Kajian Mengenai Pengaruh Imuniti dalam Tikus

Untuk mengetahui maklumat lanjut sila hubungidavid.wan@wecistanche.com

Dua daripada tiga puluh lelakiDBA/2NCrl(D2N)tikus digunakan sebagai regangan kawalan dalam analisis data latar belakang bagiDBA/2N-MDXtikus, dibentangkan dengan penemuan abnormal yang dicadangkan jangkitan. Kes 1: 4-tikus D2N jantan berusia seminggu menunjukkan lesi plak putih pada buah pinggang kiri (tiada gejala klinikal) dan pemeriksaan patologi buah pinggang telah dilakukan. Penyusupan sel radang, terutamanya neutrofil, diperhatikan dalam tubulus dan interstitium buah pinggang kiri, dan Staphylococcus aureus (S.aureus) dikesan dari segmen buah pinggang kiri. Oleh itu, lesi pada buah pinggang kiri ini didiagnosis sebagai suppuratiftubulointerstitialnefritis yang disebabkan oleh jangkitan S. aureus. Kes 2: Tortikolis kiri dengan penurunan berat badan telah dikesan dalam 9-tetikus D2N jantan berusia seminggu. Penilaian histologi mendedahkan keradangan eksudatif di sekitar orifis pharyngeal tiub eustachian, dan keradangan purulen kedua-dua telinga tengah dan telinga dalam kiri dengan pembentukan abses dan kelompok sebagai mikrokoloni gram positif. S. aureus dikenal pasti daripada kultur swab kedua-dua saluran telinga luar. Akibatnya, kes torticollis ini disebabkan oleh otitis media S. aureus-suppurative dan internet. S. aureus terkenal sebagai patogen oportunistik yang berpotensi untuk kerap menyebabkan penyakit nanah kepada haiwan makmal yang tidak cekap. Walau bagaimanapun, untuk pengetahuan kami, kes jangkitan S. aureus yang dibentangkan dengan torticollis dalam tetikus D2N ini tidak dilaporkan.

Klik di sini untuk mengetahui lebih lanjut tentang Cistanche

Pengasingan Staphylococcus aureus(MRSA) yang tahan methicillin muncul dalam tetikus makmal di Pusat Sains Haiwan Makmal Kolej Perubatan Pertahanan Kebangsaan pada 2018 danMRSApencilan telah diperolehi daripada tikus juga di bilik tikus yang lain selepas itu. Pada pencilan MRSA ini, penaipan molekul seperti Penaipan jujukan berbilang lokus(MLST), penaipan Staphylococcus aureus Protein A(spa), penaipan SCCmec dan penaipan koagulase telah dilakukan untuk penentuan genotipnya. Semua pencilan mendedahkan genotip yang sama (ST1, spa t1784, SCCmec jenis IV, dan koagulase jenis VII), menunjukkan bahawa pencilan adalah klon yang sama. Sebelum kemunculan MRSA pada tahun 2018, tiada pencilan dengan genotip sedemikian yang tidak diasingkan di kemudahan ini, diandaikan bahawa klon MRSA dibawa masuk ke dalam kemudahan melalui manusia atau haiwan makmal. STl1 ialah MRSA yang diperoleh komuniti pertama yang dipulihkan daripada kanak-kanak di Amerika Syarikat, walau bagaimanapun, ST1 dipulihkan daripada manusia dan haiwan di seluruh dunia pada masa ini. Di Jepun, strain ST1 dan SCCmec jenis IV telah diasingkan daripada manusia dan kucing, menunjukkan bahawa ST1 dihantar antara manusia dan haiwan. Strain MRSA dengan genotip ini tetapi juga dengan spa tl784 telah dipulihkan daripada manusia. Pada masa ini, perbezaan antara MRSA yang diperoleh hospital, MRSA yang diperoleh komuniti dan MRSA berkaitan ternakan adalah lebih samar-samar. Keputusan ini menunjukkan bahawa tikus boleh bertindak sebagai takungan MRSA.

Dalam imunoterapi kanser baru-baru ini, aktiviti molekul seperti PD-1 dihalang untuk meningkatkan aktiviti sel imun melawan kanser. Walaupun kesan terapeutik yang tinggi, terdapat kes di mana penyakit autoimun berkembang dalam imunoterapi kanser. Di sini, kami mewujudkan sistem yang boleh merendahkan PD-1 mengikut masa tertentu dalam sel kultur dan tikus menggunakanSistem degron SMASh. PD-1-Protein gabungan SMASh dalam sel Jurkat dan CD3 plus splenocytes dikurangkan sebanyak 1 hari selepas pentadbiran Asunaprevir(ASV) atau Grazoprevir(GRV) yang merupakan perencat protease NS3/4A. Pertumbuhan sel adenokarsinoma MC-38 yang diinokulasi dalam PD-1-tikus cherry-SMASh knockin(KI) dengan ASV telah ditindas berbanding tikus KI jenis liar(WT) dan tidak dirawat. Selain itu, tikus WT yang dipindahkan dengan sel sumsum tulang KI selepas disinari dengan sinaran maut boleh menolak sel MC-38 dengan GRV. Tikus KI kelihatan sihat dan tidak menunjukkan tanda-tanda penyakit autoimun. Kami mencadangkan bahawa penggunaan sistem degron dalam organisma hidup dijangka memajukan bukan sahaja pelbagai kajian biologi tetapi rawatan penyakit.

Progesteron (P4) dirembeskan daripada plasenta untuk mengekalkan kehamilan dan berfungsi sebagai pengawal selia imun. Glukokortikoid adalah satu lagikawal selia imunsteroid untuk mengawal keradangan. Dalam kajian ini, sel mononuklear darah periferal manusia (PBMC) telah dipindahkan ke dalam tikus NOG untuk mendorong penyakit rasuah lawan hos (GVHD) dan digunakan untuk perbandingan antara kesan P4 dan kortisol (COR). PBMC telah dirangsang dengan kehadiran pelbagai kepekatan P4 atau COR dan sel-sel dianalisis oleh sitometri aliran (FCM). Aliquots daripadaPBMCtelah dipindahkan ke dalam tikus NOG, dan P4 atau COR disuntik ke dalam tikus dua kali seminggu. Selepas 28 hari, analisis FCM dan imunohistokimia dilakukan. Akibatnya, kepekatan P4 yang tinggi menghalang pengaktifan sel T secara in vitro, manakala perencatan tidak berterusan selepas penyingkiran. Penindasan pengaktifan sel T adalah kurang dalam rawatan COR berbanding P4, dan keletihan sel T lebih menonjol. P4-tikus yang disuntik membawa lebih banyak splenosit, terutamanya sel T CD8, berbanding tikus kawalan. Walau bagaimanapun, ekspresi CD25 yang lebih rendah, kurang penyusupan sel T manusia ke dalam paru-paru dan hati, dan lebih sedikitGVHDgejala diperhatikan. Sebaliknya, bilangan splenosit, terutamanya sel T, dalam tikus yang disuntik COR adalah jauh lebih rendah, dan sel yang diaktifkan / habis adalah banyak. Keputusan ini menunjukkan bahawa P4 lebih suka mengekalkan sel T berbanding COR in vitro.

Helicobacter hepaticus dan Helicobacter bills dikenali sebagai patogen yang menyebabkan hepatitis dan kolitis pada tikus. Kewujudan beberapa kes positif masih disahkan setiap tahun di kemudahan haiwan eksperimen di Jepun. Sebaik-baiknya menggunakan kandungan cecal atau najis segar sebagai sampel untuk ujian PCR H. hepaticus, dan H. bilis.

Baru-baru ini, reagen pengangkutan dan penyimpanan DNA dan RNA telah dihasilkan oleh pelbagai pengeluar. Adalah dijangka bahawa reagen ini akan menjadi masalah dalam mengangkut sampel yang digunakan untuk ujian PCR akan dibersihkan. Oleh itu, dalam kajian ini, kegunaan reagen penyimpanan asid nukleik telah diperiksa dengan melakukan ujian PCR Helicobacter menggunakan kandungan sekum yang diawet menggunakan reagen pengawetan asid nukleik. Hasilnya, sampel yang disimpan selama 7 hari menggunakan larutan pengawetan boleh dikesan Helicobacter pada tahap yang sama dengan sampel segar. Daripada perkara di atas, adalah dicadangkan bahawa dalam ujian PCR Helicobacter, Walaupun pengangkutan mengambil masa beberapa hari, adalah mungkin untuk menjalankan ujian dengan ketepatan yang tinggi dengan mengangkut sampel yang direndam dalam reagen penyimpanan asid nukleik dengan penerbangan sejuk.

Kami sebelum ini telah membangunkan strain mutan E.coli dengan pematuhan yang dipertingkatkan dengan ketara pada permukaan pepejal in vitro dengan mengubah suai gen yang bertindak balas terhadap kebuluran nutrien. Untuk menilai interaksi antara strain E. coli (AEE) yang dipertingkatkan lekatan ini dan persekitaran usus in vivo, kami menilai keupayaan penjajahan mereka ke saluran usus dengan menyuntik tikus.

Sebelum percubaan penilaian, kami mengubah AEE dengan plasmid yang mengekspresikan luciferase untuk visualisasi in vivo. seperti yang disuntik secara lisan ke dalam tikus yang berpuasa dan mengumpul najis setiap beberapa hari. Bilangan hidupAEEdianggarkan dengan mengukur CFU daripada najis yang dikumpul.

Akibatnya, berbanding dengan ketegangan kawalan, AEE lebih banyak dalam najis selama lebih daripada satu minggu, yang menunjukkan kolonisasi yang dipertingkatkan dalam saluran usus. Dengan memerhatikan penyetempatan luciferase luminescence oleh pengimejan bukan invasif menggunakan IVIS, didapati juga bahawa AEEs cenderung untuk menjajah di cecum dan kolon.

[Objektif] Pada masa ini, [Pasteurella]pneumotropikatelah diklasifikasikan semula sebagai genus baru Rodentibacter. Daripada jumlah ini, R.pneumotropicus dan R. Healy adalah sasaran utama pemantauan mikrobiologi dalam tikus. Kami telah mengasingkan beberapa Rodentibacter sp. yang tidak dapat dikenal pasti sebagai spesies daripada tikus. Dalam kajian ini, kami meneroka ciri-ciri Rodentibacter sp. mengasingkan, memfokuskan pada virulensi bakteria. [Kaedah] Rodentibacter sp. yang diasingkan daripada trakea tikus digunakan untuk kajian ini. Penjujukan genom draf telah dilakukan pada penjujukan generasi akan datang, dan kemudian, gen yang berkaitan dengan virulensi telah diramalkan. Dalam eksperimen haiwan, tikus Rag2 digunakan untuk Rodentibacter sp. jangkitan.|Keputusan| Dengan draf penjujukan genom, gen pengekodan toksin RTX yang unik telah dikenal pasti dalam Rodentibacter sp. Urutan protein toksin RTX adalah lebih homolog dengan yang dihasilkan oleh Enterobacteriaceae berbanding dengan Pasteurellaceae. Dalam eksperimen haiwan, hampir semua tikus Rag 2 yang dijangkiti telah disahkan radang paru-paru atau septikemia yang membawa maut. Walaupun pengasingan tidak dapat dikenal pasti sebagai R. pneumotropicus dan R. heylii, spesies yang berkait rapat ini boleh membawa maut kepada haiwan yang lemah imun dengan kehadiran faktor virulensi seperti toksin RTX.

Dalam Program Pembangunan Teknologi Asas NBRP (2018-2019), kami menyusun genom bakteria patogen oportunistik murine dan melakukanRNAseqprotozoa dalam tikus, untuk membangunkan ujian PCR untuk organisma ini. Kami menggunakan keputusan ini untuk menganalisis Rodentibacter spp. dan protozoa dalam tikus dengan kerjasama Universiti Kyoto (NBRP Rat). Di sini, kami melaporkan keputusan ujian dalam sampel tikus. [Kaedah] Urutan gen 16S rRNA kira-kira 1.5 kbp dibaca oleh PCR untuk enam pencilan tikus Rodentibacter spp., dan draf jujukan genom satu pencil(#25) ditentukan menggunakan Illumina HiSeq 2500. PCR kandungan cecal tikus adalah dilakukan berdasarkan keputusan RNAseq protozoa tikus. [Keputusan] Urutan gen 16S rRNA bagi semua pencilan adalah sama, dan ia dikenal pasti sebagai Rodentibacter Ratti oleh analisis OTU. Resequencing isolat #25 juga mendedahkan strain ini ialah R. Ratti.PCR untuk protozoa murine memberi keputusan positif untuk amoeba tikus. Tiada keputusan positif diperoleh untuk TrichomonasPCRpada spesimen tikus. [Perbincangan] Pengasingan tikus Rodentibacter spp. yang diperiksa dalam laporan ini ialah kesemuanya R. Ratti. Adalah penting untuk mengetahui kehadiran R. Ratti semasa melakukan ujian Rodentibacter dalam tikus. Beberapa sampel najis tikus menunjukkan positif PCR amoeba tikus. Ini adalah langkah pertama dalam pembangunan PCR untuk pengesanan protozoa dalam tikus.

Organisma Rodentibacter 'Pasteurella pneumotropica' ialah bakteria patogen oportunistik yang menyebabkan penyakit pernafasan pada tikus dan tikus. Mereka dahulunya dikelaskan dalam genus Pasteurella, dan beberapa strain telah dicadangkan sementara sebagai biotaip. Pada tahun 2017, mereka secara kolektif disusun semula ke dalam genus Rodentibacter. Strain MaM dan MaR telah diasingkan daripada tikus dan tikus, masing-masing, sekitar tahun 1980-an. Dalam kajian ini, kami menentukan jujukan genom kedua-dua strain dan membandingkannya dengan genus Rodentibacter, bahan dan Kaedah. Strain MaM dan MaR diperoleh daripada Institut Penyakit Berjangkit Kebangsaan (NIAID)

(Manabu Saito --> Yasushi Ami -->Fumio Ike). Kedua-dua strain ditanam melalui kultur cecair untuk mengekstrak DNA genom, dan jujukan genom ditentukan menggunakan Illumina Hiseq 2500 dan Sekuel PacBio. [Keputusan] Berdasarkan jujukan gen rRNA 16S, strain MaM dikenal pasti sebagai R.pneumotropicus dan strain MaR. sebagai R. Ratti. Tambahan pula, jujukan genom lengkap (2,213,961 bp) strain MaR telah ditentukan (bilangan operon rRNA ialah 6 dan bilangan gen dianggarkan 2,063). [Perbincangan Strain MaM dan MaR telah digunakan sebagai piawai untuk mengenal pasti'Pasteurella pneumotropica'di Jepun. Daripada analisis ini, kami menentukan spesies kedua-dua strain seperti berikut: strain MaM ialah R.pneumotropicus dan strain MaR ialah R.ratti. Hebatnya, keputusan ini menunjukkan R. Ratti boleh diasingkan daripada tikus di Jepun.

Clostridium pili for me(CP) mudah dijangkiti dalam pelbagai haiwan makmal termasuk tikus dan tikus dan menunjukkan jangkitan tanpa gejala kecuali pada haiwan yang lemah imun. Ia dianggap sebagai diagnosis pembezaan utama untuk mengekalkan kemudahan haiwan dan terkenal untuk mempengaruhi data eksperimen daripada kajian haiwan. Serodiagnosis (ELISA, IFA) dan PCR biasanya digunakan untuk diagnosis CP kerana pengasingan dalam medium nutrien buatan sukar untuk CP. Walau bagaimanapun, kewujudan antibodi tidak spesifik yang menunjukkan kereaktifan silang dengan CP menggunakan serodiagnosis dilaporkan dan sering diiktiraf dalam kes yang sama di kemudahan kami. Selain itu, kaedah PCR mempunyai had sebagai kaedah diagnostik yang boleh dipercayai dengan pemantauan berkala, kerana CP tidak dapat dikesan dalam najis selepas peningkatan titer antibodi. Baru-baru ini, kami mengkaji pendekatan yang berbeza, memelihara najis daripada haiwan setiap bulan. Kami menggunakan ujian PCR untuk CP yang tidak terjejas oleh pengaruh antibodi kerana diagnostik yang lebih dipercayai menggunakan najis terus dipelihara. Dalam laporan ini, kami menunjukkan contoh terkini. (antibodi tidak spesifik) untuk membawa kepada pemeriksaan aliran yang berkembang di syarikat kami.