Adakah ekstrak Cistanche berguna untuk merawat PD(penyakit Parkinson)?

Hubungi:joanna.jia@wecistanche.com

Pengenalan: Mutasi DJ-1 ialah sebab penyebab kekeluargaanpenyakit Parkinson(PD). Leucine166Proline (L166P) dan C106S ialah dua mutasi-1 DJ yang penting. Dalam kajian ini, kami telah mewujudkan model selular PD(SH-SY5Y) yang disebabkan oleh hidrogen peroksida(H, O,) DJ-1-transfected neuroblastoma (SH-SY5Y) DJ(penyakit Parkinson) dan menyiasat kesan daripadaEkstrak cistanchedan sebatian bioaktif utama, termasuk acteoside, echinacoside, asid kafeik, dan jumlah glikosida Cistanche pada kedua-dua model ini. Kaedah: Selepas menyatakan plasmid L166P dan C106S DJ-1 berteg FLAG dalam Escherichia coli, plasmid yang diekspresikan telah dikumpul, dirawat dengan enzim sekatan dan dikenal pasti menggunakan elektroforesis DNA. Selepas penulenan, plasmid L166P DJ-1 dan C106S DJ-1 dipindahkan secara berasingan ke dalam sel SH-SY5Y menggunakan liposom. Sel SH-SY5Y yang ditransfeksi telah dikesan oleh western blotting dan immunocytochemistry. Daya tahan sel ditentukan menggunakan ujian MTT.

Keputusan: Kedua-dua western blotting dan immunocytochemistry menunjukkan bahawa L166P dan C106S DJ-1 sangat dinyatakan dalam sel SH-SY5Y yang ditransfeksi. Ujian MTT menunjukkan bahawa pemindahan dengan L166P atau C106S DJ-1 mengurangkan daya maju sel SH-SY5Y yang terdedah kepada H, O, berbanding dengan sel SH-SY5Y yang tidak ditransmisikan. Sebagai tambahan,Ekstrak cistanchedan sebatian bioaktif utama, termasuk acteoside, echinacoside, asid kafeik dan jumlah glikosida Cistanche, menghalang kemerosotan daya maju sel yang disebabkan oleh sel SH-SY5Y yang ditransfeksi H, O,inL166P dan C106S DJ-1-dengan ketara. Kesimpulan: Penemuan ini mencadangkan bahawa kami berjaya mewujudkan model sel SH-SY5Y yang sensitif dan stabil L166P DJ-1-dan C106S DJ-1-model sel SH-SY5Y yang ditransfeksikan(penyakit Parkinson)danEkstrak cistanchemungkin berguna untuk merawat PD(penyakit Parkinson).

Cistancheekstrak mempunyai banyak manfaat

KLIK SINI UNTUK BAHAGIAN 1

PERBINCANGAN

Mutasi DJ-1 adalah berkaitan rapat dengan PD kejadian awal resesif autosomal(penyakit Parkinson)(Bonifati et al., 2003; Park et al., 2015). Dalam satu keluarga Itali, puncanya adalah mutasi missense dalam DJ‐1 (L166P) (Bonifati et al., 2003). Leu‐166 menyetempat di tengah-tengah heliks terminal C (Bonifati et al., 2003). Kehadiran Pro, pemutus heliks yang kuat, berkemungkinan menggugat kestabilan heliks terminal dalam mutan DJ-1 (Bonifati et al., 2003), yang membawa kepada pembukaan bahagian terminal C protein, yang akan menjejaskan homo-nya. oligomerisasi (Bonifati et al., 2003). Dalam sel yang ditransfeksi, L166P DJ‐1 tidak stabil kerana degradasi yang berlebihan (Bonifati et al., 2003; Gorner et al., 2004; Moore, Zhang, Dawson, & Dawson, 2003). Bonifati et al. (2003)mencadangkan bahawa mutasi L166P menjejaskan homodimerisasi dan fungsi normal DJ-1, dan seterusnya membawa kepada permulaan awal PD(penyakit Parkinson).

Dalam kajian ini, kami mendapati bahawa L166P DJ-1 hadir dalam polimer/kompleks dengan jisim molekul 70 kDa dalam sel SH-SY5Y yang ditransfeksi. Struktur DJ-1 diandaikan menggunakan struktur a/ sandwic yang sama seperti protease PH1704(Bonifati et al.,2003). Disebabkan oleh struktur DJ-1 dan PH1704 yang serupa, kami mengandaikan bahawa, seperti PH1704, DJ-1 membentuk agregat yang lebih tinggi (trimer dimmer). Gorner et al. (2004) menunjukkan bahawa dalam sel yang ditransfeksi dan limfosit PD(penyakit Parkinson)pesakit, monomerik L166P DJ-1 terdapat dalam struktur yang lebih tinggi dalam sel yang ditransfeksi dan limfosit PD(penyakit Parkinson)pesakit. Ini mungkin hasil langsung daripada salah lipatan protein L166P DJ-1 atau pembentukan kompleks antara L166P DJ monomerik-1 dan protein lain. Selain itu, sebagai tambahan kepada struktur protein, mutasi L166P DJ-1 turut mengubah fungsi antioksida DJ-1(Macedo et al.,2003; Taira et al,2004). Ini patut diberi perhatian, kerana tekanan oksidatif adalah faktor penting dalam PD(penyakit Parkinson), dan sel SH-SY5Y yang ditransfeksi dengan L166P DJ-1 adalah lebih sensitif kepada H, O, berbanding sel yang tidak ditransfeksi. Digabungkan dengan penyelidikan terdahulu bahawa DJ jenis liar-1 mentransfeksi sel SH-SY5Y berjaya ditubuhkan di makmal kami (Zhang, Wang,& Pu,2007), kami mencadangkan bahawa H, O, mendorong L166P DJ{{10 }}sel SH-SY5Y yang ditransfeksi ialah model selular baharu PD yang berguna(penyakit Parkinson).

Cistancheekstrak boleh menghalangpenyakit Parkinson

DJ-1 telah dilaporkan mengurangkan tekanan oksidatif (Taira et al, 2004; Zhou & Freed, 2005). Salah satu mekanismenya ialah pengoksidaan protein itu sendiri (Taira et al., 2004). Antara tiga sisa Cys DJ-1, Cys-106 paling sensitif kepada tekanan oksidatif. Lebih-lebih lagi,

fungsi antioksida DJ-1dikawal melalui pengoksidaan Cys-106 (Freed &Zhou,2006), dan mutasi Cys-106mengakibatkan kehilangan fungsi antioksidan DJ-1 (Blackinton et al,2009; Kinumi, Kimata, Taira, Ariga,& Niki,2004).DJ-1 juga bertindak sebagai pendamping molekul yang menghalang pembentukan agregat -synuclein(Shendelman et al.,2004) apabila Cys{10}} dioksidakan kepada asid sulfinik (Zhou & Freed,2005). Penemuan ini menunjukkan bahawa Cys-106 ialah penyumbang utama kepada fungsi DJ-1 yang betul. Seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 1, sel SH-SY5Y yang ditransfeksi dengan C106S DJ-1 adalah lebih sensitif kepada H, O, berbanding sel yang tidak ditransfeksi. Berdasarkan penyelidikan terdahulu (Zhang et al., 2007), ini juga mencadangkan H, O, sel SH-SY5Y teraruh C106S DJ-1-transfected juga mungkin model selular PD yang berguna(penyakit Parkinson).

Menggunakan sel SH-SY5Y yang ditransfeksi dengan L166P DJ-1 atau C106S DJ-1, kami mengesankesan ekstrak Cistanchedan sebatian bioaktif utama, termasuk acteoside, echinacoside, asid kafeik, dan jumlah glikosida Cistanche pada H O, menyebabkan pengurangan daya maju sel. Keputusan sekarang menunjukkan bahawa acteoside, echinacoside, asid kafeik dan jumlah glikosida Cistanche semuanya meningkatkan daya maju sel dalam cara yang bergantung kepada kepekatan, menunjukkan hubungan yang stabil dan linear antara tahap L166P DJ-1dan C106S DJ-1 dan daya maju sel SH-SY5Y.

Ringkasnya, kami berjaya mewujudkan model sel SH-SY5Y yang sensitif dan stabil DJ L166P-1-dan C106S DJ-1-transfected SH-SY5Y DJ yang sensitif dan stabil(penyakit Parkinson)dan mengesahkan ituEkstrak cistanchememperbaiki neurotoksisiti yang disebabkan oleh H, O, dalam kedua-dua model ini. Kami menjangkakan bahawa kedua-dua model selular ini akan digunakan dengan berkesan untuk PD(penyakit Parkinson)penyelidikan danEkstrak cistanchemungkin berguna untuk merawat PD(penyakit Parkinson)pada masa hadapan.

Faedah ekstrak Cistanche: anti-penyakit Parkinson

RUJUKAN

1. Abou‐Sleiman, PM, Healy, DG, Quinn, N., Lees, AJ, & Wood, NW (2003). Peranan mutasi DJ-1 patogenik dalam penyakit Parkinson. Annals of Neurology, 54, 283–286. https://doi.org/10.1002/ (ISSN)1531‐8249

2. Andres‐Mateos, E., Perier, C., Zhang, L., Blanchard‐Fillion, B., Greco, TM, Thomas, B., … Dawson, VL (2007). Penghapusan gen DJ-1 mendedahkan bahawa DJ-1 adalah peroksidase seperti peroxiredoxin atipikal. Prosiding Akademi Sains Kebangsaan Amerika Syarikat, 104, 14807–14812. https://doi.org/10.1073/pnas.0703219104

3. Biosa, A., Sandrelli, F., Beltramini, M., Greggio, E., Bubacco, L., & Bisaglia, M. (2017). Penemuan terkini mengenai fungsi fisiologi DJ‐1: Beyondpenyakit Parkinson. Neurobiologi Penyakit, 108, 65–72. https://doi.org/10.1016/j.nbd.2017.08.005

4. Blackinton, J., Lakshminarasimhan, M., Thomas, KJ, Ahmad, R., Greggio, E., Raza, AS, Wilson, MA (2009). Pembentukan asid sulfinik sistein yang stabil adalah penting untuk fungsi mitokondria protein parkinsonisme DJ‐1. Jurnal Kimia Biologi, 84, 6476–6485. https://doi.org/10.1074/jbc.M806599200

5. Bonifati, V., Rizzu, P., Squitieri, F., Krieger, E., Vanacore, N., van Swieten; JC, … Heutink, P. (2003). DJ‐1 (DJ‐1), ialah gen baru untuk autosomal resesif, parkinsonisme awal. Sains Neurologi, 24, 159–160. https://doi.org/10.1007/s10072‐003‐0108‐0

6. Bonifati, V., Rizzu, P., van Baren, MJ, Schaap, O., Breedveld, GJ, Krieger, E., … van Swieten, JC, et al. (2003). Mutasi dalam gen DJ-1 yang dikaitkan dengan parkinsonisme awal resesif autosomal. Sains, 299, 256–259.

7. Burke, RE, & O'Malley, K. (2013). Degenerasi akson dalam penyakit Parkinson. Neurologi Eksperimen, 246, 72–83. https://doi.org/10.1016/j. expneurol.2012.01.011

8. Dexter, DT, Carter, C., Wells, FR, Javoy‐Agid, FJ, Agid, Y., Lees, AJ, Marsden, CD (1989). Peroksidasi lipid basal dalam substantia nigra meningkat dalampenyakit Parkinson. Jurnal Neurokimia, 52, 381– 389. https://doi.org/10.1111/j.1471

9. Dexter, DT, Holley, AE, Flitter, WD, Slater, TF, Wells, FR, Daniel, SE, … Marsden, CD (1994). Peningkatan tahap hidroperoksida lipid dalam parkinsonian substantia nigra: Kajian HPLC dan ESR. Gangguan Pergerakan, 9, 92–97.

10. Freed, CR, & Zhou, W. (2006). DJ‐1 melindungi neuron dopamin dengan pengaktifan terpilih sama ada glutation atau protein kejutan haba. Neurologi Eksperimen, 198, 558–597.

11. Glizer, D., & MacDonald, PA (2016). Latihan kognitif dalamParkinsonpenyakit: Kajian semula kajian dari tahun 2000 hingga 2014.Parkinsonpenyakit, 2016, 9291713. https://doi.org/10.1155/2016/9291713

12. Gorner, K., Holtorf, E., Odoy, S., Nuscher, B., Yamamoto, A., Regula, JT, Kahle, PJ (2004). Kesan perbezaan daripadaParkinsonpenyakit‐mutasi yang berkaitan pada kestabilan dan lipatan DJ‐1. Jurnal Kimia Biologi, 279, 6943–6951. https://doi.org/10.1074/jbc.M3092

13. Hague, S., Rogaeva, E., Hernandez, D., Gulick, C., Singleton, A., Hanson, M., … St George‐Hyslop, PH, et al. (2003). Permulaan awalParkinsonpenyakitdisebabkan oleh mutasi DJ-1 heterozigot sebatian. Annals of Neurology, 54, 271–274. https://doi.org/10.1002/(ISSN)1531‐8249

14. Kim, RH, Peter, M., Jang, YJ, Shi, W., Pintilie, M., Fletcher, GC, … Bray, MR, et al. (2005). DJ-1, pengawal selia novel penindas tumor PTEN. Sel Kanser, 7, 263–273. https://doi.org/10.1016/j. ccr.2005.02.010

15. Kinumi, T., Kimata, J., Taira, T., Ariga, H., & Niki, E. (2004). Cysteine-106 DJ-1 ialah sisa sistein yang paling sensitif kepada pengoksidaan pengantaraan hidrogen peroksida dalam vivo dalam sel endothelial vena umbilik manusia. Komunikasi Penyelidikan Biokimia dan Biofizik, 317, 722–728. https://doi.org/10.1016/j.bbrc.2004.03.110

16. Kitada, T., Asakawa, S., Hattori, N., Matsumine, H., Yamamura, Y., Minoshima, S., … Shimizu, N. (1998). Mutasi dalam gen parkin menyebabkan parkinsonisme juvana resesif autosomal. Alam Semula Jadi, 392, 605– 608. https://doi.org/10.1038/33416

17. Macedo, MG, Anar, B., Bronner, IF, Cannella, M., Squitieri, F., Bonifati, V., … Rizzu, P. (2003). Protein mutan DJ‐1 L166P yang dikaitkan dengan permulaan awalParkinsonpenyakittidak stabil dan membentuk kompleks protein peringkat tinggi. Genetik Molekul Manusia, 12, 2807–2816.

18. Moore, DJ, Zhang, L., Dawson, TM, & Dawson, VL (2003). Mutasi missense (L166P) dalam DJ‐1, dikaitkan dengan kekeluargaanParkinsonpenyakit, memberikan kestabilan protein yang berkurangan dan menjejaskan homo-oligomerisasi. Jurnal Neurokimia, 87, 1558–1567. https://doi.org/10.1111/ (ISSN)1471‐4159

19. Mullard, A. (2017). Ubat kencing manis menunjukkan janji dalamParkinsonpenyakit. Ulasan Alam Semulajadi. Penemuan Dadah, 16, 593.

20. Nagakubo, D., Taika, T., Kitaura, H., Ikeda, M., Tamai, K., Iguchi‐Ariga, SMM, & Agria, H. (1997). , Onkogen novel yang mengubah sel NIH3T3 tetikus dengan kerjasama ras. Komunikasi Penyelidikan Biokimia dan Biofizik, 231, 509–513. https://doi. org/10.1006/bbrc.1997.6132

21. Nikam, S., Nikam, P., Ahaley, SK, & Sontakke, AV (2009). Tekanan oksidatif dalamParkinsonpenyakit. Jurnal Biokimia Klinikal India, 24, 98–101. https://doi.org/10.1007/s12291‐009‐0017‐y

22. Niki, T., Takahashi‐Niki, T., Taira, T., Iguchi‐Ariga, SMM, & Agria, H. (2003). DJBP: Protein pengikat DJ-1 yang baru, mengawal reseptor androgen secara negatif dengan merekrut kompleks deacetylase histon, dan DJ-1 menentang perencatan ini dengan pemansuhan kompleks ini. Penyelidikan Kanser Molekul, 1, 247–261.

Faedah daripadaCistancheekstrak: merawatParkinsonpenyakit