Kajian Mengenai Kesan Estrogenik Echinacoside Dan Acteoside Daripada Herba Cistanche
Mar 08, 2022
Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com
WANG Lin-lin, LI Wei, SONG Xin-bo*, YU He-Shui, MIAO Lin, ZHANG Li-Juan, TAO Rui
Universiti Perubatan Tradisional Cina Tianjin, Tianjin 300193, China
Abstrak: Dalam kajian ini, kesan estrogenik daripadaechinacosidedanacteosideHerba Cistanche telah disiasat. Undang-undang plasmid wartawan pemadam lucif digunakan untuk mengesan kesan estrogenikechinacosidedanacteoside. Eksperimen mengikat persaingan reseptor estrogen digunakan untuk mengesan kesan persaingannya dengan estrogen. Keputusan menunjukkan bahawaechinacosidedanacteosideboleh meningkatkan aktiviti ERE. Bilaechinacosideatauacteosideditambah dalam tindakan estrogen, aktiviti gen wartawan yang didorong oleh ERE boleh dirangsang sebagai agonis estrogen. Oleh itu, disimpulkan bahawaechinacosidedanacteosidemempunyai aktiviti fitoestrogen melalui merangsang aktiviti gen reporter peningkatan ERE.Echinacosidedanacteosideadalah SERM yang berpotensi.
Kata kunci: echinacoside; acteoside; fitoestrogen ;
Herba Cistanche ialah tumbuhan daripada genus Cistanche (Oroban-chaceae) daripada genus Cistanche (Cistanche). Ia adalah batang berdaging kering dengan daun bersisik. Ia mempunyai fungsi yang menyuburkan buah pinggang, menyuburkan pati dan darah, dan melembabkan usus. Ia digunakan untuk kekurangan buah pinggang yang, kekurangan intipati dan darah, mati pucuk dan kemandulan, sakit pinggang dan lutut, kelemahan otot dan tulang, usus kering, dan sembelit ¨. 2J. Pada masa ini, komponen kimia utama yang diasingkan dan dikenal pasti daripada Cistanche ialah fenil glikosida, iridoid, lignan, flavonoid, polisakarida, oligosakarida, galaktitol, komponen meruap, alkaloid, dan lain-lain. Antaranya, glikosida phenethyl alkohol adalah bahan aktif utama dalam cistanche Cistanche, dan juga merupakan petunjuk pengesanan utama untuk kawalan kualiti Cistanche, dan diwakili olehechinacoside dan verbascoside. Kajian farmakologi moden telah menunjukkan bahawa Cistanche mempunyai fungsi pengawalan imun, anti-pengoksidaan, anti-penuaan, anti-keletihan, perlindungan saraf, dan perlindungan hati. Beberapa kajian farmakologi juga menunjukkan bahawa Cistanche boleh menggalakkan pertumbuhan semula tulang-l"J, menghalang pembentukan osteoporosis dan fitoestrogen dalam wanita menopause"]. Dalam eksperimen ini, kami memilih echinacoside dan verbascoside, yang merupakan petunjuk kawalan kualiti utama dalam Cistanche, dan menguji estrogenikkesan echinacosidedan verbascoside oleh kaedah plasmid wartawan luciferase dan eksperimen mengikat kompetitif reseptor estrogen. Terokai mekanisme estrogen echinacoside dan verbascoside
1 Bahan dan kaedah
1.1 Bahan sel Hela (sel kanser serviks manusia), dibeli daripada Institut Biologi Sel Shanghai;echinacosidetelah diasingkan dan disucikan daripada Cistanche deserticola oleh makmal kami dan telah diuji oleh HPLC-ELSD. Theechinacosidebahan rujukan (Institut Kebangsaan China untuk Kawalan Produk Farmaseutikal dan Biologi, nombor kelompok: 111670) digunakan sebagai kawalan, dan ketulenan yang diukur ialah 95.1 peratus . Theacteosidetelah diasingkan dan disucikan dari padang pasir Cistanche oleh makmal kami dan diperolehi oleh HPLC. Ujian ELSD, dengan bahan rujukan Verbascum glikosida (Institut China untuk Kawalan Produk Farmaseutikal dan Biologi, nombor kelompok: 111530) sebagai kawalan, ketulenan yang diukur ialah 96.4 peratus; plasmid ERa, ER[3, ERE-luc, Renila (diekstrak oleh makmal kami) ; Estradiol (E), Syarikat Sigma; Fetal Bovine Serum (FBS), Syarikat PAA; Serum Lembu Janin Terawat Karbon Teraktif (CS-FBS), Syarikat PAA; Phenol Red-Free DMEM, Syarikat Sigma; Dimetil Sulfoksida (DMSO) ), Syarikat Amresco; Sederhana LB, Syarikat Bioteknologi Shanghai Shenggong; Penampan PassiveLysis5X, Syarikat Promega; Lipofectamine2000, Syarikat Promega; Kit pengekstrakan plasmid, Syarikat TIANGEN; Kit pengesan gen wartawan Luciferase ialah produk Syarikat Promega.
1.2 Kultur sel Sel Hela telah dikultur dalam medium kultur DMEM yang mengandungi 10 peratus serum lembu janin. Sekurang-kurangnya satu generasi sebelum eksperimen digantikan dengan medium kultur DMEM yang mengandungi 1 peratus serum lembu janin yang dirawat dengan arang diaktifkan.
1.3 Transfeksi dan penentuan aktiviti luciferase Sel Hella disemai ke dalam 24-plat perigi pada ketumpatan 70 peratus hingga 80 peratus . Selepas sel melekat pada dinding dan ketumpatan sel mencapai 90 peratus, ikut arahan dalam lipo. Arahan reagen transfeksi Feetamine2000 transfeksi ERa, plasmid ekspresi ER[3 dan ERE, plasmid wartawan Renila, tukar medium selepas 8 jam dan tambah ubat ujian kepekatan yang berbeza. Selepas mengeram semalaman, gunakan pembaca plat pelbagai fungsi untuk mengesan tindak balas estrogen. Komponen aktiviti luciferase ERE, kira pengaruh relatif ubat terhadap aktiviti luciferase.
1.4 Pemprosesan data dan analisis statistik
Menggunakan perisian statistik SPSS18.0, data dinyatakan sebagai min±sisihan piawai (x±S). Analisis varians sehala (ANOVA) dan ujian-t perbandingan berganda Dunnett digunakan untuk menganalisis data antara kumpulan. P<0.05 was="" considered="" there="" is="" statistical="">
Acteoside
2 Keputusan eksperimen
2.1 Kesan verbascoside ke atas aktiviti unsur tindak balas estrogen ERE luciferase Keputusan menunjukkan bahawa berbanding dengan kumpulan kawalan apabila dimediasi oleh ERa dan ER[3, E (10nmol) boleh mengimbangi dengan ketara elemen tindak balas estrogen ERE luciferase Aktiviti verbascoside boleh mengawal selia aktiviti unsur tindak balas estrogen ERE luciferase pada 10, 100, 1, 10, dan 50 txmol. Apabila kepekatan mencapai 50 I~mol, regulasi atas aktiviti luciferase ERE adalah bersamaan dengan estradiol. Ia bergantung kepada dos, tetapi selektiviti untuk reseptor estrogen ERa dan EP~ tidak jelas (Rajah 2).
2 Kesan kepekatan yang berbeza bagiacteosidepada aktiviti luciferase ERE
Nota: Berbanding dengan kumpulan kawalan, P
2.2 Kesan daripadaechinacosidepada elemen tindak balas estrogen aktiviti luciferase ERE Keputusan menunjukkan bahawa jika dibandingkan dengan kumpulan kawalan apabila dimediasi oleh ERa dan ER[3, E(10nmol) boleh mengawal selia elemen tindak balas estrogen dengan ketara ERE pendarfluor Echinacoside boleh mengawal selia tindak balas estrogen dengan ketara. elemen ERE luciferase aktiviti pada 10, 100, 1, 10, dan 50 Ixmol. Apabila kepekatan mencapai 50 Ixmol, kawal selia aktiviti luciferase ERE adalah lebih rendah sedikit daripada estrogen. Diol juga bergantung kepada meter tetapi mempunyai sedikit perbezaan dalam selektiviti untuk reseptor estrogen ERa dan E (Rajah 3).
2.3 Kesan pengikatan kompetitif Verbascum glikosida dan estradiol pada reseptor estrogen Keputusan menunjukkan bahawa Verbascum glikosida boleh mengikat secara kompetitif kepada reseptor estrogen dengan estradiol dan menentang aktiviti estradiol pada unsur tindak balas estrogen ERE luciferase. Kesan up-regulation. Berbanding dengan kumpulan E (10nmo1), verbascosides boleh menurunkan mengawal aktiviti luciferase estradiol pada unsur tindak balas estrogen ERE kepada darjah yang berbeza-beza pada 1, 10, dan 50p, mol, dan verbascosides menunjukkan pergantungan dos. , Apabila kepekatan mencapai 50 Ixmol, kesan antagonis pada estradiol adalah yang paling jelas (Rajah 4).
2.4 Kesan mengikat persaingan daripadaechinacosidedan estradiol pada reseptor estrogen. Keputusan menunjukkan bahawaechinacosidejuga boleh mengikat secara kompetitif kepada reseptor estrogen dengan estradiol dan menentang tindak balas estradiol terhadap estrogen. Kawal selia aktiviti ERE luciferase. Berbanding dengan kumpulan E (10nmol), verbascoside boleh menurunkan aktiviti luciferase estradiol pada unsur tindak balas estrogen ERE kepada darjah yang berbeza-beza pada 1, 10, dan 50 mol, danechinacosidemempamerkan dos yang malas. Seks, apabila kepekatan mencapai 50lxmol, kesan antagonis pada estradiol adalah paling jelas (Rajah 5)
3 Perbincangan
Percubaan ini menunjukkan buat kali pertama bahawa data yang jelas menunjukkannyaechinacosidedan verbascoside, bahan aktif utama dalam Cistanche, boleh mengikat reseptor estrogen ERa dan EP~, mengawal selia aktiviti luciferase ERE dan memberikan kesan estrogenik, menunjukkan aktiviti SERM. Analisis data percubaan di atas menunjukkan bahawa dalam sistem ERa, penyelarasan verbascoside pada unsur tindak balas estrogen aktiviti luciferase ERE pada 50 lxmol adalah bersamaan dengan 0.977 kali ganda E2 (1 0nmol), yang bersamaan dengan sistem ERI3. 0.970 kali; begitu juga, dalam sistem ERa, kesan upregulation echinacoside pada elemen tindak balas estrogen aktiviti luciferase ERE pada 50 lxmol adalah bersamaan dengan E (10nmol), yang bersamaan dengan 0 dalam sistem ERI3. 937 kali, peningkatan regulasi verbascoside pada aktiviti unsur tindak balas estrogen ERE luciferase adalah lebih tinggi sedikit daripadaechinacoside, dan selektiviti untuk reseptor estrogen ERa dan ER[3 tidak jelas, manakala echinacea Glycosides mempunyai perbezaan selektiviti yang lemah untuk reseptor estrogen ERa dan ERI3. Perbezaan ini mungkin berkaitan dengan kumpulan berbeza yang disambungkan kepada kedudukan R4 verbascoside dan echinacoside. Estrogen terutamanya bertindak melalui reseptor estrogen. Terdapat dua subtipe utama reseptor estrogen, ERa dan ER [3, estrogen dan bahan bertindak estrogen bergabung dengan reseptor estrogen untuk membentuk dimer, dan kemudian dimerize Badan bergabung dengan unsur tindak balas estrogen ERE, dan kemudian memberikan kesan estrogen. [2l,. Fitoestrogen dan estrogen mempunyai struktur dan fungsi yang serupa. Kajian telah menunjukkan bahawa fitoestrogen boleh mengawal metabolisme tulang dan memainkan peranan yang sangat penting dalam mengekalkan keseimbangan penyerapan tulang dan pembentukan tulang. Ia berkesan untuk osteoporosis pada pesakit dengan hipofungsi nyanyuk. Mempunyai kesan pencegahan dan rawatan klinikal tertentu¨. Oleh itu, adalah spekulasi bahawa kesan Cistanche dalam menggalakkan pertumbuhan semula tulang dan menghalang pembentukan osteoporosis pada wanita menopause adalah melalui fitoestrogennya. Eksperimen ini juga menunjukkan bahawa echinacoside dan verbascoside boleh mengikat secara kompetitif kepada reseptor estrogen dengan estradiol dan menentang regulasi naik estradiol pada aktiviti ERE luciferase. Mekanisme tindakan ini dikenali sebagai resveratrol. Kesan fitoestrogen adalah serupa dengan J. Diterangkan lagi bahawa echinacoside dan verbascoside memberikan kesan estrogenik dengan mengikat reseptor estrogen ERa dan ER3. Kajian di atas mengenai aktiviti fitoestrogen Cistanche dan mekanisme kesan estrogennya menunjukkan bahawa Cistanche boleh melambatkan pembentukan osteoporosis selepas menopaus pada wanita dengan meningkatkan tahap estrogen dalam badan, atau merawat rawatan yang disebabkan oleh penurunan tahap estrogen dalam badan. Osteoporosis mengemukakan kemungkinan dan menyediakan asas teori untuk meluaskan skop penggunaan perubatan klinikal Cistanche.
Rujukan
1 Suruhanjaya Farmakope Cina（(国家药典委员）). Farmakope Republik Rakyat China. Beijing: Chemical Industry Press,2010. Jld 1:126.
2 Li SZ（李时珍）.Kompendium Materia Medica. Beijing: People * s Medical Publishing House （人民卫生出版社）, 1977.727.
3 Zeng LQ（曾群力）,Zheng YF（郑一凡）,Lv ZL（吕志良）. Aktiviti imunobiologi dan mekanisme tindakan polisakarida cistanches. J Zhejiang Univ,Med Ed （浙江 大学学报,医学版）,2002,31:284-287.
