Penuaan Kulit Merupakan Fenomena Biologi yang Kompleks Akibat Penurunan Fisiologi

Sila hubungioscar.xiao@wecistanche.comuntuk maklumat lanjut

Abstrak:Matlamat kajian ini adalah untuk menguji kesan perencatan ekstrak buah-buahan daripada Washingtonia filifera terhadap enzim berkaitan penuaan kulit. Ekstrak pulpa tidak memberikan perencatan enzim yang ketara manakala ekstrak biji daripada W.filifera mempamerkan aktiviti anti-elastase, anti-kolagenase dan anti-tirosinase. Tyrosinase direncat sedikit manakala kesan yang lebih kuat diperhatikan berkenaan dengan perencatan elastase dan kolagenase. Ekstrak alkohol memberikan hasil yang lebih baik daripada ekstrak akueus. Antaranya, ekstrak metanol menunjukkan aktiviti perencatan enzim yang menonjol ialah nilai IC5o untuk elastase dan kolagenase yang setanding dan lebih baik daripada sebatian rujukan. Mod perencatan ekstrak paling aktif telah disiasat oleh analisis plot Lineweaver-Burk. Ekstrak benih daripada W.filifera juga telah disiasat untuk kesan perlindungan foto mereka oleh persamaan Mansur dan aktiviti antioksidan ekstrak W.filifera telah dinilai dalam sel-sel tekanan oksidatif. Untuk menilai keselamatan ekstrak, kesan ke atas daya maju sel sel keratinosit manusia telah dianalisis.cistanche empayar yang hilangEkstrak metanol mempersembahkan kesan perlindungan foto terbaik dan memberikan aktiviti antioksidan dalam sistem selular tanpa kesan sitotoksik. Keputusan keseluruhan menunjukkan bahawa ekstrak W.filifera merupakan sumber sebatian bioaktif yang menjanjikan yang boleh digunakan dalam penyediaan kosmetik dan farmaseutikal.

Kata kunci:perencatan enzim; kolagenase; elastase; tyrosinase; ekstrak tumbuhan; biji benih; penuaan kulit; Washingtonia filifera

Sila klik di sini untuk mengetahui lebih lanjut

1. Pengenalan

Penuaan kulit adalah fenomena biologi yang kompleks disebabkan oleh penurunan fisiologi dalam fungsi kulit dan beberapa faktor persekitaran ekstrinsik, seperti sinaran UV, bahan kimia, dan spesies oksigen reaktif (ROS). Kulit ialah bahagian badan yang terbesar dan paling terdedah dan pendedahan kepada sinaran UV suria mewakili salah satu faktor pencetus tekanan luaran yang paling ketara: penuaan kulit akibat foto yang dikaitkan dengan tekanan oksidatif. ROS yang disebabkan oleh penyinaran UV boleh memulakan laluan molekul kompleks, termasuk pengaktifan enzim yang merendahkan protein matriks ekstraselular (ECM) dalam dermis, mengubah integriti kulit [1]. Salah satu ciri utama penuaan kulit sememangnya kehilangan struktur ECM, yang terdiri daripada banyak protein, termasuk kolagen dan elastin, yang semuanya memainkan peranan utama dalam mengekalkan keanjalan kulit [2]. Degradasi ECM terutamanya disebabkan oleh peningkatan aktiviti enzim proteolitik, seperti kolagenase dan elastase. Perencatan aktiviti enzimatik ini oleh sebatian tumbuhan semula jadi mungkin merupakan pendekatan yang menjanjikan untuk mencegah penuaan kulit [3]. Kolagenase (EC 3.4.24.3) tergolong dalam keluarga metalloproteinase matriks dan ia boleh merendahkan kawasan triple-heliks kolagen di bawah keadaan fisiologi.pecahan flavonoid tulen mikronisasi 1000 mg kegunaanKolagen ialah komponen berserabut ECM dan protein struktur utama dalam kulit manusia, memberikan sokongan struktur untuk tulang, tendon, ligamen dan saluran darah. Elastase (EC3.4.21.36) ialah enzim proteolitik yang terlibat dalam degradasi fisiologi elastin, protein ECM yang bertanggungjawab untuk keanjalan kulit. Peningkatan aktiviti elastase telah ditemui dalam beberapa penyakit, contohnya, psoriasis, dermatitis, proses keradangan, dan penuaan kulit pramatang, yang berkait rapat dengan pembentukan kedutan[4].

Cistanche boleh anti-penuaan

Selain itu, salah satu perubahan besar yang berkaitan dengan kedutan pada orang tua adalah penampilan bintik-bintik hiperpigmentasi, juga dikenali sebagai lentigo nyanyuk atau bintik-bintik penuaan. Mereka secara langsung dikaitkan dengan pigmentasi yang tidak sekata disebabkan oleh aktiviti enzim lain yang berkaitan dengan penuaan bernama tyrosinase. Tyrosinase (EC 1.14.18.1) ialah enzim pengehad kadar dalam metabolisme melanin. Ia memangkinkan hidroksilasi L-tirosin kepada 3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA), diikuti dengan pengoksidaan L-DOPA kepada dopaquinon. Pempolimeran oksidatif derivatif dopaquinone menimbulkan melanin [5]. Sintesis pigmen melanin adalah proses fisiologi yang memainkan peranan penting dalam mencegah kerosakan kulit akibat UV dengan menyerap cahaya matahari UV. Walaupun kelebihannya, pengeluaran berlebihan atau pengumpulan melanin yang tidak normal menyebabkan masalah kulit seperti bintik-bintik penuaan yang biasa. Memandangkan kulit adalah organ badan yang paling ketara, penampilan pramatang kedutan dan hiperpigmentasi juga boleh menyebabkan tekanan emosi bagi sesetengah orang.

Oleh itu, perencat semua enzim yang diterangkan di atas mungkin mewakili bahan yang semakin penting dalam kosmetik dan ubat-ubatan untuk mencegah penuaan kulit [6]. Produk tumbuhan semulajadi boleh menjadi sumber sebatian bioaktif yang menjanjikan. Kepentingan khusus untuk aplikasi anti-penuaan, ekstrak mempunyai pelbagai fungsi yang bermanfaat, seperti perencatan enzim yang berkaitan dengan penuaan dan kapasiti menghilangkan radikal bebas.

Dalam kerja kami sebelum ini, kami menerangkan kapasiti antioksidan dan beberapa aktiviti biologi ekstrak biji W.filifera [7]. Washington filifera (Lindl.) H. Wendl., biasanya dikenali sebagai palma kipas California atau palma kipas padang pasir, ialah pokok palma malar hijau yang berasal dari California Selatan, Arizona, Mexico, dan zon padang pasir.oteflavonoidPalma ini, dengan ketinggian 15-20 m, tidak mengeluarkan kurma tetapi mempunyai buah-buahan yang manis dan lazat yang boleh dimakan. Beri ini mempunyai biji coklat yang sangat besar yang dikelilingi oleh pulpa nipis (Rajah 1). W.filifera telah dikaji mengenai, sebagai contoh, penggunaannya sebagai sumber berpotensi gentian selulosa baru [8] dan nilai pemakanan buahnya [9]; komposisi fenolik dan aktiviti antioksidan bahagian udara juga telah dilaporkan [10]. Dalam kajian terdahulu kami, kami melaporkan aktiviti antioksidan yang baik W.puritans vitamin cekstrak biji filifera, yang kelihatan sebagai sumber molekul fenolik dan flavonoid[7]. Ekstrak yang sama memberikan kesan perencatan pada enzim xanthine oxidase dan kolinesterase, yang masing-masing mewakili enzim utama dalam rawatan gout dan penyakit Alzheimer.

Matlamat kerja ini adalah untuk memanjangkan pencirian tumbuhan ini dan menilai potensi penggunaan ekstraknya sebagai agen anti-penuaan. Oleh itu, ekstrak pulpa dan biji benih telah disiasat untuk aktiviti perencatannya terhadap aktiviti elastase, kolagenase dan tyrosinase, kerana ia mewakili enzim sasaran utama untuk pencegahan dan rawatan penuaan foto kulit; Selain itu, ekstrak W.filifera yang menunjukkan aktiviti yang menjanjikan terbaik telah dianalisis untuk sitotoksisiti in vitro, aktiviti antioksidan selular dan kesan perlindungan foto.

2.Keputusan dan Perbincangan

2.1. Perencatan Enzim

Pulpa W. filifera dan ekstrak biji benih diuji pertama kali pada kepekatan 50 ug/mL.sistancheSemua ekstrak pulpa tidak memberikan perencatan enzim yang ketara (data tidak ditunjukkan). Aktiviti perencatan enzim ekstrak biji dikira dan dinyatakan sebagai kepekatan perencatan separuh maksimum (juga). Jadual 1 menunjukkan nilai ICso yang diperoleh daripada ekstrak benih berbanding dengan perencat piawai, untuk menilai kekuatan perencatan sampel. Seperti yang boleh diperhatikan, semua ekstrak lemah menghalang aktiviti tyrosinase, dengan nilai ICso lebih tinggi daripada piawaian, asid kojik. Perencatan yang lebih baik diperhatikan terhadap aktiviti elastase dan kolagenase, dan ekstrak etanol (EEG dan EES) dan metanol (MEG dan MES) memberikan kesan terbaik. Aktiviti perencatan sampel ini terhadap elastase adalah serupa; nilai ICso berjulat dari 10.75 hingga 19.75 ug/mL dan setanding dengan kawalan positif （asid oleanolik; ICso=11.75 ug/mL）.

Sebaliknya, aktiviti kolagenase sangat dihalang oleh ekstrak, yang menunjukkan potensi yang lebih tinggi daripada epigallocatechin gallate standard, ICso adalah sehingga tiga kali ganda lebih rendah daripada kawalan positif. Memandangkan ekstrak adalah campuran beberapa sebatian, kepekatan molekul aktif tunggal adalah lebih rendah daripada nilai IC50, sekali gus menjadikan ekstrak lebih menjanjikan sumber sebatian perencatan.

2.2.Analisis Kinetik oleh Lineweaver-Burk Plot

Kami menumpukan perhatian kami pada ekstrak etanol dan metanol untuk menyiasat cara perencatan enzim ini kerana ia mempunyai kesan yang lebih baik terhadap aktiviti elastase dan kolagenase. Kinetik perencatan ditentukan oleh plot timbal balik berganda Lineweaver-Burk. Ujian dilakukan dengan meningkatkan kepekatan substrat masing-masing jika tiada dan kehadiran ekstrak pada kepekatan yang berbeza.

Jadual 2 menunjukkan bahawa EEG dan EES bertindak sebagai perencat tidak kompetitif terhadap elastase. Malah, analisis kinetik ekstrak ini menghasilkan keluarga garis selari untuk meningkatkan kepekatan ekstrak (Rajah 2A, B). Analisis kiretik ini menunjukkan bahawa ekstrak ini boleh mengikat dengan kompleks enzim-substrat. Pemalar keseimbangan (Krs) dikira daripada tampalan semula pemintas (1/Vmax) berbanding kepekatan perencat, menghasilkan nilai 3.91 dan 8.89 ug/mL untuk EEG dan EES, masing-masing. Cara perencatan ekstrak metanol sememangnya mendedahkan bahawa ekstrak ini bertindak sebagai perencat bukan kompetitif. Malah, dengan meningkatkan kepekatan ekstrak, satu keluarga garis lurus dengan cerun yang berbeza, semuanya bersilang pada absis, ditemui (Rajah 2C, D). Analisis ini menunjukkan bahawa ekstrak boleh mengikat bukan sahaja kepada kompleks enzim-substrat tetapi juga kepada enzim bebas. Pemalar keseimbangan untuk mengikat dengan enzim bebas (Kj) dan dengan kompleks enzim-substrat(Kis) diperolehi sama ada daripada cerun (Km/Vmaks) atau nilai 1/Vmaks (pintasan-y) yang diplot berbanding kepekatan perencat, masing-masing.Akhir sekali, kelakuan kinetik kolagenase pada kepekatan ekstrak yang berbeza ditunjukkan dalam Rajah 3A-D. Semua ekstrak bertindak sebagai perencat tidak kompetitif dengan nilai Krs dalam julat 7.58-13.04 ug/mL （Jadual 2）.

Dalam kerja kami sebelum ini, kami menganalisis ekstrak alkohol biji W. filifera, menggunakan HPLC-DAD-ESI/MS. Kami telah menekankan bahawa sebatian fenolik utama ekstrak ini terdiri daripada flavan-3-ol [7]. Antaranya, procyanidins jenis B merupakan sebatian utama dalam ekstrak biji W.filifera. Hubungan positif antara tahap pempolimeran procyanidin dan kapasiti procyanidins untuk menghalang elastase telah diperhatikan dalam kertas sebelumnya [11,12]. Selain itu, aktiviti perencatan terhadap elastase dan kolagenase oleh beberapa sebatian procyanidin telah dilaporkan [13,14]. Tindakan sinergik sebatian ini boleh menyumbang kepada menjelaskan perencatan ketara ekstrak metanol W.filifera terhadap kedua-dua enzim.

2.3.Faktor Perlindungan Matahari

Aktiviti photoprotectant sangat penting untuk sebatian dengan kemungkinan penggunaan kulit, oleh itu kami menentukan faktor perlindungan matahari (SP) ekstrak kami. SPF menunjukkan keupayaan bahan untuk menyerap sinaran UV, melindungi kulit daripada kesan toksik yang dihasilkan oleh sinaran tersebut. Kosmetik berasaskan tumbuhan mempunyai potensi besar dalam menyerap sinaran UV kerana ekstrak tumbuhan mengandungi polifenol, seperti flavonoid atau karotenoid. Sebatian ini, mempunyai cincin aromatik, boleh menyerap sinaran UV dan, oleh itu, boleh bertindak sebagai penapis matahari. Oleh kerana ekstrak biji alkohol W.filifera mengandungi sebatian fenolik dan flavonoid [7], kesan perlindungan foto ekstrak ini dinilai. Seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 3, semua ekstrak yang dianalisis, pada kepekatan 100 ug/mL, menunjukkan nilai SPF antara 1.52 hingga 3.35. Ekstrak metanol didedahkan mempunyai kesan perlindungan foto terbaik. Sinaran UV bertanggungjawab untuk penyakit kulit dan ia mencetuskan proses yang mengakibatkan penuaan kulit, tekanan oksidatif, dan pembentukan kedutan. Oleh itu, mengurangkan penyerapan sinaran ini meningkatkan, secara tidak langsung, aktiviti antioksidan dan perencatan enzim yang berkaitan dengan penuaan.

2.4. Daya Daya Sel dan Tahap ROS Intraselular

Memandangkan tekanan oksidatif merupakan faktor utama dalam menyebabkan penuaan dan kerosakan yang berkaitan dengan usia, kami turut mengkaji sama ada ekstrak W. filifera menghalang H2O2-penjanaan ROS yang disebabkan dalam sistem selular. Dalam makalah sebelumnya, kami menerangkan aktiviti antioksidan ekstrak biji menggunakan kaedah spektrofotometri (ujian ABTS)[7]. Sampel didedahkan sebagai sumber sebatian fenolik yang baik dengan sifat antioksidan, dengan MEG menunjukkan aktiviti terbaik. Memandangkan ekstrak ini mempunyai aktiviti antioksidan terbaik dan juga berpotensi besar, memandangkan aktiviti perencatan terhadap enzim yang diuji (kolinesterase, xanthine oksidase, dan enzim penuaan yang dibentangkan di sini), kami memutuskan untuk mengesahkan kapasiti antioksidan MEG dalam model selular.

Pertama, kesan ekstrak W.filifera terhadap daya maju sel telah disiasat dalam sel HaCaT. Barisan sel HaCaT keratinosit manusia yang diabadikan telah digunakan secara meluas sebagai model untuk mengkaji homeostasis epidermis [15]. Untuk menentukan keselamatan ekstrak ini, sel-sel telah dirawat dengan pelbagai kepekatan sampel selama 24 jam dan diperiksa menggunakan ujian MTT. Keputusan menunjukkan bahawa ekstrak tidak sitotoksik dalam sel HaCaT dan hanya penurunan kecil (daya maju 80 peratus ) diperhatikan pada 100 ug/mL (Rajah 4). Memandangkan daya maju tidak terjejas sehingga 50 ug/mL （daya maju 96 peratus ）, kami memutuskan untuk melakukan eksperimen selular selanjutnya menggunakan sehingga kepekatan ekstrak ini. Kami menilai tahap ROS dalam sel sebelum dan selepas tekanan oksidatif, dan selepas rawatan dengan MEG. Kajian ini dijalankan menggunakan 21,7'-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA), yang mudah meresap melalui membran sel dan dihidrolisiskan oleh esterase endogen kepada DCFH. Peningkatan pesat dalam DCF menunjukkan pengoksidaan DCFH oleh ROS intraselular, seperti H2O2.Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 5, pengeraman H2O2 meningkatkan pembentukan ROS dalam sel HaCaT dengan ketara, tetapi rawatan dengan ekstrak itu dapat menghalang pengeluaran ROS yang disebabkan oleh H2O{17}} dalam cara tindak balas dos. Oleh itu, keputusan ini mengesahkan ujian antioksidan dan mencadangkan bahawa MEG juga boleh mengurangkan pembentukan ROS dalam sel.

Ekstrak metanol yang dianalisis dalam kertas ini menunjukkan sifat antioksidan yang tinggi. Komposisi fenolik ekstrak ini terdiri daripada flavan-3-ol, dan procyanidins jenis B ialah sebatian fenolik utama [7]. Procyanidins, sekumpulan bioflavonoid polifenolik, telah dilaporkan mempamerkan pelbagai sifat biologi, farmakologi, dan kemoprotektif terhadap radikal bebas oksigen [16,17]. Kajian terdahulu telah menunjukkan bahawa aktiviti anti-radikal procyanidin adalah kuat pada kepekatan tinggi[18]. Selain itu, ekstrak proanthocyanidin adalah pemusnah radikal superoksida yang lebih berkesan daripada vitamin C dan Trolox antioksidan [19].

3. Bahan dan Kaedah

3.1.Bahan kimia

Semua reagen kimia diperoleh sebagai produk komersial tulen daripada Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, Amerika Syarikat) melainkan dinyatakan sebaliknya, dan digunakan tanpa penulenan selanjutnya.

3.2.Penyediaan Sampel Tumbuhan

Buah-buahan W.filifera dikumpulkan di Tunisia di kawasan Gabes (G) dan Sousse (S), dan bahan tumbuhan disediakan mengikut prosedur yang diterangkan sebelum ini [7]. Pulpa dan biji benih diliofilkan secara berasingan dan kemudian bahan tumbuhan (25 g) diekstrak dalam 100 mL air (AE, ekstrak akueus), etanol (E, ekstrak etanol), atau metanol (ME, ekstrak metanol) selama 72 jam, di bilik. suhu, dalam kacau berterusan. Selepas penapisan dan sentrifugasi pada 10,000 rpm, ekstrak akueus kemudiannya diliofilkan, manakala ekstrak etanol dan metanol yang diperolehi tertumpu di bawah vakum, menggunakan penyejat berputar untuk analisis lanjut. Kuasa kering (1 mg/mL) telah dilarutkan dalam DMSO sebelum digunakan.

3.3. Perencatan Enzimatik

Keputusan semua ujian yang diterangkan di bawah dinyatakan sebagai peratusan kawalan kosong. Kepekatan ekstrak yang menyebabkan 50 peratus perencatan aktiviti enzim (ICso) ditentukan dengan interpolasi lengkung tindak balas dos. Model perencatan ditentukan dengan melakukan ujian pada kepekatan substrat yang berbeza dan ketiadaan dan kehadiran ekstrak pada kepekatan yang berbeza. Data kinetik dianalisis menggunakan plot Lineweaver-Burk. Data daripada ujian aktiviti telah direkodkan dengan spektrofotometer Ultrospec 2100 (Biochrom Ltd., Cambridge, UK).

3.3.1. Ujian Perencatan Tirosinase

Perencatan aktiviti tyrosinase oleh ekstrak W.filifera ditentukan dengan menggunakan 3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) sebagai substrat [20]. Campuran tindak balas mengandungi 25 mM penimbal fosfat (pH 6.8), cendawan tyrosinase (100 U/mL, kepekatan akhir), dengan atau tanpa larutan ekstrak tumbuhan. Kemudian, L-DOPA (0.5 mM) telah ditambah ke dalam campuran dan aktiviti ditentukan dengan mengikuti peningkatan dalam penyerapan pada 492 nm, hasil daripada pembentukan produk dopachrome. Julat kepekatan ekstrak yang digunakan untuk ujian perencatan tyrosinase cendawan ialah 0-0.3 mg/mL. Dalam ujian yang dilakukan tanpa ekstrak tumbuhan, DMSO telah ditambah kepada campuran tindak balas sebagai kawalan kosong. Asid kojic digunakan sebagai kawalan positif.

3.3.2.Ujian Perencatan Elastase

Perencatan elastase telah diuji dengan memantau pembebasan p-nitroaniline semasa pembelahan substrat N-succ-(Ala)3-nitroanilide (SANA) oleh tindakan enzim melalui kaedah yang diterangkan [21], dengan sedikit pengubahsuaian. Ujian telah dilakukan dalam 0.1 M Tris-HCl buffer (pH8.0). Elastase pankreas babi (3.3 ug/mL) diinkubasi dengan atau tanpa ekstrak selama 20 minit dan, selepas inkulasi, substrat (1.6mM) ditambah, dan aktiviti enzim dipantau pada 410 nm. Kawalan dilakukan dengan DMSO, manakala asid oleanolik digunakan sebagai kawalan positif.

3.3.3.Ujian Perencatan Kolagenase

Kolagenase daripada Clostridium histolyticum telah disediakan dalam penimbal Tricine {{0}}.05 M, pH 7.5, mengandungi 0.4 M NaCl dan 0.01 M CaClz, dan diinkubasi (1 U /mL) dengan sampel ujian pada kepekatan berbeza selama 15 minit. Substrat sintetik N-(3-[2-Fury]]-acryloyl)-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA), yang disediakan dalam larutan penimbal yang sama, kemudian ditambahkan untuk memulakan tindak balas ( dengan kepekatan akhir 0.8 mM). Penyerapan dipantau pada 340 nm [21]. Kawalan dilakukan dengan DMSO, manakala epigallocatechin gallate digunakan sebagai kawalan positif.

3.4. Penentuan Faktor Perlindungan Matahari In Vitro

Faktor perlindungan matahari bagi ekstrak W. filifera ditentukan menggunakan kaedah penyerapan ab UV, mengikut metodologi yang diterangkan oleh Mansur et al. (1986) [22]. Penyerapan ekstrak (0.1 mg/mL) diukur dalam julat 290-320 nm, dengan kenaikan 5 nm, dan tiga penentuan dibuat pada setiap titik. SPF dikira dengan menggunakan Persamaan Mansur: dengan CF=faktor pembetulan(10); EE(A)= kesan eritemogenik sinaran dengan panjang gelombang λ;I（）= spektrum keamatan suria; Nilai penyerapan spektrofotometri Abs（λ= pada panjang gelombang λ. Nilai EE（A） × I（A） adalah malar. Mereka ditentukan oleh Sayre et al. (1979)[23] dan ditunjukkan dalam Jadual 4.

3.5.Kultur Sel dan Tahap ROS Intraselular

Barisan sel keratinosit kulit manusia HaCaT telah dikultur dalam Medium Helang Modified Dulbecco (DMEM) yang mengandungi 10 peratus serum lembu janin (FBS, Gibco, NY, USA) dan 1 peratus peni-cillin/streptomycin pada 37 darjah, dalam suasana lembap, dengan 5 peratus CO2. Daya maju sel telah dikesan oleh kolorimetrik 3-(4)5-dimethylthiazol-2-yl)-2.5-ujian diphenyltetrazolium bromide (MTT), sebagai diterangkan sebelum ini, dengan pengubahsuaian kecil [24]. Selepas pengeraman 24 jam dengan MEG pada kepekatan yang berbeza (0-100 ug/mL), sel telah dilabelkan dengan larutan MTT selama 3 jam pada 37 darjah . Mendakan formazan violet yang terhasil telah dibubarkan dalam DMSO dan penyerapan setiap telaga ditentukan pada 560 nm menggunakan pembaca plat mikro dengan rujukan 630 nm.

Tahap ROS selular ditentukan dengan kaedah DCFH-DA [25]. Sel HaCaT telah dirawat dengan pelbagai kepekatan MEG(0-50 ug/mL) selama 24j. Kemudian, sel telah diinkubasi dengan DCFH-DA (10 uM) pada 37 darjah selama 30 minit. Selepas pengeraman, 1 mM HSO2 telah ditambah ke dalam telaga, dan keamatan pendarfluor DCF segera diukur menggunakan pembaca plat pendarfluor pada panjang gelombang pengujaan 485 nm dan panjang gelombang pelepasan 530 nm, mengambil bacaan pada selang 5 minit selama 50 min.

3.6.Analisis Data

Semua eksperimen dilakukan dalam tiga kali ganda dan data dinyatakan sebagai min 士 sisihan piawai （SD）. Perbezaan statistik telah dinilai menggunakan perisian GraphPad Prism versi 8 (San Diego, CA, Amerika Syarikat). Perbandingan antara kumpulan dijalankan dengan analisis varians sehala (ANOVA) diikuti dengan Ujian Perbandingan Pelbagai Tukey. Nilai-ap kurang daripada 0.05 dianggap penting secara statistik.

4. Kesimpulan

Kesimpulannya, kami melaporkan, buat pertama kalinya, bahawa ekstrak biji dari W.filifera berkesan dalam menghalang enzim utama yang terlibat dalam penuaan kulit. Penuaan semula jadi atau "intrinsik" adalah fenomena fisiologi yang berlaku dalam semua tisu manusia akibat daripada peredaran masa. Walau bagaimanapun, kulit juga terdedah kepada faktor-faktor pencetus tekanan luaran yang mewakili punca utama penuaan kulit pramatang. Penuaan "ekstrinsik" terutamanya berkaitan dengan kerosakan akibat UV pada tisu penghubung kulit. Sinaran UV menyebabkan tekanan oksidatif, yang bertanggungjawab untuk pengaktifan enzim yang merendahkan ECM, dan penampilan kedutan dan bintik-bintik penuaan. Manuskrip ini melaporkan kepentingan yang boleh dimiliki oleh benih W.filifera dalam konteks ini. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 6, ekstrak boleh bertindak dalam pencegahan penuaan pramatang, bertindak serentak pada beberapa bahagian.

Pertama, ekstrak boleh bertindak pada permulaan proses melalui kesan fotoprotektifnya dan, oleh itu, mengurangkan penyerapan sinaran UV. Kemudian, mereka menunjukkan kesan antioksidan yang baik dengan ekstrak metanol, menghalang pembentukan ROS dalam sistem selular, tanpa ketoksikan sel. Akhir sekali, semua ekstrak, khususnya, sampel metanol, boleh menghalang kolagenase, elastase, dan tyrosinase (yang terakhir sedikit). Secara keseluruhan, keputusan yang diperolehi menunjukkan bahawa W.filifera boleh menjadi sumber molekul bioaktif dan menggalakkan eksperimen selanjutnya untuk mengasingkan komponen aktif tunggal yang bertanggungjawab untuk aktiviti yang diperhatikan.

Artikel ini diekstrak daripada Plants 2021, 10, 151. https://doi.org/10.3390/plants10010151 https://www.mdpi.com/journal/plants