BAHAGIAN Ⅱ: Peranan Fibroblast Renal Primer Manusia dalam TGF- 1-Peranti Peniruan Fibrosis Pengantaraan

Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com

BAHAGIAN Ⅱ: Peranan Fibroblast Renal Primer Manusia dalam TGF- 1-Peranti Peniruan Fibrosis Pengantaraan

Seong-Hye Hwang, Yun-Mi Lee & et al.

Abstrak

Fibrosis buah pinggangadalah penyakit buah pinggang kronik yang progresif yang akhirnya membawa kepada kegagalan buah pinggang peringkat akhir. Walaupun beberapa pendekatan untuk memerangifibrosis buah pinggang, model eksperimen untuk menilai ubat yang tersedia pada masa ini tidak sesuai. Kami membangunkan model b-mimicking menggunakan peranti kultur bersama tiga dimensi (3D) yang direka bentuk dengan tiga lapisan interstitium tubul yang berasingan, iaitu lapisan epitelium, fibroblastik dan endothelial. Kami memperkenalkan sel epitelium tiub proksimal renal manusia (HK-2), sel endothelial vena umbilik manusia dan fibroblas buah pinggang yang diperolehi oleh pesakit, dan menilai kesantfaktor pertumbuhan mengubahsuai- (TGF-)danTGF-rawatan perencat mengenai perkara inibuah pinggangfibrosismodel. Ungkapan daripadafibrosispenanda alfa-otot licin aktin atasTGF- 1rawatan telah ditambah dalam sel HK-2 kultur monolayer dalam model penyakit 3D. Dalam petak vaskularbuah pinggangfibrosismodel, ketumpatan kapal telah meningkat dan menurun dalamTGF--kumpulan yang dirawat danTGF--kumpulan rawatan perencat, masing-masing. Multiplex ELISA menggunakan supernatan dalamTGF--model 3D yang merangsang menunjukkan bahawa sitokin pro-radang dan tahap faktor pertumbuhan termasuk interleukin-1 beta, faktor nekrosis tumor-alfa, faktor pertumbuhan fibroblas asas danTGF- 1, TGF- 2, danTGF- 3telah meningkat, yang meniru persekitaran mikro fibrotik buah pinggang manusia. Kajian ini mungkin membolehkan pembinaan manusiabuah pinggangfibrosis-meniru model peranti di luar eksperimen budaya tradisional.

Kata kunci: fibroblas buah pinggang; fibrosis; TGF- 1

manfaat kesihatan cistanche tubolosa: merawat penyakit buah pinggang kronik

KLIK DI SINI UNTUK BAHAGIAN Ⅰ

3. Perbincangan

TGF- 1memainkan peranan penting dalam pengumpulan matriks dalam fibrogenesis buah pinggang dan menghalang percambahan dalam kebanyakan sel, termasuk sel epitelium dan endothelial glomerular, serta sel epitelium tiub 【1】. Walau bagaimanapun, TGF-ß1 mendorong percambahan dalam fibroblas buah pinggang manusia melalui induksi faktor pertumbuhan fibroblas asas (FGF-2) [8].

Dalam kajian ini, kami telah menubuhkan afibrosis-peranti meniru menggunakan tiga komponen selular penting, termasuk fibroblas renal primer manusia, sel epitelium tiub renal, dan sel endothelial manusia dan menilai ia sebagaibuah pinggangfibrosismodel berdasarkanTGF- 1rangsangan. Untuk menjanabuah pinggangfibrosis-on-a-chip, kami mewujudkan sistem kultur 3D baru yang direka dengan tiga bahagian tisu yang berasingan, bertujuan untuk mengatasi halangan yang berkaitan dengan pemodelan penyakit buah pinggang. Kajian kami menunjukkan bahawaTGF- 1tindak balas selular yang disebabkan, termasuk peralihan epitelium-mesenchymal tiub (EMT) sel epitelium, perubahan mikrovaskular sel endothelial, dan perubahan sitokin dalam fibroblas buah pinggang. Ini merupakan kajian pertama yang memperkenalkan afibrosis-peranti meniru yang terdiri daripada fibroblas primer yang berasal daripada buah pinggang manusia dan fibroblas yang dirangsang yang diasingkan daripada pesakit denganTGF- 1, pendorong tindak balas fibrotik yang diketahui secara amnya digunakan sebagai piawai untuk menirufibrosisdalam kultur sel [9]. Keputusan ini mencadangkan bahawaTGF- 1-sel epitelium yang dirawat ditukar kepada fenotip seperti sel mesenchymal. BilaTGF- 1diberikan kepada fibroblas, pelbagai sitokin diubah untuk mencerminkan induksi proses fibrotik. Ia jelas bahawa dalambuah pinggangfibrosismodel, fibroblas adalah kuasa utama di sebalik pembangunan sistem kultur yang ditubuhkan melalui rangsangan TGF.

Davis et al, melaporkan bahawa 3Dkultur sel endothelial adalah mencukupi untuk sel-sel untuk menyerang dan membentuk rangkaian lumen dan tiub, berikutan organisma utuh dalam vivo [10,11]. Beberapa kumpulan telah melaporkan bahawa model kultur 3D mempamerkan tahap nefrotoksisiti yang lebih tinggi daripada model kultur sel 2D [12]. Tambahan pula, ekspresi gen berkaitan nefrotoksisiti dan keradangan adalah jauh lebih tinggi dalam model kultur sel 3D buah pinggang berbanding dalam budaya 2D biasa [13].

Dalam kajian ini, media budaya manusiabuah pinggangfibrosis-on-a-chip mempunyai tahap sitokin yang jauh lebih tinggi berbanding dengan 2Dculture. Kumpulan kami telah menunjukkan bahawa fibroblas yang berasal dari pesakit boleh mencipta semula tisu buah pinggang asli, termasuk lapisan sel endothelial dan epitelium, melalui cadangan kami.fibrosis-model pada cip. Akibatnya, penemuan ini menunjukkan bahawabuah pinggangfibrosisModel -on-a-chip mensimulasikan persekitaran mikrofizikal buah pinggang manusia dengan tepat. Di samping itu, kerana fibroblas yang dikultur dalam cip berasal daripada pesakit, model pesakit klinikal lain yang berkaitan boleh diperoleh dengan mudah dan jelas dengan cara yang selamat. Oleh itu, manusiabuah pinggangfibrosisSistem model -on-a-chip boleh membenarkan pembangunan perubatan yang diperibadikan dengan ukuran sensitif fungsi epitelium dan endothelial. Dalam eksperimen kami,fibrosisdan angiogenesis telah menurun dalamTGF-kumpulan yang dirawat dengan perencat. Inhibitor TGF- adalah antagonis semulajadi TGF-, yang telah ditunjukkan menggunakan pelbagai model penyakit buah pinggang. Nampaknya adalah mungkin untuk menjalankan eksperimen untuk mengesahkan keberkesanan rawatan dalam model penyakit menggunakan agen terapeutik seperti perencat TGF- ini. Oleh itu, cip ini telah menyediakan cara untuk membangunkan model fibrosis buah pinggang yang lebih baik untuk mengukur morfologi dan fungsi sel dan mungkin berguna dalam melaksanakan penilaian nefrotoksisiti untuk farmaseutikal.

TGF-adalah faktor profibrotik yang utama dalam pelbagai penyakit buah pinggang [14] dan memainkan peranan dalam angiogenesis [15]. Kesan angiogenik TGF- adalah sangat kompleks dan boleh mempunyai aktiviti proangiogenik atau antiangiogenik bergantung pada tetapan dan pelbagai faktor pengawalseliaan [16]. Faktor pertumbuhan angiogenik seperti VEGF dan FGF-2mendorong angiogenesis in vivo nampaknya memainkan peranan penting dalam modulasi angiogenesis in vivo [17-20]. Beberapa bukti menunjukkan bahawa kedua-dua faktor ini boleh bertindak secara sinergistik untuk menggalakkan peristiwa morfogenetik sel endothelial [21,22]. Kami telah memberikan bukti bahawa ekspresi mRNA VEGF dan rembesan protein FGF-2 dinaikkan dengan ketara oleh TGF- 1 dalam cip 3D berbanding dengan budaya 2D.

Keterbatasan kamifibrosismodel mungkin ia dicipta dalam tempoh masa yang agak singkat, 24 jam. TGF-beta mempunyai sifat pro-fibrotik dan anti-radang dalam masa awalfibrosisproses, bukan dalam proses kronik. Secara konvensional,TGF-telah digunakan terutamanya dalam sitokin yang disebabkanfibrosismodel. Walau bagaimanapun, oleh kerana hanya satu sitokin tidak boleh diwakili dalam vivo,fibrosismodel aruhan menggunakan beberapa bahan calon tambahan sepertiTGF-dan BMP7 telah dicadangkan. Walau bagaimanapun, dua atau tiga sitokin masih tidak mencukupi untuk membiak secara in vivo. Kami menggunakanTGF-sebagai titik permulaan; walau bagaimanapun, kami cuba melaksanakan persekitaran mikro in vivo pada cip dengan mendorong ribut sitokin yang lebih pelbagai. Fibroblast, komponen selular utamafibrosis, diperkenalkan, dan rangsangan sekunder sitokin yang lebih pelbagai (IL-1 , TNF- , b-FGF,TGF- 1, TGF-2, danTGF-3) telah diinduksi dalam fibroblas yang dirangsang denganTGF-. Oleh itu, persekitaran yang serupa denganfibrosisdalam tubuh manusia telah dihasilkan semula.

ekstrak cistanche deserticola: merawat penyakit buah pinggang

4. Bahan dan Kaedah

4.1.Budaya Sel

Kidney fibroblasts(KFs)were isolated from biopsies of the normal tissue portion of renal cell carcinoma patients with an estimated glomerular filtration rate (eGFR)>60 mL/minit/1.73 m2 selepas pesakit memberikan persetujuan mereka untuk biopsi kedua untuk tujuan penyelidikan. KF dibiakkan dalam medium pertumbuhan fibroblas (FGM-2, Lonza, Switzerland) dan petikan 3 hingga 4 digunakan untuk eksperimen. Fibroblas buah pinggang dikikis daripada kultur selama 1-2 minggu sehingga sel-sel membentuk satu lapisan. Untuk menghapuskan sel epitelium yang mencemarkan kultur, fibroblas dipilih menggunakan manik anti-fibroblast magnetik (Miltenyi Biotec Inc., Auburn, CA, Amerika Syarikat) selepas laluan pertama. Sel telah ditanggalkan menggunakan 0.05 peratus asid trypsin-etilenediaminetetraacetic (EDTA)(Welgene, Gyeongsan, Korea), diinkubasi dengan manik anti-fibroblast dan diasingkan menggunakan lajur magnet, dan aliran- melalui telah dikumpulkan. Fibroblas primer yang telah dimurnikan dicirikan oleh analisis pengisihan sel teraktif pendarfluor (FACS) menggunakan antibodi anti-fibroblas terkonjugasi PE. Pemisihan sel teraktif magnetik lembut (MACS) digunakan untuk mengisar tisu buah pinggang yang lembut. Pemisah Magnetik Octo MACSTM dengan lajur MACS LS (dengan pelocok) yang digunakan untuk penulenan sel berlabel microbead telah dibeli daripada Miltenyi Biotec Inc. (Auburn, CA, USA). Tiub MACS C yang lembut (Miltenyi Biotec Inc., Auburn, CA, USA) telah digunakan untuk mengisar buah pinggang untuk pemisahan sel. Penapis Pintar MACS (70 um) diperoleh daripada Miltenyi Biotec Inc. (Auburn, CA, Amerika Syarikat). Penampan lajur digunakan untuk mencuci lajur dan menggantung semula pelet sel. Penampan itu disediakan sebagai larutan yang mengandungi 0.5 peratus albumin serum lembu (BSA) dengan 2 mM EDTA dalam garam penimbal fosfat (PBS) (pH7.4) dan dibeli daripada Miltenyi Biotec Inc. (Auburn, CA, Amerika Syarikat). Sel endothelial vena umbilical manusia yang mengekspresikan protein pendarfluor hijau (GFP-HUVECs, Lonza, Switzerland) telah dikultur dalam Sederhana Pertumbuhan Endothelial (EGM-2, Lonza, Switzerland) dan sel dalam petikan 3 hingga 4 telah digunakan. Sel garisan sel tubular proksimal manusia (buah pinggang manusia-2(HK-2) telah diperolehi daripada American Type Culture Collection(ATCC). Talian sel itu ditanam dalam medium Eagle's Modified Eagle (DMEM) Dulbecco dengan glukosa tinggi. ditambah dengan 10 peratus serum lembu janin (FBS), penisilin (100 U/mL), dan streptomycin (100 ug/mL). Reagen dibeli daripada Gibco (Rockville, MD, Amerika Syarikat). Semua sel telah ditanggalkan menggunakan 0.05 peratus Trypsin- EDTA dan dikekalkan dalam inkubator lembap pada 37 darjah dan 5 peratus CO2. KF digantung semula dalam FGM-2 pada kepekatan sel 4×10 darjah sel/mL. Sel epitelium tiub buah pinggang manusia (HK{{49 }}) telah digantung semula pada kepekatan 2×10 darjah sel/mL dalam DMEM glukosa tinggi.GFP-HUVEC telah digantung semula pada kepekatan 2×10 darjah sel/mL dalam EGM-2.

4.2.Reagen

Matriks ini terdiri daripada gel fibrin, termasuk fibrinogen yang boleh didapati secara komersil daripada plasma lembu, aprotinin daripada paru-paru lembu, dan trombin daripada plasma lembu. Tiga bahan yang disebutkan di atas telah dibeli dari Sigma (St. Louis, MO, Amerika Syarikat). Fibrinogen telah dilarutkan dalam l×PBS dalam mandi air (37 darjah ) selama 30 min pada kepekatan 10 mg/mL. Trombin dan aprotinin telah dilarutkan dalam air ternyahion pada kepekatan 50 unit/mL dan 4 TIU/mL. Ketiga-tiga larutan tersebut telah disterilkan dengan menapis melalui penapis 0.22 μm. Manusia rekombinanTGF- 1diperoleh daripada PeproTech EC Ltd. （London, UK). Perencat khusus kinase reseptor TGF-beta, SB431542, telah dibeli daripada Tocris Cookson, Inc. (Ellisville, MO, USA).

4.3. Corak Sel dalam Peranti

Sebelum pembenihan sel untuk memudahkan ikatan yang ketat, peranti telah dirawat selama 1 minit dalam mesin plasma (Femto Science Inc., Suwon, Korea) dengan kuasa 70 W, 50 Hz. Hidrofilisiti permukaan yang disebabkan oleh rawatan plasma dan membantu memudahkan corak gel dan pemuatan media. Untuk mengelakkan perubahan dalam hidrofilik, eksperimen dilakukan dalam masa 30 minit selepas rawatan plasma. Corak selular yang berbeza dalam peranti boleh dilakukan dengan cara yang sangat disesuaikan. Adalah penting untuk menentukan komposisi dan kepekatan jenis sel yang berbeza untuk dicorakkan terlebih dahulu. Untuk penggantungan hidrogel selular, 37.5 μL penggantungan sel dan aliquot yang dipisahkan sebanyak 12.5 μL larutan fibrinogen 10 mg/mL （250 μL larutan fibrinogen 10 mg/mL dengan 40 μL 4 TIU/mL aprotinin yang dipisahkan dengan serta-merta) sebelum dimuatkan. Sejurus sebelum pemuatan, 37.5 μL penggantungan sel dicampur dengan 12.5 μL 10 mg/mL fibrinogen sehingga dihomogenkan. 50uL hidrogel dicampur dengan titisan 1 uL trombin (0.5 unit/mL). Sejurus selepas mencampurkan, trombin dengan penggantungan fibrin GFP-HUVECs (kepekatan sel 2 × 10 'sel / mL) disuntik ke pinggir luar saluran luar (Rajah 3, Gel A). Kami menunggu 3 minit untuk pautan silang fibrinogen selesai. Sejurus selepas mencampurkan, trombin dengan penggantungan fibrin KFs (kepekatan sel 4×10 darjah sel/mL) diletakkan pada setiap sisi lantai takungan setiap telaga (Rajah 3, Gel C). Suspensi fibrin KF ini dibenarkan untuk bersilang pada suhu bilik selama 3 minit. Suspensi sel 10 μL sel epitelium tiub proksimal renal manusia (HK-2) telah disuntik ke dalam port suntikan saluran dalam (Rajah3, Gel B). Untuk melekatkan HK-2 pada dinding gel fibrin dalam saluran GFP-HUVECs, peranti dihidupkan 90 darjah dan diletakkan dalam 5 peratus CO, inkubator selama 30 minit pada 37 darjah . HK-2 mendap dan membentuk helaian sel pada sisi gel fibrin.

Selepas melampirkan HK-2, peranti telah diisi dengan EGM-2. Peranti telah diinkubasi selama 3 hari pada 37 darjah dalam 5 peratus CO, inkubator. Medium telah ditukar dengan atau tanpa 5ng/mLTGF- 1dan dengan5ng/mLTGF- 1dan 10 umTGF- 1perencat selepas tiga hari pengeraman (Rajah 3).

apa itu cistanche

4.4. Imunocytofluorescence

Tisu yang dikultur bersama dalam peranti telah ditetapkan dengan larutan paraformaldehid 4 peratus (w/v) (Biosesang, Seongnam, Korea) dalam PBS(Welgene, Gyeongsan, Korea) selama 20 min, diikuti dengan permeabilisasi dengan 20 rendaman min dalam 0.15 peratus Triton X-100(Sigma, St.Louis, MO, Amerika Syarikat). Sampel kemudian dirawat dengan 3 peratus BSA (Sigma, Amerika Syarikat) selama 1 jam. Sel-sel telah diinkubasi dengan antibodi yang dibeli daripada Abcam. Antibodi utama adalah anti-sitokeratin 8 dan anti-o-SMA, dibiarkan selama 2 hari pada suhu bilik (RT). Alexa Fluor 647 keldai konjugasi anti-arnab IgG(H tambah L) digunakan sebagai antibodi sekunder. Pelabelan DNA dilakukan dengan pencairan 1:250 Hoechst33342 (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA) selama 3 jam di RT. Imej dikumpulkan menggunakan mikroskop laser confocal Zeiss LSM 710. Purata keamatan pendarfluor (MFI) diukur menggunakan ImageJ dan penganalisis intensiti pendarfluor.

4.5. Analisis Pelbagai Sitokin

Kit MSD V-Plex Cytokine dan Angiogenesis Panel 1 Human (Rockville, MD, USA) telah digunakan untuk mengukur interleukin-1 beta （IL-1ß） dan faktor pertumbuhan fibroblast asas （b-FGF）kepekatan dalam sampel tunggal, mengikut arahan pengilang. Semua sampel dinilai untuk jumlah tahap protein IL-1 dan b-FGF. Jumlah (dalam pg/mL) dikira daripada lengkung piawai bagi setiap ukuran.

4.6. Multiplex Bead Immunoassay

Kepekatan sitokin dianalisis menggunakan sistem immunoassay manik multiplex (Procarta Cytokine Assay Kit; Affymetrix, Inc., Santa Clara, CA, USA), berdasarkan teknologi multi-plexing (xMAP; Luminex, Austin, TX, USA), menurut arahan pengeluar. Data itu diperoleh menggunakan stesen kerja serasi Luminex dan perisian pengurusnya (stesen kerja Bio-Plex dan perisian versi 6.0; Bio-Rad, Tokyo, Jepun), mengikut arahan pengeluar. TGF Manusia- 1, TGF- 2 dan TGF- 3 berkaitan denganfibrosisproses dianalisis secara serentak dalam sampel yang dicairkan. Isoform daripadaTGF-telah dikesan menggunakan Sistem Bio-Plex 200 dan Bio-Plex ProTM Manusia yang tersedia secara komersialTGF-ujian (Bio-Rad Laboratories, Inc); berdasarkan maklumat yang diberikan oleh pengilang. Kit ujian multipleks boleh mengukur secara kuantitatif berbilang sitokin daripada supernatan dengan had pengesanan yang lebih rendah iaitu 1 pg/mL setiap sitokin. Setiap sampel dijalankan sebagai satu ukuran untuk kuantiti terhad supernatan yang dikumpul.

4.7.PCR Masa Nyata

Pengekstrakan RNA dilakukan menggunakan Reagen TRIzol (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, Amerika Syarikat). Campuran Induk dan Kit Sintesis cDNA Untaian Pertama Bantuan Kembali telah digunakan untuk transkripsi terbalik bagi jumlah RNA.qPCR dilakukan menggunakan Campuran Induk Hijau Applied BiosystemsTM PowerUpTM SYBRTM (Thermo Fisher Scientific, Inc.). Primer khusus telah disediakan oleh Bioneer (Daejeon, Korea) dan digunakan dalam eksperimen ini seperti berikut. Urutan primer diringkaskan dalam Jadual 1.

Sepuluh mikroliter PowerUp SYBR Green Master Mix, 4 μL cDNA, dan 2 pmol setiap primer telah digunakan untuk PCR masa nyata dalam volum akhir 20 μL. Tindak balas telah dijalankan pada 95 darjah selama 1s dan 60 darjah selama 20 s selama 45 kitaran selepas denaturasi pada 95 darjah selama 20 s. PCR dilakukan dalam pendua atau tiga kali ganda untuk setiap sampel. Tahap cDNA ditentukan menggunakan lengkung standard ambang kitaran. Semua data untuk setiap cDNA berada dalam lengkung piawai yang sepadan. Data yang diperoleh telah dinormalkan kepada -actin cDNA.

4.8. Analisis statistik

Data kuantitatif dibentangkan sebagai min ±SD atau SE daripada sekurang-kurangnya tiga eksperimen bebas. Analisis statistik telah dilakukan menggunakan ujian-t Pelajar dua hujung. Kami menganggap perbezaan yang ketara hanya pada tahap keyakinan 95 peratus atau lebih tinggi (ms<>

5. Kesimpulan

Secara ringkasnya, protokol dalam kajian ini membolehkan pembinaan manusiabuah pinggangfibrosis-meniru peranti sebagai model dan menunjukkan pelbagai kesan yang tidak mungkin dalam eksperimen budaya 2D. Kami percaya bahawa strategi penilaian yang dicadangkan dalam kajian ini akan membawa kepada pemahaman yang lebih baik tentang terperincifibrosismekanisme yang terlibat dalam perubahan patologi semasapenyakit buah pinggang. Fibrosis renal 3D-on-a-chip yang dibangunkan boleh digunakan sebagai model in vitro yang berpotensi, yang akan membawa kita lebih dekat untuk mencipta model buah pinggang-pada-cip yang dipertingkatkan.

cistanche phelypaes: rawatan untuk penyakit buah pinggang

Rujukan

1. Sempadan, W.; Noble, N. Mengubah faktor pertumbuhan dalam tisufibrosis.N. Inggeris. J. Med.1994, 331,1286-1292.

2. Wang, W.;Huang, XR;Li,AG;Liu, F;Li,J.; Truong, LD; Wang, XJ; Lan, HYMekanisme isyarat TGF-betal dalam pencegahan keradangan buah pinggang: Peranan Smad. Saya adalah. Soc. Nephrol.2005, 16, 1371-1383. [CrossRef]

3. Liu,Y.buah pinggangfibrosis: Pandangan baharu tentang patogenesis dan terapeutik. Kidney Int.2006,69,213-217. [CrossRef][PubMed]

4. Andes, D.; Craig, WA Farmakokinetik model haiwan dan farmakodinamik: Kajian kritikal. Int. J.Antimicrob.Agents 2002, 19,261-268. [CrossRef]

5. Kim, S.; Takayama, S.Organ-on-a-chip dan buah pinggang. Buah Pinggang Re. Clin. Pract.2015, 34, 165-169.[CrossRef][PubMed]

6. Jang, KJ; Mehr, AP; Hamilton, GA; McPartlin, LA; Chung, S.; Suh, KY; Ingber, DEHuman tubul proksimal buah pinggang pada cip untuk pengangkutan dadah dan penilaian nefrotoksisiti. Integer. biol. 2013,5,1119-1129. [CrossRef[PubMedl

7. Reardon, S. 'Organ-pada-cip' menjadi arus perdana. Alam Semula Jadi 2015, 523, 266. [CrossRef]

8. Strutz, F; Zeisberg, M; Renziehausen, A.; Raschke, B.; Becker, V; Kooten, CV; MuLler, GATGF- 1mendorong percambahan dalam fibroblas buah pinggang manusia melalui induksi faktor pertumbuhan fibroblas asas (FGF-2). Int Buah Pinggang. 2001, 59, 579-592.[CrossRef][PubMed]

9. Zanotti, S.; Bragato, C.; Zuccella, A.; Maggi, L.; Mantegazza, R.; Morandi, L.; Mora, M. Kesan anti-fibrotik pirfenidone dalam fibroblas terbitan otot daripada pesakit distrofi otot Duchenne. Life Sci. 2016, 145,127-136. [CrossRef]

10. Davis, GE.:Camarillo. C, W. Mekanisme pinositik bergantung integrin alpha 2 beta 1 yang melibatkan pembentukan vakuol intraselular dan penyatuan mengawal pembentukan lumen dan tiub kapilari dalam matriks kolagen tiga dimensi. Exp. Sel Re. 1996, 224, 39-51.[CrossRef]

11. Bayless, KJ; Davis, G. Cdc42 dan Race GTPases diperlukan untuk pembentukan lumen kapilari dalam matriks ekstraselular tiga dimensi. J. Sel Sci. 2002,115,1123-1136. [CrossRef [PubMed]

12. DesRochers, TM; Suter, L.; Roth, A.; Kaplan, DL Bioengineered 3D tisu buah pinggang manusia, platform untuk penentuan nefrotoksisiti. PLoS ONE 2013, 8, e59219. [CrossRef]

13. Astashkina, AI; Mann, BK; Prestwich, GD; Grainger, DW Membandingkan biomarker nefrotoksisiti ubat ramalan dalam kultur organoid primer 3-D buah pinggang dan garisan sel yang diabadikan. Biobahan 2012, 33, 4712-4721. [CrossRef] [PubMed]

14. Meng, XM; Nikolic-Paterson, DJ; Lan, HY TGF-beta: Pengawal selia induk bagifibrosis. Nat.Rev.Nephrol.2016,12, 325-338. [CrossRef]

15. Pardali,E.;Goumans, MJ;ten Dijke,P. Isyarat oleh ahli keluarga TGF-beta dalam morfogenesis dan penyakit vaskular. Trends Cell Biol.2010, 20, 556-567. [CrossRef] [PubMed]

16. Cunha, SL; Pietras, K. ALK1 sebagai sasaran yang baru muncul untuk terapi antiangiogenik kanser. Darah 2011,117,6999-7006.[CrossRef]

17.Klagsbrun, M.;D'Amore, PA Pengawal selia angiogenesis. Annu. Rev. Physiol.1991,53, 217-239. [CrossRef]

18. Folkman, J.;Shing, Y.Angiogenesis. J.Biol. Chem.1992, 267,10931-10934. [CrossRef]

19. Shweiki, D. Itin, A.Soffer, D.Keshet, E. Faktor pertumbuhan endothelial vaskular yang disebabkan oleh hipoksia boleh menjadi pengantara angiogenesis yang dimulakan oleh hipoksia. Alam 1992, 359, 843-848. [CrossRef]

20. Kim, KJ; Li, B.; Winer, J.; Armanini, M; Gillett, N.; Phillips, HS; Ferrera, N. Perencatan angiogenesis yang disebabkan oleh faktor pertumbuhan endothelial vaskular menyekat pertumbuhan tumor dalam vivo. Alam 1993, 362, 841-844. [CrossRefl]

21. Lada, MS; Ferrara, N.; Orci, L.; Montesano, R. Sinergisme kuat antara faktor pertumbuhan endothelial vaskular dan faktor pertumbuhan fibroblast asas dalam induksi angiogenesis secara in vitro.Biochem. Biophys. Res. Commun.1992,189,824-831.[CrossRefl

22. Goto, F.; Goto, K.; Weindel, K.; Folkman, J. Kesan sinergistik faktor pertumbuhan endothelial vaskular dan faktor pertumbuhan fibroblas asas pada percambahan dan pembentukan kord sel endothelial kapilari lembu dalam gel kolagen. Makmal. Investig.1993,69, 508-551.[PubMed]

KLIK DI SINI UNTUK BAHAGIAN Ⅰ