Bahagian 2:Echinacoside Menghalang Pembebasan Glutamat Dengan Menekan Ca2 Bergantung Voltan serta Kemasukan Dan Protein Kinase C dalam Terminal Saraf Cerebrocortical Tikus
Mar 05, 2022
Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com
Cheng Wei Lu 1,2, Tzu Yu Lin 1,2, Shu Kuei Huang 1 dan Su Jane Wang 3,*
Sila klik di sini kembali ke Bahagian 1
3.2 Implikasi Terapeutik
Excitotoxicity, proses patologi yang disebabkan oleh pelepasan glutamat yang berlebihan dan pengaktifan reseptor glutamat, adalah punca utama kematian neuron dalam gangguan otak akut dan kronik seperti strok, kecederaan otak traumatik, Parkinson, dan penyakit Alzheimer [13,41], dan strategi terapeutik melibatkan perencatan pelepasan glutamat mungkin menjanjikan strategi neuroprotektif untuk merawat penyakit tersebut. Echinacoside telah disahkan untuk menembusi penghalang darah-otak (BBB) dan mempamerkan kesan neuroprotektif dalam pelbagai model in vivo neurotoksisiti [8,10-12,42]. Walaupun mekanisme kesan neuroprotektif ini tidak difahami sepenuhnya, beberapa mekanisme yang mungkin telah dilaporkan termasuk perencatan tindak balas inflamasi, penstabilan fungsi mitokondria, antioksida, penghapusan radikal bebas, dan fungsi neurotropik yang meniru [5,9,12,42]. Dalam kajian semasa, keupayaanechinacosideuntuk mengurangkan pembebasan glutamat dari terminal saraf juga boleh menjelaskan sebahagian mekanisme neuroprotektifnya. Walau bagaimanapun, sama ada kesan ini menyumbang kepada potensi terapeutik yang jelas bagiechinacosidedalam gangguan otak yang berkaitan dengan excitotoxicity glutamat memerlukan penyelidikan lanjut.
Kesan neuroprotektif daripadacistancdia echinacoside
4.Bahan dan Kaedah
4.1. Bahan kimia
Fura-2-acetoxymethyl ester (Fura-2-AM) dan 3',3',3'-dipropylthiadicarbocyanine iodide [DiSC3(5)] telah dibeli daripada Invitrogen (Carlsbad, CA, USA). o-conotoxin MVIIC, rottlerin, 2-[1-(3-dimethylaminopropyl)indol-3-yl]-3-(indol-3-yl) maleimide ( GF109203X), 5,6,7,13-tetrahydro- 13-metil-5-oxo-12H-indolo[2,3-a]pyrrolo[3,{ {27}}c]carbazole-12-propanenitrile (Go6976) dan N-[2-(p- bromocinnamylamino)ethyl]-5-isoquinolinesulfonamide (H89) telah dibeli daripada Tocris Bioscience (Bristol, UK ).Echinacoside, dantrolene, DL-threo-beta-benzyl-oxyaspartate (DL-TBOA), 7-chloro-5-(2-chloropheny)-1,5-dihydro{ {10}},1-benzothiazepin-2(3H)-satu (CGP37157), 2-(2-amino-3- methoxyphenyl)-4H -1-benzopyran-4-satu) (PD98059), etilena glikol bis(-aminoethyl ether)- N,N,N/,N/-tetraacetic acid (EGTA) dan semua reagen lain telah dibeli daripada Sigma- Aldrich Co. (St. Louis, MO, Amerika Syarikat).
4.2. Haiwan
Tikus Sprague-Dawley jantan berumur dua bulan telah digunakan. Haiwan ditempatkan di bawah keadaan persekitaran piawai (22 ± 1 oC; kelembapan relatif 50 peratus; kitaran cahaya/gelap 12 jam) dan membenarkan akses tanpa had kepada makanan dan air. Haiwan itu dibunuh dengan memenggal kepala dan korteks serebrum dikeluarkan dengan cepat pada suhu 4 oC. Prosedur eksperimen telah diluluskan oleh Jawatankuasa Penjagaan dan Penggunaan Haiwan Institusi Fu Jen (A10259), menurut Panduan Institut Kesihatan Kebangsaan untuk Penjagaan dan Penggunaan Haiwan Makmal. Segala usaha telah dibuat untuk meminimumkan penderitaan haiwan dan menggunakan bilangan minimum haiwan yang diperlukan untuk menghasilkan hasil yang boleh dipercayai.
4.3. Persediaan Sinaptosom
Sinaptosom telah disucikan daripada korteks serebrum tikus pada kecerunan Percoll yang tidak berterusan seperti yang diterangkan sebelum ini [43,44]. Secara ringkas, tisu telah dihomogenkan dalam medium yang mengandungi 0.32 M sukrosa (pH 7.4), homogenat diempar selama 10 min pada 3000 × g (5{{25} }00 rpm dalam rotor JA 25.5; Beckman Coulter, Inc., Miami, FL, Amerika Syarikat) dan 4 oC, dan supernatan itu diempar semula selama 12 minit pada 14,500× g (11, 000 rpm dalam rotor JA 25.5). Pelet itu digantung semula perlahan-lahan dalam sukrosa 0.32 M (pH 7.4), dan satu alikuot penggantungan sinaptosom ini (2 mL) diletakkan pada kecerunan tak selanjar 3 mL Percoll yang mengandungi sukrosa 0.32 M, 1 mM EDTA, 0.25 mM DL-ditidit, dan 0.25 mM. 3 peratus , 10 peratus dan 23 peratus Percoll (pH 7.4). Selepas sentrifugasi pada 32,500 × g (16,500 rpm dalam rotor JA 20.5) selama 7 minit pada 4 oC, sinaptosom diperolehi daripada antara 10 peratus dan 23 peratus jalur Percoll, dan ia dicairkan dalam isipadu akhir 30 mL Medium penimbal HEPES (140 mM NaCl, 5 mM KCl, 5 mM NaHCO3, 1 mM MgCl2﹒ 6H2O, 1.2 mM Na2HPO4, 10 mM glukosa, dan 10 mM HEPES (pH 7.4)). Selepas sentrifugasi selanjutnya pada 27,000 × g (15,000 rpm dalam JA 25.5) selama 10 minit, pelet sinaptosom digantung semula dalam 3 mL medium penimbal HEPES, dan kandungan protein ditentukan menggunakan ujian Bradford. Akhirnya, 0.5 mg suspensi sinaptosom telah dicairkan dalam 10 ml medium penimbal HEPES dan disentrifugasi pada 3000 × g (5000 rpm dalam rotor JA 20.1) selama 10 minit. Supernatan dibuang, dan pelet yang mengandungi sinaptosom disimpan di atas ais dan digunakan dalam masa 4-6 jam.
herba cistanche
4.4. Pelepasan Glutamat
Pelepasan glutamat telah diuji oleh fluorimetri dalam talian seperti yang diterangkan sebelum ini [45,46]. Pelet sinaptosom digantung semula dalam medium penimbal HEPES (0.5 mg/mL) dan prainkubasi pada suhu 37 oC selama 10 minit dengan kehadiran albumin serum lembu 16 uM untuk mengikat sebarang asid lemak bebas yang dikeluarkan daripada sinaptosom semasa prainkubasi. Alikuot 2-mL sinaptosom dipindahkan ke kuvet kacau yang mengandungi 2 mM NADP tambah, 50 unit glutamat dehidrogenase, dan 1.2 mM CaCl2, dan pendarfluor NADPH diukur dalam Perkin-Elmer LS{{14 }} spektrofluorimeter (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, USA) pada pengujaan dan panjang gelombang pancaran masing-masing 340 dan 460 nm. Oleh kerana sinaptosom tidak boleh menerima rangsangan elektrik, penyekat saluran kalium 4-aminopyridine telah digunakan untuk merangsang pembebasan glutamat. 4-aminopyridine menjejaskan kestabilan potensi membran dan dianggap menyebabkan penyahkutuban bergantungan saluran Na+ spontan berulang yang menghampiri depolarisasi in vivo terminal sinaptik yang membawa kepada pengaktifan saluran Ca2 tambah yang bergantung kepada voltan dan pelepasan neurotransmitter [47 ]. Data diperolehi pada selang 2 s. Satu piawai glutamat eksogen (5 nmol) telah ditambah pada akhir setiap eksperimen. Nilai perubahan pendarfluor yang dihasilkan oleh penambahan standard digunakan untuk mengira glutamat yang dibebaskan sebagai nanomol glutamat setiap miligram protein sinaptosom (nmol/mg). Nilai keluaran yang dipetik dalam teks ialah tahap yang dicapai pada keadaan mantap selepas 5 minit penyahkutuban (nmol/mg/5 min). Data kumulatif dianalisis menggunakan hamparan Lotus 1-2-3 (IBM, White Plains, NY, USA) dan MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA).
4.5. Potensi Membran Plasma
Potensi membran plasma ditentukan dengan pewarna sensitif berpotensi membran, DiSC3(5) [48]. Sinaptosom telah digantung semula dalam medium penimbal HEPES, dan 2 mL aliquot dipindahkan ke kuvet kacau yang mengandungi 5 uM DiSC3(5) pada 37 oC dalam spektrofluorometer Perkin–Elmer LS-55 (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham , USA). Selepas membenarkan campuran untuk mengimbangi selama 3 minit, pendarfluor ditentukan pada pengujaan dan pancaran panjang gelombang 646 dan 674 nm, masing-masing. Data dikumpul pada selang 2 s. Data kumulatif dianalisis menggunakan MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA) dan dinyatakan dalam unit pendarfluor.
4.6. Kepekatan Ca2 tambah sitosol ([Ca2 tambah ]C)
[Ca2 tambah ]C diukur dengan penunjuk Ca2 tambah fura-2. Sinaptosom (0.5 mg/mL) telah dipraeramkan dalam medium penimbal HEPES yang mengandungi 5 uM fura-2 dan 0.1 mM CaCl2, selama 30 minit pada suhu 37 oC dalam tabung uji kacau . Selepas fura{12}} dimuatkan, sinaptosom telah disentrifugasi dalam mikrosentrifuge selama 30 saat pada 3000× g (5000 rpm). Pelet sinaptosom digantung semula dalam medium penimbal HEPES dan penggantungan sinaptosom dikacau dalam kuvet termostat dalam spektrofluorometer Perkin-Elmer LS-55 (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, USA). CaCl2 (1 mM) ditambah selepas 3 minit dan penambahan selanjutnya dibuat selepas 10 minit tambahan. Data pendarfluor terkumpul pada panjang gelombang pengujaan 340 dan 380 nm (panjang gelombang pelepasan 505 nm) pada selang 2 s. [Ca2 tambah ]C (nM) dikira menggunakan prosedur penentukuran [49] dan persamaan yang diterangkan sebelum ini [50]. Data kumulatif dianalisis menggunakan MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA).
4.7. Western Blotting
Sinaptosom telah dihomogenkan dalam penimbal lisis (penimbal 10 mM HEPES, pH 7.4), 1 peratus Triton X-100 dan campuran perencat protease. Lysates telah dijelaskan dengan sentrifugasi, dan kepekatan protein ditentukan menggunakan kit ujian protein (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA). Jumlah protein yang sama dipisahkan oleh elektroforesis gel sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide (SDS-PAGE) dan dipindahkan ke membran nitrocellulose. Membran telah disekat dengan garam Tris-buffered yang mengandungi 5 peratus susu rendah lemak dan diinkubasi dengan antibodi primer yang sesuai (phospho-protein kinase C (pan), 1:3000, NOVUS Biologicals Inc., Beverly, MA, USA) semalaman pada 4 oC. Selepas tiga kali cucian dalam garam Tris-buffered, membran itu kemudiannya dirawat dengan antibodi terkonjugasi peroksidase lobak pedas sekunder (1:3000) selama 1 jam pada suhu bilik. Membran kemudian dibasuh sekurang-kurangnya tiga kali dengan garam Tris-buffered dan divisualisasikan menggunakan sistem chemiluminescence yang dipertingkatkan (Amersham, Buckinghamshire, UK). Aliquot sampel telah dimuatkan dan disiasat dengan antibodi anti-PKC untuk pengesanan PKC sebagai kawalan pemuatan. Tahap ekspresi atau fosforilasi dinilai oleh ketumpatan jalur, yang dikira dengan densitometri. Kuantiti densitometri jalur dianalisis menggunakan perisian Syngene (Synoptics, Cambridge, UK).
4.8. Analisis statistik
Data diperoleh daripada penyediaan sinaptosom tunggal dan tidak bebas antara satu sama lain. Untuk menguji kepentingan kesan ubat berbanding kawalan, ujian t Pelajar dua ekor telah digunakan. Apabila perbandingan tambahan diperlukan (seperti sama ada rawatan kedua mempengaruhi tindakan echinacoside), ANOVA sehala diikuti dengan ujian Tukey digunakan. Analisis telah diselesaikan melalui perisian SPSS (17.0; SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Data dinyatakan sebagai min ± SEM; kesignifikan telah dinilai pada p < 0.05="" untuk="" semua="" ukuran="">
cistanche
5. Kesimpulan
Ini adalah kajian pertama yang menunjukkan bahawa echinacoside menghalang pembebasan glutamat daripada sinaptosom serebrokortikal tikus dengan mengurangkan kemasukan Ca2 ditambah melalui saluran Cav2.2 dan Cav2.1, dan perencatan pelepasan ini mungkin bergantung pada penindasan laluan protein kinase C, sekurang-kurangnya dalam bahagian. Penemuan sekarang adalah berharga kerana ia memberikan gambaran baru tentang mekanisme tindakan echinacoside dalam otak.
Penghargaan: Kerja ini disokong oleh geran daripada Kementerian Sains dan Teknologi (PALING 103-2320-B-030-001 MY3).
Sumbangan Pengarang: Tzu Yu Lin dan Su Jane Wang menyusun dan mereka bentuk eksperimen; Cheng Wei Lu melakukan eksperimen; Cheng Wei Lu dan Shu Kuei Huang menganalisis data; Su Jane Wang menulis kertas itu.
Konflik Kepentingan: Pengarang mengisytiharkan tiada percanggahan kepentingan.
ekstrak herba cistanche
Rujukan
1. Tu, PF; Wang, B.; Deyama, T.; Zhang, ZG; Lou, ZC Analisis glikosida phenylethanoid daripada Herba cistanchis oleh RP-HPLC. Acta Pharm. Dosa. 1997, 32, 294–300.
2. Dalby-Brown, L.; Barnett, H.; Landbo, AK; Meyer, AS; Molgaard, P. Kesan antioksidatif sinergistik alkamida, derivatif asid kafeik, dan pecahan polisakarida daripada Echinacea purpurea pada pengoksidaan in vitro lipoprotein berketumpatan rendah manusia. J. Agric. Kimia Makanan. 2005, 53, 9413–9423. [CrossRef] [PubMed]
3. Dapas, B.; Dall'Acqua, S.; Bulla, R.; Agostinis, C.; Perissutti, B.; Invernizzi, S.; Grassi, G.; Voinovich, D. Imunomodulasi yang dimediasi oleh sirap herba yang mengandungi ekstrak akar Echinacea standard: Kajian rintis dalam subjek manusia yang sihat mengenai ekspresi gen sitokin. Phytomedicine 2014, 21, 1406–1410. [CrossRef] [PubMed]
4. Beliau, WJ; Fang, TH; Tu, PF Penyelidikan kemajuan mengenai aktiviti farmakologi echinacoside. China J. Chin. Mater. Med. 2009, 34, 476–479.
5. Deng, M.; Zhao, JY; Tu, PF; Jiang, Y.; Li, ZB; Wang, YH Echinacoside menyelamatkan sel neuron SHSY5Y daripada apoptosis yang disebabkan oleh TNFalpha. Eur. J. Pharmacol. 2004, 505, 11–18. [CrossRef] [PubMed]
6. Koo, KA; Sung, SH; Park, JH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC Aktiviti neuroprotektif in vitro glikosida phenylethanoid daripada Callicarpa dichotoma. Planta Med. 2005, 71, 778–780. [CrossRef] [PubMed]
7. Wang, YH; Xuan, ZH; Tian, S.; Du, GH Echinacoside Melindungi daripada 6-Hydroxydopamine-Induced Mitochondrial Dysfunction and Inammatory Response in ammatory Cells in PC12 Cells melalui Mengurangkan Pengeluaran ROS. Evid. Pelengkap Berasaskan. Altern. Med. 2015, 2015, 189239. [CrossRef] [PubMed]
8. Zhu, M.; Lu, C.; Li, W. Pendedahan sementara kepada echinacoside adalah mencukupi untuk mengaktifkan isyarat Trk dan melindungi sel neuron daripada rotenone. J. Neurochem. 2013, 124, 571–580. [CrossRef] [PubMed]
9. Geng, X.; Tian, X.; Tu, P.; Pu, X. Kesan neuroprotektif echinacoside dalam model MPTP tetikus penyakit Parkinson. Eur. J. Pharmacol. 2007, 564, 66–74. [CrossRef] [PubMed]
10. Wei, LL; Chen, H.; Jiang, Y.; Tu, PF; Zhong, M.; Du, J.; Liu, F.; Wang, L.; Liu, CY Kesan echinacoside pada tahap histio-pusat jisim aktif dalam tikus oklusi arteri serebrum tengah. Berbiomed. alam sekitar. Sci. 2012, 25, 238–244. [PubMed]
11. Wu, CR; Lin, HC; Su, MH Pembalikan oleh ekstrak berair Cistanche tubulosa daripada defisit tingkah laku dalam model tikus seperti penyakit Alzheimer: Perkaitan untuk pemendapan amiloid dan fungsi neurotransmitter pusat. Pelengkap BMC. Altern. Med. 2014, 14, 202. [CrossRef] [PubMed]
12. Zhao, Q.; Gao, J.; Li, W.; Cai, D. Kesan neurotropik dan neurorescue Echinacoside dalam model tetikus MPTP subakut penyakit Parkinson. Otak Re. 2010, 1346, 224–236. [CrossRef] [PubMed]
13. Meldrum, BS Glutamat sebagai neurotransmitter di otak: kajian fisiologi dan patologi. J. Nutr.2000, 130, 1007S–1015S. [PubMed]
14. Lee, D.; Shim, MS; Kim, KY; Tidak, YH; Kim, H.; Kim, SY; Weinreb, RN; Ju, WK Coenzyme Q10 menghalang excitotoxicity glutamat dan perubahan mitokondria pengantara tekanan oksidatif dalam model tetikus glaukoma. menyiasat. Oftalmol. Vis. Sci. 2014, 55, 993–1005. [CrossRef] [PubMed]
15. Choi, DW Kalsium dan kecederaan neuron excitotoxic. Ann. NY Acad. Sci. 1994, 747, 162–171. [CrossRef][PubMed]
16. Lau, A.; Tymianski, M. Reseptor glutamat, neurotoksisiti dan neurodegenerasi. Pgers. Gerbang. 2010, 460, 525–542. [CrossRef] [PubMed]
17. Sattler, R.; Tymianski, M. Mekanisme molekul kematian sel neuron eksitotoksik yang dimediasi reseptor glutamat. Mol. Neurobiol. 2001, 24, 107–129. [CrossRef]
18. Schauwecker, PE Neuroprotection oleh antagonis reseptor glutamat terhadap kematian sel eksitotoksik yang disebabkan oleh sawan dalam otak yang semakin tua. Exp. Neurol. 2010, 224, 207–218. [CrossRef] [PubMed]
19. Yeganeh, F.; Nikbakht, F.; Bahmanpour, S.; Rastegar, K.; Namavar, R. Kesan neuroprotective NMDA dan antagonis reseptor glutamat metabotropik kumpulan I terhadap neurodegeneration yang disebabkan oleh homocysteine dalam hippocampus tikus: Kajian in vivo. J. Mol. Neurosci. 2013, 50, 551–557. [CrossRef] [PubMed]
20. Doble, A. Peranan excitotoxicity dalam penyakit neurodegenerative: implikasi untuk terapi. Pharmacol. Ther.1999, 81, 163–221. [CrossRef]
21. Muir, KW Pendekatan terapeutik berasaskan Glutamat: Percubaan klinikal dengan antagonis NMDA. Curr. Pendapat. Pharmacol. 2006, 6, 53–60. [CrossRef] [PubMed]
22. González, JC; Egea, J.; del Carmen Godino, M.; Fernandez-Gomez, FJ; Sánchez-Prieto, J.; Gandía, L.; Garcia, AG; Jordan, J.; Hernández-Guijo, JM Neuroprotectant minocycline menekan neurotransmisi glutamatergik dan Ca2 ditambah isyarat dalam neuron hippocampal. Eur. J. Neurosci. 2007, 26, 2481–2495. [CrossRef] [PubMed]
23. Lu, CW; Lin, TY; Wang, SJ Memantine menekan pembebasan glutamat melalui perencatan kemasukan Ca2 ditambah yang bergantung kepada voltan dan protein kinase C dalam terminal saraf korteks serebrum tikus: Mekanisme bebas reseptor NMDA. Neurokim. Int. 2010, 57, 168–176. [CrossRef] [PubMed]
24. Wang, SJ; Sihra, TS Noncompetitive metabotropic glutamat 5 receptor antagonis (E)-2-methyl-6- styryl-pyridine (SIB1893) menekan pembebasan glutamat melalui perencatan kemasukan Ca2 yang bergantung kepada voltan dalam terminal saraf serebrokortikal tikus (sinaptosom). J. Pharmacol. Exp. Di sana. 2004, 309, 951–958. [CrossRef] [PubMed]
25. Dunkley, PR; Jarvie, PE; Heath, JW; Kidd, GJ; Rostas, JA Kaedah pantas untuk pengasingan sinaptosom pada kecerunan Percoll. Otak Re. 1986, 372, 115–129. [CrossRef]
26. Araque, A.; Li, N.; Doyle, RT; Haydon, PG SNARE pembebasan glutamat yang bergantung kepada protein daripada astrocytes.J. Neurosci. 2000, 20, 666–673. [PubMed]
27. Dunlop, J. Pendekatan terapeutik berasaskan glutamat: Menyasarkan sistem pengangkutan glutamat.
Curr. Pendapat. Pharmacol. 2006, 6, 103–107. [CrossRef] [PubMed]
28. Zucchi, R.; Ronca-Testoni, S. Retikulum sarkoplasma Ca2 ditambah saluran/reseptor ryanodin: Modulasi oleh pengesan endogen, ubat dan keadaan penyakit. Pharmacol. Wahyu 1997, 49, 1–51. [PubMed]
29. Fan, Y.; Li, J.; Zhang, YQ; Jiang, LH; Zhang, YN; Yan, CQ Protein kinase C delta mengantara sitotoksisiti 6-Hydroxydopamine melalui pengaktifan kinase 1/2 terkawal isyarat ekstraselular yang berterusan dalam sel PC12. Neurol. Res. 2014, 36, 53–64.[CrossRef] [PubMed]
30. Gschwendt, M.; Müller, HJ; Kielbassa, K.; Zang, R.; Kittstein, W.; Rincke, G.; Marks, F. Rottlerin, perencat kinase protein novel. Biokim. Biophys. Res. Commun. 1994, 199, 93–98. [CrossRef] [PubMed]
31. Nicholls, DG; Sihra, TS; Sanchez-Prieto, J. Pembebasan glutamat yang bergantung kepada kalsium dan bebas daripada sinaptosom yang dipantau oleh fluorometri berterusan. J. Neurochem. 1987, 49, 50–57. [CrossRef] [PubMed]
32. Nicoll, RA Gandingan reseptor neurotransmitter kepada saluran ion dalam otak. Sains 1988, 241,545–551. [CrossRef] [PubMed]
33. Wu, LG; Saggau, P. Perencatan presinaptik pelepasan neurotransmitter yang ditimbulkan. Trend Neurosci. 1997, 20, 204–212. [CrossRef]
34. Turner, TJ; Dunlap, K. Pencirian farmakologi saluran kalsium presinaptik menggunakan ukuran biokimia subsaat perembesan neuro sinaptosom. Neuropharmacology 1995, 34, 1469–1478. [CrossRef]
35. Millan, C.; Sanchez-Prieto, J. Gandingan pembezaan saluran kalsium jenis N- dan P/Q kepada eksositosis glutamat dalam korteks serebrum tikus. Neurosci. Lett. 2002, 330, 29–32. [CrossRef]
36. Vazquez, E.; Sanchez-Prieto, J. Presynaptic modulasi pelepasan glutamat mensasarkan saluran kalsium yang berbeza dalam terminal saraf serebrokortikal tikus. Eur. J. Neurosci. 1997, 9, 2009–2018. [CrossRef] [PubMed]
37. Long, P.; Mercer, A.; Begum, R.; Stephens, GJ; Sihra, TS; Jovanovic, Terminal Saraf JN Reseptor GABAA Mengaktifkan Isyarat Ca2 tambah /Bergantung kepada Calmodulin untuk Menghalang Ca2 berpagar Voltan ditambah Inux dan Pelepasan Glutamat. J. Biol. Kimia. 2009, 284, 8726–8737. [CrossRef] [PubMed]
38. Turner, JR; Sudut, JM; Hitam, ED; Joyal, JL; Sacks, DB; Madara, JL Peraturan PKC yang bergantung kepada rintangan transepithelial: Peranan MLC dan MLC kinase. Am. J. Physiol. 1999, 277, C554–C562. [PubMed]
39. Vaughan, PF; Walker, JH; Peers, C. Peraturan rembesan neurotransmitter oleh protein kinase C.Mol. Neurobiol. 1998, 18, 125–155. [CrossRef] [PubMed]
40. Coffey, ET; Sihra, TS; Nicholls, DG; Pocock, JM Fosforilasi sinapsin I dan MARCKS dalam terminal saraf dimediasi oleh kemasukan Ca2 plus melalui saluran Ca2 plus yang sensitif Aga-GI yang digabungkan dengan eksositosis glutamat. FEBS Lett. 1994, 353, 264–268. [CrossRef]
41. Obrenovitch, TP; Urenjak, J. Transmisi glutamatergik yang diubah dalam gangguan neurologi: Daripada glutamat ekstraselular yang tinggi kepada keberkesanan sinaptik yang berlebihan. Prog. Neurobiol. 1997, 51, 39–87. [CrossRef]
42. Zhang, D.; Li, H.; Wang, JB Echinacoside menghalang fibrilasi amyloid HEWL dan melindungi daripada neurotoksisiti yang disebabkan oleh A. Int. J. Biol. Makromol. 2015, 72, 243–253. [CrossRef] [PubMed]
43. Lin, TY; Lu, CW; Wang, CC; Lu, JF; Wang, SJ Hispidulin menghalang pembebasan glutamat dalam terminal saraf serebrokortikal tikus. Toksik. Appl. Pharmacol. 2012, 263, 233–243. [CrossRef] [PubMed]
44. Chang, CY; Lin, TY; Lu, CW; Huang, SK; Wang, YC; Chou, SS; Wang, SJ Hesperidin menghalang pembebasan glutamat dan memberikan perlindungan saraf terhadap eksitotoksisiti yang disebabkan oleh asid kainik dalam hippocampus tikus. Neurotoxicology 2015, 2015, 157–169. [CrossRef] [PubMed]
45. Nicholls, DG; Sihra, TS Synaptosomes mempunyai kumpulan glutamat eksositotik. Nature 1986, 321, 772–773.[CrossRef] [PubMed]
46. Wang, CC; Kuo, JR; Wang, SJ Dimebon, ubat antihistamin, menghalang pembebasan glutamat dalam terminal saraf serebrokortikal tikus. Eur. J. Pharmacol. 2014, 734, 67–76. [CrossRef] [PubMed]
47. Tibbs, GR; Barrie, AP; van Mieghem, FJ; Mc-Mahon, HT; Nicholls, DG Potensi tindakan berulang dalam terminal saraf terpencil dengan kehadiran 4-aminopyridine: Kesan pada Ca2 plus bebas sitosol dan pembebasan glutamat. J. Neurochem. 1989, 53,1693–1699. [CrossRef] [PubMed]
48. Akerman, KE; Scott, LG; Heikkila, JE; Heinonen, E. Pergantungan ionik terhadap potensi membran dan tindak balas berkaitan reseptor glutamat dalam sinaptoneurosom seperti yang diukur dengan pewarna sianin, DiSC2(5).J. Neurokim. 1987, 48, 552–559. [CrossRef] [PubMed]
49. Sihra, TS; Bogonez, E.; Nicholls, DG Penyetempatan Ca2 ditambah kemasukan lebih disukai memberi kesan nyahfosforilasi protein, fosforilasi dan pembebasan glutamat. J. Biol. Kimia. 1992, 267, 1983–1989. [PubMed]
50. Grynkiewicz, G.; Poenie, M.; Tsien, RY Generasi baharu penunjuk Ca2 tambah dengan sifat pendarfluor yang sangat baik. J. Biol. Kimia. 1985, 260, 3440–3450. [PubMed]
