekeringan usus dan sembelit. Penyelidikan moden telah menunjukkan bahawa komponen kimia utama herba perubatan dalam genus Cistanche termasuk phenylethanolamine glycosides, iridoids, lignans, polisakarida, alkaloid, minyak meruap, dan komponen lain [2]. Antaranya, glikosida phenylethanoid adalah bahan aktif utama Cistanche deserticola untuk anti-penuaan, anti-keletihan, tonifikasi buah pinggang dan yang, demensia anti-nyanyuk, dan kesan farmakologi yang lain. Cistanche deserticola terutamanya mengandungi echinacea, ganglioside A, poolside, isopiloside, chrysotile, 2'- acetyl glycoside, 2' - acetyl poolside, cistanche glycoside A, cistanche glycoside C Phenylethanol glycosides seperti antosianin B [3-7]. Kajian ini menggunakan HPLC untuk mengenal pasti glikosida phenylethanolamine dalam Cistanche deserticola (Xinjiang) dan mewujudkan kaedah penentuan serentak, yang boleh digunakan untuk membezakan keaslian dan kualiti Cistanche deserticola, menyediakan asas saintifik untuk penyelidikan kualiti dan kawalan Cistanche deserticola.

Konstituen Kimia Utama Cistanche deserticola

1 Instrumen, ubat ujian, dan sampel

Kromatografi: Kromatografi cecair berprestasi tinggi siri Ultramate3000 (pam kecerunan kuaternari LPG 3400SDN, pensampel automatik WPS-3000SL, kotak suhu lajur TCC 3000RS, pengesan VWD 3100); Lajur kromatografi: Lajur ThermoSyncronisC18 (4.6mm × ２５０ｍｍ, ５ μ ｍ）; Imbangan elektronik: 1/100000 model imbangan elektronik ialah Sedoris SQP; Model imbangan elektronik 1/10000 ialah Sedoris SQP Sistem bersepadu air tulen/air ultra tulen: PURELABClassicUV, sistem air ultra tulen.

Echinoside, komponen kimia utama Cistanche deserticola

Echinoside: Lemaitian Pharmaceutical, nombor kelompok: DST191008-038, kandungan 99.9 peratus ; Guanhua glycoside A: ChemFace, nombor kelompok: CFN90669, kandungan 98 peratus ; Glikosida bunga Maorui: AWAS, nombor kelompok PS011530, kandungan: 94.6 peratus ; Isopiloside: ChemFace, nombor kelompok CFN97049, kandungan 98 peratus ; 2 '- Acetylpiloside: ChemFace, nombor kelompok: CFN92452, kandungan: 98 peratus . Guanhua glycoside B: Greep, nombor kelompok: 20120903, kandungan 98.57 peratus ; Asetonitril: Fisher tulen secara kromatografi; Asid fosforik: Fisher, tulen dari segi kromatografi; Metanol: Perubatan Cina, tulen analitik.

Herba ubatan Guanhua Cistanche dibeli daripada Xinjiang Heji Traditional Chinese Medicine Slice Co., Ltd., dengan asalnya di Xinjiang. Ia telah dikenal pasti sebagai Guanhua Cistanche oleh Xinjiang Heji Traditional Chinese Medicine Slice Co., Ltd. dan Jinpai Zhengtang Pharmaceutical Co., Ltd.

2 Kaedah dan Keputusan

2.1 Keadaan kromatografi

Menggunakan gel silika terikat octadecylsilane sebagai pengisi (ThermoSyncronisC18); Menggunakan asetonitril (A) -0.1 peratus larutan asid fosforik (B), elusi kecerunan (0-10min, 15 peratus A → 18 peratus A; 10-20min, 18 peratus A → 2 0 peratus A; 20-45min, 20 peratus A → 27 peratus A); Kadar aliran 1.0mL/min; Suhu lajur 30 darjah ; Panjang gelombang pengesanan ialah 330nm; Isipadu suntikan 10 μＬ. Kromatogram larutan ujian di bawah keadaan kromatografi ini ditunjukkan dalam Rajah 1.

Rajah 1 Analisis kromatografi bagi larutan ujian Cistanche deserticola

2.2 Penyediaan Penyelesaian

2.2.1 Penyediaan larutan ujian

Ambil sampel lebih kurang 0.1g (diayak melalui ayak ke-3), timbang dengan tepat, tambah 20mL 50 peratus metanol, timbang jisim, rendam selama 30 minit, sonicate (500W, 53kHz) selama 40 minit, biarkan ia sejuk, timbang jisim sekali lagi, gunakan 50 peratus metanol untuk menggantikan jisim yang hilang, goncang dengan baik, dan dapatkan sampel.

2.2.2 Penyediaan penyelesaian rujukan

Timbang dengan tepat sampel kawalan Echinacetin, Anthocyanin A, Piloside, Isopiloside, 2'- acetylpiloside, dan Anthocyanin B dan tambah 50 peratus metanol untuk mendapatkan kepekatan 1287.000mg/L, 120.834mg/L, 450.30. /L, 301.840mg/L, dan 17.593mg/L, masing-masing 6.113mg/L larutan rujukan campuran diperolehi. Kromatogram penyelesaian rujukan ditunjukkan dalam Rajah 2

Rajah 2  6 Kromatogram penyelesaian rujukan untuk 26 glikosida fenilethanoid

2.3 Penentuan glikosida phenylethanoid dalam Cistanche deserticola (Xinjiang)

Sediakan penyelesaian rujukan untuk phenylethanolamine glycosides seperti echinacoside, anthocyanin A, anthocyanin A, is anthocyanin, anthocyanin, 2'- acetyl anthocyanin, 2' - acetyl anthocyanin A, anthocyanin C, and anthocyanin B, dan mengumpul tiga kumpulan sampel anthocyanin dari Heji, Xinjiang (asal Xinjiang) sejak 2017, Sediakan penyelesaian ujian mengikut kaedah penyediaan "2.2.1", dan analisa larutan piawai dan larutan ujian di bawah keadaan kromatografi "2.1". Keputusan menunjukkan bahawa taburan puncak kromatografi dalam tiga kelompok sampel Cistanche deserticola adalah konsisten. Dengan menggabungkan masa pengekalan dengan lengkung penyerapan panjang gelombang penuh setiap sebatian glikosida phenylethanolamine, puncak kromatografi sampel telah dikenalpasti. Keputusan menunjukkan bahawa ketiga-tiga kelompok sampel Cistanche deserticola mempunyai enam glikosida phenylethanolamine: echinacoside, anthocyanin A, anthocyanin, is anthocyanin, 2'- acetyl anthocyanin, dan anthocyanin B, Tiada puncak kromatografi glikosida phenylethanoid yang lain. Pengenalpastian puncak kromatografi ditunjukkan dalam Rajah 3.

Konstituen Kimia Utama Cistanche deserticola

Klik di sini untuk melihat produk Cistanche

【Minta lebih lanjut】 E-mel:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.4 Kajian Metodologi

2.4.1 Pemeriksaan hubungan linear

Cairkan larutan rujukan campuran (1 #) di bawah "2.2.2" sebanyak 2 kali, 4 kali, 8 kali dan 16 kali untuk mendapatkan penyelesaian rujukan 2 # -5 #. Ambil setiap tahap penyelesaian rujukan dan analisis mengikut keadaan kromatografi di bawah "2.1". Gunakan kepekatan setiap tahap penyelesaian rujukan sebagai paksi-x dan kawasan puncak setiap tahap sebagai paksi-y untuk regresi linear. Keputusan ditunjukkan dalam Jadual 1, menunjukkan hubungan linear yang baik antara komponen dalam julat linear yang sepadan.

Jadual 1  6 Hubungan linear glikosida fenilethanoid

Rajah 3 Pengenalpastian puncak kromatografi bagi glikosida fenil etanol dalam Cistanche deserticola

2.4.2 Ujian ketepatan

Mengikut kaedah penyediaan penyelesaian ujian dalam "2.2.1", sediakan satu bahagian penyelesaian ujian dan analisis berterusan enam kali di bawah keadaan kromatografi dalam "2.1". Kandungan echinacoside, anthocyanin A, anthocyanin, anthocyanin, 2'- acetyl anthocyanin, dan anthocyanin B dalam setiap analisis diperolehi, dengan nilai RSD 0.3 peratus , 0.3 peratus dan 0.2 peratus , masing-masing, 0.1 peratus , 1.0 peratus , 3.1 peratus , menunjukkan ketepatan instrumen yang baik.

2.4.3 Ujian kestabilan

Mengikut kaedah penyediaan penyelesaian ujian "2.2.1", sediakan satu bahagian penyelesaian ujian dan analisis 6 kali di bawah keadaan kromatografi "2.1" pada 0, 2, 4.5, 1{{16 }}, 13.5 dan 2{18}} jam, masing-masing, untuk mendapatkan kandungan echinacoside, anthocyanin A, anthocyanin, ialah anthocyanin, 2'- acetyl anthocyanin dan anthocyanin B dalam setiap analisis, Nilai RSD kandungan ialah {{20}}.6 peratus , 0.4 peratus , 0.5 peratus , 0.4 peratus , 1.3 peratus dan 3.1 peratus , menunjukkan bahawa penyelesaian ujian mempunyai kestabilan yang baik dalam masa 20 jam.

2.4.4 Ujian kebolehulangan

Mengikut kaedah penyediaan penyelesaian ujian "2.2.1", sediakan 6 sampel larutan ujian dan analisanya di bawah keadaan kromatografi "2.1" untuk mendapatkan kandungan setiap analisis echinacoside, anthocyanin A, anthocyanin A, adalah antosianin, 2'- acetyl anthocyanin B, dan anthocyanin B, dengan nilai RSD 0.6 peratus , {{10}}.6 peratus, 0.6 peratus, 1.5 peratus, masing-masing 1.5 peratus menunjukkan kebolehulangan yang baik kaedah ini.

2.4.5 Ujian pemulihan pelabelan

Ambil kira-kira {{0}}.05g kandungan serbuk ubat yang diketahui, timbang dengan tepat dan timbang selari 9 bahagian. Tambahkan penyelesaian rujukan bersamaan dengan 50 peratus , 100 peratus dan 150 peratus kali ganda kandungan 6 komponen yang akan diuji dalam bahan perubatan, dan sediakan 3 bahagian secara selari. Sediakan penyelesaian ujian mengikut kaedah "2.2.1", analisisnya di bawah keadaan kromatografi "2.1", dan hitung kadar pemulihan setiap komponen, Keputusan ditunjukkan dalam Jadual 2, menunjukkan bahawa ketepatan kaedah ini adalah baik . 2.5 Sampel Penentuan Kandungan: Timbang kira-kira 0.1g kumpulan serbuk ubat yang berbeza (diayak melalui ayak No. 3), timbang dengan tepat, sediakan larutan ujian mengikut kaedah yang diterangkan dalam "2.2.1", ukur mengikut keadaan kromatografi yang diterangkan. dalam "2.1", rekodkan kawasan puncak, dan hitung kandungan enam glikosida phenylethanoid menggunakan persamaan regresi. Keputusan ditunjukkan dalam Jadual 3.

3 Perbincangan

3.1 Penentuan glikosida fenilethanoid

Tiga kelompok Cistanche deserticola (Xinjiang) yang diuji semuanya mengandungi enam glikosida phenylethanoid, iaitu, echinacoside, anthocyanin A, poolside, isopiloside, 2'- acetylpiloside, dan anthocyanin B, dan tiada satu pun daripada mereka mengandungi komponen fenil etanol yang lain. Ini menunjukkan bahawa jenis phenylethanol glycosides dalam Cistanche deserticola (Xinjiang) adalah agak konsisten, termasuk echinaside, dan piloside Kandungan glikosida dalam bunga Isomeria adalah lebih tinggi daripada 1 peratus .

Phenylethanol glycoside adalah komponen aktif utama Cistanche deserticola

3.2 Pengoptimuman keadaan pengekstrakan

Eksperimen ini menjalankan kajian faktor tunggal ke atas pelarut pengekstrakan (10 peratus ~90 peratus metanol), dan akhirnya menentukan 50 peratus metanol sebagai pelarut optimum; Penyiasatan faktor tunggal telah dijalankan pada masa pengekstrakan ultrasonik (20-60 minit), dan didapati bahawa 2'- tepi kolam asetil mencapai kemuncak dalam julat masa pengekstrakan ultrasonik 30-40 minit. Walau bagaimanapun, kandungan berkurangan selepas 60 minit ultrasound, dan komponen ini mungkin rosak akibat masa ultrasound yang berpanjangan. Dengan mengambil kira kesan pengekstrakan komponen lain, ultrasound selama 40 minit adalah masa pengekstrakan yang optimum.

3.3 Pengoptimuman keadaan kromatografi

Pengimbasan panjang gelombang penuh (190-400nm) telah dijalankan menggunakan pengesan tatasusunan diod, menunjukkan bahawa lengkung penyerapan panjang gelombang penuh enam glikosida phenylethanoid adalah konsisten, dengan puncak penyerapan pada 195nm dan 330nm. Panjang gelombang rendah terjejas teruk oleh gangguan penyerapan fasa mudah alih dan latar belakang kekotoran, jadi 330nm ialah panjang gelombang penyerapan optimum. Kesan pemisahan lajur kromatografi yang berbeza telah disiasat, dan didapati bahawa lajur kromatografi DiamonsilC18, AgilentZORBAXSB-AqC18, dan ThermoSyncronis C18 dapat memisahkan enam glikosida phenylethanoid ini daripada sampel ujian Cistanche deserticola, antaranya lajur kromatografi C18 mempunyai kesan pemisahan yang terbaik.

Jadual 2 Keputusan ujian pemulihan berduri

Jadual 3 Kandungan 6 phenylethanol glycosides dalam Cistanche deserticola ( peratus )

4. Kesimpulan

Eksperimen ini mengenal pasti glikosida phenylethanolamine dalam Cistanche deserticola (Xinjiang) dan mewujudkan kaedah penentuan serentak untuk kandungan enam glikosida phenylethanolamine dalam Cistanche deserticola, termasuk echinaside, anthocyanin A, anthocyanin, isoanthocyanin, 2 '- athocyantincetyl anthocyanin ini. kaedah adalah mudah, cepat, tepat, dan mempunyai dua peranan dalam analisis kualitatif dan kuantitatif, Ini menyediakan kaedah analisis dan asas saintifik untuk mengawal kualiti Cistanche deserticola secara berkesan.

Serbuk ekstrak cistanche

rujukan:

[1] Suruhanjaya Farmakope Kebangsaan. Farmakope Republik Rakyat China [M]. Beijing: Akhbar Sains dan Teknologi Perubatan China, 2020:140-141

[2] Wang Jia, Yang Wen, Wang Dong, et al. Kajian perbandingan empat spesies Cistanche deserticola berdasarkan spektrum ciri HPLC [J]. Jurnal Analisis Farmaseutikal, 2021, 41 (3): 384-393

[3] Ding Yanxia, ​​Wang Xiaoqin, Zhang Ying. Penentuan kandungan enam glikosida feniletanolamin utama dalam herba perubatan genus Cistanche berdasarkan kromatografi cecair berprestasi tinggi [J]. Shi Zhen Guoyi Guoyao, 2020, 31 (4): 813-816

Xiong Hui, Liu Yuqi, Qu Wenjia, et al. Spektrum ciri HPLC bagi Cistanche deserticola dan penentuan lima glikosida phenylethanolamine ［ J ］. Jurnal Analisis Farmaseutikal, 2019, 39 (2): 233-239

[5] Ma Zhiguo, Tan Yongxin. Perubahan enam glikosida phenylethanoid dalam Cistanche deserticola pada masa pengukusan yang berbeza [J]. ubat paten tradisional Cina dan penyediaan ringkas, 2011, 33 (11): 1951-1954

［ 6 ］ Ma Xueqin, Dong Yanhong, Guo Qi, et al. Penentuan Enam Phenylethanolamine Glycosides dalam Herba Cistanche deserticola dengan Satu Ujian Kaedah Penilaian Pelbagai ［ J ］. Shi Zhen Guoyi Guoyao, 2018, 29 (10): 2309-2312

[7] Liang Jiansong, Xue Cuili, Wu Menghua, et al. Penentuan enam glikosida phenylethanol dalam Cistanche deserticola dan Cistanche deserticola oleh UPLC dan penilaian kemometrik [J]. Jurnal Analisis Farmaseutikal, 2021, 41 (2): 226-235