Echinacoside daripada cistanche tubulosa berkesan merawat osteoporosis
Mar 08, 2022
Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com
Bahagian Ⅰ: Keberkesanan Dan Keselamatan Echinacoside dalam Model Osteopenia Tikus
Xiaolin Yang, 1 Fei Li, 2 Yanan Yang, 3 Jinyang Shen, 2 Run Zou, 2 Panpan Zhu, 2 Chunfeng Zhang, 2 Zhonglin Yang, 2 dan Ping Li
Kajian ini bertujuan untuk menyiasat keberkesanan dan keselamatanEchinacoside(ECH) menggunakan model tikus osteopenia. Tikus Sprague-Dawley betina empat puluh lapan 6-bulan telah dibahagikan secara rawak kepada satu kumpulan kendalian palsu (SHAM) dan lima subkumpulan OVX (ovariectomized): SHAM dengan kenderaan 0.5 peratus natrium karboksimetilselulosa ( 0.5 peratus CMC-Na) dan OVX dengan kenderaan (OVX), OVX dengan 17 estradiol (E2) dan OVX denganECH (echinacoside) daripada dos berperingkat (ECH (echinacoside)ECH-L, ECH -M dan ECH-H). Kesan ECH(echinacoside)dan E2 pada parameter biokimia serum, ketumpatan mineral tulang (BMD), sifat biomekanik tulang, mikroarkitektur tulang, dan imunohistokimia telah diperiksa, dan penilaian keselamatan juga dinilai. Keputusan menunjukkan bahawa ECH(echinacoside)rawatan meningkatkan jumlah BMD femur, microarchitecture tulang, dan sifat biomekanik serta menurunkan paras penanda serum berbanding kumpulan OVX. Selain itu, ECH (echinacoside)pentadbiran meningkatkan tahap osteoprotegerin (OPG) dengan ketara, dan menurunkan tahap pengaktif reseptor ligan faktor nuklear (RANKL) dalam serum, serta dalam femur proksimal. Yang penting,ECH (echinacoside)rawatan memperbaiki parameter lipid tanpa kejadian keseluruhan kejadian buruk rahim dan kelenjar susu berbanding kumpulan OVX dan SHAM. Kajian ini menunjukkan bahawa pentadbiranECH (echinacoside) selama 12 minggu dengan berkesan dan selamat dapat mencegah akibat OVXosteoporosisdalam tikus melalui peningkatan nisbah OPG/RANKL.
cistanche echinacoside boleh merawat Osteoporosis
1. Pengenalan
Osteoporosisadalah satu jenis gangguan metabolik rangka yang dicirikan oleh pengurangan jisim tulang dan kemerosotan mikroarkitektur tisu tulang, yang boleh mengakibatkan kerapuhan dan patah tulang. Ia telah menjadi salah satu ancaman utama untuk kesihatan penduduk yang semakin tua [1, 2], dibuktikan dengan anggaran kelaziman 200 juta orang di seluruh dunia, dan kos atendan tahunan, untuk penyakit ini, telah melebihi kira-kira 10 bilion dolar [ 3, 4]. Penipisan estrogen mengganggu homeostasis tulang, mengubah pembezaan dan aktiviti osteoblas dan osteoklas dan oleh itu memainkan peranan yang sangat penting dalam permulaan dan perkembanganosteoporosisdan ia telah ditunjukkan sebagai faktor risiko utama untuk perkembangan menopauseosteoporosispada wanita [5, 6]. Ester estradiol dan estrogen terkonjugasi mempunyai kesan penindasan yang kuat padaosteoporosisaktiviti dalam tulang [7]. Pada masa ini, pemberian bifosfonat dan terapi penggantian estrogen (ERT) adalah dua bentuk utama rawatan dan pencegahanosteoporosismalah mengurangkan kejadian patah tulang dalam tempoh menopausosteoporosiswanita [8, 9]. Walau bagaimanapun, bifosfonat membawa kepada patah tulang atraumatik sebagai akibat daripada keadaan adinamik yang serupa dengan yang diterangkan pada pesakit yang menjalani hemodialisis penyelenggaraan kronik [10], dan rawatan estrogen jangka panjang disertai dengan kesan sampingan yang tidak diingini, terutamanya insiden jantung koronari yang lebih tinggi. penyakit, kanser payudara invasif, strok, embolisme pulmonari, kanser endometrium, kanser kolorektal, dan patah tulang pinggul [11]. Oleh itu, strategi rawatan baru yang berkesan dan selamat untukosteoporosisamat diperlukan.
Cistanche tubulosa (Schrenk) R. Wight (tumbuhan parasit Orobanchaceae)diedarkan secara meluas di Afrika Utara dan negara-negara Asia, dan batang C. tubulosa biasanya digunakan untuk merawat kekurangan buah pinggang dan penyakit neurodegeneratif sebagai agen penggalak [12].ECH (echinacoside) (Rajah 1) adalah salah satu juzuk utama Herba perubatan tradisional Cina yang terkenalCistanches(batangCistanchedeserticola,Cistanchesalsa, atauCistanchetubulosa) [13]. Penyelidikan menunjukkan bahawaECH (echinacoside), sebagai sebatian polifenol semulajadi, mempunyai pelbagai jenis aktiviti farmakologi, seperti antioksidatif, anti-radang, neuroprotektif, hepatoprotektif, pemusnah radikal nitrik oksida [14], dan vasodilatasi [15]. Pada masa ini, tiada laporan tersedia mengenai kesan terapeutikECH (echinacoside) dan penyelamatannyaECH (echinacoside) padaosteoporosisdalam model tikus OVX.
Rajah 1: Struktur kimia echinacoside daripada cistanche tubulosa
Kajian terdahulu kami menunjukkan bahawaECH (echinacoside)boleh merangsang pertumbuhan semula tulang melalui peningkatan nisbah OPG/RANKL dalam sel MC3T3-E1 [16]. Ini menunjukkan bahawaECH (echinacoside)memerlukan siasatan lanjut. Untuk menyiasat lebih lanjut ini, kami menjalankan eksperimen dalam model tikus OVX [17], model standard untuk penyiasatan morfologi danECH (echinacoside)perubahan selepas rawatan yang berbeza untukosteoporosis. Dalam laporan ini, kami menilai kesan 12 mingguECH (echinacoside)rawatan untuk parameter biokimia dalam serum, kualiti tulang, mikroarkitektur tulang dan imunohistokimia, serta penunjuk keselamatan termasuk parameter lipid, antigen karsinoembrionik (CEA) dan tahap antigen kanser 125 (CA-125) dalam serum dan rahim serta susu histologi kelenjar dalam tikus OVX. Paling penting, kami mula-mula melaporkan kesan daripadaECH (echinacoside)pada sistem OPG/RANKL dengan memeriksa paras OPG/RANKL serum dan tulang.
Cistanche tubulosa
2. Bahan-bahan dan cara-cara
2.1. Bahan Tumbuhan dan Haiwan.
Batang segar daripadaCistanchetubulosa(Schrenk) R. Wight, yang dituai pada November 2010 di Xinjiang, China, telah dibeli daripada Institut Ekologi dan Geografi Akademi Sains Cina di Xinjiang, China. Bahan-bahan tersebut telah dikenal pasti oleh Profesor Ping Li, Sekolah Perubatan Tradisional Cina, Universiti Farmaseutikal China. Spesimen baucar (No.02369433) telah disimpan di makmal kami di China Pharmaceutical University.
Semua bahan dikeringkan pada suhu bilik hingga berat tetap.ECH (echinacoside)telah diasingkan dan ditulenkan daripada ekstrak etanol daripadaCistanchetubulosa(Schenk) R. Wight oleh makmal kami mengikut kaedah yang dilaporkan sebelum ini [18] dengan sedikit pengubahsuaian, dan strukturnya disahkan oleh spektroskopi UV, IR, MS, dan NMR. Ketulenannya (98.5 peratus ) ditentukan oleh Agilent 1260 Series HPLC dengan pengesan DAD (Agilent Scientific, Co., USA). 17-estradiol (E2, Sigma; ketulenan Lebih daripada atau sama dengan 98 peratus ) digunakan sebagai kawalan positif.
Echinacoside dari Cistanche tubulosa
2.2. Rawatan Farmaseutikal.
Tikus dibahagikan secara rawak kepada enam kumpulan (8 tikus dalam setiap kumpulan): dikendalikan secara palsu (SHAM), ovariektomi dua hala (OVX), rawatan OVX dan E2, dan tiga lagi OVX dan dos berbeza bagiECH (echinacoside)kumpulan rawatan. Semua tikus telah dibius melalui suntikan intraperitoneal (ip) 300 mg/kg chloral hydrate (Sinopharm, China) dan kemudian diovariektomi pada minggu 0 dan kumpulan SHAM menjalani ovariektomi palsu. Prosedur pembedahan dilakukan di bawah keadaan aseptik mengikut protokol Penjagaan Haiwan Universiti Farmaseutikal Universiti China. Tikus dibiarkan tanpa rawatan selama 4 minggu untuk membolehkan tikus pulih dan mengalami osteopenia. Selepas 4 minggu, tikus dalam kumpulan OVX dan E2 menerima pentadbiran intragastrik (ig) harian E2 (50g/kg/hari) selama 12 minggu; tikus palsu dan OVX dikenakan pentadbiran intragastrik harian sebanyak 0.5 peratus CMC-Na (Sinopharm, China) sebagai kenderaan. E2 danECH (echinacoside)telah dilarutkan dalam kenderaan sebanyak 0.5 peratus CMC-Na, dan tikus dalam OVX danECH (echinacoside)kumpulan menerima pentadbiran ig harian daripadaECH (echinacoside)(ECH-L, 30 mg/kg/hari; ECH-M, 90 mg/kg/hari; dan ECH-H, 270 mg/kg/hari) masing-masing selama 12 minggu. Berat badan diukur setiap minggu, danECH (echinacoside)dos telah diselaraskan dengan sewajarnya.
2.3. Euthanasia Haiwan dan Pengumpulan Spesimen.
Semasa nekropsi, darah dikumpulkan dari arteri karotid di bawah bius am pada awal pagi. Darah dibiarkan membeku dan disentrifugasi pada 3,000 ×g selama 10 minit. Serum dituai dan disimpan pada suhu −20∘C sehingga digunakan untuk ujian biokimia. Selepas euthanasia haiwan, femora telah diasingkan untuk BMD, Micro-CT, dan ECH (echinacoside) dan analisis imunohistokimia, dan kelenjar susu dan rahim dikeluarkan, dibebaskan daripada lemak, dan difiksasi dalam larutan formaldehid penampan 10 peratus natrium fosfat (PBS) (PH 7.4) dan kemudian disimpan pada suhu 4∘C sehingga digunakan untuk penilaian histologi dan imunohistokimia untuk menilai keselamatan daripadaECH (echinacoside)
2.4. Penilaian Keberkesanan.
2.4.1. Analisis Biokimia Serum.
Fosfatase alkali (ALP) diketahui dikaitkan dengan metabolisme tulang dan pembezaan osteoblas dan aktivitinya adalah salah satu penunjuk yang paling biasa bagi pembezaan osteoblas dan sifat osteogenik [19]. Oleh itu, tahap ALP serum ditentukan menggunakan kit ujian aktiviti ALP (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute; Nanjing, China). Asid fosfatase 5b tahan tartrat (TRACP-5b), dirembeskan oleh osteoklas, berkorelasi dengan aktiviti penyerapan tulang dalam metabolisme tulang yang tidak normal [20]. Untuk penanda penyerapan tulang, tahap TRACP-5b diukur dengan kit ujian imunosorben berkaitan enzim (ELISA) (R&D Systems Inc.) dalam serum. Serum OPG dan RANKL juga telah diuji dengan kit ELISA (R&D Systems Inc.). Semua ukuran kit ELISA telah dilakukan mengikut protokol yang disediakan oleh pengeluar.
2.4.2.Pengukuran Ketumpatan Mineral Tulang.
Ketumpatan mineral tulang (BMD) daripada jumlah femora yang betul diukur dengan menggunakan penyerapan sinar-X dwi-tenaga Discovery W (DEXA, Hologic Inc., Boston MA, Amerika Syarikat) dilengkapi dengan perisian yang sesuai (edisi 13.1.2) untuk penilaian ketumpatan tulang dalam haiwan makmal kecil. Selepas imbasan, BMD dalam jumlah femora yang betul diperolehi untuk analisis statistik. Penyiasat yang melakukan pengukuran tidak mengetahui rawatan yang telah diterima oleh tikus.
2.5. Perangkaan.
Semua keputusan dibentangkan sebagai min ± sisihan piawai (SD). Perbezaan statistik antara kawalan palsu, kawalan OVX, dan kumpulan rawatan yang berbeza dianalisis menggunakan analisis varians sehala (ANOVA) diikuti dengan perbandingan berbilang post hoc menggunakan ujian-t perbezaan ketara terkecil (LSD) Fisher. Semua pengiraan dilakukan menggunakan SPSS Versi 15.0 untuk Windows (SPSS, Chicago, IL, USA). Dalam semua analisis, nilai P bagi<0.05 was="" considered="" to="" be="" statistically="">
3. Keputusan
3.1. Penilaian Keberkesanan
3.1.1. Analisis Biokimia Serum.
Tahap ALP serum dan penanda pusing ganti tulang TRACP-5b telah dinilai pada penghujung rawatan, OVX menghasilkan peningkatan ketara dalam paras ALP dan TRACP-5b serum berbanding kumpulan dikendalikan palsu. Selepas pentadbiran Echinacoside atau E2, paras serum ALP dan TRACP-5b telah dikurangkan dengan ketara dalam ketiga-tiga kumpulan Echinacoside atau kumpulan E2. Di samping itu, dos tinggi Echinacoside mempunyai paras terendah yang ketara iaitu 25.82 peratus dan 38.05 peratus berbanding kumpulan OVX (P< 0.01).="" all="" three="" doses="" of="" echinacoside="" treatments="" had="" a="" similar="" effect="" as="" e2="" in="" changing="" bone="" turnover="" markers="">< 0.05).="" at="" the="" end="" of="" the="" protocol,="" assays="" for="" serum="" opg="" and="" rankl="" levels="" were="" performed.="" all="" doses="" of="" echinacoside="" treatment="" groups="" had="" significantly="" higher="" levels="" of="" opg="" and="" opg/rankl="" ratios,="" as="" well="" as="" significantly="" lower="" rankl="" levels="" than="" e2-treated="" or="" vehicle-treated="" ovx="" groups="" (table="" 1).="" the="" highest="" levels="" of="" opg="" and="" opg/rankl="" ratios="" were="" observed="" in="" the="" ech-h="">(Echinacoside) kumpulan rawatan, 150.14 peratus, dan 197.64 peratus, masing-masing, berbanding kumpulan OVX (P<0.01). however,="" no="" differences="" in="" rankl="" levels="" and="" the="" opg/rankl="" ratio="" were="" observed="" in="" the="" e2="" group,="" as="" compared="" with="" the="" ovx="">
3.1.2. Penilaian BMD.
Keputusan jumlah BMD femur oleh DXA dibentangkan dalam Jadual 2. Seperti yang dijangkakan, jumlah BMD femur telah menurun sebanyak OVX berbanding dengan kumpulan SHAM (P< 0.01).="" however,="" all="" the="" treated="" groups="" significantly="" increased="" bmd="" than="" the="" ovx="" group="" after="" 12="" weeks="" of="" treatment="">< 0.01),="" but="" no="" significant="" difference="" was="" found="" between="" treated="" groups.="" the="" three="">(Echinacoside)kumpulan yang dirawat meningkatkan jumlah BMD femur kepada 109.25 peratus , 115.27 peratus dan 124.53 peratus , masing-masing berbanding kumpulan OVX. E2 meningkatkan jumlah BMD femur kepada 113.82 peratus berbanding kumpulan OVX.
3.1.3. Tomografi Pengiraan Mikro (Micro-CT).
Pengimbasan mikro-CT adalah kaedah yang sangat tepat untuk mengukur seni bina vertebra kerana ia mengukur struktur trabekular dalam tiga dimensi. Keputusan kuantitatif kawasan metaphyseal berhampiran dengan plat pertumbuhan femur distal dari penilaian Mikro-CT dinyatakan sebagai BV / TV, Tb. N, Tb.Sp, Tb.Th, dan SMI dalam Jadual 2. Parameter Mikro-CT Trabekular dalam Jadual 2 menunjukkan bahawa OVX menyebabkan penurunan ketara dalam BV/TV, Tb. N, dan Tb.Th dan peningkatan dalam Tb.Sp dan SMI (P< 0.01).="" furthermore,="" the="" indices="" bv/tv,="" tb.="" n,="" and="" tb.="" thin="" ech-h="">(Echinacoside)kumpulan adalah jauh lebih tinggi daripada kumpulan OVX (P< 0.01="" for="" bv/tv,="" and="" tb.th,="">< 0.05="" for="" tb.n),="" and="" ech-h="">(Echinacoside)rawatan dengan ketara meningkatkan nilai BV/TV sebanyak 169.23 peratus , Tb.N sebanyak 157.73 peratus , dan Tb. Th sebanyak 148.23 peratus berbanding kumpulan OVX. Di samping itu, ECH-H juga menghalang peningkatan yang disebabkan oleh OVX dalam tahap Tb.Sp dan SMI (P<0.01 for="" tb.sp,="">< 0.05="" for="" smi).="" the="" preventive="" effects="" of="" echinacoside="" on="" trabecular="" bone="" mass="" and="" microarchitecture="" deterioration="" are="" further="" proved="" by="" the="" 3d="" micro-ct="" images="" (ovx="" group="" presented="" a="" notable="" reduction="" in="" the="" trabecular="" number="" and="" trabecular="" area="" when="" compared="" with="" the="" sham="" group.="" echinacoside="" and="" e2="" partially="" prevented="" ovx="" induced="" bone="" loss="" and="" significantly="" improved="" the="" trabecular="" bone="" mass="" and="">
3.1.4. Lenturan Tiga Titik Femur.
Keputusan eksperimen lenturan tiga mata biomekanikal ditunjukkan dalam Jadual 2. Penurunan ketara dalam beban muktamad, kekakuan, dan penyerapan tenaga diperhatikan dalam kumpulan OVX berbanding dengan kumpulan SHAM (P< 0.01).="" echinacoside="" treatment="" improved="" bone="" mechinacosideanical="" strength,="" evidenced="" by="" increased="" levels="" of="" ultimate="" load,="" stiffness,="" and="" energy="" absorption=""><0.01 for="" ultimate="" load="" and="" energy="" absorption,="">< 0.05="" for="" stiffness);="" however,="" no="" significant="" difference="" was="" observed="" among="" the="" three="">ECH (Echinacoside)-kumpulan yang dirawat. Nilai mEchinacosideanical ECH-H(Echinacoside)kumpulan dirawat telah meningkat sebanyak 55.51 peratus untuk beban muktamad, 34.05 peratus untuk kekakuan, dan 183.33 peratus untuk penyerapan tenaga berbanding kumpulan OVX yang dirawat kenderaan (P<0.01). e2="" increased="" ultimate="" load="" by="" 49.51%,="" stiffness="" by="" 28.63%,="" and="" energy="" absorption="" by="" 55.56%="" compared="" to="" the="" ovx="" group,="" respectively,="" but="" its="" effect="" on="" mechinacosideanical="" values="" was="" less="" than="" the="">ECH-H (Echinacoside)kumpulan.
3.2. Penilaian Keselamatan
3.2.1. Analisis Serum.
Kesan pada profil lipid diringkaskan. Pada minggu ke-12, E2 menunjukkan peningkatan daripada garis dasar dalam tahap TC dan TG. Tiga dos ECH (Echinacoside)(ECH-L,ECH-M, danECH-H) mengurangkan tahap TC dan TG berbanding kumpulan OVX dan SHAM. Di samping itu, ECH-H(Echinacoside)kumpulan menurunkan tahap TG dengan ketara sebanyak 30.87 peratus berbanding OVX (P< 0.05),="" or="" by="" 19.07%="" versus="" the="" sham="" group="">< 0.05).="" moreover,="" the="" effects="" of="">ECH (Echinacoside) -L danECH (Echinacoside)-M pada tahap TG adalah marginal. Pada penghujung protokol, pengukuran untuk tahap CEA dan CA-125 serum telah dikumpul seperti ditunjukkan dalam Jadual 3. Kumpulan E2 meningkatkan tahap CEA dan CA-125 dengan ketara sebanyak 54.38 peratus dan 59.58 peratus berbanding OVX ( P< 0.01),="" or="" by="" 49.53%,="" 28.87%="" versus="" sham="" group="">< 0.01).="" all="" doses="" of="" ech="">Echinacoside) pentadbiran mengakibatkan pengurangan yang ketara dalam paras CA-125 serum (P< 0.05)="" compared="" to="" the="" sham="" group,="" but="" echinacoside="" did="" not="" show="" any="" significant="" effect="" on="" the="" serum="" cea="" concentrations="" versus="" the="" sham="" group="" or="" ovx="" group.="" in="" addition,="" the="" ech-h="">Echinacoside)kumpulan menurunkan tahap CA-125 dengan ketara sebanyak 29.31 peratus berbanding kumpulan OVX (P<0.05), or="" by="" 42.91%="" versus="" the="" sham="" group="">< 0.01).="" all="" doses="" of="" echinacoside="" administration="" resulted="" in="" a="" notable="" reduction="" in="" the="" serum="" ca-125="" and="" cea="" levels="">< 0.01)="" compared="" to="" the="" e2="" group.="" moreover,="" the="" ech-h="">Echinacoside)kumpulan menurunkan tahap CA-125 dan CEA dengan ketara masing-masing sebanyak 44.30 peratus dan 64.70 peratus, berbanding kumpulan E2.
3.2.2. Histologi dan Imunohistokimia Rahim dan Kelenjar Susu.
Kejadian buruk yang paling biasa pada kelenjar uteri dan susu tidak diperhatikan di antara semua kumpulan tetapi bukan kumpulan E2 (Jadual 3). Pemberian E2 (50g/kg/hari) selama 12 minggu meningkatkan ketebalan endometrium dan percambahan kelenjar susu berbanding kumpulan OVX atau SHAM. Tambahan pula, tiga kelenjar susu ekspresi CEA juga boleh dikesan dalam kumpulan E2 dengan analisis imunohistokimia, tetapi tiada rahim. Kumpulan rawatan Echinacoside tidak dikaitkan dengan sebarang kelainan pada rahim dan kelenjar susu.
Rujukan
[1]T. Nakamura, T. Matsumoto, T. Sugimoto, dan M. Shiraki, "Kajian tindak balas dos denosumab pada ketumpatan mineral tulang dan penanda pusing ganti tulang dalam wanita menopause Jepun denganosteoporosis," OsteoporosisAntarabangsa, jld. 23, hlm. 1131–1140, 2012.
[2]XL Wang, LZ Zhen, G. Zhang, MS Wong, L. Qin, dan XS Yao, "Kesan osteogenik aglikon flavonoid daripada pecahan osteoprotektif Drynaria dalam kajian keberkesanan in vitro," Phytomedicine, vol. 18, tidak. 10, hlm. 868–872, 2011.
[3]JY Reginster dan N. Burlet, "Osteoporosis: kelaziman yang masih meningkat," Bone, vol. 38, no. 2, tambahan 1, ms S4–S9, 2006.
[4]A. Katrina dan BE McDonald, Satu penyiasatan eksperimen dan unsur terhingga terhadapEchinacosidepatah mampatan vertebra [Ph.D. disertasi], Queensland University of TEchinacosidenology, 2009.
[5]SC Manolagas, "Kelahiran dan kematian sel tulang: peraturan asasEchinacosidedan implikasi untuk patogenesis dan rawatanosteoporosis," Ulasan Endokrin, jld. 21, no. 2, hlm. 115– 137, 2000.
[6]BL Riggs, S. Khosla, dan LJ Melton, "Steroid seks dan pembinaan dan pemuliharaan rangka dewasa," Ulasan Endokrin, vol. 23, tidak. 3, hlm. 279–302, 2002.
[7]M. Tezval, EK Stuermer, S. Sehmisch, et al., "Peningkatan kualiti tulang trochanteric dalamosteoporosismodel selepas rawatan jangka pendek dengan hormon paratiroid: ujian mEchinacosideanical baru untuk kawasan trochanteric femur tikus,"OsteoporosisAntarabangsa, jld. 21, tidak. 2, hlm. 251–261, 2010.
[8]LN Li, Z. Zeng dan GP Cai, "Perbandingan neo dan naringin pada percambahan dan pembezaan osteogenik dalam MC3T3-E1," Phytomedicine, vol. 18, hlm. 985–989, 2011.
[9]W. Qi, YB Yan, W. Lei, ZX Wu, Y. Zhang, dan D. Liu, "Pencegahan tidak digunakanosteoporosisdalam tikus oleh ekstrak Cordyceps Sinensis,"OsteoporosisAntarabangsa, jld. 9, hlm. 2347–2357, 2012.
[10]CV Odvina, JE Zerwekh, DS Rao, N. Maalouf, FA Gottschalk, dan CYC Pak, "Perolehan tulang yang ditindas teruk: komplikasi terapi alendronate yang berpotensi," Jurnal Endokrinologi dan Metabolisme Klinikal, vol. 90, tidak. 3, hlm. 1294–1301, 2005.
[11]Kumpulan penulisan untuk Penyiasat Inisiatif Kesihatan Wanita, "Risiko dan faedah estrogen ditambah progestin dalam wanita selepas menopaus yang sihat," The Journal of the American Medical Association, vol. 288, hlm. 321–333, 2002.
[12]H. Kobayashi, H. Oguchi, N. Takizawa, et al., "BaruphenylethanoidglikosidadaripadaCistanchetubulosa," Buletin Kimia & Farmaseutikal, jld. 35, hlm. 3309–3314, 1987.
[13]S. Zhao, J. Gao, W. Li, dan D. Cai, "Kesan neurotropik dan penyelamat sarafEchinacosidedalam model tetikus MPTP subakut penyakit Parkinson," Brain Research, vol. 1346, ms. 224–236, 2010.
[14]CQ Jia, H. Shi, XM Wu, YZ Li, JJ Chen dan PF Tu, "PenentuanEchinacosidedalam serum tikus oleh kromatografi cecair berprestasi tinggi fasa terbalik dengan pengesanan ultraungu dan penggunaannya pada farmakokinetik dan bioavailabiliti," Journal of Chromatography B, vol. 844, no. 2, ms. 308–313, 2006.
[15]WJ He, TH Fang, X. Ma, K. Zhang, ZZ Ma dan PF Tu, "Echinacosidemenimbulkan kelonggaran yang bergantung kepada endothelium dalam cincin aorta tikus melalui laluan NO-cGMP," Planta Medica, vol. 75, no. 13, ms. 1400–1404, 2009.
[16]F. Li, YN Yang, PP Zhu et al., "Echinacosidemenggalakkan penjanaan semula tulang dengan meningkatkan nisbah OPG/RANKL dalam sel MC3T3-E1," Fitoterapia, jilid 8, ms. 1443–1450, 2012.
[17]A. Ishihara, T. Sasaki, K. Debari, et al., "Kesan ovariektomi pada morfologi tulang dalam maxillae tikus matang," Jurnal Mikroskop Elektron, vol. 48, tidak. 4, hlm. 465–469, 1999.
[18]L. Lei, ZH Song, PF Tu, LJ Wu dan FK Chen, "Separation ofEchinacosideoleh kromatografi cecair berprestasi tinggi persediaan fasa terbalik," Jurnal Kromatografi Cina, jilid 19, no. 3, ms. 200–202, 2001.
[19]L. Malaval, D. Modrowski, AK Gupta, dan JE Aubin, "Ekspresi selular protein berkaitan tulang semasa osteogenesis in vitro dalam kultur sel stromal sumsum tulang tikus," Jurnal Fisiologi Selular, vol. 158, no. 3, hlm. 555–572, 1994.
[20]W. Qi, YB Yan, W. Lei, ZX Wu, Y. Zhang, D. Liu, et al., "Pencegahan daripada tidak digunakanosteoporosisdalam tikus oleh ekstrak Cordyceps Sinensis,"OsteoporosisAntarabangsa, jld. 9, hlm. 2347–2357, 2012.
